Dosagem de lisozima na lágrima de recém-nascidos

Dosagem de lisozima na lágrima

de recém-nascidos

Lysozyme concentration in tears of newbom babies

Marcos Wilson Sampaio(1) Milton Ruiz Alves(2)t

Cecília Helena Silveira Corre a (3) Pedro Henrique Silveira Corre a (O)

Trabalho apresentado como Tema Livre no XXV

Congresso Brasileiro de Oftalmologia e XVII Congresso Panamericano de Oftalmologia. (1) Médico Assistente da Cllnica Oftalmológica

do Hospital

das

Cllnicas da FM USP. (2) Mldico Assistente Doutor da Cllnica Ofta/­

moMgica do Hospital

das

CItnicas da FMUSP.

(3) BiomMica pela Escola Paulista de Medicina. (4) MUico Responsdvel pelo Laborat&rio de

AndJises Cllnicas da Associação Maternidade de São Paulo.

Endereço pi COlTespondtlncia: Dr. Milton Ruiz Alves - R. Luiz Coelho, 308 - cjs. 15- 1 6 - 01309

- S. Paulo - SP

ARQ. BRAS. OFfAL. 53(4), 1990

RESUMO

A

concentração de lisozima lacrimal foi medida pelo método da lisoplaca em quarenta e sete recém-nascidos divididos em três gru­ pos; vinte e dois de termo, onze de termo com baixo peso e catorze prematuros.

A

concentração de lisozima foi maior no grupo de ter­ mo comparando-se com o grupo de baixo peso e prematuros e seus valores aumentaram com peso e idade gestacional dos recém-nasci­ dos.

Palavras-chave: Lisozima, Lágrima, Recém-nascido.

INTRODUÇÃO

Fleming, em

1 922 ,

comunicou a descoberta de "um elemento bacte­ riolítico notável" e de uma amostra de coccus gram-positivo, o

Micro­

coccus lysodeikticus. que era parti­ cularmente sensível

à

sua ação. Por apresentar uma ação principalmente lítica denominou-a lisozima. Eviden­ ciou, ainda, que estava presente em concentrações elevadas na clara do ovo, na lágrima humana, na saliva e nas secreções nasais e, em menor grau, no soro e nos leuc6citos(1 21.

Lisozima tem ação bacteriolítica despolimerizando os mucopolissacá­ rides da parede celular_ Além da

função antibacteriana, não há nada dermido a respeito de outras funções da lisozima no ser humanol1 1 I.

Condições que alteram a estrutura da conjuntiva e das glândulas lacri­ mais, como síndromes mucocutâneas ou tracoma, modificam o teor de li­ sozima lacrimal. Reduções desses níveis também são encontradas na ceratoconjuntivite seca, Síndrome de Sjõgren, artrite reumatóide, lupus eritematoso, desnutrição proteica, in­ fecções por herpes simples e con­ juntivites bacterianas(2,3,ll ,1 2,1 41 •

A presença de secreção ocular é um achado comum em recém-nasci­ dos e

uma

deficiência na atividade da lisozima poderia constituir-se em fator predisponente(61• Lisozima tem sido escassamente avaliada em re­ cém-nascidos.

O presente trabalho se propõe a avaliar a atividade da lisozima, atra­ vés do método da lisoplaca, correla­ cionando sua concentração com peso e idade gestacional de recém-nasci­ dos.

CASUÍSTICA E MÉTODOS

Casuística

Três grupos de recém-nascidos fo­ ram estudados:

22

de termo,

1 1

de termo com baixo peso e

1 4

prematu­ ros (Tabela

1).

A idade gestacional foi calculada a partir da data da última menstrua­ ção referida pela mãe. As amostras foram colhidas de ambos os olhos não-infectados nas primeiras

24

ho­ ras após o nascimento. Os pacientes foram oriundos do Berçário da As­ sociação Maternidade de São Paulo, tendo sido o material coletado com autorização da Diretoria Clínica e

1 85

Dosagem de lisozima

na

lágrima de rechn-nascidos

TABELA 1

Caracterfstlcas dos três grupos de reclSm-nascldos.

Recém-nascidos Termo Prematuro Tenno baixo peso

(22) ( 1 4) ( 1 1 )

Peso de nascimento (g)

média 3.396,81 2.228,57 2.627,27

variaçao 2.850-4.370 1 .300-3.020 2. 1 00-2.800 Idade gestacional (semanas)

média 39,63

variação 37-41

Chefia do Berçário, não tendo sido

observada qualquer reação ou incô­

modo de nota nas crianças.

Material

- Meio

de

"BBL".

cultura:

Eugonagar

- In6culo:

Micrococcus lysodeikti­ cus

da Sigma Chemical Company

lote 062F0250 com número de

catálogo M-0128.

- Discos de papel de filtro Whatman

número 4 1 com 6

mm

de diâmetro.

- Lisozima: Lysozyme grade

m

from Chicken egg white da Sigma

Chemical Company lote 024F8 130

com número de catálogo L-7oo1.

- Espectrofotômetro tipo Coleman

20/A.

Métodos

Foi empregado o método da BO­

NA VIDA

&

SAPSE(4) modificado

por

VILA &

MIMICA(17). As placas

de Petri foram elaboradas com 20 mI

de Eugonagar aquecido a 45°C e de­

pois refrigeradas. A cultura de

Mi­ crococcus lysodeikticus

pura foi en­

tão

diluída em solução fisiológica

com leitura de 10% de transmitância

no espectrofotômetro com compri­

�nto de onda de 570Â, tendo sido a

solução adicionada

ao

meio de cultu­

ra.

34, 50 38, 54

32-36 37-40

a 37°C por 24 horas. Os halos de lise

foram medidos com compasso con­

frontado com régua padrão. As con­

centrações conhecidas de lisozima

foram colocadas em ordenadas e os

valores dos balos obtidos em abscis­

sas. Obtivemos, já corrigidos pela

equação da reta da curva padrão, os

seguintes valores (Tabela 2):

TABELA 2

Concentraç6es conhecidas de Ilsozlma e valores dos halos jd corrigidos pela

equação da reta da curva padrão. Concentração de lisozima (mcglml) 30 60 1 20 250 500 800 1 000 1 600 3200 Halo de lise (mm) 1 1 ,62 1 1 , 79 1 2, 1 1 1 2,80 1 4,23 1 5, 89 1 7,00 20,32 29, 1 9

O s pacientes foram submetidos

à

colheita de lágrimas colocando-se os

discos com ajuda de

uma

pinça esté­

ril

no fómice inferior de ambos os

olhos, pe

rman

ecendo nesta posição

até

a sua

umec

tação, sendo então

re­

tirados e colocados sobre

uma

folha

de papel de filtro

Wha

tman

n2 4 1 por

30 segundos, visando obter

uma

aceitável padronização de quantida­

de do material

obtidol5,8,12,13).

Os

discos com as

amo

stras

de lágrimas

foram depositados sobre as placas de

Petri em número de 4 por placa (2

olhos de 2 pacientes). A seguir, as

placas perman

eceram

em estufa a

37°C por 24 horas, sendo depois

medidos os halos de lise pela mesma

pessoa com o aux1lio de compasso

confrontado com régua padrão.

Os resultados foram submetidos

à

análise numérico-estatística através

de cálculos

das

médias e desvios-pa­

drão e do coeficiente de correlação

de Pearson.

RESULTADOS

A Tabela 3 apresenta os resulta­

dos das médias e desvios-padrão dos

diâmetros de

lise

obtidos nos três

grupos de recém-nascidos.

O diâmetro de lise foi maior entre

os recém-

nasc

idos de termo compa­

rando-se com aqueles obtidos dos

permaturos e dos de baixo peso

(p

<

0,00 1). A média do diâmetro de

lise obtida entre os recém-nascidos

de termo foi de 16,75

mm,

o que

correspondeu a

uma

concentração de

lisozima de 930, 18 mcg/mI.

A Figura 1 correlaciona o diâme­

tro da zona de lise e idade gestacio­

nal.

A concentração de lisozima cres­

ceu com o aumento da idade gesta­

cional dos recém-nascidos (r=0,49;

p

<

0,(01).

A Figura 2 correlaciona o diâme­

tro de lise e peso dos recém-nasci­

dos.

A concentração de lisozima cres­

ceu com o aumento do peso dos

re­

cém-nascidos (r=0,63; p

<

0,(01).

TABELA ₃

Para a realização da curva padrão

foram empregadas diluições da liso­

zima em tampão de fosfato pH 6 em

diluições de 3.200, 1 .600, 1 .000,

800, 500, 250, 120, 60 e 30 mcg/mI.

PUdias e desvios-padrão dos diâmetros de Ilse nos três grupos de rec:4m-nascld08.

Os discos de papel de filtro de

6

mm

f

oram

embebidos nessas con­

centrações e colocados nas placas de

Petri e estás pe

rman

eceram em estufa

186 Recém-nascidos Média de lise (mm) Desvio-padrão Tenno 1 6, 75 0,91 Prematuro 1 5, 04 1 , 77 T. Baixo peso 1 5,50 0,74

Dosagem de lisozima

na I4grima

de rec/m-nascidos

Use (diâmetro mm)

1 9 1 7 1 5 1 3 1 1 9 7 5 �� __

�

__

�

__

�

__ ���� __ -L __

�

__ ����-J 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49

Idade gestacional

Figura 1 -DIAmelro da zona de llse e Idade gestaclonal.

20

Lise (diâmetro mm)

1 8 1 6 1 4 . . 1 2 1 0 �----�----�--�---r----.----'---r----' 1 000 1 500 2000 2500 3000 3500

Peso (g)

4000 4500 5000

Figura 2 -Diâmetro de Ilse e peso dos recám-nascldos.

DISCUSSÃO

o filme

lacrimal é, classicamente, descrito como sendo dividido em três camadas: mucosa, lipCdica e aquosa. ARQ. BRAS. OFTAL. 53(4), 1990

A COmpoS1Çao qu1inica da camada aquosa é complexa; ela contém água, eletrolitos, carboidratos, uréia, ami­ noácidos, lipCdeos, enzimas, cerulo­ plasmina, lactofenina, lisozima, betalisina, imunoproteÚlas, etc.

Cer-ca de sessenta componentes já fomm identificados no filme lacrimal. A glândula lacrimal secreta, no míni­ mo, vinte destes componentes, in­ cluind

o

a lisozima(9,1 1 ,15).

Os valores nonnais de dosagem de lisozima na lágrima de adultos

re­

feridos por BONA VIDA &

SAPSE(4)

foram cerca de

1.700

mcglm1 e de

1 .975

mcglm1 por Vll..A & MIMI­ CA(1 7). Os valores encontrados em recém-

nasc

idos foram de

1 . 1 18

mcglm1 por

ETCHES

et al.(6); de

700-800

mcg/m1 por BONA VIDA &

SAPSE(4)

e de

930

mcglm1 nos

re­

cém-nascidos de termo deste traba­ lho. Estas dosagens foram

rea]jzadas

sempre em lágrimas coletadas de olhos que não apresentavam infec­ ção.

Não existe informação na literatu­ ra

pesquisada

correlacionando liso­ zima e fatores não-lisozimais em re­ cém-nascidos com conjuntivites. Nossos resultados, concordantes com os de ETCHES et al.(6), mostram

re­

dução do nível de lisozima nas lá­ grimas de recém-nascidos de termo com baixo

peso

e em prematuros. Isto poderia tomá-los mais susceptí­ veis

à

infecção ocular. Este é

um as­

sunto que merecerá, sem dl1vida, ser estudado futuramente. Contudo, pa­

rece

provável que a lisozima

repre­

senta somente

uma

fiação de

uma

frente ampla de fatores antibacteria­ nos sinergistas(6).

De

fato, conside­ rando-se que imunoglobulinas espe­ cfficas como

19A

e IgG, imunoglo­ bulinas não-especfficas, lactofenina, lisozima e ceruloplasmina formam

uma

linha de defesa contra infecção externa que parece

ser

mais efetiva que anticorpos produzidos sistemi­ camente!1 ,7,10), isto ressalta que o pa­ pel individual de defesa da lisozima ainda não está adequadamente ava­ liado.

SUMMARY

The

concenlration of lysozyme in

the lacrimal tear of

newbom

babies

was measured by

a

modification of

the lysoplate method.

The 47

bom

babies were classified in three groups;

22

normal terms,

1 1

small-fordates

and 1 4

preterms. The lysozyme concentration was greater in the normal term babies compared with the other two groups

and

in­ creased with gestational age and weight of the newboms.

AGRADECIMENTO

Agradecemos ao _{Dr. Matheus Ajzem­}

berg, Médico Pediatra, Chefe do Berçário da Associação Maternidade de São Paulo, pelo acesso e facilidades na realização deste trabalho.

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