Rey. Ikst. Med. ttop. São Paulo
26(6)12,89-294, kovembto-dezembro, 1,984
cDU
616.995.121AVAL¡AçÃO DE ANTíGENOS DE CYSTICERCUS CELLULOSAE NO IMUNODIAGNÓSTIGO DA GISTICERCOSE HUMANA PELA
HEMAGLUTINACÁO INDIRETA E. NASCIMENm (r) e W. MAYRINI( (1) ,t
¡
,]RESUMO
Os Autores avaliararn os antígenos de Cysticercus cellulosae para
o
imuno-diagnósticoda
cisticercose huma¡apela
reaçáode
hemaglutina4áo indireta. Observaram que os antÍgenos de escólex (ES) e ES picoII
são mais específicosque os antígenos de
c.
c€llulosaeiotal
(cc),
líquido vesiculare
de membrana(ME).
Usando sorosde
pacientes com cisticercose comprovada parasitologi-camente, obtiveram uma sensibilidade de 0,80 parao
ES, 0,84 parao
ESII
eespecificidade 1,0, quando os soros foram usados na diluiçáo 1:B para
o
antígeno ES e 1:16 parao
antígeno ESIL
INTRODUCÃO
No imunodiagnóstico da cisticercose huma-na sáo conhecidas as dificuldades para se
de-tectar
anticorpos anticisticercos;a
pesquisa de anticorpos no líquido cefalorraqueano (ICR) é de grande utilidade no diagnóstico da neuro-cisticercose, enlretantoa
mesma pesquisa no soro seria facilitada devidoa
suafácil
obten-ção em relâçáo ao IÆR que é obtido através dahrrh¡Ã^ mêd1r1ot
tmpregando
extrato
total
de
qr'sficercus cellulosaee a
reação de hemaglutinaçáo indi-reta(HI)
para detectar anticorpos circulantes anti-cisticercos,BIAGI
&
col,1, encontraram uma positividade de 92Ò/oem
13 soros depa-cientes
com
cisticercose comprovada. PROC TOR&
col. 11. utilizando a mesma técnica ean-tígeno de C. cellulosae ertraído em solução
sa-lina, encontraram 85% de positividade em 48
soros de pacientes com cisticercose comprova-da
e
17Vo em soros de pacientes com tenÍasepor Taenie solium ou T, s¿ginata.
POWELL
&
col.10 usando como antigeno oextreto
total
de C. cellulosaee a
HI
para odiagnóstico da cisticercose, concluíradn ser
es-se método de grande valor na detecçáo de
an-ticorpos anti-cisticercos na
lorma
assintomáti-ca e na epilepsia associada a cisticercose.Estudos recentes sobre
o
relacionamento entre a,nfígenos do C. cellulosa€ e da T. solium, através de imune soros. demonslraJam a exis.tência de componentes comuns entre os antÍ-genos do C. cellulosaê e da T, solium (N.{SCI-MENTO
&
A.R.A,ÍiJO 8).O
presente trabalhotem
como objetivo a,¡aliara
especificidadee a
sensibilidade dos antÍgenos de C. cellulosa€ parao
imunodiag-nóstico da cisticercose humanâ pela hemaglutinação indireta,
MATERIAL
E
MÉTODOS Antigenos-
Os Cysticercus cellulosae (CC)foram obtidos
do
coração, línguae
músculos esqueléticosde
suínos naturalmente infecta-dos. Äpós serem retirados dos músculos, oscisticercos
foram
lavados em banhossucessi-(r) Tråþalho realizado com apoio alo Conselho Nacional de ¡esenvolvtmento Cientlftco e Tecnológico (CN?q) e da ¡¡. ¡¡snciÊdor¿, de Estudos e Projetos (FINEP), no Depâ âiÌìento de PÊrasltologia, Il)stitu0o de Ciênctas Eiológics,s
da Unwe$idade ¡edþrâl de Minas G€¡eis. Câixe Postâl 2486, 30.000 - Belo Hodzonte. Mtnas Gerais, Bmsil 289
N¡SCIMENTO, E. & MAYRI\ÌK, W.
- ¿.vatiaçáo de antlgenos de Qsllcercus cellulosae no imunodiÂgÍósltco da cistlcer' cose huma¡â pela bemâglutinação ÍndireLâ. Rev. Inst. Med. t¡oP. São Pauro 26:289_294' 1984.
vos de água destilada e de soluçáo sa,lina tam-ponada com fosfato (SST) 0,15
M pH
?,2.Par-te
dòs cisticercos íntegrosfoi
liolilizada epar-te
foi
sepa,rad,a em membrana (ME) e escólex(ES) com auxílio de
bisturi
e microscópioes-teroÈcópico.
o
antígeno de líquido vesicular(LI)
foi
co-lhido dirctåmente das vesÍculas com auxílio de
uma seringa adaptada com agulha 15x10. .4s
partes do C. cellu.losa€: ME, ES,
LI
e o CCto-tal
foram liofilizadas, sendo a extraçáo dos an-tigenos realizada segundo método descrito por NASCIMENTO&
,ARAI'JO 7.A
çndroriza@,oda
coacentração protéica dos a¡tígenosfoi
feita
de acordo como
mé todo descrito por LOWÊY '& col.ú.Soms dos pacientes
-
Os soros dospa-cientes com neuÍocisticercose comprovada por
cirurgia
loram
otrtidosno
DepaÌtamento deNeurologia
do
Hospital das ClÍnica.sda
Uni-versidade Federal de Minas Gerais, enquanl,o que os demais soros de pacientes com teníase(T.
solium ouT,
saginata), ancilostomose,es-quistossomose, ascaddíase, tricocefalose, es-trongiloidose
e
doença de Chagas foram obti' dos no Departamento de Parasitologia doIns-tituto
de Ciências Biológicasda
Universidade Federal de Minas Gerais. Como padrõesnega-tivos foram
usados sorosde
recém-nascidos Norte,Americanos, obtidosna
divisãode
aler-gia, imunologia
e
doeDças, infecciosås da PaloAlto
Medical l¿esearch Foundation, Palo Alto, Calilómia, USA. Todos os soros foram diluídos inicialmente a 1:4 em SSL.Fra€ionemento de antígenos
-
As frações dos antígenos ES eLI
usadås no presente tra" balho foram obtidas como descdtapor
NAS CIMENTO&
AR,A,I'JO 8.Hemaglufinação indireta
-
I'oi
executada usando-se placastipo V,
segundo NASCIMEN-TO & AIl,.túJO 8. Os edtrócitos hrlfrlanos, O Rh nàgativos, foram fixados peto formaldeído segundo BUTLER,3, IIOSHINOSIIIMIZTJ 6¿ colJ. Na sensibilização dos eritrócitos foram usados 3
ml
de uma suspensão de células a lOEa, parà . cada antigeno. Inicialmente, as células foram lavadaspor
centrifugaçãoa
1000g,
cinco ve-zes com 10mI
cada vez de soluçáo de NaCla
0,857¿, dura¡¡tettês
mhutos.
o
sedimento de eritrócitosfol
ressuspenso em 10rú
de PBSpH ?,2 contendo ácido tânico
a
1:15000 eincu-290
bado em tanho-maria a 31"C, dura¡te 30 minu-tos. Em seguida as células foram lavadas por centrifugaçáo, cinco vezes em soluçáo salina. O sedimento
foi
ressuspenso em 1ùnl de PBS pH6,4, contendo
rlm
antígeno de cada na concen-traçãode
150 microgramas de proteínas pormililitro
e
incubaçãopor
30 minutosa
3?'C.Após
a
incubaçáo, os eritrócitos foramnova-mente lavados cinco vezes em solução salina contendo 1010 de soro normal, inativado, de
coe-lho.
Finalmenteos
eritrócitos fora,m ressus pensosa
17. em soluçá,o estabilizadora prepa-rada segu¡do HOSIIINO-SHIMIZIJ&
coI.s econservados a 4'C. Vinte e cinco microlitros do antígeno fo¡am gotejados em cada orifício da placa contendo 50 microlitxos da diluiçáo dos soros e a trtaca em seguida agitada
por
30se-gu¡dos em vibrador (Mixtron, Toptronix, Bra-sil).
A
leituraloi
realil,ada, após duas horas à temperâtura ambiente,Sensibilidade e especifici,il¿de
-
Oscálcu-los desses índices loram feitos de acordo com BÜCK
&
GA.RT 2.RESULTADOS
Anticorpos anti-cisticercos
foram
detecta-dos pelos antÍgenos Cc, ES, ESII,
LI,
LI II
e
ME
ate nas diluições de sorosde
1:512 ou 1:1024, de pacientes com cisticercose compro-vada (TabelaI).
Foram observadas reações cruzadas com tenÍase por T. soliu¡n ou T. sagi-nata nas diluições de soro de ate 1:32 com a¡-tígeno CC, 1:8 com antÍgeno ES, 1:64 com antÍ' geno ESII,
1:16 com antígenoLI
e
1;8 com antígenoME
(TabelaI).
Para pacientes com ascaridÍase, tricocefa.lose, esquistossomose e sÍ'filis
foram
observadas reações quzadas com soros puros ou diluidos até 1:8, com os antíge-nos CC,tS
II
eLI
IL
As diluições dos soros nos quars as rea-ções de hemaglutinação mostrou especificidade máxima (índice 1,0) variaram segu¡do os dife-rentes adrtígenos
e
corresponderama
diferen-tes Índices de sensibilidade. Estes dados estáo reunidos na Tabe1aII.
DrscussÁo
Em geral a reaçáo de hemaglutinaçáo indi-reta