FCF 0518 KT FCF/USP 24/03/2010

(1)

FCF 0518 FCF 0518 KT FCF/USP KT FCF/USP 24/03/2010 24/03/2010

(2)

INFEC

ÇÕ

ES VIRAIS

~ 400 diferentes v

~ 400 diferentes víírus humanosrus humanos •

• DoenDoençças viraisas virais: :

-- agudas ou cragudas ou crôônicasnicas

-- sintomsintomááticas ou assintomticas ou assintomááticasticas

-- graves ou graves ou benbeníígnasgnas

-- VVáários vrios víírus causam rus causam sintomas ~ ousintomas ~ ou 1 v

1 víírus causam vrus causam váárias doenrias doenççasas

•

• ConsequConsequêênciasncias de uma infecde uma infecçãção viralo viral

-- efeito efeito citopcitopááticotico

-- efeito lefeito lííticotico

-- corpcorpúúsculos de inclussculos de inclusãão o

-- formaformaçãção de sinco de sincíícioscios

-- transformatransformaçãção neoplo neopláásicasica

-- mecanismo mecanismo imunopatolimunopatolóógicogico

-- danificam resistdanificam resistêência inatancia inata

-- induz autoinduz auto--imunidadeimunidade

-- quebra de tolerquebra de tolerâância imunolncia imunolóógicagica

-- depledepleçãção dos LT CD4+o dos LT CD4+

-- formaformaçãção de ICo de IC

Vaz, A.;

Vaz, A.; TakeiTakei, K.; Bueno, , K.; Bueno, E.C.E.C.––ImunoensaiosImunoensaios. Fundamentos. Fundamentos

e Aplica

e Aplicaçõções. Guanabara es. Guanabara KooganKoogan, Rio de Janeiro,, Rio de Janeiro, 2007

(3)

Agente etiol

Agente etiolóógico, tipo gico, tipo gengenôômicomico, principais manifesta, principais manifestaçõções cles clíínicas e nicas e t

téécnicas de diagncnicas de diagnóóstico laboratorial de doenstico laboratorial de doençças virais.as virais.

Agente viral Família Genom

a Doença

Métodos laboratoriais mais empregados

Respiratórios

Adenovírus Adenoviridae DNA Infecções do trato respiratório superior e inferior, conjuntivite, diarréia

Sorológico, cultura celular

Rinovírus A e B Picornaviridae RNA Infecções do trato respiratório superior Sorológico, cultura celular. Geralmente desnecessário.

Coxsackievírus Picornaviridae RNA Pleurodinia, herpangina, doença da mão-pé-e boca

Sorológico, cultura celular

Coronavírus Coronaviridae RNA Infecções do trato respiratório superior Sorológico, cultura celular, microscopia eletrônica

Vírus Influenza A -C Orthomyxoviridae RNA Influenza. Principal causa de gripe pandêmica e epidêmica

Sorológico, cultura celular, IFD

Vírus parainfluenza 1 - 4 Paramyxoviridae RNA Infecções do trato respiratório superior e inferior, crupe

Sorológico, cultura celular,

shell-vial, IFD

Vírus sincicial respiratório –

RSV Paramyxoviridae RNA Bronquiolite, pneumonia

Sorológico, cultura celular, IFD

Digestivos

Vírus da caxumba Paramyxoviridae RNA Caxumba, pancreatite, orquite Sorológico, cultura celular

Rotavírus Reoviridae RNA Diarréia infantil

Microscopia eletrônica, detecção do vírus nas fezes por ELISA ou por aglutinação de partículas/látex

(4)

a Doença

Vírus da hepatite B – HBV Hepadnaviridae DNA Hepatite B aguda e crônica. Sorológico, detecção Ag viral, molecular

Vírus da hepatite C – HCV Flaviviridae RNA Hepatite C aguda e crônica Sorológico, molecular Vírus da hepatite D – HDV Agente subviral

Delta vírus RNA Hepatite D aguda e crônica (com HBV)

Sorológico

Vírus da hepatite E – HEV Caliciviridae RNA Hepatite E aguda. Transmissão oral-fecal

Sorológico

Sistêmicos com erupções cutâneas

Vírus do sarampo Paramyxoviridae RNA Sarampo Cultura celular, sorológico Vírus da rubéola Togaviridae RNA Rubéola e síndrome da rubéola

congênita

Sorológico

Parvovírus B19 Parvoviridae DNA Eritema infeccioso, anemia aplástica anemia hemolítica crônica

Histológico, sorológico, molecular

Vírus da vacínia Poxviridae DNA Varíola

Vírus varicela-zoster – VZV Herpesviridae DNA Varicela, herpes-zoster Cultura celular, shell-vial, sorológico, IFD

Vírus herpes simples 1 – HSV

1 Herpesviridae DNA

Lesão herpética (labial), gengivoestomatite, furúnculos, encefalite

Cultura celular, sorológico, microscopia eletrônica, molecular, IFD

Vírus herpes simples 2 – HSV

2 Herpesviridae DNA Lesão herpética genital, encefalite

Cultura celular, sorológico, microscopia eletrônica e molecular, IFD

(5)

a Doença

Sistêmicos com distúrbios hematopoiéticos

Citomegalovírus – CMV Herpesviridae DNA Doença da inclusão citomegálica, CMV congênita

Sorológico, cultura celular, shell-vial, antigenemia e molecular

Epstein-Barr vírus – EBV Herpesviridae DNA Mononucleose infecciosa, linfoma de Burkitt, carcinoma de nasofaringe

Sorológico, anticorpos heterófilos

Vírus linfotrópico T humano

-HTLV-I Retroviridae RNA

Leucemia/linfoma de células T do adulto, paraparesia espástica tropical

Sorológico

HTLV-II Retroviridae RNA

Provável associação com doença neurológica semelhante à paraparesia espástica tropical e ataxia

Sorológico

Vírus da imunodeficiência humana adquirida – HIV-1 e HIV-2

Retroviridae RNA Síndrome da imunodeficiência humana adquirida (AIDS)

Sorológico, detecção de Ag, molecular

Arbovírus e Febre hemorrágica

Vírus da Dengue 1-4 Togaviridae RNA Dengue, febre hemorrágica Sorológico, Ac em LCR

Vírus da febre amarela Togaviridae RNA Febre amarela Sorológico, Ac em LCR

Crescimentos verrucosos

Papilomavírus humano – HPV Papillomaviridae DNA Condiloma, carcinoma cervical

Citológico, molecular. Sorologia de baixo valor diagnóstico

(6)

a Doença

Sistema nervoso central

Vírus da poliomielite Picornaviridae RNA Poliomielite Sorológico, cultura celular

Vírus da raiva Rhabdoviridae RNA Raiva Sorológico só para a avaliação da vacinação, coloração FA

JC Vírus Papovaviridae DNA Leucoencefalopatia multifocal progressiva

Microscopia eletrônica Vírus da encefalites arbovirais

Togaviridae RNA Encefalite oriental, do Oeste, e Venezuelana

Sorológico ou isolamento viral, Ac em LCR

Adaptado de Samuelson J. Doen

Adaptado de Samuelson J. Doençças Infecciosas. In: as Infecciosas. In: ContranContranRS, RS, KumarKumarB, Collins T. B, Collins T. Robbins Robbins ––PatologiaPatologia

estrutural e funcional.

Traduzido por Barbosa FB, Vasconcelos MM,

Traduzido por Barbosa FB, Vasconcelos MM, VoeuxVoeuxPJ, 6PJ, 6ªªed. Rio de Janeiro: Guanabara ed. Rio de Janeiro: Guanabara KooganKoogan, 2000. p. 300., 2000. p. 300. Adaptado de

Adaptado de http://virologyhttp://virology--online.com/questions/89online.com/questions/89--1.htm1.htm. Acesso em 10/01/2006.. Acesso em 10/01/2006.

Vaz, A.;

Vaz, A.; TakeiTakei, K.; Bueno, , K.; Bueno, E.C.E.C.––ImunoensaiosImunoensaios. Fundamentos e Aplica. Fundamentos e Aplicaçõções. Guanabara es. Guanabara KooganKoogan, Rio de Janeiro,, Rio de Janeiro, 2007

(7)

DIAGN

Ó

STICO LABORATORIAL DAS VIROSES

DETEC

DETECÇÃÇÃO DO AGENTE, O DO AGENTE, AgAg OU DO OU DO ÁÁCIDO NUCLCIDO NUCLÉÉICOICO

•

• Isolamento viral por cultura do vIsolamento viral por cultura do víírusrus •

• Microscopia e Microscopia e imunomicroscopiaimunomicroscopia eletreletrôônicanica •

• Citologia e histologia Citologia e histologia –– InclusInclusõões cito/nucleares, IFI, Shell es cito/nucleares, IFI, Shell vialvial •

• DetecDetecçãção do o do áácido nuclcido nuclééico ico

-- amplicaamplicaçãçãoo do do áácido nuclcido nuclééico ico

-- amplificaamplificaçãção do sinal o do sinal

T

TÉÉCNICA SOROLCNICA SOROLÓÓGICAGICA

Anticorpos

-- detecdetecçãção de o de IgMIgM, , IgAIgA e e IgGIgG de alta e baixa avidez, de alta e baixa avidez,

-- Uso de Uso de AcAc Mo como ferramenta de detecMo como ferramenta de detecçãçãoo Ant

Antíígenosgenos

-- lisadolisado viralviral

-- antantíígeno viral purificadogeno viral purificado

-- antantíígeno recombinadogeno recombinado

(8)

BIOLOGIA MOLECULAR NO DIAGN

Ó

STICO

LABORATORIAL

•

• DETEC

DETEC

ÇÃ

O DO

Á

CIDO NUCL

É

ICO

NAT

bDNA

Captura h

Captura hííbridabrida Hibrida

Hibridaçõções es

•

• GENOTIPAGEMGENOTIPAGEM LiPA

LiPA, sorol, sorolóógica gica sequenciamento

sequenciamento

•

• PRODUPRODUÇÃÇÃO DE REAGENTES/INSUMOS LABORATORIAISO DE REAGENTES/INSUMOS LABORATORIAIS Ac

Ac monoclonais para monoclonais para imunoensaiosimunoensaios, caracteriza, caracterizaçãção/purificao/purificaçãçãoo de ant

de antíígenosgenos Ag

(9)

*

Visa regiões conservadas em ambos HIV-1/ HCV para

assegurar

a detecção de todos os subtipos/genótipos

5

'

UT C E1 E2/NS1NS2 NS3 NS4 NS5 3

'

UT

HIV-1

HCV

gag pol vif env

LTR

Regiões alvo das sondas de captura, amplificação e detecção

Região 5

'

UT

Região LTR Região pol

Ensaio

Chiron

Procleix

HIV

-

1/HCV

Amplifica

(10)

APLICA

ÇÃ

O DOS TESTES QUALITATIVOS

DE DETEC

ÇÃ

O DO

Á

CIDO NUCL

É

ICO

•

• Elevada Elevada sensibilidadesensibilidade •

• Detecta o agente durante a Detecta o agente durante a janela janela sorolsorolóógica gica –– diagndiagnóósticostico precoce

precoce

•

• Detecta Detecta viremiaviremia •

• Monitoramento do Monitoramento do tratamentotratamento •

• DiagnDiagnóóstico stico definitivo definitivo –– esclarece resultados sorolesclarece resultados sorolóógicosgicos inconclusivos ou indeterminados

inconclusivos ou indeterminados

•

• Detecta transmissDetecta transmissãão o congcongêênitanita •

• DiagnDiagnóóstico em stico em imunodeficientesimunodeficientes •

• Detecta Detecta mutamutaçõções es e o surgimento de mutantes resistentese o surgimento de mutantes resistentes •

(11)

PERFIL CL

PERFIL CLÍÍNICO, SOROLNICO, SOROLÓÓGICO E VIRAL DA HEPATITE CGICO E VIRAL DA HEPATITE C JANELA SOROL

JANELA SOROLÓÓGICAGICA

T it u lo T it u lo re la ti v o re la ti v o anti anti--HCVHCV ALT ALT anos anos meses meses 0 3 6 0 3 6 Janela Janela Exposi

Exposiçãçãoo SintomasSintomas + + ouou-

-HCV RNA

HCV RNA

VAZ, A

(12)

0 6 12 1 2 3

0 6 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 4 5 6 7 8 9 10 11

semanas

semanas anosanos

//

0 0 1.000 1.000 10 1022 1.0 1.066 LT CD4/mm LT CD4/mm LT CD4/mm LT CD4/mm LT CD4/mm LT CD4/mmLT CD4/mm

LT CD4/mm33333333 CargaCargaviralviral

Fase

Fase agudaaguda FaseFase crôcrônicanica AIDSAIDS

Carga

Carga viralviral LT CD4+

LT CD4+

Anticorpos Anticorpos

MARCADORES LABORATORIAIS NA INFEC

MARCADORES LABORATORIAIS NA INFECÇÃÇÃO POR HIV/AIDSO POR HIV/AIDS NIVEIS DE VIREMIA

(13)

10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 T Tíítulostulos,, RNA viral RNA viral Ag e Ac Ag e Ac HIV-1 RNA Ac - HIV-1 p24 Ag Dias

Dias apapóóssinfecinfecçãçãoo

20 30 40 50 90 T Tíítulostulos RNA viral RNA viral e Ac e Ac 10 60 70 80 0 HCV RNA Ac - HCV

Perfil

de RNA do HIV e do HCV e

marcadores

sorol

ó

gicos

ap

ó

s

Infec

çã

o

Ref.

(14)

JANELA SOROL

Ó

GICA

Precocidade no diagn

Precocidade no diagnóóstico pstico póós infecs infecçãoção

Ref. Saldanha, 1999

Saldanha, 2000

Detec

Detecçãção (dias)o (dias) Teste Teste HCV HCV HIVHIV PCR PCR 11 11 -- 1616 1111 Ag Ag 15 15 -- 2020 1616 Anti Anti--HCVHCV 40 40 -- 6060 2222

(15)

Hepatite B 1: 63.000 unidades

HTLV I/II 1:641.000 unidades

Hepatite C 1:125.000 unidades (sorologia)

1:1.600.000 unidades (sorologia + N

1:1.600.000 unidades (sorologia + NAT)AT)

HIV 1:493.000 unidades (sorologia)

1:1.900.000 unidades (sorologia + N

1:1.900.000 unidades (sorologia + NAT)AT)

Transfus

Transfusãão de sangue o de sangue ou derivados

ou derivados –– riscos riscos de transmiss

de transmissãão duranteo durante a janela sorol

(16)

RESPOSTA AO TRATAMENTO

•

• Para o genPara o genóótipo 1tipo 1 –– Teste quantitativoTeste quantitativo

-- semana semana 12 12 apapóós ins iníício do tratamento: cio do tratamento: negativanegativaçãçãoo ou queda ou queda de

de >>2 2 loglog nos nnos nííveis de RNA do HCV em relaveis de RNA do HCV em relaçãção o àà carga viralcarga viral inicial: continuar o

inicial: continuar o tratamento por 48tratamento por 48 semanas. Se RNA do HCVsemanas. Se RNA do HCV negativo:

negativo: repetir aprepetir apóós 24s 24 semanas. Se negativo semanas. Se negativo Resposta Resposta sustentada

sustentada

•

• Para os genPara os genóótipos 2 e 3tipos 2 e 3 –– Teste qualitativoTeste qualitativo

-- semana 24 de tratamento: semana 24 de tratamento: negativanegativaçãçãoo.. Repetir teste qualitativo ap

Repetir teste qualitativo apóós s 24 semanas24 semanas: : se negativo se negativo respostaresposta sustentada

sustentada

TESTES QUANTITATIVOS : MONITORAMENTO DO

TRATAMENTO

Terapia combinada

Terapia combinada: : PegPeg--INFINF(alfa(alfa--2a, alfa2a, alfa--2b) 1x semana 2b) 1x semana (subcut

(subcutâânea) + nea) + ribavirinaribavirina (2x dia)(2x dia)

HCV

(17)

• Pré-tratamento - Quantificação inicial (baseline) de HCV RNA pode ser usada como uma referência na determinação da duração da terapia em pacientes com genotipo 1.

• Fator preditivo de tratamento - Quantificação de HCV RNA pode ser usada como uma referência precoce na avaliação da eficácia da terapia (meses 1-3).

•

• PrPréé--tratamentotratamento -- QuantificaQuantificaçãçãoo inicialinicial ((baselinebaseline) de HCV ) de HCV RNA

RNA podepode ser ser usadausada comocomo umauma referreferêênciancia nana determinadeterminaçãçãoo da

da duraduraçãçãoo dada terapiaterapia emem pacientespacientes com com genotipogenotipo 1.1.

•

• FatorFator preditivopreditivo de de tratamentotratamento -- QuantificaQuantificaçãçãoo de HCV RNA de HCV RNA pode

pode ser ser usadausada comocomo umauma referreferêênciancia precoceprecoce nana avaliaavaliaçãçãoo da

da eficeficááciacia dada terapiaterapia ((mesesmeses 11--3).3).

EASL Consensus Statement J Hepatol 1999;30:956

EASL Consensus Statement J Hepatol 1999;30:956--961961

Davis G, Gish R ACG Monograph 2001

HCV

TESTES QUANTITATIVOS MONITORAMENTO DA TERAPIA

(18)

HCV: EX DE T

É

CNICAS MOLECULARES

•

• PCR

PCR

(

Amplicor

Hepatitis

C

Virus

Test

,

version 2,0, Roche) sensibilidade 50 UI/mL

•

• TMA

TMA

–

5 a 10 UI/mL

•

• In

In

house

–

100 a 1.000 UI/mL

•

• nested

nested

PCR

–

100 UI/mL

•

• Quantitiativo

Quantitiativo

–

Amplicor

Monitor

test

version 2,0

–

600 a 85.000 UI/mL

ou 1.620 a 2.295.000 c

ó

pias/ mL

•

• bDNA

bDNA

-

>0,2

Meq

/mL

CDC, 2003

(19)

LIMITES DE DETEC

LIMITES DE DETECÇÃÇÃO DE TESTES QUANTITATIVOSO DE TESTES QUANTITATIVOS Exs

Exs. de testes encontrados no mercado. de testes encontrados no mercado

COBAS AMPLICOR HCV Monitor (RT

COBAS AMPLICOR HCV Monitor (RT--PCR) 600 PCR) 600 -- 5 x 105 x 1055 VERSANT HCV RNA 3.0

VERSANT HCV RNA 3.0 AssayAssay ((bDNAbDNA) 615 ) 615 -- 7.7 x 107.7 x 1066 TaqMan

TaqMan HCV RNA (RTHCV RNA (RT--PCR) 10 PCR) 10 -- 10 x 1010 x 1066 ABBOTT MOLECULAR HCV ASR (RT

(20)

HBsAg

HBsAg –– RESULTADOS FALSOS NO ELISA RESULTADOS FALSOS NO ELISA

Falsos

-

positivos

em:

•

• Plasma

Plasma

heparinizado

•

• Hemoglobina ou bilirrubina

Hemoglobina ou bilirrubina

•

• Infec

Infec

. agudas ou cr

ô

nicas

•

• Doen

Doen

ç

as auto

-

imune

•

• Doen

Doen

ç

a hep

á

tica cr

ô

nica

•

• Gr

Gr

á

vidas

Falsos

-

negativos

em:

•

• Janela do core

Janela do core

•

• Baixos n

Baixos n

í

veis de

HBsAg

•

• Mutante do gene S

Mutante do gene S

•

• Co

Co

-

infec

çã

o com HCV/HDV

Ref. WERBER, 2004

ELUCIDA

ÇÃ

O DE RESULTADOS SOROL

Ó

GICOS

Falsos, inconclusivos, indeterminados

(21)

BIOMOL NA DETEC

ÇÃ

O DE MUTANTES DO V

Í

RUS

DA HEPATITE B

Gene S e pr

é

-

S

•

• Afeta

Afeta

antigenicidade

do determinante

a

--

HBsAg

indetect

á

vel pela sorologia

--

vacina n

ã

o protege contra HBV selvagem

Gene

pol

cepas

resistentes

à

an

á

logo de

nucleos

í

deos

como

Lamivudina

e

Famciclovir

•

• Gene X

Gene X

•

• Pr

Pr

é

-

core e core

afeta

(22)

Risco de transmiss

ã

o vertical

vertical

HBV

•

• MMããe e HBeAgHBeAg+ : 70%+ : 70% •

• MMããe e antianti--HBeHBe+ : 10%+ : 10% HCV

HCV

•

• RN de mRN de mããe infectada: 5,6 e infectada: 5,6 –– 9,0%9,0%

DETEC

ÇÃ

O DE INFEC

ÇÃ

O CONG

Ê

NITA / PERINATAL

DETEC

ÇÃ

O DE INFEC

ÇÃ

O EM IMUNOSSUPRIMIDOS

•

AcAc podem resultar negativos na presenpodem resultar negativos na presençça da infeca da infecçãçãoo

Diagnóstico

• AcAc IgGIgG maternos passivamente maternos passivamente transferidos no soro do RN

transferidos no soro do RN

•

• AcAc IgMIgM pouco senspouco sensííveisveis

•

(23)

BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA

À

PRODU

ÇÃ

O

DE KITS/INSUMOS PARA O DIAGN

(24)

HEPATITE C

1975

Hepatite

n

ã

o

-

A

, n

ã

o

-

B

Transmiss

í

vel em chimpanz

é

s

1989

Clonagem e Seq

ü

enciamento

Hepatitis

C

Virus

-

HCV

kit sorol

ó

gico padronizado

ANTES

(25)

NS5A NS5A NS5BNS5B NS3 NS3 E2NS1 P7 E2NS1 P7 E1 E1 5 5’’NCRNCR CC NS2NS2 NS4NS4 33’NCR’NCR

ORGANIZA

ÇÃ

O GEN

Ô

MICA DO HCV

Regi

Regiãão estruturalo estrutural Prote

Proteíínasnas

N

Núúcleocleo-

--capscapsíídeodeo * * Protease/ Protease/ Helicase Helicase Regi

Regiãão no nãão estruturalo estrutural

RNA

RNA polimerasepolimerase RNA dependente RNA dependente

Regi Regiããoo hipervari hipervariáávelvel (2.0) (2.0) C22 C22--3r3r _C33r_C33r 5 5--11--1r1r (1.0) (1.0) (2.0) (2.0) C100 C100--3r3r C100 C100rr (3.0) (3.0) NS5r NS5r (3.0) (3.0) Glicoprote

Glicoproteíínasnas do envelope do envelope

Met

Metáloálo--proteaseprotease

9400 9400 ntnt 3033 aa C200 C200 (3.0) (3.0) C22 C22--pp (2,0) (2,0) C33c C33c Cofator Cofator da da serinaserina protease protease ? ? Ag

Ag de 1de 1ªª. gera. geraçãçãoo

Ags

Ags de 2ªde 2ª. gera. geraçãçãoo

(26)

HCV ELISA

e IMMUNOBLOT

GERA

GERA- -ÇÃ

ÇÃOO ANO ANTÍGENOS SENSIB.

DIAS DIAS ap apóós s infec infecçãçãoo 1 1ªª gera geraçãçãoo 1990 1990 C100C100--3 3 770%0% ~ 120~ 120 2 2ªª gera geraçãçãoo 1992 1992 _C22_C22_-_-_3p_3p₊₊_{C33c +}_{C33c +} C100 C100--33 88 88--95%95% 88 88 3 3ªª gera geraçãçãoo 19941994 C22C22--3p 3p + + C33c +C33c + C100 C100--33 +NS5 +NS5 >97% >97% 6666

(27)

GENOTIPAGEM

(28)

RNA do HCV

-

ALTA HETEROGENEIDADE

•

Escape

imunol

ó

gico: persist

ê

ncia da infec

çã

o

no hospedeiro

•

• Taxa estimada de

Taxa estimada de

mutaçõ

muta

ções

es

–

1.92 x 10

-3-3

_{por s}

_í

_tio,

por ano

•

• Sem

Sem

imunidade cruzada

entre cepas

•

• Associa

Associa

çã

o entre > diversidade

gen

ô

mica

e taxa para >

cronicidade

•

• Dificulta desenvolvimento de

Dificulta desenvolvimento de

vacinas

FarciFarci, 2000, 2000

Resposta ao tratamento

Resposta ao tratamento::

• GenGenóótipos 2, 3, 5 e 6 tipos 2, 3, 5 e 6 -- 6 meses6 meses 1 e 4

1 e 4 -- 1 ano1 ano Progn

Prognóósticostico:: •

• GenGenóótipo 1b tipo 1b -- evolui mais para a cirrose e CHCevolui mais para a cirrose e CHC pior para o f

pior para o fíígado transplantadogado transplantado Kit diagn

Kit diagnóósticostico: : •

(29)

Genotipagem

do HCV

_{do HCV}

Indica

çõ

es da

Genotipagem

Tratamento

Resposta sorol

ó

gica

Carga viral

Transplante

Epidemiologia

Vacinas

(30)

LiPA

LiPA ®® ((InnogeneticsInnogenetics) )

GENOTIPAGEM

(31)

COMPLEXIDADE GENÉTICADO HCV

Categoria Homologia da

sequ

ê

ncia

(%)

Tipo

66

66 -

-

69

69 Subtipo

Subtipo

77

77 -

-

80

80 Isolado

Isolado

91

91 -

-

95

95 Quasispecies

Quasispecies

> 98

FCF/USP

(32)

KT FCF/USP HSPE

EPIDEMIOLOGIA

GEN

GENÓÓTIPOS DO HCV TIPOS DO HCV -- DOADORES DE SANGUEDOADORES DE SANGUE

Doadores de Sangue (n = 34)

1a

18%

1b

38%

1 3%

2a

3%

2b

3%

3a

32%

1b+3a

3%

(33)

HCV

–

_–

distribui

çã

o mundial dos gen

ó

tipos

1b, 3a, 1a 2a 2b 2c 1a 1b 2a 2b 3a 5a 1b 4a 1b 3a 1a 2c 1a 2a 2b 1a 1b 3a 3b-3f 1b 1b 6a 1a 2b 3a 2a 2c 3a 1a 3a

LAU et al., 1996; SIMMONDS et al. 1966a; SMMONDS et al., 1966b; GISH & LAU, 1997; MAERTENS & STUYVER, 1997; mison ET AL., 1997; SIMMONDS, 1997.

(34)

Associa

çã

o entre

gen

ó

tipos do HCV e resposta

terap

ê

utica

(RS, RR, NR) ao IFN

αααα

-

2a

nos

pacientes com HC

-

C

0

20

40

60

80

100 1a

1b

2

3 RS

RS

RR

NR

Gen

ó

tipos do HCV

F

re

q

F

re

q

ü

ê

ü

ê

n

ci

a

d

e

re

sp

o

st

a

(%

)

n

ci

a

d

e

re

sp

o

st

a

(%

)

Bassit

(35)

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 R e a ti v id a d e ( % ) C1 C2 E2/NS1 NS3 NS4 NS5 Tipo 1 Tipo 3 Bassit

Bassit, 1998 , 1998 –– DissertaDissertaçãção de Mestrado o de Mestrado –– FCFFCF--USPUSP

REATIVIDADE ANTIC

Ó

RPICA

À

DIFERENTES

(36)

HCV

–

CANDIDATOS

Á

VACINAS

Dificuldades

•

• Diversidade

Diversidade

gen

ô

mica

•

• N

N

ã

o

propag

á

vel

in

vitro

•

• Sem modelo animal adequado

Sem modelo animal adequado

suscet

suscetííveis veis -- ssóó homens e homens e chimpanzeschimpanzes

•

• Imunidade n

Imunidade n

ã

o protege contra HCV de outros

gen

ó

tipos

Ref.

(37)

BIOLOGIA MOLECULAR NA INVESTIGA

ÇÃ

O

DE NOVOS AGENTES

(38)

1965

B

(DNA)

1973

A

(RNA)

1977

D

(RNA)

1989

C

(RNA)

1990

E

(RNA)

Redução na incidência

de HPT não-A, não-B

(39)

HEPATITES NANE

HGV HGV TTV TTV SANBAN SANBAN YONBAN YONBAN SEN VIRUS SEN VIRUS TLMV (

(40)

PREVAL

Ê

NCIA DE

HGV

RNA E ANTI

-

E2 EM

GRUPOS DE ALTO RISCO (%)

Categoria N HGV RNA Anti

-

E2 Exposi

çã

o

Usu

á

rio de drogas

Tacke

et

al

99 38 41 75

Dille

et

al

27 4 85 7

3

3 Pilot

Pilot

-

Matias

et

al

40 5 73 78

Doadores de sangue pagos

Dille

et

al

50 26 34 60

Pilot

-

Matias

et

al

42 5 33 38

Hemodi

á

lise

Oguchi

et

al

392 11 8 19

Ref.

(41)

Preval

ê

ncia do

TTV

(UTR) e positividade da

N22 em diferentes popula

çõ

es

81,2 81,2 97,7 97,7 42,3 42,3 85.3 85.3 5,5 5,5