Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 19(4): 227-231, Out-Dez, 1986
CARACTERÍSTICAS DAS CÉLULAS PARASITADAS PELO TRYPANOSOMA
CRU ZI N A PAREDE D A VEIA CENTRAL DAS SUPRA-RENAIS DE
CHAGÁSICOS CRÔNICOS
Hipolito de Oliveira Almeida, Elizabeth Martins, José Umberto Franciscon,
Vicente de Paula Antunes Teixeira, Alfredo José Afonso Barbosa, Helenice Gobbi e
Marlene Antonia dos Reis
Foram analisados os aspectos das células m usculares parasitadas pelo Trypa-
nosom a cruzi, na veia da supra-renal de chagásicos crônicos, através de exam e ao
m icroscópio óptico de lâm inas coradas pela hem atoxilina-eosina (H E ), P A S, Feulgen e peroxidase-antiperoxidase (PA P ) para antigenos do T. cruzi. A lém das modificações nucleares descritas anteriormente, os leiom iócitos parasitados exibem alterações cito- p lasm áticas que podem ser vistas m esm o em células que albergam poucos parasitas. A s fo rm a s am astigotas geralm ente estão envoltas p o r halo claro e o citoplasm a restante adquire aspecto granuloso ou reticular, basófilopelo H E, sendo sempre P A S e Feulgen negativos. E stes dados sugerem que o m aterial basófilo no citoplasm a deve ser R N A ribossômico. A periferia dos ninhos que m ostram um a “m em b ra n a ” com reação do P A P para antigenos do T. cruzi fortem ente positiva, poderia ser devida a reação cruzada de m aterial celular rechaçado pa ra a periferia ou a difusão de antigenos do T. cruzi e sua adsorção à periferia celular. O m aterial citoplasm ático P A P positivo poderia resultar de artefato, de reação im unocitoquim ica cruzada, de antigenos tripanossom óticos difun didos ou de antigenos tripanossom a-sim ile resultantes de interações entre o leiomiócito e o parasita.
Palavras chaves: T rypanosom a cruzi. D oença de Chagas. M úsculo liso. Supra- renal. Veia central da supra-renal.
H á alguns anos iniciamos estudos que nos per mitiram concluir ser a veia central das supra-renais uma importante sede de parasitism o nos chagásicos crônicos3 14. N este local observam-se com freqüência, modificações nucleares nas células parasitadas4 5, semelhantes às descritas por Rubio e H ow ard13 em casos humanos congênitos da tripanossomose e por Torres e A zevedo15 no tatu (“ arm adillo” ) infectado pelo T. cruzi. A creditam os que uma exploração mais minuciosa destas células poderá contribuir para o me lhor conhecim ento da fase intracelular do ciclo bio lógico do parasita no chagásico crônico. N o presente trabalho tentam os analisar os aspectos morfológicos e algumas características histoquímicas do citoplasm a de leiomiócitos da veia supra-renálica, parasitados pelo T. cruzi.
M A T E R IA L E M É T O D O S
Foram estudadas 40 secções de células parasi tadas pelo T. cruzi na veia da medula das supra- renais de 8 chagásicos crônicos, coradas pela hem ato
xilina-eosina (H E ), 20 secções de células semelhan tes, coradas pelo Feulgen e outras 20 pela técnica im unocitoquimica da peroxidase-antiperoxidase (PA P), de acordo com a padronização seguida por Barbosa6 e Barbosa e cols7. E ste material foi obtido através de seleção prelim inar que obedecia ã seguinte padronização: as supra-renais de chagásicos crônicos eram fixadas em solução de formaldeído a 4% , a se guir recortadas em vários fragmentos que eram incluí dos em parafina e submetidos à microtomia seriada, sendo os cortes num erados, corando-se inicialmente pela hem atoxilina-eosina apenas os números ímpares ou apenas os números pares. N estes, era feita a pro cura de ninhos cujos locais eram m arcados para estudo posterior. Algum as lâminas não coradas pela hema- toxilina-eosina, próximas daquelas que apresentavam ninhos, eram coradas pelo método de Feulgen para D N A e outras pela técnica do P A P ou P A S . A seleção dos chagásicos crônicos era feita baseando-se nos achados anatôm icos, associados às reações de imuno- fluorescência e de fixação do com plem ento positivas para T. cruzi.
Disciplinas de Patologia Geral e de Parasitologia da Facul dade de Medicina do Triângulo Mineiro (Uberaba) é de Anatomia Patológica da Universidade Federal de Minas Gerais (Belo Horizonte).
Recebido para publicação em 3/1 /1 9 8 6 .
R E S U L T A D O S
E m dois casos o número de células musculares lisas parasitadas pelo T. cruzi na veia da supra-renal era grande, sendo fácil o encontro de m ais de 10 ninhos
Almeida HO, M artins E, Franciscon JU . Teixeira VPA, Barbosa A JA . G obbi H, Reis MA C aracterísticas das células parasita das pelo Trypanosom a cruzi na parede da veia central das supra-renais de chagásicos crônicos. R evistada Sociedade B rasileira de Medicina Tropical 19: 227-231, O ut-D ez, 1986.
por secção transversa da veia em cada lâmina; nos de mais encontrava-se um a 4 ninhos por caso. N os casos com parasitismo mais abundante pudemos identificar células cuja secção mostrava de um a três parasitas envoltos por halos claros, situados perifericamente no citoplasma (Fig. 1). Este, em sua m aior extensão,
Fig. 1 - M usculatura da veia central da supra-renal de cha-
gasico crônico ^célu la parasitada contendo p e q u e no numero de am astigotas, apresentando núcleo volumoso de contorno irregulare hipercrom ático;o citoplasm a é abundante, fin a m en te reticular, co- rando-se levem ente pela hem atoxilina (basofilo). Em torno das am astigotas form ou-se halos claros. H em atoxilina-eosina. x800.
perdia o aspecto fusiforme e a característica miofibri- lar acidófila, tom ando-se oval por expansão do diâ metro transverso, assumindo uma característica de trama reticular ou de grânulos finos, com afinidade tin- torial basofila, corando-se em um tom azul ou cinza- claro em preparações pela hem atoxilina-eosina. O núcleo destas células apresenta-se aum entado, poden do exibir um ou dois nucléolos. Em outras células (Figs. 2 e 3) o número de parasitas é um pouco maior, estando eles isolados ou em pequenos grupos no interior de grandes espaços claros com pleta ou incom pletamente delimitados por septos ou “ m em branas” . Estas lojas opticamente vazias contendo formas am as tigotas do T. cruzi, geralmente dispõem-se periferi camente no citoplasma, em cuja parte central freqüen temente observa-se material granuloso, basófilo, às vezes associado a pequena quantidade de m aterial aci- dófilo. Q uando presente, o núcleo e volumoso e mos- tra-se envolvido pelo citoplasm a granuloso da célula hospedeira. O contorno do ninho é m arcado por uma “ mem brana" interna basófila, de espessura um pouco irregular, externamente à qual, geralmente pode-se observar uma faixa eosinófila, homogênea, com pac tada de citoplasma m uscular que circunda todo o ninho, sem que se possa dizer se é citoplasm a de
Fig. 2 - Célula da cam ada m uscular da veia da supra-
renal de chagásico crônico apresentando núcleo volumoso, claro e de contorno m a l definido. Ju n to a um dos pólo s do núcleo o citoplasm a apresenta-se fo rm a d o predom inantem ente p o r fin o s grânulos basófilos; o resto do citoplasm a é fo rm a d o p o r am plo espaço claro contendo algum as am astigo tas. H em atoxilina-eosina. x l2 5 0 .
Fig. 3 - M usculatura da parede da veia da supra-renal -
Na intim idade de um fa sctcu lo m u scular obser vam-se dois ninhos de am astigotas: o da direita apresenta alguns p a rasitas e m aterial citoplas- matico granuloso; o da esquerda m ostra um cito p la sm a claro contendo algum as am astigotas e na sua periferia vê-se estrutura m em branosa fo r m ando a parede interna do ninho (setas). H em a to xilina-eosina. x800.
células m usculares adjacentes ou da própria miocé- lula parasitada. À s vezes a celula parasitada apresenta apenas pequena porção de citoplasm a granuloso junto ao núcleo volumoso e grande espaço citoplasm ático sem afinidade tintorial, contendo algumas formas amastigotas, formando um nítido contraste entre o
Almeida H O , M artins E, Franciscon JU . Teixeira VPA, Barbosa AjA. Gobbi H, Reis MA. C aracterísticas das células parasita das pelo Trypanosom a cruzi na parede da veia central das supra-renais de chagásicos crônicos. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 19: 227-231, O ut-D ez, 1986.
grande espaço citoplasm ático e o pequeno número de parasitas que o ocupa. O utros ninhos apresentam-se volumosos e com grande número de parasitas que preenche praticam ente todo o seu espaço citoplasm á tico. N estas células com muitos parasitas o núcleo é mais difícil de ser visto c, quando presente, pode apre sentar grau variável de encarquilham ento e/ou croma- úna com tendência à homogeinização e hipercroma- tismo e, às vezes, desaparecim ento d a m em brana cro- matínica. Q uando as células parasitadas são coradas pelo método Feulgen para D N A (Fig. 5), em seus núcleos evidencia-se a imagem negativa dos nucléolos e no citoplasm a o m aterial granuloso é negativo, sendo o núcleo e o cinetoplasto das am astigotas intensa mente corados, tornando a identificação dos parasitas muito fácil por este método. A reação do PA S (ácido periódico de Schiff) não cora nem a m embrana basófila da periferia do ninho, nem o material basófilo granuloso do seu citoplasm a e nem o corpo do parasita. Já a técnica da peroxidase antiperoxidase para T.
cruzi (Fig. 4), além de corar bem as amastigotas,
Fig. 4 - N inhos de am astigotas na veia central da supra-
renal de chagásico crônico, corado pelo método da peroxidase-antiperoxidase (PAP) para T. cruzi. Próxim o ao canto superior direito célula p a ra si tada contendo apenas um a am astigota com reação fortem en te positiva enquanto o citoplasm a contém grânulos que se coram fra ca m en te pelo PAP. E m baixo à esquerda observa-se volum oso ninho cuja "m em brana" periférica (setas) é fortem en te p o si tiva pelo PAP, como as am astigotas. E ntre os dois ninhos descritos observa-se um terceiro cujo conteú do cora-se intensam ente pelo PAP. x640.
mostra-se fortemente positiva ao nível da m embrana periférica (basófila pelo H E ) do ninho e ao nível de alguns septos que dividem os espaços opticam ente va zios que contêm parasitas. O material citoplasmático granuloso e basófilo que é Feulgen e PA S negativos pode m ostrar-se fraca ou m oderadam ente positivo pelo P A P em algumas células parasitadas.
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• * * *
Fig. 5 - D ois ninhos de am astigotas do T. cruzi (setas) na
m usculatura da veia central da supra-renal de cha gásico crônico, corados pelo método de Feulgen para DMA. O cinetoplasto e o núcleo dos a m asti gotas coram -se fortem ente da mesm a fo rm a que o núcleo de um a das células hospedeiras. M aterial citoplasm atico de a m bas as células hospedeiras é
Feulgen negativo. x 5 00.
D IS C U S SÃ O
Estudos da interação entre o T. cruzi e células de vertebrados foram desenvolvidos “ in vitro” por D vorak e col9, N ogueira e co l12, Luban e c o ls10, Mei- relles e co ls11 e A lexander1 dentre outros. Extensa revisão e discussão sobre os vários aspectos da relação hospedeiro-parasita na tripanossomose cruzi e feita por Brener8. A pesar da existência de expressiva soma de trabalhos publicados abordando diferentes ângulos desta protozoose, pouca atenção tem sido dada às células m usculares lisas parasitadas pelo T. cru zi, na fase crônica da doença humana e mesmo experimen tal. Em trabalhos anteriores 4 5 chamamos a atenção para as modificações nucleares que se observam fre qüentemente em células m usculares lisas da veia da supra-renal de chagásicos crônicos parasitadas pelo
T. cruzi. Recentem ente observamos gigantismo nu
clear em célula m uscular cardíaca de chagásico crôni co com formas am astigotas do T. c ru zi2. O presente trabalho trás novas contribuições, m ostrando as modi ficações citoplasm áticas que ocorrem nas células mus culares lisas parasitadas em supra-renais de chagási cos crônicos. Pode-se dizer que o parasitism o dos leio miócitos além de promover as modificações nucleares citadas, induz alterações citoplasm áticas que podem ser vistas mesmo em secções de células que albergam apenas um ou poucos parasitas. Geralm ente a forma am astigota do T. cruzi, mesmo quando única na secção celular, m ostra-se envolta por halo claro (opti camente vazio), nitidamente separado do resto do citoplasma. O citoplasm a restante perde a caracterís
Almeida HO, Martins E, Franciscon JU , Teixeira VPA, Barbosa AJA , Gobbi H, Reis M A. Características das células parasita das pelo Trypanosom a cruzi na parede da veia central das supra-renais de chagásicos crônicos. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 19: 227-231, Out-Dez, 1986.
tica miofibrilar acidófila e adquire aspecto finamente reticular ou granuloso, corando-se m oderadam ente pela hem atoxilina (basófilo), sendo Feulgen e P A S negativos. E stes dados histoquímicos levam-nos a adm itir que a basofilia do citoplasm a da célula parasi tada seja devida a aum ento do teor de R N A , particu larmente o ribossômico, o que está de acordo com as características assum idas pelos núcleos que além de volumosos apresentam , às vezes, excepcional desen volvimento nucleolar5. A m edida que as form as am as tigotas aum entam em núm ero os halos claros são transformados em “ lojas” periféricas, delim itadas por septos, às vezes com m em brana interna basófila que pode existir tam bém contornando todo o ninho. E stas “ lojas” têm grandes espaços opticam ente vazios, que são apenas parcialm ente preenchidos por grupos de am astigotas pouco numerosos, m as que podem ser volumosos. O citoplasm a sem parasitas, geralmente se concentra em tom o do núcleo e contém m aterial fina mente granuloso e basófilo, podendo ainda apresentar- se constituído por grânulos um pouco m ais grosseiros, em parte basófilos e em parte ligeiramente acidófilos. E nquanto as am astigotas m ostram núcleo e cineto- plasto facilmente identificáveis pelo Feulgen, o cito plasma da célula hospedeira mantém -se Feulgen e PA S negativos. E ntretanto, em algumas células sem e lhantes às descritas acima, a técnica da peroxidase antiperoxidase para T. cruzi, além de dem onstrar suas formas am astigotas, coram substâncias livres no citoplasma granuloso da célula hospedeira e, às vezes, esta reação é fortemente positiva na “ m em brana” que envolve todo o ninho, podendo sê-lo tam bém nas membranas que delimitam as lojas. E stas m em branas poderiam ser explicadas tanto por reação imunocito- química cruzada de m aterial celular rechaçado p ara a periferia da célula hospedeira como tam bém por difusão de antígenos do T. cruzi e adsorção dos m es mos às estruturas da periferia celular. J á o m aterial citoplasmático granuloso, cuja positividade pelo PA P é menos acentuada, poderia resultar de reação imuno- citoquímica cruzada ou simplesmente de um artefato (background), podendo também constituir-se de antí genos tripanossoma-símile resultantes de interação entre o leiomiócito e o parasita.
S U M M A R Y
S om e m orphologic aspects o f the sm ooth m us- cle cells, p arasitised by T. cruzi in the adrenal vein o f chronic chagasicpatients were studied. The staining techniques used were thefollow ing: H em atoxylin and Eosin (H E), P A S, Feulgen a n d the peroxidase anti peroxidase (PAP) im m unocytochem ical m ethod fo r
Identification o f T. cruzi antigen. The intracellular amastigotes were often surrounded by a clear halo and the cytoplasm o f the parasitised sm ooth m uscle
cells were granular or reticular in appearance being basophil and, P A S a n d Feulgen negative. These data suggest that the cytoplasm atic basophil m aterial could be ribosom ic R N A . The intracellular nests o f am astigotes were surrounded by a P A P positive "m em brane-like” structures. This P A P positive “m em brane-like"m aterial, as w e lla ss o m e cytoplas m atic P A P p o sitiveg ra n u lo m a to u s m aterial, could be due to absorbed antigensfrom the parasite or to T. cruzi- like antigens resultedfrom the interaction between the parasite a n d the host cell.
K ey words: T rypanosom a cruzi. C hagas’ di- sease. Sm ooth muscle o f the central suprarenal vein.
R E F E R Ê N C IA S B IB L IO G R Á F IC A S
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