The genetic variant C825T of the beta 3 subunit of G protein is associated with hypertension in a Portuguese population

(1)

www.revportcardiol.org

Revista

Portuguesa

de

Cardiologia

Portuguese

Journal

of

Cardiology

ARTIGO

ORIGINAL

A

variante

genética

c825t

da

subunidade

␤3

da

proteína

G

associa-se

com

a

hipertensão

arterial

numa

populac

¸ão

portuguesa

Ana

Célia

Sousa

a,∗

,

Roberto

Palma

dos

Reis

b

,

Andreia

Pereira

a

,

Soﬁa

Borges

a

,

Sara

Gouveia

a

_,

_Adelaide

_Spínola

a

_,

_Ana

_Isabel

_Freitas

a_,c

_,

_Grac

_¸a

_Guerra

a_,c

_,

Teresa

Góis

a

_,

_Mariana

_Rodrigues

a

_,

_Eva

_Henriques

a

_,

_Ilídio

_Ornelas

a

_,

Carolina

Freitas

a

_,

_Décio

_Pereira

a

_,

_António

_Brehm

c

_,

_Maria

_Isabel

_Mendonc

_¸a

a

a_Unidade_de_Investigac_¸ão,_Hospital_Doutor_Nélio_Mendonc_¸a,_Funchal,_Portugal b_Faculdade_de_Ciências_Médicas,_Universidade_Nova_de_Lisboa,_Lisboa,_Portugal c_Laboratório_de_Genética_Humana,_Universidade_da_Madeira,_Funchal,_Portugal

Recebidoa13demarçode2017;aceitea24desetembrode2017 DisponívelnaInterneta28demaiode2018

PALAVRAS-CHAVE Estudocaso-controlo; Hipertensãoarterial; Polimorﬁsmos; ProteínaG; GN␤3 Resumo

Introdução: AhipertensãoarterialéumproblemadeSaúdePública,afeta25%dapopulação adultamundial.Fatoresgenéticoseambientaiscontribuemparaasuapatogénese.O polimor-fismo C825Tdasubunidade␤3daProteína G(rs5443)favorece aprodução deumavariante alternativa,truncada,quefacilitaasinalizaçãointracelular,podeinterferirnaregulaçãoda pressãoarterial.Essavariantegenéticatemsidodescritacomoumfatorderiscoparaa hiper-tensãoarterial,comresultadoscontroversos.

Objetivo: AvaliaraassociaçãodopolimorfismoC825TdogeneGN␤3 comoaparecimentode hipertensãoarterial,numapopulaçãoportuguesadoArquipélagodaMadeira.

Métodos: Comumaamostrade1641indivíduos(médiade50,6±8,1anos),ﬁzemosumestudo caso-controlocom848indivíduoscomhipertensãoarteriale793controlos,ajustadospara o sexo e aidade. Todos osparticipantes colheram sanguepara análises bioquímicas e foram genotipados para o polimorﬁsmo C825T. Foifeita uma regressãologística para ver quais as variáveisquese relacionamcomahipertensãoarterial.A análisedosdadosfoifeitacomo

softwareestatísticoSPSS,versão19.0.Usamoscomolimiardesigniﬁcânciaovalordep<0,05.

Resultados: EncontramosumaassociaçãosignificativaentreopolimorfismoC825Teo apareci-mentodehipertensãoarterial(oddsratio=1,275;IC95%(1,042---1,559);p=0,018)nomodelo dominante,apósanálisemultivariada.

Conclusão:O polimorfismo C825T da subnidade ␤3da Proteína G está associado, de forma significativaeindependente,comoaparecimentohipertensãoarterialnanossapopulação. ©2018PublicadoporElsevierEspaña,S.L.U.emnomedeSociedadePortuguesadeCardiologia. ∗_Autor_para_{correspondência.}

Correioeletrónico:[email protected](A.C.Sousa).

https://doi.org/10.1016/j.repc.2017.09.018

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KEYWORDS Case-controlstudy; Hypertension; Polymorphisms; Gprotein; GNB3

ThegeneticvariantC825Tofthebeta3subunitofGproteinisassociatedwith hypertensioninaPortuguesepopulation

Abstract

Introduction:Hypertensionisanimportantpublichealthproblem,affectingabout25%ofthe adultpopulationworldwide.1Geneticandenvironmentalfactorscontributetoitspathogenesis. TheTalleleoftheC825Tpolymorphismofthebeta3subunitofGprotein(rs5443)leadstothe productionofatruncatedvariantthatenhancesintracellularsignalingandmayinterferewith theregulationofbloodpressure.Thisgeneticvarianthasbeendescribedasariskfactor for hypertension,althoughstudyresultsarecontroversial.

Objective:TheobjectiveofthisstudywastoanalyzetheassociationoftheC825Tpolymorphism oftheGNB3genewith theoccurrenceofhypertensioninaPortuguesepopulationfromthe Madeiraarchipelago.

Methods:A case-control study was performed with 1641 Caucasian individuals (mean age 50.6±8.1years),848withhypertensionand793controls.Bloodwascollectedfromall partici-pantsforbiochemicalandgeneticanalysis,includinggenotypingoftheC825Tpolymorphism. Logisticregressionanalysiswasperformedtodeterminewhichvariablesweresigniﬁcantly asso-ciated withthe onset of hypertension. Statistical analyses were performed using IBM SPSS version19.0andp-values<0.05wereconsideredstatisticallysigniﬁcant.

Results:Inourstudy,therewasasigniﬁcantassociationbetweentheC825Tpolymorphismof theGNB3geneandtheoccurrenceofhypertension(oddsratio1.275;95%conﬁdenceinterval 1.042-1.559;p=0.018)inthedominantmodel,aftermultivariateanalysis.

Conclusion:WeconcludethattheC825Tpolymorphismofthebeta3subunitofGproteinis signiﬁcantlyandindependentlyassociated withtheoccurrence ofhypertensioninthestudy population.

Introducão

A hipertensão arterial (HTA) é um problema importante desaúdepública,afetacercade25%dapopulac¸ãoadulta mundial1_. _É_um_fator _de_risco _de_doenc_¸a _{cardiovascular}_e

deprogressãoparainsuﬁciênciarenal,independentemente deoutrosfatoresderiscovascular2,3_._Na_populac_¸ão_adulta

portuguesa, asua prevalênciaglobal é de 42% (44,4%nos homense40,2%nasmulheres)4_.

Nasúltimasdécadas,muitos estudostêmsidofeitosno sentidodeesclarecerqualocontributogenéticono desen-volvimento da HTA. Sabe-se que de 20-40% da variac¸ão da pressão arterial é determinada geneticamente5,6_. _No

entanto, a genética molecular da HTA ainda permanece poucoesclarecida.

As proteínas G e seus recetores têm um papel cru-cialna sobrevivência celular.Essasproteínas fazem parte deumasuperfamíliade proteínas que,no estadoinativo, encontram-seacopladasarecetoresdamembranacelular. Quandoativadas, por estímulos adequados, grac¸as a pro-priedades funcionais e estruturais, migram pelo citosol e ativammúltiplosefetores,comosejamenzimas,canais ióni-cos, hormonas, neurotransmissores e fatoresautócrinos e parácrinos7_,_consumam_a_transmissão_de_sinais._Esse_é _um

processodeativac¸ãodoseventosintracelularespor estímu-losexternos.

A transduc¸ão de estímulos externos em sinais intra-celulares é comprovadamente um dos fatores de grande importânciaparaaperpetuac¸ãodascaracterísticasviáveis

na escala evolutiva. Tendo em vista o seu papel abran-gente,adeﬁciênciadaexpressãoouformasalteradasdessas importantesproteínaspodemlevaradistúrbiosmetabólicos globaisourestritos8_.

AsproteínasGtêmumaestruturaheterotrimérica, com-postaportrês subunidadesdenominadasalfa(␣),beta(␤) e gama(␥), codiﬁcadaspor genes distintos.A subunidade alfa(␣)éamaiscaracterísticadecadaproteínaGeéessa subunidade que interage com o recetor, liga-se ao GTP e regula os sistemas efetores9_. _As _subunidades_␤ _e _␥ _estão

associadasporligac¸õesnãocovalentese,quandose encon-tram ligadasàsubunidade ␣, conﬁguramo estado inativo daProteínaG10_._Os_dímeros_␤_e_␥,_para_além_de_servir_para

ancorarasubunidade␣,tambémtêminﬂuênciaem proces-sos celularesespecíﬁcos11,12 _e_podem _modular_a _atividade

dedeterminadosefetores13_._Devido_ao_seu_papel_crucial_na

func¸ãodemuitostiposdecélulas,asanormalidades gené-ticas nassubunidadesdas proteínas Gtêm opotencial de estarenvolvidasnaetiologiadeumavastagamadesituac¸ões clínicas.

Ogenequecodificaasubunidade␤3daProteínaGestá localizadonocromossoma12p13.Opolimorfismoda subuni-dade␤3daProteínaG(C825T)rs5443situa-senoexão10do geneGN␤3,ondehá umasubstituição dacitosina(C)pela timidina (T) nonucleótido 825. O alelo825T está associ-ado com a ocorrência dum splicing alternativo dentro do exão9,noqualosnucleótidos498-620sãoeliminados14,15_.

Como resultado, os aminoácidos 167 a 197 estão ausen-tesnaproteínacodiﬁcada(designadaG␤3-s).Essavariante

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Avariantegenéticac825tdasubunidade␤3daproteínaGassocia-secomahipertensão 501 truncadaplice (G␤3-s)éumaproteína funcionalque

con-fere uma ativac¸ão aumentada das proteínas G, facilita a sinalizac¸ãointracelular14,16_._Dado_que_a_ativac_¸ão_da_proteína

G é oevento-chave na transdução desinalintracelular, o polimorfismoC825Ttemumpapel importantenaetiologia dumavasta gamadesituaçõesclínicas,bemcomona res-postaafármacos17_._Essa_variante_genética_foi_descrita_como

associada a várias patologias, HTA14,15,18---20_, _obesidade21_,

depressão22 _e _doenc_¸as _{cardiovasculares}23_. _Além _disso, _o

alelo825Tpodeservircomomarcadorfarmacogenéticona previsãoderespostasaváriosfármacoscomosejam: diuré-ticos,antidepressivos,sildenaﬁl,clonidina,ngiotensinaIIe endotelina-117_.

Noentanto,osresultadosdealgunsestudosnão demons-traramassociac¸ãodessavariantegenéticacoma HTA24-26_.

Háestudosqueconfirmameoutrosquerejeitamaligação do polimorfismo da subunidade ␤3da Proteína G (C825T) àHTA,justifica-se avaliara suaeventualassociação numa populaçãoportuguesa.

Objetivo

AvaliaraeventualassociaçãodopolimorfismoC825Tda Pro-teínaG(GN␤3,rs5443)comoaparecimentodeHTA,numa populaçãoportuguesadoArquipélagodaMadeira.

Métodos

Protocolodoestudoeaprovac¸ãoética

EsteestudofoiaprovadopelaComissãodeÉticadoSesaram (Servic¸o de Saúde da Região Autónoma da Madeira) e foi conduzidodeacordocomasdiretrizeséticasinternacionais daDeclarac¸ãodeHelsínquiade2013.

Todososindivíduosassinaramotermodeconsentimento informadoeforaminformados,pelomédicointernistacom maisde10anosdeexperiência,acercadacolheitade san-gue para análisee armazenamentoe reutilização de ADN ededadosclínicosrelevantes.Asamostrasdesanguepara finsgenéticossãomantidasnonossobiobanco depesquisa hospitalardeacordocomosartigos6,15e16daDeclaração UniversaldaUnescosobreBioéticaeDireitosHumanos.

Populac¸ãodoestudo

Esteestudo foifeitonoArquipélagodaMadeira, Portugal, cujapopulaçãoédecercade300000habitantes.Os indiví-duosparticipantesnoestudosãodeetniabranca,naturais do Arquipélagoda Madeira, e osseus progenitores (1.a e 2.a geração) sãotambémnascidosnessearquipélagoe da mesmaetnia.Procuramosdessaformaqueessapopulação deindivíduosfossegeneticamentehomogéneae represen-tasseassimumapopulaçãodaEuropadoSul.

Comumaamostrade1641indivíduoscommédia50,6± 8,1anos,848(49,9%)eramdogéneromasculino, seleciona-dossequencialmentedasconsultasdemedicinagerale fami-liaredemedicinainternadoHospitalCentraldoFunchal.

Constituímosdois grupos,com anossaamostra, conso-ante tinham ou não HTA, procuramos que não houvesse

diferenc¸assigniﬁcativasentreambos osgrupos emtermos desexoeidade.

Hipertensãoarterial

AHTAfoiconsideradaseosindivíduosàentradanoestudo jáestivessem diagnosticados e/ou cumprissem medicac¸ão anti-hipertensiva havia mais de três meses ou ainda se fossemhipertensosrecém-diagnosticadoscompressão arte-rial sistólica (PAS) e/ou pressão arterial diastólica (PAD) ≥140/90mmHg,avaliadaem,pelomenos,trêsocasiões27_.

Foram excluídos todos os indivíduos com hipertensão secundária, tais como hiperaldosteronismo primário ou doençarenalclinicamenterelevante, e osquereceberam medicaçãoparaoutrasindicaçõesquepodeafetarapressão arterial.

Oscontrolosnormotensosnuncatinhamfeitomedicação anti-hipertensivaeapresentavamPAS/PAD<140/90mmHg. Foiavaliadaapressãoarterialatodososindivíduos,após 10min derepouso, em posiçãosentada, nobraço direito, com o uso de um esfigmomanómetro Welch Allyn padrão (fasesIaV),efoiregistadaamédiadetrêsleiturasfeitas comintervalodedoismin27_.

Recolhadedados

Todos os participantes responderam a um questionário padronizadoemrelac¸ãoaidade,sexo,estilodevida, taba-gismo, consumo de álcool, história pessoal e familiar de eventoscardiovasculares,nomeadamenteacidentevascular cerebraledoenc¸adasartériascoronáriasehistóriafamiliar deHTA.

Foramavaliados,emtodososparticipantes,os parâme-trosantropométricos.Foimedidaaalturaem centímetros e o peso em quilogramas e calculado o Índice de Massa Corporal(IMC)comousodafórmula(kg/m2₎28_._O_IMC_foi

divididoemtrêssubgrupos:normal(<25kg/m2_),_excesso_de

peso(25≤IMC<30kg/m2₎_e_obesidade_(IMC_≥₃₀_kg/m2₎28_.

Operímetroabdominalfoiavaliadoeconsideradoelevado quandosuperior a94cm parao sexomasculino ea 80cm para o feminino29_. _A _razão _cintura/anca _foi _calculada,

foi considerada elevada para um valor > 0,9 para o sexo masculinoe>0,8paraofeminino29_.

A velocidade de onda de pulso (VOP) foi determinada por tonometria através do Complior como previamente descrito30_._Um_valor_de_VOP_>₁₀_m/s2_foi_considerado

ele-vado. A diabetes mellitus (DM) foi deﬁnida por um nível deglicose emjejum≥126mg/dle/ouumníveldeglicose ≥200mg/dle/ouumahistóriadetratamentoparaDM31_.

Sedentarismofoideﬁnidoquandoosindivíduosnão pra-ticavampelomenos150minutos/semanadeatividadefísica moderadaavigorosa29_.

Consideraram-se fumadores aqueles que à data da entradanoestudotinhamhábitostabágicosedividiu-seessa variávelemtrêssubgrupos,consoanteonúmerodecigarros consumidospordia:deuma10cigarros;entre10a20 cigar-rosemaisde20cigarros.Osindivíduosqueingeriamálcoolà entradadoestudoforamconsideradoscomotendohábitos alcoólicos.Quantiﬁcou-seoconsumo deálcoolemgramas por semana, foi considerado excesso quando superior a 70 gr/semana no sexo masculino e 50 gr/semana no feminino.

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Análisebioquímica

Asamostrasdesangueforamextraídasapós14-16horasde jejume o plasma foi preparadopara a quantificação dos perfis biológicos. As análises bioquímicas foram feitas no LaboratórioCentraldoHospital,deacordocomastécnicas usuais.

Paradeterminarocolesteroltotal,HDL,LDL,triglicéridos eglucose,asamostrasdesangueforamcolocadasemtubos secos,centrifugadasdurantemeiahoraa3500ge posteri-ormentequantiﬁcadas poruma técnica enzimáticacom o usodeumanalisadorautomático«AU5400»(Beckman

Coul-ter).Osmarcadoresbioquímicosderisco lipoproteína(a),

apoliproteínaBeaProteínaC-reativadealtasensibilidade (PCR-as)foramquantificadospor umaparelhoautomático «AU5400»(BeckmanCoulter) pelatécnicade imunoturbi-dimetria. Em relação ao fibrinogénio, a colheita também foifeitacomodoenteemjejum,paraumtubocomcitrato de sódio, com o uso de um analisador automático «ACL TOP700».

AnálisegenéticadopolimorﬁsmoC825Tdogene GN␤3

O ADN genómico foi extraído dos leucócitos do sangue periféricocom o uso dométodo desalting-out. Aanálise genotípicafoiefetuadacomsondasoligonucleotídicas mar-cadascomfluorescênciaespecíficaparacadaumdosalelos numensaioque combinaa técnicaconvencionada dePCR ea técnicaTaqMan(Applied Biosystems). Osprimerse as sondas foram as pré-estabelecidas pelo fornecedor (Taq-Man SNP Genotyping Assays, Applied Biosystems) para o polimorfismoC825TdogeneGN␤3(rs5443),os oligonucleó-tidosforamsintetizadoseosmarcadoresfluorogénicosFAM eVICacopladosàsextremidades5’dassondasdemodoa alcançaradiscriminaçãoalélica.Areaçãodepolimerização em dois passos consistia em 40 ciclos de desnaturação a 92◦Cdurante15segundos edeprimerannealinge exten-sãoa60◦Cduranteumminutoefoiefetuadanumaparelho 7.300Real-TimePCRSystem(AppliedBiosystems).Os genó-tiposforamdeterminadoscomo7.300SystemSDSSoftware (AppliedBiosystems)semqualquerconhecimentopréviodos dadosclínicosindividuais(Fig.1).

Análiseestatística

As variáveiscategóricassão apresentadaspela frequência e a sua respetiva percentagem, com o uso do teste de qui-quadrado.As variáveis contínuas sãoexpressascom a média±desviopadrãooumediana(mínimo---máximo).Para comparar asvariáveis contínuas foram usados ostestes t

deStudentou o testenão paramétricodeMann-Whitney, conformeapropriado.

OequilíbriodeHardy-Weinbergfoicalculadoparacada um dos genes com o uso do teste de qui-quadrado. Um valor de p inferior a 5% foi considerado estatisticamente significativo,enquanto ovalor Pb(pdivididopelo número totaldecomparações)foi consideradoapósa correçãode Bonferroni.

Paradeterminar,poranálisemultivariada,quaisas variá-veis associadas ao aparecimento de HTA, foi elaborada

uma regressão logística com o uso do método Forward Wald.

Aforc¸ade associac¸ão foideterminada pela oddsratio

(OR)epelosrespetivosintervalosdeconﬁanc¸a(IC)a95%. Os dados estatísticos foram analisados com o uso do

softwareestatísticoSPSS(StatisticalPackagefortheSocial

Sciences)versão19.0.Usamoscomolimiardesigniﬁcância ovalordep<0,05.

Resultados

Característicasdosparticipantesdoestudo

Apresentamos as características basais dos participantes do estudo na Tabela 1. A população estudada é com-postapor1641indivíduos,848casoscomHTA(idademédia de 50,8 ± 8,1; 51,8% do sexo masculino) e 793 con-trolos sem HTA (idade média de 50,3 ± 8,2; 47,9% do sexo masculino). As variáveis género e idade foram ajus-tadas entreos grupos, nãohouvediferenças significativas (Tabela1).

Verifica-sequehouvediferençasignificativaemrelação às seguintes variáveis: consumo de álcool (p = 0,008), IMC e obesidade (p < 0,0001), perímetro abdominal (p < 0,0001) e cintura/anca (p < 0,0001), apresentaram valo-res médios mais elevados no grupo dos hipertensos em relação aos controlos. Da mesma maneira, a DM, disli-pidémia, pressão arterial sistólica e distólica, frequência cardíaca e a VOP foram mais frequentes no grupo dos indivíduos hipertensos em relação aos normotensos, com significânciaestatística(p<0,0001).Nogrupodos hiperten-sos,haviamaisindivíduos comhistória pessoal(p=0,002) e familiar(p<0,0001) deeventoscardiovasculares,assim como história familiar de HTA (p < 0,0001). Constatou-se também que havia uma maior percentagem de fumado-resnogrupodos controlosemtodosossubgrupos,exceto nos que fumavam mais de 20 cigarros/dia, em relação ao grupo dos hipertensos e com significância estatística (p<0,0001).

Em relação às variáveis bioquímicas (Tabela 2), houve diferença significativa entre os dois grupos em relação à hemoglobina (p < 0,0001), leucócitos (p < 0,0001), fibrinogénio (p < 0,0001), HDL-colesterol (p < 0,0001), triglicerídeos(p<0,0001),apolipoproteínaB(p<0,0001), glicoseemjejum(p<0,0001)ePCR(as)(p<0,0001),que também apresentaram valores médios mais elevados no grupodoshipertensosemrelaçãoaoscontrolos.Emrelação àsvariáveis colesterol total,LDL- colesterol,lipoproteína (a) e plaquetasnãohouvediferença significativaentreos doisgrupos(p>0,05).

Frequênciasalélicasegenotípicasdopolimorﬁsmo genéticoGN␤3C825TeriscodeHTA

Apresentamos as frequências dos alelos do polimorfismo genético C825T do gene GN␤3 na Tabela 3. A frequência dosalelosCeTdopolimorfismoC825Tnapopulaçãototal danossaamostrafoide60,5%ede39,5%,respetivamente. Nogrupodoscasosecontrolosseguiuamesmatendência, atingiuumvalordeORde1,106,massemsignificância esta-tística(p=0,158)(Tabela3).

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Avariantegenéticac825tdasubunidade␤3daproteínaGassocia-secomahipertensão 503 24.000 20.000 16.000 12.000 8.000 4.000 0.000 0.000 1.000 2.000 3.000 4.000 Allele X (GNB3 C) Allele Y (GNB3 T) Allelic Discrimination GNB3 TT GNB3 CT GNB3 CC 5.000 6.000

Figura 1 Discriminac¸ão genotípica do polimorﬁsmo C825T do gene GN␤3 no Aparelho 7300Real-Time PCR System (Applied Biosystems).

Tabela1 Característicasdemográﬁcaseclínicasdosparticipantesdoestudo

Variáveis Total(n=1.641) Hipertensos(n=848) Controlos(n=793) Valorp

Idade,anos 50,6±8,1 50,8±8,1 50,3±8,2 0,212 Sexomasculino,n(%) 819(49,9) 439(51,8) 380(47,9) 0,119 Sedentarismo,n(%) 887(54,1) 476(56,1) 411(51,8) 0,080 Álcool,n(%) 627(38,2) 350(41,3) 277(34,9) 0,008 Excessoálcool,n(%) 536(32,8) 291(34,3) 245(31,2) 0,176 Tabagismo,n(%) 375(22,9) 164(19,5) 211(26,6) <0,0001 1a10cig,/dia,n(%) 142(37,9) 59(36) 83(39,3) 0,002 10a20cig,/dia,n(%) 118(31,5) 40(24,4) 78(37) >20cig,/dia,n(%) 115(30,7) 65(39,6) 50(23,7) IMC,kg/m2 _27,7_±_4,9 _29,2_±_5,2 _26,2_±₄ _<_0,0001 Normala_,_n_(%) ₄₆₆_(28,4) ₁₄₃_(16,9) ₃₂₃_(40,7) _<_0,0001 Excessodepesob_,_n_(%) ₇₃₄_(44,7) ₃₇₉_(44,7) ₃₅₅_(44,8) Obesidadec_,_n_(%) ₄₄₁_(26,9) ₃₂₆_(38,4) ₁₁₅_(14,5) Perímetroabdominal♦,n(%) 1217(74,2) 710(83,7) 507(63,9) <0,0001 Cintura/Anca˚,n(%) 1461(89) 788(92,9) 673(84,9) <0,0001 Diabetes,n(%) 169(10,3) 134(15,8) 35(4,4) <0,0001 Dislipidémia,n(%) 815(49,7) 470(55,4) 345(43,5) <0,0001 PAS,mmHg 134,4±20,4 147,2±18,9 120,7±10,9 <0,0001 PAD,mmHg 84,5_±12,1 91,1_±11,7 77,4_±7,7 <0,0001

Frequênciacardíaca,bat./min. 72,1±11,8 73,1±12,2 71±11,2 <0,0001

VOP,m/s2 ₈_±_1,5 _8,4_±_1,5 _7,7_±_1,3 _<_0,0001

VOP>10m/s2_,_n_(%) ₁₆₀_(9,8) ₁₁₇_(13,8) ₄₃_(5,4) _<_0,0001

EventosCV,n(%) 41(2,5) 31(3,7) 10(1,3) 0,002

CVfamiliar,n(%) 539(32,9) 327(38,6) 212(26,7) <0,0001

HTAfamiliar,n(%) 609(37,1) 405(47,8) 204(25,7) <0,0001

Cig.:cigarros;CV:cardiovasculares;HTA:hipertensãoarterial;IMC: índicedemassacorporal;PAD:pressãoarterialdiastólica;PAS: pressãoarterialsistólica; 70gr/diaparaoshomense>50gr/diaparaasmulheres;VOP:Velocidadedeondadepulso

a _IMC_<_25kg/m2 b ₂₅_≤_IMC_<_30kg/m2

c _IMC_≥_30kg/m2_;_♦_>₉₄_cm_para_os_homens_e_>₈₀_cm_para_as_mulheres;_>_0,9_para_os_homens_e_>_0,8_para_as_mulheres;_{Signiﬁcância} estatísticaparap<0,05.

A frequência de cada genótipo em ambos os grupos, casosecontrolos,foiencontradaem conformidadecomo equilíbriode Hardy-Weinberg (Tabela4).O genótipomais

frequente,no modelo aditivo, foi o heterozigotoCT, que apresentou valores de 50,7% e 44,3% nos casos e contro-los, respetivamente, quando comparado com o genótipo

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Tabela2 Característicasbioquímicasdosparticipantesdoestudo

Variáveis Total(n=1.641) Hipertensos(n=848) Controlos(n=793) Valorp Hemoglobina,g/dl 14,3(9,6-18,2) 14,4(9,6-18,2) 14,2(10,1-17,6) <0,0001 Plaquetas,103_/_␮l _229,0_(23-664) _233,0_(23-664) _227,0_(65-544) _0,206 Leucócitos,103_/_␮l _6,4_(2,1-18) _6,6_(2,9-18) _6,2_(2,1-16,6) _<_0,0001 Fibrinogénio,mg/dl 362(179,2-874) 371,0(179,2-874) 355,3(224-688) <0,0001 Glicose,mg/dl 95(66-364) 98,0(70-360) 93,0(66-364) <0,0001 Lipoproteína(a),mg/dl 16,3(0,6-236) 16,6(0,6-236) 16,2(0,8-198,2) 0,730 Colesterol,mg/dl 207(107-370) 208,5(115-344) 206(107-370) 0,193 HDL-C,mg/dl 48(17,2-111,7) 46,9(17,2-103) 49(20,8-111,7) <0,0001 LDL-C,mg/dl 131(37,7-269) 131(37,7-269) 131(42-260) 0,944 Triglicéridos,mg/dl 110(21-1098) 119,0(29-1098) 99,0(21-688) <0,0001 ApolipoproteínaB,mg/dl 104(3,9-232) 106,6(5,1-205) 99,7(3,9-232) <0,0001 PCR(as),mg/dl 0,2(0-18,5) 0,2(0-13,1) 0,2(0-18,5) <0,0001

Asvariáveisbioquímicassãoapresentadaspelamediana(mínimo-máximo).

HDL-C:colesteroldaslipoproteínasdealtadensidade; LDL-C:colesteroldaslipoproteínasdebaixadensidade;PCR(as):proteínaC reativadealtasensibilidade;signiﬁcânciaestatísticaparap<0,05.

Tabela3 FrequênciasalélicasdopolimorﬁsmogenéticoC825TdogeneGN␤3

C825T Total % Casos % Controlos % OR(IC95%) Valorp

C 1985 60,5% 1006 59,3% 979 61,7% 1,106(0,962---1,273) 0,158

T 1297 39,5% 690 40,7% 607 38,3%

Total 3282 100% 1696 100% 1586 100%

IC:Intervalodeconfiança;OR:oddsratio;significânciaestatísticaparap<0,05.

Tabela4 GenótiposdopolimorﬁsmogenéticoC825TdogeneGN␤3eriscodehipertensãoarterial

Polimorﬁsmo Genótipo Casos(n=848) Controlos(n=793) OR(IC95%) Valorp

GN␤3C825T CC 288(34,0%) 314(39,6%) Referência

---CT 430(50,7%) 351(44,3%) 1,336(1,079---1,653) 0,008

TT 130(15,3%) 128(16,1%) 1,107(0,827---1,482) 0,494

IC:intervalodeconfiança;OR:oddsratio;significânciaestatísticaparap<0,05.

homozigotodereferência CC.Esse genótipoacarretou um riscomaiorde1,336(p=0,008)emrelac¸ãoaohomozigoto mutado(OR=1,107;p=0,494)(tabela4).

Nomodelodominante(Tabela5),osindivíduoscom genó-tipo(CTouTT)tinhamummaiorriscodedesenvolverHTA (OR=1,275;IC95%=1,042---1,559)quandocomparadoscom ogenótipodereferência(CC)(p=0,018).

Análisederegressãologística

Foifeitaumaanálise deregressãologística (Tabela6), as variáveisque permaneceram naequação foram:DM, obe-sidade, consumo de álcool e os genótipos CT e TT do polimorfismoGN␤3,associaram-sedeformasignificativae independenteaoaparecimentodeHTA(Tabela6).

Oshábitostabágicossurgem naequação como variável protetoraemrelaçãoaoaparecimentodeHTA.O sedenta-rismosaiudaequação,nãoinfluenciouoaparecimentode HTA(Tabela6).

Discussão

No presente estudo, investigámos a existência de uma associação entre a variante GN␤3 825T da Proteína G e a HTA, numa população portuguesa do Arquipélago da Madeira. Osindivíduos com omodelo genético dominante apresentaram umrisco acrescido dedesenvolver HTA (OR = 1,275;IC95% =1,042---1,559; p =0,018),mesmo após a análisemultivariada,comcorreçãoparaosfatoresde con-fusão (obesidade,DM,sedentarismo, ingestão de álcoole hábitostabágicos).Essesresultadosdemonstramque,nessa população,asvariantesdaProteínaGseassociamàHTAde formaindependentedosfatoresderiscodeHTAjá conheci-dos,ouseja,acrescentamriscodeHTAaosfatoresderisco tradicionais.

Nanossapopulação,afrequênciaencontradaparaoalelo Tfoide39,5%nessapopulação,oqueésuperioràrelatada emoutraspopulaçõesdeetniabranca(37,7%),éinferiorà descritaparaosasiáticos(48,4%)eparaosnegros america-nos(76,3%)19_.

(7)

Avariantegenéticac825tdasubunidade␤3daproteínaGassocia-secomahipertensão 505

Tabela5 GenótiposdopolimorﬁsmogenéticoC825TdogeneGN␤3eriscodehipertensãoarterial(modelodominante)

Polimorﬁsmo Genótipo(modelodominante) Casos(n=848) Controlos(n=793) OR(IC95%) Valorp

GN␤3C825T CC 288(34,0%) 314(39,6%) Referência

---CT+TT 560(66,0%) 479(40,4%) 1,275(1,042---1,559) 0,018

IC:Intervalodeconfiança;OR:oddsratio;significânciaestatísticaparap<0,05.

Tabela 6 Análise de regressão logísticaa _com _o _modelo _genético _dominante _do _{polimorﬁsmo} _GN_␤3 _e _as _variáveis _de

confundimento

Variáveis B S.E. Wald df OR(IC95%) Valorp Diabetes 1,223 0,205 35,711 1 3,397(2,275---5,074) <0,0001 Obesidade 1,185 0,126 88,686 1 3,270(2,555---4,184) <0,0001 Álcool 0,243 0,109 5,010 1 1,276(1,031---1,579) 0,025 Tabaco -0,464 0,127 13,359 1 0,629(0,490---0,806) <0,0001 GN␤3(CT+TT) 0,236 0,108 4,755 1 1,267(1,024---1,566) 0,029 Constante -0,477 0,102 21,881 1 0,621 <0,0001

a _Método_Forwald_Wald_(SPSS_versão_19.0)._Saíram_da_equac_¸ão_{sedentarismo,}_sexo_e_idade.

B:betacoefficient;df:degreesoffreedom;IC:intervalodeconfiança;OR:oddsratio;S.E.:standarderror;significânciaestatística parap<0,05.

Ospresentesresultados,inovadoresnapopulac¸ão portu-guesa,vãonasequênciadealgunsestudoscomresultados semelhantes.

Pela primeira vez, Siffert et al.14 _{demonstraram,} _num

estudo com 426 pacientes, uma associação significativa do polimorfismo no gene GN␤3 sensível à toxina pertús-sis (GN␤3) com a HTA, (OR =1,79; IC 95% = 1,05---3,05; p = 0,03) numa população daAlemanha. Posteriormente, muitos estudosem nível mundial e em diferentes grupos étnicos encontraram associação entre o polimorfismo do GN␤3C825TcomaHTA14,15,17---19_ou_com_a_variac_¸ão_da_pressão

arterial32---34_.

Benjaﬁeldetal.15_,_num_estudo_feito_na_etnia_branca

con-cluíramqueavarianteGN␤3825TdaProteínaGseassociava comaHTA(OR=2,3;IC95%=1,7---3,3)15_.

Também numa população egípcia encontrou-se a associaçãodessavariantegenéticacomaHTA(OR=1,4;IC 95%=0,9---2,1)nomodelogenéticodominanteeque aumen-tavasignificativamentenomodelorecessivo(OR=2,3;IC95% =1,5---3,7)20_.

Zheng etal19_, _numa_{meta-análise}_que _envolveu₃₆₈₀₂

indivíduos,confirmaramumaassociaçãosignificativaentre o polimorfismo GN␤3 (C825T) e o risco global de HTA em brancosechineses,masessaassociaçãonãofoicomprovada noutraspopulaçõesasiáticas19_.

Emcontraponto,Guoetal.26_,_numa_{meta-análise,}

suge-rirampelaanáliseglobal dasevidênciasqueo aleloGN␤3 825T pode ser um bom indicador de risco de HTA, mas não evidenciou associac¸ão com a HTA em asiáticos e brancos26_.

Vários mecanismosﬁsiopatológicospoderão justiﬁcaro papelimportantedavariantegenéticaGN␤3C825Trs5443, nodesenvolvimentodeHTA.

Siffert et al.14 _descreveram _que _a _variante _truncada

splice- G␤3-sé umaproteínafuncionalque provoca uma

atividadeaumentadadasproteínasGnossistemas reconsti-tuídos,promovemelhorsinalizac¸ãointracelular14_.

Umapressãoarterialmaiselevadadeve-seaofactoduma maiorsensibilidadeàshormonaspressoresvasoativas, aque-las que transmitem os seus sinais através de proteínas GN␤335_.

Esseconceitoédemonstradoemestudosinvivo,provado pelofactodeosindivíduosportadoresdavariantegenética GN␤3825Tteremmaiorreatividadevascularnaestimulac¸ão derecetores␣1-adrenérgicoscoronários36_.

Meirhaegheetal.16_avaliaram_a_{vasomotilidade}_das

arté-rias coronárias em resposta à injeção intravenosa dum fármacovasoconstritor(metil-ergonovina)econcluíramque os indivíduos portadores de pelo menos um alelo T do GN␤3apresentarammaiorsuscetibilidadeàvasoconstrição quando comparados com os do genótipo selvagem CC. A subunidade G␤3-s está associada a aumentoda atividade dessa proteína, pode, portanto, incrementar a atividade do ␣1A-adrenoreceptor acoplado às proteínas G, explica amaiorvasoconstriçãoobservadaem respostaao fármaco vasoconstritor,emindivíduoscomoaleloGN␤3825T.

OutrahipóteseédefendidaporSiffertetal.14_,_de_que_o

inícioda HTA nos portadores do aleloT do GN␤3 poderá não se dever à vasoconstrição aumentada por hormonas vasoconstritorascomo a noradrenalinae a angiotensina II queativamheterotrímerosdasProteínasGnãosensíveisà toxinapertússis,massimresultardaproliferaçãodas célu-lasmusculares lisasvasculares que levamgradualmente à hipertrofiavascular14_.

Fizemos na nossa população uma análise de regressão logísticana qualforam estudadas asvariáveis de confun-dimento, como sejam obesidade, DM, hábitos alcoólicos, tabagismoeomodelogenéticodominantedopolimorfismo GN␤3,afimdeavaliarquaisasvariáveisqueserelacionavam deformasignificativaeindependentecomoaparecimento daHTA. Aobesidade ea DMsãovariáveis queconferiram riscosignificativodeaparecimento deHTAcomumORde 3,270(IC95%=2,555---4,184;p<0,0001)e3,397(IC95%= 2,275---5,074;p<0,0001),respetivamente.Opolimorfismo

(8)

GN␤3tambémsemantevenaequac¸ão,comumrisco(OR) de1,276(IC95%=1,024---1,566;p=0,029),oquedemonstra queseassociadeformasigniﬁcativaeindependentecomo aparecimentodeHTA.

Segundo os resultados do nosso estudo no grupo dos controloshaviaumamaiorpercentagemdeindivíduoscom hábitostabágicosdoquenogrupodoshipertensosemtodos ossubgrupos,excetonosfumadoresdemaisde20cigarros pordia. Apósa análise multivariada,oshábitostabágicos surgiram na equação como variável protetora em relação ao aparecimento de HTA. Isso se deve ao facto de ser considerado ter hábitos tabágicos aquando à entrada do estudo,portantoosindivíduosqueeramfumadoresativos, enão aquelesque tinhamtido históriade hábitos tabági-cos. Salienta-seo facto de que osindivíduos hipertensos, àentradadoestudo,jáestavamaserseguidosem consul-tasmédicas,em abordagem geraldo riscocardiovascular, o que terá levado a que alguns deixassem de fumar. No entanto,nonossoestudoverifica-seque,paraosindivíduos commaiorconsumotabágico,torna-semaisdifícilaevicção dessehábito.Sabemosqueaobesidadeétambémum impor-tantefatorderiscoparaodesenvolvimentodeHTA.Estudos transversais demonstram que obesidade está associada a níveismaiselevadosdepressãoarterial,deganhodepeso ao longo da vida, e é um importante preditor de desen-volvimentodeHTA37---40_._Vários_estudos,_em _populac_¸ões_de

váriasetnias,demonstraramaassociac¸ãodoaleloTdo poli-morﬁsmoGN␤3comaobesidade41,42_,_o_que_pode_afetar_as

variac¸õesdapressãoarterial43,44_.

Outros estudos que correlacionem a anormalidade dos complexos mecanismos transdutores a nível celular com outros processos patológicos podem ser a base para des-cobertasfarmacológicasimportantesparaaterapêuticada HTAedemuitasoutrasdoenc¸as.

Pontosfortesdoestudo

Opresenteestudoéoprimeiro estudocaso-controlofeito napopulac¸ãodaIlhadaMadeira,umapopulac¸ãoportuguesa geneticamentehomogénea45---47_e_{relativamente}_isolada,_em

queseinvestigaaassociac¸ãodopolimorﬁsmoGN␤3C825T comasuscetibilidadeparaaHTA.

Essa população, com as características citadas, repre-senta uma mais-valia para o mapeamento de distúrbios rarose,alémdisso,segundováriospesquisadores,oestudo depopulaçõesculturalmenteegeneticamenteisoladasque apresentamummododevida,hábitosalimentarese ambi-entenaturalidênticospodereduziravariaçãoambiental48_.

Conclusão

No estudo, o polimorfismo GN␤3 C825T associou-se de forma significativa e independente com o aparecimento deHTA, numapopulação portuguesa(OR = 1,275; IC 95% = 1,042---1,559; p = 0,018) no modelo dominante, mesmo apósanálisederegressãologística,naqualforamestudadas outrasvariáveisquepodemtambémassociar-seao apareci-mentodeHTA.

A identificação de genes candidatos e a compreensão da sua função contribuem para o estabelecimento duma basemolecularespecíficaparaHTA.Serãonecessáriosmais

estudoscomtamanhosdeamostramaiores,emdiferentes populac¸ões,paradeterminarseopolimorﬁsmoGN␤3C825T desempenhaumpapelrelevantenaetiologiadaHTA.

Financiamento

Programa Operacional de Valorizac¸ão do Potencial Econó-micoe Coesão Territorial daRegião AutónomadaMadeira (Intervir+).

Conﬂitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconﬂitosdeinteresse.

Bibliograﬁa

1.Kearney PM, Whelton M, Reynolds K, et al. Global bur-den of hypertension: analysis of worldwide data. Lancet. 2005;365:217---23.

2.NationalHeart,LungandBloodInstitute.FactBookﬁscalyear 1966.Bethesda,Md:NHLBI.

3.LewingtonS,ClarkeP,QizilbashN,etal.,ProspectiveStudies Collaboration. Age-speciﬁc relevance of usual blood pres-suretovascularmortality:ameta-analysisofindividualdata for one million adults in 61 prospective studies. Lancet. 2002;360:13---903.

4.Polónia J, Martins L, Pinto F,et al. Prevalence, awareness, treatmentandcontrolofhypertensionandsaltintakein Por-tugal:changesoveradecade.ThePHYSAstudy.JHypertens. 2014;32:21---1211.

5.GongM,HubnerN.Moleculargeneticsofhumanhypertension. ClinSci.2006;110:315---26.

6.LiftonRP.Moleculargeneticsofhumanbloodpressurevariation. Science.1996;272:676---80.

7.Neves SR, Ram PT, Iyengar R. G protein pathways. Science. 2002;296:39---1636.

8.EmalaCW,SchwindingerWF,WandGS,etal.Signal-transducing Gproteins:basicand clinicalimplications. ProgNucleic Acid ResMolBiol.1994;47:81---111.

9.FarfelZ,BourneHR,IiriT.TheexpandingspectrumofGprotein diseases.NEnglJMed.1999;340:20---1012.

10.MilliganG,KostenisE.HeterotrimericG-proteins:ashort his-tory.BrJPharmacol.2006;147:S46---55.

11.BezerraMGT,LatronicoAC,FragosoMCBV.Tumoresendócrinos associadosàsmutac¸õesdasproteínasGsalfaeGialfa2.Arq BrasEndocrinolMetabol.2005;49:784---90.

12.McCudenCR,HainsMD,KimpleRJ,etal.G-proteinsignaling: backtothefuture.CellMolLifeSci.2005;62:551---7.

13.HauacheOM.ReceptoresacopladosàproteínaG:implicações para a fisiologia e doenças endócrinas. Arq Bras Endocrinol Metab.2001;45:228---39.

14.SiffertW,RosskopfD,SiffertG,etal.Associationofahuman G-protein _␤3 subunit variant with hypertension.Nat Genet. 1998;18:45---8.

15.BenjaﬁeldAV,Jeyasingam CL,NyholtDR,etal. G-Protein(3 SubunitGene(GNB3)VariantinCausationofEssential Hyper-tension.Hypertension.1998;32:97---1094.

16.MeirhaegheA, BautersC,HelbecqueN,etal. Thehuman G--proteinbeta3subunitC825Tpolymorphismisassociatedwith coronaryarteryvasoconstriction.EurHeartJ.2001;22:845---8.

17.Siffert W. Effects of the G Protein Beta 3-Subunit Gene C825TPolymorphism:Should HypothesesRegardingthe Mole-cular Mechanisms Underlying Enhanced G Protein Activation BeRevised?Focuson‘‘ASpliceVariantoftheGProteinBeta

(9)

Avariantegenéticac825tdasubunidade␤3daproteínaGassocia-secomahipertensão 507

3-SubunitImplicatedinDiseaseStatesDoesNotModulateIon Channels’’.PhysiolGenomics.2003;13:81---4.

18.Li M, Zhang B, Li C, et al. G-protein beta 3 subunit polymorphismsandessentialhypertension:acase-control asso-ciation study in northern Han Chinese. J Geriatr Cardiol. 2015;12:127---34.

19.ZhengH,XuH,CuiB,etal.Associationbetweenpolymorphism oftheG-protein_␤3subunitC825Tandessentialhypertension: anupdatedmeta-analysisinvolving36,802subjects.BiolRes. 2013;46:265---73.

20.ElDinHemimiNS,MansourAA,AbdelsalamMM.Predictionof theRisk for EssentialHypertensionamong Carriersof C825T GeneticPolymorphismofGProtein_␤3(GNB3)Gene.Biomark Insights.2016;11:69---75.

21.KoKD,KimKK,SuhHS,etal.AssociationsbetweentheGNB3 C825Tpolymorphismandobesity-relatedmetabolicriskfactors inKoreanobesewomen.JEndocrinolInvest.2014;37:20---1117.

22.FangL,ZhouC,BaiS,etal.TheC825Tpolymorphismofthe G--proteinb3geneasariskfactorfordepression:ameta-analysis. PLoSOne.2015;10:e0132274.

23.SempliciniA,GrandiT,SandonàC,etal.G-protein␤3-subunit geneC825Tpolymorphismandcardiovascularrisk:anupdated review.HighBloodPressCardiovascPrev.2015;22:225---32.

24.Brand E, Herrmann SM, Nicaud V, et al. The 825C/T poly-morphism of the G-protein subunit, (3 is not related to hypertension.Hypertension.1999;33:1175---8.

25.Kato N, Sugiyama T, Morna H, et al. G protein _␤3 subunit variantandessentialhypertensioninJapanese.Hypertension. 1998;32:935---8.

26.GuoL,ZhangLL,ZhengB,etal.TheC825Tpolymorphismofthe G-protein_␤3subunitgeneanditsassociationwithhypertension andstroke:anupdatedmeta-analysis.PlosOne.2013;8.

27.European Society of Hypertension-European Society of Car-diology Guidelines Committee. 2003 European Society of Hypertension-EuropeanSocietyofCardiologyguidelinesforthe managementofarterialhypertension.

28.NationalInstituteofHealth,NationalHeart,Lung, andBlood InstituteNorthAmericanAssociationfortheStudyofObesity. ThePracticalGuide:Identiﬁcation,Evaluation,andTreatment ofOverweightandObesityinAdults.NHLBIObesityEducation Initiative,NIHPublicationNumber.2000,00---4084.

29.Authors/TaskForceMembers:PiepoliMF,HoesAW,AgewallS, etal.2016EuropeanGuidelinesonCardiovasculardisease pre-ventioninclinicalpractice:TheSixthJointTaskForceofthe EuropeanSocietyofCardiologyandOtherSocietieson Cardio-vascularDiseasePreventioninClinicalPractice(constitutedby representativesof10societiesandbyinvitedexperts) Develo-pedwiththespecialcontributionoftheEuropeanAssociation forCardiovascularPrevention&Rehabilitation(EACPR). 30.AsmarR,BenetosA,TopouchianJ,etal.Assessmentofarterial

distensibility by automatic pulse wave velocity measure-ment:validationandclinicalapplicationstudies.Hypertension. 1995;26:485---90.

31.ExpertCommitteeontheDiagnosisandClassiﬁcationof Diabe-tesMellitus.ReportoftheExpertCommitteeontheDiagnosis

andClassiﬁcationofDiabetesMellitus.DiabetesCare.2003;26: 3160-67.

32.HegeleRA, HarrisSB,HanleyAi,et al.Gprotein␤3subunit genevariantandbloodpressurevariationinCanadianOji-Cree. Hypertension.1998;32:688---92.

33.SchunkertH,HenseHW,DoringA,etal.Associationbetween a polymorphismintheG protein_␤3subunitgeneand lower reninandelevateddiastolicbloodpressurelevels. Hyperten-sion.1998;32:510---3.

34.HayakawaT,TakamuraT,AbeT,etal.AssociationoftheC825T polymorphismoftheG-proteinbeta3subunitgenewith hyper-tension,obesity, hyperlipidemia,insulinresistance,diabetes, diabetic complications, and diabetic therapies among Japa-nese.Metabolism.2007;56:44---8.

35.Schiffrin EL. Intracellular signal transduction for vasoac-tive peptides in hypertension. Can J Physiol Pharmacol. 1994;72:954---62.

36.Baumgart D,NaberC,HaudeM,et al.G protein␤3subunit 825T allele and enhanced coronary vasoconstriction on ␣2-adrenoceptoractivation.CircRes.1999;85:965---9.

37.KannelWB,BrandN,SkinnerJJJr,etal.Therelationof adi-positytobloodpressureanddevelopmentofhypertension.The Framinghamstudy.AnnInternMed.1967;67:48---59.

38.JohnsonAL,CornoniJC,CasselJC,etal.Inﬂuenceofrace,sex andweightonbloodpressurebehaviorinyoungadults.AmJ Cardiol.1975;35:523---30.

39.MikhailN,GolubMS,TuckML.Obesityandhypertension.Prog CardiovascDis.1999;42:39---58.

40.FrohlichED,MesserliFH,ReisinE,etal.Theproblemofobesity andhypertension.Hypertension.1983;5(III):71---8.

41.SiffertW,ForsterP,JöckelK-H,etal.Worldwideethnic distri-butionoftheGprotein(3subunit825Talleleanditsassociation withobesityinCaucasians,Chinese,andblackAfrican individu-als.JAmSocNephrol.1999;10:30---1921.

42.SiffertW,NaberC,WallaM,etal.Gprotein(3subunit825T alleleanditspotentialassociationwithobesityinhypertensive individuals.JHypertens.1999;17:1095---8.

43.IiriT,FarfelZ,BourneHR.G-proteindiseasesfurnishamodel fortheturn-onswitch.Nature.1998;394:35---8.

44.HegeleRA,AndersonC,YoungTK,etal.G-protein␤3subunit genesplicevariantandbodyfatdistributioninNunavutInuit. GenomeRes.1999;9:972---7.

45.Gonc¸alvesR,FreitasA, BrancoM,etal.Y-chromosome Line-agesfrom Portugal,Madeira and Ac¸oresRecord Elementsof Sephardim and Berber Ancestry. Annals of Human Genetics. 2005;69:443---54.

46.BrehmA,PereiraL,KivisildT,etal.Mitochondrialportraitsof theMadeiraandAc¸oresarchipelagoswitnessdifferentgenetic poolsofitssettlers.HumGenet.2003;114:77---86.

47.Kristiansson K,Naukkarinen J, PeltonenL. Isolated populati-ons and complex disease gene identiﬁcation. Genome Biol. 2008;9:109.

48.JordeLP,WoodingSP.Geneticvariation,classiﬁcationandrace. NatGenet.2004;3611suppl:528---33.