Fungos em sementes importadas de plantas olerícolas e ornamentais
Thaís F Cordeiro1,*; Guilherme C Gouvea1,*; Camila S Machado1,*; Vanessa M A Goulart1,**; Carolina C Teixeira1,**; Paulo S T Brioso1,*1UFRRJ/ IB/ Laboratório Oficial de Diagnóstico Fitossanitário (L.O.D.F.), CP 74585, 23851-970, Seropédica, RJ, thafe01@gmail.com; guilhermegouvea@ig.com.br; camila-machado20@hotmail.com; nessa_mayra@hotmail.com; carolcarvalho.t@gmail.com; brioso@bighost.com.br.
RESUMO
No Brasil, o mercado de plantas olerícolas e ornamentais tem apresentado fluxo crescente, na demanda ou na produção das mesmas e, grande parte das sementes utilizadas são importadas por firmas multinacionais. Objetivando verificar a sanidade das sementes importadas de plantas olerícolas e ornamentais, relativo a 2010-2011, recebidas para a análise fitossanitária no L.O.D.F. e identificar/ isolar os fungos fitopatogênicos associados às mesmas, procedemos ao Blotter Test, observação/ identificação dos fungos ao microscópio estereoscópico e ótico, isolamento em meio de cultura (BDA), extração do DNA a partir de micélio. Das amostras recebidas correspondentes a 123 espécies botânicas oriundas da África do Sul, Alemanha, Austrália, Chile, China, Dinamarca, Espanha, Estados Unidos, França, Holanda, Itália, Japão, Peru, Tailândia, Taiwan verificamos que em alguns lotes a presença de 16 espécies fúngicas associadas às sementes. Embora o nível de sanidade das sementes tenha sido bem elevado, a presença dos fungos, oriundos de outros países, indica a necessidade da adoção de medidas de controle imediatas e eficazes interligado a um sistema de diagnose mais específico (por exemplo, molecular), de forma a minimizar a possível disseminação destes fitopatógenos (raças exóticas) e de possíveis danos econômicos a este crescente e importante mercado no país.
Palavras-chave: Fitopatógenos, Patologia de Semente, Blotter Test ABSTRACT
Fungi on imported seeds of vegetables and ornamental plants
In Brazil, the market for vegetables and ornamental plants has shown increasing flow demand or production thereof, and most of the seeds used are imported by multinational firms. To ascertain the health of imported seed of vegetables and ornamentals plants, on 2010-2011, received for phytossanitary analysis in LODF and identify/isolate pathogenic fungi associated with them, proceeded to the Blotter Test, observation / identification of fungal to the optical and stereoscopic microscope, isolation in culture medium (PDA) and DNA extraction from mycelium. The received samples corresponding to 123 plant species originating from South Africa, Germany, Australia, Chile, China, Denmark, Spain, United States, France, Holland, Italy, Japan, Peru, Thailand, Taiwan found that in some samples the presence of 16 fungal species associated with seeds. Although the level of seed health has been very high, the presence of fungi, from other countries indicates the need to adopt control measures immediate and effective system interconnected to a more specific diagnosis (eg, molecular) of to minimize the potential spread of these pathogens (exotic races) and possible economic damage to this growing and important market in the country.
Considerando que o mercado de sementes envolve a movimentação de milhões de dólares e há um potencial risco de introdução de espécies/ raças de fungos fitopatogênicos (exóticos ou não) no país tem-se que trabalhos envolvendo aspectos relacionados a patologia de sementes importadas são necessários e atuais, proporcionando desta forma uma rápida decisão na estratégia de controle à ser adotada de forma a minimizar ou eliminar possíveis perdas econômicas além do que tem potencial de gerar conhecimento relevante para a geração, a absorção, a introdução e a difusão de inovação tecnológica e produto biotecnológico, para fortalecer o desempenho científico e tecnológico do país e aumentar a competitividade internacional da pesquisa brasileira. Por exemplo, o uso de técnicas moleculares na patologia de sementes é praticamente inexistente, no país, em função da ausência de disponibilidade de kit diagnóstico no mercado bem como de informações relevantes sobre os fungos a nível de espécie ou mesmo a nível de raça nas sementes das espécies botânicas tradicionalmente importadas. Desta forma, objetivou-se identificar e extrair o DNA dos fungos associados a sementes de espécies botânicas de olerícolas e ornamentais importadas de diversos países recebidos pelo Laboratório Oficial de Diagnóstico Fitossanitário da UFRRJ.
MATERIAL E MÉTODOS
OBTENÇÃO E ANÁLISE DE SEMENTES
As sementes utilizadas foram as regularmente recebidas (Tabela 1) pelo Laboratório Oficial de Diagnóstico Fitossanitário (L.O.D.F.) da UFRRJ, no período de janeiro de 2010 a maio de 2012, e a análise preliminar, feita através da observação direta das amostras ao Microscópio Estereoscopio Wild após o Teste de Blotter Test e/ou pelo Teste de Isolamento em meio de cultura conforme descrito no Ministério de Agricultura, Pecuária e Abastecimento (2009) e no ISTA (2012). Sendo a identificação morfológica das estruturas fúngicas, após coleta com estilete, feita no microscópio ótico binocular Olympus CX40 (200 X) montadas em lâmina de vidro, coberta de lamínula de vidro, na presença de lactofenol de Amann acrescido de azul de algodão 0,1% (p/v). após o Teste de Blotter Test e/ou pelo Teste de Isolamento em meio de cultura conforme descrito no Ministério de Agricultura, Pecuária e Abastecimento (2009) e no ISTA
EXTRAÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DO DNA TOTAL DOS FUNGOS
Para a extração do DNA, foram retirados 100 mg de micélio fúngico sendo depositados em almofariz estéril e pulverizado, com o auxílio de pistilo estéril, sob nitrogênio líquido adicionando-se em seguida 400 µl de tampão fornecido no Dneasy
Plant Mini Kit (Qiagen Brasil) seguindo-se, posteriormente, instruções do fabricante. O
DNA total foi dosado em espectrofotômetro de luz ultravioleta sendo diluído a uma concentração final de 20 ng.µl-1.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Na Tabela 1, através da metodologia adotada, estão indicadas as sementes das 123 espécies botânicas e os fungos associados, tais como: Alternaria alternata,
Alternaria brassicae, Alternaria brassicicola, Alternaria dauci, Alternaria porri, Aspergillus sp., Bipolaris sorokiana, Curvularia sp., Didymella bryoniae, Fusarium solani, Lewia sp., Nigrospora sp., Penicillium sp., Pestalotiopsis sp., Rhizopus sp., Stemphyllium botryossum.
Foi possível fazer a extração do DNA das amostras fúngicas que será utilizado para teste molecular como o de PCR (Polymerase Chain Reaction).
Embora o nível de sanidade das sementes tenha sido elevado, a presença de fungos, oriundo de outros países, indica a necessidade da adoção de medidas de controle imediatas e eficazes interligado a um sistema de diagnose mais específico (por exemplo, molecular), de forma a minimizar a possível disseminação destes fitopatógenos (raças exóticas) e de possíveis danos econômicos a este crescente e importante mercado no país.
REFERÊNCIAS
INTERNATIONAL SEED TESTING ASSOCIATION (ISTA). 2012. Seed Health Testing Methods. In: INTERNATIONAL SEED TESTING ASSOCIATION (eds.). International Rules for Seed Testing. Edition 2012. Bassersdorf: ISTA. p. 1-248. MINISTÉRIO DA AGRICULTURA, PECUÁRIA E ABASTECIMENTO. 2009.
Tabela 1. Lista das sementes de espécies botânicas/ país e fungos associados (List of seeds of plant species/country and fungi associated)
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ESPÉCIE BOTÂNICA PAÍS FITOPATÓGENO***
Abelmoschus esculentus USA
Ageratum houstianum Alemanha, Holanda
Ageratum mexicanum X A. houstianum Holanda
Allium cepa Africa do Sul, Argentina, Austrália, França, Holanda, Itália, USA
Allium cepa USA Alternaria porri
Allium cepa África do Sul Fusarium sp.; Rhizopus sp.
Allium cepa França Fusarium sp.; Rhizopus sp.
Allium cepa Dinamarca Fusarium solani
Allium cepa África do Sul Fusarium solani
Allium cepa Itália Fusarium solani
Allium cepa Australia Fusarium solani
Allium fistulosum Holanda, Itália, USA
Allium fistulosum Itália Alternaria porri
Allium porrum Italia
Alyssum saxatile Holanda
Anethum graveolens Holanda
Anthriscus cerefolium Holanda
Antirrhinum majus Holanda
Antirrhinum majus Holanda Fusarium solani
Apium graveolens Italia
Apium graveolens USA Alternaria porri
Artemisia absinthium Holanda
Artemisia dracunculus Holanda Alternaria alternata
Arthemisia absinthus Holanda
Asparagus officinalis USA
Axonopus affinis Austrália Curvularia sp.
Barbarea verna USA
Begonia semperflorens-cultorum Alemanha
Bellis perennis Holanda
Beta vulgaris USA
Beta vulgaris USA Alternaria alternata
Brassica chinensis Japão
Brassica juncea Holanda, USA
Brassica oleracea Dinamarca, Itália, USA
Brassica oleracea USA Fusarium solani
Brassica oleracea Dinamarca Alternaria brassicicola
Brassica oleracea var. acephala Holanda, USA
Brassica oleracea var. botritys Chile, França, Japão
Brassica oleracea var. capitata Itália, Japão, USA
Brassica oleracea var. capitata Japao Chaetomium sp.
Brassica pekinensis Japão
Calendula officinalis Holanda Alternaria alternata
Calendula officinalis Holanda
Calendula officinalis França Alternaria alternata
Callistephus chinensis Holanda Fusarium solani
Callistephus chinensis Holanda Alternaria alternata
Callistephus chinensis França Alternaria alternata
Capsicum annuum USA Fusarium solani
Capsicum annuum Chile, China, Itália, USA
Capsicum annuum USA Chaetomium sp.
Capsicum annuum Tailandia Fusarium solani
Capsicum frutescens França, Itália
Carica papaya Taiwan
Carica papaya Taiwan Pestalotiopsis sp.
Catharanthus roseus Holanda
Celosia argentea Holanda
Celosia cristata Holanda Fusarium solani
Celosia cristata Alemanha
Celosia plumosa Holanda
Centaurea cyanus Holanda Alternaria alternata
Centaurea spp. Holanda
Chrysanthemum carinatum Holanda
Chrysanthemum carinatum Holanda Alternaria alternata
Chrysanthemum leucanthemum Alemanha
Chrysanthemum maximum Holanda Alternaria alternata
Cichorium endivia Chile, China, Holanda
Cichorium intybus Italia
Cineraria maritima X Senecio cinerae Holanda
Citrullus lanatus USA Penicillium sp.
Citrullus lanatus USA Aspergillus sp.
Citrullus lanatus USA
Citrullus vulgaris USA
Consolida ambigua França
Convolvulus tricolor França
Convulvolus tricolor Holanda Penicillium sp.
Coreopsis verticilata Holanda
Coriandrum sativum USA Alternaria alternata
Coriandrum sativum USA
Cosmos bipinatus X Bidens bipinatus Holanda
Cosmos bipinnatus Holanda
Cucumis melo China, Espanha, Israel, Peru, Tailândia
Cucumis melo Israel Chaetomium sp.
Cucumis melo USA Lewia sp.
Cucumis melo Espanha Didymella bryoniae
Cucumis melo China Didymella bryoniae
Cucumis sativus Chile, China, Holanda, Itália, Japão, USA
Cucumis sativus USA Didymella bryoniae
Cucurbita moschata Japão, USA
Cucurbita moschata USA Aspergillus sp.; Penicillium sp.
Cucurbita moschata Japão
Cucurbita moschata x C. maxima Japao
Cucurbita pepo Chile, China, USA
Cucurbita pepo USA Rhizopus sp.
Cucurbita pepo USA Alternaria brassicicola
Cuminum cyminum Holanda
Cynodon dactylon USA Dreschera sp.
Cynodon dactylon USA Alternaria alternata; Bipolaris sorokiana
Dahlia chinensis Holanda
Dahlia pinnata Holanda Fusarium solani
Dahlia pinnata Alemanha
Dahlia variabilis Holanda Fusarium solani
Daucus carota Italia Alternaria dauci
Daucus carota Italia Alternaria alternata
Daucus carota França Alternaria dauci
Daucus carota USA Alternaria dauci
Daucus carota USA
Delphinium consolida Holanda
Dianthus barbatus Holanda
Dianthus caryophyllus Alemanha, Holanda
Dianthus caryophyllus Holanda Fusarium solani
Dianthus caryophyllus Holanda Fusarium solani
Dianthus chinensis Holanda
Dianthus chinensis Holanda Alternaria alternata; Fusarium solani
Dianthus chinensis Holanda Fusarium solani
Dianthus chinensis X D. barbatus Holanda
Digitalis purpurea/D.lanata Holanda
Dimorphoteca sinuata/Venidium fastuosum Holanda
Dimorphotheca sinuata Holanda
Dorotheanthus berllidiformis Holanda
Eruca sativa Italia
Eschischolzia californica Holanda
Eucalyptus gunii Alemanha
Foeniculum vulgare Holanda Fusarium solani
Foeniculum vulgare X Pimpinela anisum Holanda Alternaria alternata
Foeniculum vulgare X Pimpinela anisum Holanda
Fragaria vesca Holanda Penicillium sp.
Fragaria vesca Holanda
Gazania rigens Alemanha
Gypsophila elegans França, Holanda
Helianthus annus Alemanha Penicillium sp.; Rhizopus sp.
Helianthus annuus França
Impatiens balsamina Holanda
Ipomoea purpurea Holanda Fusarium solani
Ipomoea violacea/I. horsfalliae/I.purpurea Holanda
Lactuca sativa Chile, Holanda, Itália, USA
Lactuca sativa USA Alternaria alternata
Lathyrus odoratus França, Holanda
Lavandula officinalis França Alternaria alternata
Lavatera trimestris Holanda
Lavatera trimestris França
Lens culinaris Austrália Alternaria alternata
Limonium latifolium Alemanha
Lobularia maritima Alemanha, Holanda
Lupinus polyphyllus Holanda Fusarium solani
Lycopersicon esculentum China, França, Peru, Tailândia, Taiwan, USA
Lycopersicon esculentum Israel Fusarium solani
Lycopersicon esculentum Japao Penicillium sp.
Lycopersicon esculentum China Fusarium solani
Lycopersicon esculentum Tailandia Fusarium solani
Lycopersicon esculentum Peru Fusarium solani
Mathiola incana Holanda Alternaria alternata
Matricaria chamomila Holanda
Medicago sativa Austrália Stemphyllum botryossum
Melissa officinalis Holanda
Mentha piperita Holanda
Miralabis jalapa Holanda
Myosotis alpestris Holanda
Nemesia strumosa Holanda
Ocimum basikicum Holanda
Ocimum basilicum maximum Holanda
Ocimum sp. Holanda Rhizopus sp.
Origamum vulgare/O. majorana Holanda
Origanum vulgare Holanda
Papaver nudicaule Holanda
Papaver nudicaule/ P. bracteatum Holanda
Papaver nudicaule/ P.bracteatum Holanda Alternaria alternata
Papaver orientale Holanda
Pelargonium hortorum Holanda
Pentas lanceolata Alemanha
Petroselinum crispum França, Italia, USA
Petroselinum crispum Italia Alternaria alternata
Petroselinum crispum França Pestalotiopsis sp.
Petroselinum crispum Italia Alternaria alternata
Petroselinum crispum França Alternaria alternata
Petunia x hybrida Holanda
Phaseolus vulgaris Holanda
Phaseolus vulgaris USA
Phlox drummondi Alemanha, Holanda
Phlox drummondii Holanda Fusarium solani
Phlox drummondii França Chaetomium sp.
Portulaca grandiflora Holanda
Portulaca grandiflora Holanda Fusarium solani
Primula elatior Holanda Penicillium sp.
Primula veris/P.obconica/ P. polyantha Holanda
Raphanus sativus Itália, USA
Raphanus sativus USA Alternaria alternata
Raphanus sativus Italia Aspergillus sp.
______________________________________________________________________ ***Espécie botânica sem indicação de fitopatógeno = nenhum fungo encontrado no lote
analisado
AGRADECIMENTOS
