Rev. Bras. Reumatol. vol.57 número2

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REVISTA

BRASILEIRA

DE

REUMATOLOGIA

Artigo

original

Polimorfismo

genético

do

fator

de

crescimento

vascular

endotelial

G1612A

(rs10434)

e

manifestac¸ões

neuropsiquiátricas

em

pacientes

com

lúpus

eritematoso

sistêmico

Sherif

Taha

_,

_Sherif

_Mohammed

_Gamal

,

Mohamed

Nabil

,

Nahla

Naeem

,

Dalia

Labib

_,

_Ibrahim

_Siam

_e

_Tamer

_Atef

_Gheita

a_{CairoUniversity,FacultyofMedicine,ChemicalPathologyDepartment,Cairo,Egito}

b_{CairoUniversity,FacultyofMedicine,RheumatologyDepartment,Cairo,Egito}

c_{Beni-SweifUniversity,FacultyofMedicine,InternalMedicineDepartment,Beni-Sweif,Egito}

d_{CairoUniversity,FacultyofMedicine,NeurologyDepartment,Cairo,Egito}

e_{NationalResearchCenter,InternalMedicineDepartment,Cairo,Egito}

informações

sobre

o

artigo

Históricodoartigo:

Recebidoem18demaiode2016 Aceitoem29deagostode2016 On-lineem28deoutubrode2016

Palavras-chave: LES

VEGF

GeneG1612A(rs10434) Polimorfismo

Manifestac¸õesneuropsiquiátricas

r

e

s

u

m

o

Objetivo:Investigararelac¸ãoentreopolimorfismogenéticodofatordecrescimento vascu-larendotelial(VEGF)empacientescomlúpuseritematososistêmico(LES)emanifestac¸ões neuropsiquiátricasrelacionadascomolúpus.

Pacientese métodos:Foramrecrutados60pacientesadultoscomLESnosdepartamentos deReumatologiaeNeurologiadehospitaisuniversitáriosdoCairoeclassificadosemdois grupos;grupoA:30pacientescommanifestac¸õesneuropsiquiátricas(LESNP)egrupoB: 30pacientessemmanifestac¸õesneuropsiquiátricas.Genotipou-seoSNPG1612A(rs10434) dogeneVEGFemambososgruposporreac¸ãoemcadeiadapolimeraseemtemporeal (RT-PCR).

Resultados: Foiencontradadiferenc¸aestatisticamentesignificativanasfrequências geno-típicasealélicasentreosdoisgrupos(AA[70%vs.13,3%,p<0,001]eGG[10%vs.66,7%, p<0,001]).

Conclusão:OpolimorfismonogenequecodificaoVEGFpodeestarassociadoaoaumento naincidênciadelúpusneuropsiquiátricoempacientescomLES.

©2016ElsevierEditoraLtda.Este ´eumartigoOpenAccesssobumalicenc¸aCC BY-NC-ND(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

∗ _{Autorparacorrespondência.}

E-mail:[email protected](S.M.Gamal).

http://dx.doi.org/10.1016/j.rbr.2016.08.005

0482-5004/©2016ElsevierEditoraLtda.Este ´eumartigoOpenAccesssobumalicenc¸aCCBY-NC-ND(http://creativecommons.org/licenses/

Vascular

endothelial

growth

factor

G1612A

(rs10434)

gene

polymorphism

and

neuropsychiatric

manifestations

in

systemic

lupus

erythematosus

patients

Keywords: SLE VEGF

G1612A(rs10434)gene Polymorphism

Neuropsychiatricmanifestations

a

b

s

t

r

a

c

t

Aim: Toinvestigatetherelationbetweenvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)gene polymorphisminsystemiclupuserythematosus(SLE)patientsandlupusrelated neuropsy-chiatricmanifestations.

Patientsandmethods: SixtyadultSLEpatientsrecruitedfromtheRheumatologyand Neu-rologydepartmentsofCairoUniversityhospitalswereclassifiedintotwogroups;GroupA: 30patientswithneuropsychiatricmanifestations(NPSLE)andGroupB:30patientswithout. ForbothgroupstheSNPG1612A(rs10434)oftheVEGFgenewasgenotypedbyrealtime polymerasechainreaction(RT-PCR).

Results: Statisticallysignificantdifferencewasfoundingenotypeandallelefrequencies betweenbothgroups(AA[70%vs13.3%,p<0.001]andGG[10%vs66.7%,p<0.001]). Conclusion: PolymorphisminthegenecodingforVEGFmaybeassociatedwithincreased incidenceofneuropsychiatriclupusinSLEpatients.

©2016ElsevierEditoraLtda.ThisisanopenaccessarticleundertheCCBY-NC-ND license(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Introduc¸ão

Olúpuseritematososistêmico(LES)éumadoenc¸aautoimune1

emquefatoresgenéticoseambientaisdesempenhampapéis

significativosnasuapatogênese.2_{Comoconsequênciadasua}

imunopatologiacomplexa,queenvolveaproduc¸ãode autoan-ticorposeavasculitedocomplexoimunecomdanosacélulas endoteliais,3_{diferentesórgãosevasossanguíneospodemser}

afetadospelainflamac¸ãocrônica.4

Odanoeaativac¸ãodecélulasendoteliaisvascularessão osfatoresqueiniciamapatogênesedoLES.5_Ofatorde

cres-cimentovascularendotelial(VEGF)éummoduladorchaveda angiogênese,proliferac¸ãoemigrac¸ãodecélulasendoteliais, quimiotaxiaehiperpermeabilidadecapilar6_{;verificou-seque}

estásuprarreguladoemumasériededoenc¸asdocolágeno, incluindooLES.7_{Alémdisso,relatou-sequeníveiselevados}

deVEGFpodemestar associadosà atividadeda doenc¸ano

LES.3,4_{Alémdisso,opolimorfismonogeneVEGFR2jáfoi}

cor-relacionadocom doenc¸as vascularesepode influenciar na integridade,reparac¸ãoefunc¸ãodoendotélio.8

Alémdaassociac¸ãodosníveisdeVEGFcomaatividadeda doenc¸anoLES,encontrou-seaindaqueoVEGFestá correla-cionadocomoutrasmanifestac¸õesdadoenc¸a,comoanefrite lúpica,ecomumamaiorespessuramédiadastúnicasmédia eíntimadacarótida9,10_{ehipertensãopulmonar}11_e

inversa-mentecorrelacionadocomacontagemdeplaquetas.7_Apesar

detersidorelatadoqueoanticorpoantiproteínaPribossomal possainfluenciarnapatologiadolúpusneuropsiquiátricopor meiodaelevac¸ãonaproduc¸ãodeVEGFpelosmonócitos,12_a

associac¸ãoentreolúpusneuropsiquiátricoeoVEGF perma-neceobscura.

Esteestudotemcomoobjetivoinvestigararelac¸ãoentreo polimorfismodenucleotídeoúnico(SNP)G1612A(rs10434)do VEGFempacientescomLESemanifestac¸ões neuropsiquiátri-casrelacionadascomolúpus.

Pacientes

e

método

Este éumestudotransversal queincluiu 60pacientes que atendiam aoscritérios revisadosatualizadosda ACRparaa classificac¸ão doLES.13 _{Foram recrutados30 pacientes com}

manifestac¸ões neuropsiquiátricasdoLES(LESNP)(GrupoA)

dosdepartamentosdeReumatologiaeNeurologiade

hospi-taisuniversitáriosdoCairodemaiode2013amaiode2015.As manifestac¸õesneuropsiquiátricasdoLES(LESNP)foram defi-nidaspelapresenc¸adeacidentevascularencefálicoatualou pregresso,ataqueisquêmicotransitório,psicose,convulsões,

confusão mental e/ou disfunc¸ão cognitiva.

Selecionaram--se outros30pacientes consecutivossemenvolvimentoNP

(GrupoB)paracorresponderaomesmonúmerodepacientes

com envolvimento NP. Obtiveram-seconsentimentos

infor-mados dospacientes eo estudo foi aprovado pelo comitê

de ética local. Fez-se em todos os pacientes uma

anam-nese abrangenteeumexameclínicocompleto,comênfase

especial no envolvimento neuropsiquiátrico. Excluíram-se

doestudopacientesqueapresentassemdoenc¸arenalativa, hipertensão pulmonar, hipertensão arterial, artrite ativa e trombocitopenia.

Em todos os pacientes, o SNP G1612A (rs10434) na

região 3’ não traduzida (3’-UTR) do gene VEGF foi

genoti-pado por reac¸ão em cadeia da polimerase em tempo real

(RT-PCR).

IsolamentodoDNA

Isolou-se o DNA genômicode leucócitosdo sangue

perifé-rico com okit High PurePCR TemplatePreparation (Roche

DiagnosticsGmbH,RocheAppliedScience,68298Mannheim,

GenotipagemdoVEGFporRT-PCR

APCRemtemporealfoifeitapeloCarousel-BasedSystem, Lightcycler2.0,comokitmastermix,kitLightcyclerfaststart

MasterHybprobe(RocheDiagnosticsGmbH,68298Mannheim,

Alemanha),emconjuntocomokitLightSNiPrs10434VEGFA

(TIBMOLBIOLGmbH-Eresburgstrasse22-23,D-12103Berlin, Alemanha)quecontinhaosprimersnecessáriosparaareac¸ão.

O kit Lightcycler fast start Master Hybprobe é um Hot

StartReactionMixparaPCRqueusasondasHybProbecomo

formatodedetecc¸ão.OformatoLightCyclerHybProbe baseia--senoprincípiodatransferênciadeenergiaderessonância de fluorescência (FRET), em que sondas oligonucleotídicas

específicas de duas sequências, marcadas com diferentes

corantes(doadoresereceptores),foramadicionadasàmistura de reac¸ãoalém dosprimers de PCR. Aquantidade de fluo-rescênciaproduzidapelamarcac¸ãonasondaédiretamente proporcionalàquantidadedeDNA-alvoproduzidoduranteo processodePCR.Areac¸ãodePCRfoifeitadeacordocomas instruc¸õesdofabricanteefoiacompanhadapelaanáliseda curvademelting(curvadefusão).

Análiseestatística

Os dados foram descritos estatisticamente em termos de

média±desvio padrão (± DP), mediana e intervalo, ou

frequências(númerodecasos)epercentagens,quando

apro-priado. Usou-se o teste de qui-quadrado para comparar

variáveisqualitativas. Acorrelac¸ãoentre osparâmetrosfoi feita pormeio do coeficiente de correlac¸ãode Pearson. As diferenc¸as entre os grupos foram consideradas estatistica-mentesignificativasemcasodevaloresdepinferioresa0,05e altamentesignificativosseinferioresa0,01.Todososcálculos estatísticosforamfeitoscomaversão16doprogramaSPSS (StatisticalPackagefortheSocialScience;SPSSInc.,Chicago,IL,

EUA)paraWindows.

Resultados

Osdadosdemográficoseosparâmetroslaboratoriaisdo pre-senteestudosãoapresentadosnatabela1.Osgruposforam

Tabela1–Característicasdemográficasedurac¸ãoda doenc¸anospacientescomLESdogrupoA(LESNP)e grupoB(semmanifestac¸õesneuropsiquiátricas)

GrupoA(n=30) GrupoB(n=30) p

Idade

Intervalo 19-52 21-55,0 0,3

Média±DP 31,9±7,6 34,3±8,6 NS

Sexo

Masculino 1(3,3) 3(10) 0,6

Feminino 29(96,7) 27(90) NS

Durac¸ãodadoenc¸a

Intervalo 1,0-12 1,0-11 0,9

Média±DP 5,5±3,5 5,5±3,3 NS

NS,nãosignificativo.

pareados poridade esexo,semdiferenc¸assignificativasna durac¸ãodadoenc¸a(p=0,9).

As manifestac¸ões neuropsiquiátricas nos pacientes do grupoA(LESNP)sãodescritasaseguir:nove(30%) apresen-tavamdiagnósticodepsicose,oito(26,7%)tinhamconvulsões, cinco(16,7%)tiveramataquesisquêmicostransitórios(AIT), quatro(13,3%)tiveramacidentevascularencefálico,três(10%) tinhammielitetransversa(TM)eum(3,3%)tinhadepressão. Asmanifestac¸õesclínicasdogrupoBforam:manifestac¸ões mucocutâneas, artralgia, leucopenia, anemia hemolítica e serosite.

As características laboratoriais, incluindo a distribuic¸ão genotípica da populac¸ão do estudo, são mostradas na

tabela2.

Discussão

OLESéumadoenc¸aautoimunemultissistêmica.14_Nolúpus,

a inflamac¸ão sistêmica crônica leva à ativac¸ão de células

endoteliaisvascularesqueporsuavezlevaaumaumento

substancialemfatoresangiogênicosquedesempenhamum

papel significativo na permeabilidade vascular, no

cresci-mento vascular e na resposta inflamatória, o que leva à

destruic¸ãodosvasossanguíneoseadisfunc¸ãodeórgãos inter-nosgrave.15

OVEGFtambémestáenvolvidonafunc¸ãorenale pulmo-nar,alémdeatuarcomoumfatordesobrevivênciaparaas célulasneuronais.16_{Ospolimorfismosemgenesqueregulam}

aangiogênesepodemafetararespostaaumestímulo angi-ogênicoe,assim,afetarasusceptibilidadee/ouaprogressão daangiogênesedependentedadoenc¸a.Emestudospréviosde genes,ospolimorfismosnoVEGFereceptordofatorde cres-cimentovascularendotelial2(VEGFR2)estiveramclaramente

associadosaodesenvolvimentodedoenc¸asdependentesde

angiogênese.17

OsníveiscirculantesdeVEGFsãoaltamentehereditários;18

noentanto,ogeneVEGFéaltamentepolimórfico,com cente-nasdepolimorfismosatualmentedescritosnobancodedados SingleNucleotidePolymorphism(dbSNP).Issoincluipelomenos

trêspolimorfismosquesãorelativamentecomunsepodem

afetaraexpressãodoVEGF.Considerou-sequeopolimorfismo deinserc¸ão/delec¸ão(I/D)naposic¸ão-2549da região promo-toraeopolimorfismo-634G/C(rs2010963)localizadono5’-UTR

estãoassociados aumaumentonaexpressãodoVEGF.19 _O

polimorfismo936C(rs3025039)localizadono3’UTRtambém estáassociadoaníveisséricossubstancialmenteaumentados deVEGF.20

Emdecorrênciadaimplicac¸ãodoVEGFcomoum

modu-lador da angiogênese, proliferac¸ão e migrac¸ão de células endoteliais,oobjetivodopresenteestudofoiinvestigara pos-sívelrelac¸ãoentrepolimorfismosnogenequecodificampara oVEGFemanifestac¸õesneuropsiquiátricasempacientescom LES.

Nopresenteestudo,encontrou-seumadiferenc¸a estatis-ticamentesignificativanasfrequênciasgenotípicasealélicas entreos pacientesdogrupoA(aquelescom manifestac¸ões

neuropsiquiátricas) e pacientes do grupo B (aqueles sem

Tabela2–Comparac¸ãoentreosdadoslaboratoriaisempacientescomLESdogrupoA(LESNP)egrupoB(sem manifestac¸õesneuropsiquiátricas)

GrupoA(n=30) GrupoB(n=30) p

ANA

+ve 28 (93,3) 25 (83,3) 0,4

−ve 2 (6,7) 5 (16,7) NS

DNA

+ve 11 (36,7) 10 (33,3) 1

−ve 19 (63,3) 20 (66,7) NS

GenótipoVEGF

AA 21 (70) 4 (13,3) <0,001

AG 6 (20) 6 (20) 1

GG 3 (10) 20 (66,7) <0,001

VHS 48,8±32,3(5-12) 48,2±34,9(12-150) 0,9

Hb 12,3±1,4(9,5-15,3) 12,3±1,5(9,3-15,3) 0,9

CL 8,4±2,5(3,8-16) 7,6±1,5(3,8-9,5) 0,1

PLT 246,2±77,4(80-466) 229,8±42,3(130-321) 0,3

ANA,anticorposantinucleares;CL,contagemdeleucócitos;Hb,hemoglobina;PLT,contagemdeplaquetas;VEGF,fatordecrescimentovascular endotelial;VHS,velocidadedehemossedimentac¸ão.

Osresultadossãoapresentadoscomonúmero(%)oumédia±DP(intervalo).

Embora nenhum dos estudos anteriores tenha focado no polimorfismo do gene VEGF e sua associac¸ão com o LESNP,estudou-searelac¸ãoentreessepolimorfismoeoutras manifestac¸ões relacionadas com o lúpus; descreveu-se a relac¸ão significativa do gene (VEGF) +405GG com a nefrite lúpica.21 _{Da mesma maneira, a relac¸ão entre os seis SNP}

do gene VEGF (rs2010963, rs3024994, rs3025000, rs3025010, rs3025035ers833070)e asusceptibilidade aoLESno norte daChinafoipesquisadaem44pacientes.22_{Oestudorelatou}

queafrequênciadoalelo Ars833070foisignificativamente

maiornospacientes comLESdoquenoscontroles eoGG

rs833070diminuiuasusceptibilidadeàartriteempacientes comLES.

Limitac¸ões

O pequeno número de pacientes incluídos no estudo e a

ausênciadeestudossemelhantescomfoconarelac¸ãoentre

o polimorfismo do gene VEGF e manifestac¸ões

neuropsi-quiátricasrelacionadascomolúpussãoaslimitac¸õesmais importantesdesteestudo.Noentanto,estetrabalhopodeser

considerado um estudo piloto; ele pode abrir portas para

o futuro, para estudos feitos em grandes populac¸ões

para estabelecer o impacto real do polimorfismo

gené-ticodoVEGFnapatogêneseounascaracterísticasclínicasdas manifestac¸õesneuropsiquiátricasdoLES.Alémdisso,outros estudoscom avaliac¸ãodosníveisséricosdeVEGFem

paci-entes com manifestac¸ões neuropsiquiátricas poderiam ser

benéficos.

Mensagem

chave

OSNPG1612A(rs10434)dogeneVEGFpoderepresentarum

aumentonasusceptibilidadeaoenvolvimento neuropsiquiá-tricoempacientescomLES.

Conflitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconflitosdeinteresse.

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n

c

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a

s

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