Efeito do congelamento e resfriamento na preservação de E. coli (ATCC25922) e S. aureus (ATCC9801) inoculadas em carne moída bovina estocada para investigação de surtos de toxinfecção alimentar

Universidade

_{Federal de}

_Uberlândia

Faculdade

_de

_Medicina

_Veterinária

Curso

_de

_{Ciências Biológicas}

EFEITO _{DO CONGELAMENTO E RESFRIAMENTO}

NA PRESERVAÇÃO DE

E. _{co/(ATCCZ5922) E}

_s.

aureuáATCCQBOI) INOCULADAS EM _CARNE MOÍDA BOVINA _{ESTOCADA PARA INVESTIGAÇÃO}

DE _{SURTOS DE}

TOXINFECÇÃO ALIMENTAR

Claudia _{Ribeiro Borges Silva}

Monografia

_apresentada

_{à Coordenação}

do _Curso

_de

_{Ciências Biológicas da}

Universidade

_{Federal de}

_Uberlândia

para

a ob'rençê'o do

_{grau de}

_{Bacharelado em} Ciências Biológicas.

Uberlândia

_-

MG Fevereiro—2003

Universidade

_{Federal de}

Uberlândia

Faculdade

de

Medicina

_Veterinária

Curso

de

_{Ciências Biológicas}

EFEITO DO CONGELAMENTO E RESFRIAMENTO NA PRESERVAÇÃO DE E.

_{co/(AT6625922)}

E

5.

_{aureuáATCC9801)}

_{INOCULADAS EM CARNE}

MOÍDA BOVINA ESTOCADA PARA _{INVESTIGAÇÃO DE SURTOS DE}

TOXINFECÇÃO ALIMENTAR

Claudia _{Ribeiro Borges Silva} Dra. Daise

_Aparecida

Rossi

Monografia

apresentada

à Coordenação

do Curso

de

_{Ciências Biológicas da}

Universidade

Federal de

Uberlândia

_para

a obTenção do

_{grau de}

Bacharelado em

Ciências Biológicas .

Uberlândia — MG

Universidade

Federal de

Uberlândia

Faculdade

de

Medicina

Veterinária

Curso

de

_{Ciências Biológicas}

EFEITO DO CONGELAMENTO E RESFRIAMENTO NA PRESERVAÇÃO DE E. col/(ATCCZE922) E

_&

_{aureus(ATCC9801) INOCULADAS} EM CARNE

MOÍDA BOVINA ESTOCADA PARA INVESTIGAÇÃO DE SURTOS DE

TOXINFECÇÃO ALIMENTAR

Claudia _{Ribeiro Borges Silva}

Aprovado pela comissão

examinadora

em

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Daise Aparecido Rossi

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Fúlvia Zardini (Convidada)

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Agradecimentos

Daise,

Agradeço o apoio,compreensão e paciência durante toda realização deste

_trabalthue

_este

possa_{ser apenas o começo de umanovaetapa.}

Jupyºse Fabi,

"Cada _{pessoa que passa em nossa vida,}

passa sozinha,porque cada pessoa e' _{única e}

nenhuma substitui a outra.

Cada pessoa que passa em _nossa vida, _{passa sozinha, mas não vai sozinha e nem nos} deixará só, _{porque leva um pouco de nós e deixa um}

pouco de si.

Há os que levam muito e deixam _{pouco, há os que levam pouco e deixam muito.}

Essa é _{a mais bela responsabilidade da vida e a}

prova de que não nos encontramos _por acaso.

Agradeço a ajuda ,carinho e paciência.

Chesca, Analice,Lu

Obrigada pelo apoio e _{incentivo na realização deste trabalho e pelos momentos}

inesquecíveis que tivemos no laboratório. Gis_mar,

)

)

))) ))))))))

)))

))

Dedico, A_Deus,

“Eu_souopãoda vida ea luz do mundo”.

Ofereço,

Aos meus país pelo amor mcondicional e pela contribuição na minha formação pessoal e

profissional.

Aos meus irmãos eavós _obrigadaportudo,

Ao meu namorado Gleison, _{obrigada por estar sempre ao meu lado, pelo seu carinho e} amor.

Atodos osamigos,

“Celebrar a vida é _{somar amigos experiências e conquistas dando—lhes sempre algum}

significado. esteja onde estiver, próximo oudistante, quero conservar parasempre a beleza da_nossaamizade”.

Shirleny,

Se fôssemos escrever todas _{as histórias que passamos juntas} durante toda a nossa trajetóriadava paraescrever um livro.

)))))

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Efeito do congelamento e resfriamento na preservação de Escherichia coli

(ATCC25922) e Staphylococcus aureus (ATCC9801) inoculadas em carne moída bovina estocada

_para

investigação de surtosde toxinfecção alimentar.

The effect offreezingand _{cooling on the preservation}ofEscherichia coli (ATCC25922)

and Sthaphylococcus aureus (ATCC9801) inoculated in stocked bovine meat for investigation on the outbreaksoffoodtoxinfection.

Resumo

Esse trabalho objetivou verificar qual método de _{conservação, refrigeração e/ou}

congelamento, é mais _{adequado na preservação de Escherichia coli} e Staphylococcus

aureus inoculadas em carne moída e armazenadas por 2 e 5 dias _{para posterior}

investigação de surtos. Carne bovina moída foi submetida à _temperatura de

75ºC/15minutos até que seobtivesse o produto pronto paraconsumo. Após serdividida em

grupos A e B, foram inoculadasartificialmente 102UFCmL'l _e 104 UFCmL'1 deE. coli e

S. _{aureus, respectivamente. Posteriormente ao contato com o inóculo por} 5 _{minutos, uma}

alíquota foi analisada imediatamente (controle) e outra subdividida e submetida ao

congelamento/refrigeração, durante2-5 dias _{para posterior} análise. Em todas as amostras houve diminuição das contagens após tratamentos (p<0,05). Houve diferença significativa entre congelamento e refrigeração apenas nas amostras inoculadas com E.

coli (p<0,05). No mesmo tratamento, o período de armazenamento não interferiu para nenhuma das cepas (p>0,05). A refrigeração foi _{mais adequada na preservação dessas}

cepas, resultando em uma maior concentração de células viáveis.

UNITERMOS: congelamento/resfiiamento, carne moída bovina, Escherichia coli e

Staphylococcus aureus

LINTRODUÇÃO

O alimento, quando processado a partirde matéria primade qualidade, manipulado e armazenadosob boas práticasde higiene, é fonte de saúdeimprescindível ao serhumano.

)

₎

Seus benefícios, porém, podem ser revertidos em doença quando tais medidas não são consideradas, resultando assim, em enfermidadesque podem colocar em risco a saúde do consumidor.

As _{doenças veiculadas pela ingestão} de alimentos contaminados talvez sejam o

problemasanitário mais _{generalizado no mundoatual, seconstituindoem causa importante}

na redução da _{produtividade econômica em função das altas taxas de morbidade}

(ABUSSALAM,1984).

Bean; Griffin _{(1990) consideram como surto} de _{toxinfecção} alimentar, o fato de

dois ou mais _{indivíduos serem afetados por doença} similar, decorrente da ingestão do mesmo alimento. _{Geralmente, a toxinose alimentar pode ocasionar distúrbios}

gastrointestinaisagudos, comodiarréia, vômitose doresabdominais.

Dentre os alimentos que, frequentemente, aparecem relacionados a surtos de

toxinfecções alimentares destacam-se a carne bovina e a de frango, responsáveis pela veiculação, principalmente de clostrídios, estalilococos e enterobacte'rias (GERMANO, GERMANO, 2001).

No município de São Paulo em 1997, no período de _{janeiro a} setembro foram notificados42 surtos de _{doenças transmitidas por alimentos (DTAs). Os pratos prontos}

preparados com carnes foram citados como alimentosenvolvidos, tendo como principais

microrganismos identificados, Staphylococcus aureus e Escherichiab coli (ZANARDI,

TORRES, 2000),

A carne é _{excessivamente manipulada durante todo o seu processamento, desde o}

abate até seu consumo. Ritter et al. _{(2001) considerama carne moídauma fonte potencial}

de _{disseminação de patógenos, pois a mesma, geralmente,} é _proveniente de retalhos de

outrascarnes.

Segundo Franco, Landgraf (1996), a _presença de _{bactérias do grupo coliforme em} alimentos revela, _{com maior segurança, informações sobre as condições} higiênicas do produto, bem como, dos utensílios que entramem contato direto como alimento. Ainda, a incidência _{desse grupoé a melhor indicação da presença}de _{outros enteropatógenos.}

Os _{microrganismos para se desenvolverem necessitam de condiçõesfavoráveis, tais} como nutrientes, água e temperatura adequada. A temperatura é um _{fator que está}

associado diretamenteà _{velocidade das reações} químicas dos microrganismos. Isso se deve ao fato de _{que tais reações são catalisadas por} enzimas especílicas, _{que tem}a sua atividade

aumentada ou diminuída de _{acordo com} a temperatura. Porém, a temperatura não deve exceder ao valor de _{temperatura ótima (To), pois a partir daí as enzimas} são daniíicadas

pelo calor, perdem sua atividadee as células deixam de crescer( CHESCA etal., 2001).

Paraa conservação dos alimentos, são empregadas&reliigeração e o congelamento. Os efeitosletais _{do congelamentoe resiiiamento dependem do microrganismo considerado} e das condições de tempo/temperaturade_{armazenamento (ELEMENTOS._.,}1999).

A _{investigação de um surto tem por} finalidade _{identificar as pessoas acometidas,o}

risco de exposição, os fatores de risco, _{os pontos críticos} de controle, os alimentos implicados, o agente etiológicoe os fatores causais (DIAS et al., 1999). A detecção destes

problemas pode resultar numa ação direta para prevenir exposição e doenças adicionais

(KEENE, 1999).

Considerando o número crescente de surtos de _{toxinfecção alimentar, há a}

recomendação da Vigilância Sanitária para a estocagem de _amostras de alimentos em

unidades de alimentação. _{A estocagem possui como objetivo comprovar o surto} e

estabelecero agente etiológico, facilitandoassim, a investigação. Deste modo, o presente trabalho possui comoobjetivo:

—verificar_{qual o método} de _{conservação, refrigeração e/ou congelamento,}é mais _adequado

na preservação de Escherichia coli (ATCC25922) e Staphylococcusaureus(ATCC9801) inoculadasem carne moída e armazenadas por 2 e 5 dias _{para posterior investigação}de

surtos.

3. MATERIALE MÉTODOS

No Laboratório de _{Biotecnologia} Animal _{Aplicada (LABIO) da Universidade}

Federalde _{Uberlândia,as cepas}de Staphylococcusaureus(ATCC9801)eEscherichia coli

(ATCC 25922) foram reativadas em caldo BHI (Caldo Intiisão de cérebro e coração) e

incubadasa _{37ºC/24horas. A estabilidade das cepas} foi _{obtida repicando} 1% das culturas deS. _aureuse E. coli por 3 _{vezes consecutivasem lOmL de caldo Muller Hinton (MH) e}

Caldo Lauril Sulfato de _{Sódio (LST), respectivamente, conforme sugerido por Jorge et} al.

(1990).

O crescimento de _{cada cepa} foi _{monitorado através da densidade óptica a} 650nm

(DOõsonm) e unidades formadoras de colônia (UFCmL'l), de modo a padronizar a

concentração de células inoculadas. A equação, reta de _regressão e coeíiciente de

correlação obtidas, calculadas com auxílio _{do programa MacOrigin podem ser observadas} naFigura1.

A carne moída utilizada no experimento foi adquirida em _{açougue na} cidade de

Uberlândia— MG. Para transporte ao laboratório, foi devidamente acondicionadaem caixa

isotérmica contendo gelo. No LABIO, de maneira a reproduzir o processamento que

sofreria emuma unidade de alimentação, foi submetidaà temperatura de 7SºC/15minutos até que se obtivesse o produto pronto para consumo. Em seguida, a carnefoi dividida em

grupos A e E, nos quais foram inoculados 102 UFCmL"l e 104 UFCmL'1 das culturas de Escherichia coli e Staphylococcus aureus, respectivamente. Após o contato como inóculo

durante 5 _minutos,as amostras foramsubdivididas esubmetidasa dois tipos de tratamento,

o congelamento(-l8ºC) e arefrigeração(ZºC), ambos, durante2 e 5 dias. Na carne após_a

inoculação (grupo controle) e após ser submetida aos tratamentos, foram realizadas contagensdeEscherichia colieStaphylococcus aureus.

Para análise, em 225mL de água peptonada 0,1% foram pesadas 25g de carne moída (diluição 104). A partir dessa, foram realizadas diluições seriadas, para posterior

enumeração de Escherichia coli (NNIPg'I) e Staphylococcus aureus (UFCg'l), de acordo comametodologia proposta por Brasil (1981) epela ABNT (1991), respectivamente.

Foi adotado o delineamento inteiramente casualizado—DIC. A diferença estatística

entre os dois tratamentos foi calculada através de análises de variância. AS médias dos dois

tratamentos foram comparadas pelo Teste de Tukey a 5% de probabilidade

(SAMPAIO,1998),

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Gava (1986) afirma que a atividade metabólica dos microrganismos é reduzida

com o decréscimo da temperatura. Em todas as amostras houve diminuição das

contagens após os tratamentos, quando os resultados foram comparados aos obtidos no grupo controle (p<0,05).

Tortora et al. _{(2002) afirmam que, o efeito} das baixas temperaturas sobre a

microbiota depende do microrganismo considerado e da intensidade da aplicação. Embora

não tenha sido observada diferença estatística significativa entre o congelamento e o 4

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resfriamento, a _contagem média _{após refrigeração por} 2 dias

(6,de3

UFCg'l) foi mais

adequada na preservação das células de S. _{aureus(;P—0,05).} As _{menores contagens foram}

observadas após o congelamento, provavelmente,em consequência dainibição das reações enzimáticas _{pela queda de temperatura, bem como da formação de cristais} de gelo pelo congelamento, os quais _{podem romper a estrutura celular} e molecular das bactérias

(TORTORA, 2002). Os _{resultados encontrados reforçam a sugestão do Codex}

Alimentarius(1997)em adotara _{refrigeração para conservar os}alimentos.

Diferença entre os dois tipos de conservação (resfriamento/congelamento) foi

evidenciadanas amostras inoculadas com E. _{coli (p<0,05).} As _contagens médias obtidas

foram de 0,66x100N1K/13Pg'1 _{e 3,3lxlOlNlN/1Pg'1para amostras refrigeradas por} 5 _{dias e}

congeladas por 2 dias, respectivamente (Tabelal). Nas amostras inoculadas com E.coli umasensibilidade _{maior da cepa}foi _{observada nos tratamentos por} 5 _dias, sendo_{as médias}

das _{amostras congeladas e refrigeradas por 2 dias, as mais próximas} do controle. Isso sugere que, na investigaçãode um surto, análises realizadasem contra-provas submetidas

ao _{congelamento e/ou refrigeração por} 5 dias _{podem fornecer}um resultadofalso _negativo.

De acordo com Germano; Germano (2001) a Escherichia coli é _capaz de resistir por longo tempo em temperaturas de refrigeração. Este fato nãofoi _{observado no presente}

trabalho, assim, é necessário o monitoramento de _{outras cepas dessa bactéria,} pois, o coeficiente de_{variação obtido nesse experimento para} E.colifoi de _55,063%.

Quando o mesmo tratamento (congelamento ou resfriamento) foi _{analisado nos}

dois períodos de estocagem, apesar de haver redução nas contagens das amostras analisadas aos 5 _{dias, não} foi _{detectada diferença estatística significativa em nenhum}

dos grupos estudados (p>0,05). Yamamoto; Harris (2001) ao estudarem o

comportamento da Eschericia coli 01572H7 frente ao efeito do congelamento e

descongelamento no suco de maçã, detectaram que um decréscimo maior nas contagens ocorreu após 24 horas.

Tortora et al. _{(2002) afirmam que um terço da população de algumas cepas}

vegetativas podem sobreviver a _{um ano de congelamento, enquanto que em outras}

espécies, o número de células viáveis pode reduzir consideravelmente,

A legislaçãonão preconiza o tipoe formade _estocagemde amostrasde alimentos prontos parao consumo, para posterioranálise em casos de surto. Os padrões vigentes são

somente para alimentos in natura, Codex Alimentarius(1997) sugerea estocagem destesa

temperaturas menores ou iguais a 4ºC em embalagemestéril _{durante um período de} no mínimo 3 dias.

Em pratos prontos para o consumoa basede _carnes a contagemmáxima permitida para Staphylococcus aureus é de 2xlOZUFCg“1(BRASlL,l987)e 2x10NMPg"1 para coliformestermotolerantes(ANVISA,2001). No caso de surto causado por esses patógenos,

a refrigeração por 2 dias seria a mais adequada na preservação da carne moída estocada para investigaçãode surtos, poisfoi _{o tratamento} em _que ascontagens semantiverammais

próximas as do grupocontrole.

5. CONCLUSÃO

Os reSultados _{obtidos após} análise _{microbiológica da carne moída} artificialmente

contaminada com 102 _{UFCmL'1 e} 104UFCmL'1 de E. coli e S. _{aureusrespectivamentee}

mantida _refrigeradae _{congelada por}2 e 5 dias permitem concluirque:

- A refrigeração por 2 dias foi o melhor método de preservação de E.coli e Saureus,

apesar de não ter havido diferença estatística significativa entre os tratamentos para

Saureus

ABSTRACT: The objectiveofthis work was to verify wich conservation methodis _more

adequate to preserve samples of food contaminated by Escherichia. coli and

Staphylococcus aureus for further investigation on outbreaks. The bovine meat was

subjected to a 75ºC _{temperature /} 15 _minutes,and divided in _{groups A}and B, each oneof

them inoculated with 102 UFCmL'I and 104 UFCmL'1 from E.coli and S. _aureus,

respectively. After& 5 núnute-contact, an aliquot was imediatily analysed (control) and the

another subdivided and _{subjected freezing}and cooling, for2 and 5 _days. Therehad beena

decrease of the countings after the treatments (p<0,05). A difference was detected between cooling and freezing only in the samples inoculated with E. coli (p<0,05). In the same treatment the storage period did not interfere with none

of

the samples (p>0,05). Cooling was more adequate for the preservation

of

these strains, resulting in a greater concentration

of

viablecells.

UNITERMS: freezing/ cooling, bovine meat, Escherichia. coli and Staphylococcus. aureus.

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Dºâsºnm 0,10— 0,08 -0,06— ,, "'; 9,04

-.

Eschencmacai 32,=«033528+8,63548x1 =097265 9,02_ «'Nª-Ml 1 ___,«v'ª'' . “_{Staphyiococcusaureus} y;=_3331656+

(3,0sz

tº;=_{0,955: 6} 6,00 ! I l l l l ! 1,0 1_{,5 2,0 2,5 3,0 3,5} 4,0 _{4,5 5,0} Log UFCmLª

Figura 1. Reta e equação de regressão realizada para padronização do inóculo de

Escherichia coli (ATCC 25922)eStaphylococcusaureus(ATCC 9801).

Tabela ]. Contagens médias das células viáveis de Escherichia coli (ATCC 25922) e

Staphylococcus aureus (ATCC 9801) inoculadas na carne moída e mantidas

refrigeradose_{congeladas por}2 e 5 dias.

Amostras/Tratamentos Escherichiacoli] _{Staphylococcus aureus}º

(NMP/g)l (UFC/g)

Controle* 1,1x102 ª 1,66xio4 ª

Contaminadacongelada (2dias) 3,3X 101 b 2,7)(103 b

Contaminada congelada(Sdias) 8,4)(10O bº 1,9)(103 b

Contaminadarefrigerada(Zdias) 2,

bdºl

M 6,171103 b

Contaminadarefrigerada (5dias) 0,66XIOº ºd 5,2x103 b

*_{Amostra contaminada que não sofreu tratamento térmico.}

Médias seguidas por letras distintas diferem entre si ao nível de significância de5%.

1Coeficientede variação -55,063% 2_{Coeficiente de variação— 8,934%}

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semestralmente em _{portuguêsou inglês. desunado à divulgaçãodetrabalhosligados}

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pºr tºdºs os autores.

SQlicitando &sua publicação exclusivamente nesta revista;

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Tipos de _{publicação- Os trabalhosdivulgados}

poderãoser:

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apresentarem _{contribuiçãointeiramentenovaao conhecimentoepermitam}

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análises e deduções do _{autor e repetira investigação se assim o}

desejarem.Incluem—se_{aquios resumos}

_º

teses. _{Devem conter: Títuloem}

portuguêse Inglês, Resumo_{(ate' 150palavras), Unitermos, Introdução, Material}

eMétodos, _{Resultados. Discussão.}

Conclusão, Agradecimentos,Abst1act, UnitennS, Referências Bibliográficas. Os_{trabalhos não devem exceder}

a 20 laudas. _{incluídosos anexos.}

2._{ArtigosdeRevisão- As revisões}

devem abordartemas de _interesse,atualizados. Devem _{conter: Titulo}

em_{português eInglês, Resumo,Unitermos. Texto.}

Conclusão,Agradecimentos(casonecessario),Abstract, Uniterms, Referências Bibliográficas.Os_{trabalhosnão devemexcedera 30 laudas,inclmeSOSanexos}

e as

Referências Bibliográficas.

3. _{Relatode caso(s)}

-Artigos predominantementeclínicos, desde alta relevânciaeatualidade, relatosde

achados na área clinica_{ebásica. Deverconter:Título}

em_{portuguêse inglês, Resumo, Umterrnos, Introduçaº,}

Relato do caso, Discussão, Conclusão.Agradecimentos(casonecessário),Abstract, UmtermS, Referencms Bibliográficas. Os trabalhos nãodevem _excederIO_{laudas, incluindoos anexos.}

4._{Comunicação-Artigo nãooriginal, demonstrando}

a_{experiênciade um grupo oudeumserviço,abrangendo}

preferencialmenteensino,pesquisa,politicasdesaúdeeexercícioproHSSional. _{Deve conter: Título emportugues}

e_{inglês, Resumo. Unitennos, Introdução.Conteúdo.Agradecimentos(casonecessário),Abstract, Umterms,}

Referências Bibliográficas. Os_{trabalhosnãodevem exceder 15 laudasincluindo os}

anexos.

5. Notas _{prévias - pequenas infomações que apesar}

de _{conterem novosdados , aindanão permitem ao}

leitor. _{pela provisoriedade mesmado texto.}

definira_{conclusão. Devem conter:Título emportugueseingles,}

Resumo,Unitermos, _{Texto,Abstract,Uniterms,}

Referências Bibliográficas.Ostrabalhosnãodevem exceder

a 5 laudas.

6. _Editoriais — colaborações solicitadas

& esp66ialistasde áreas _{afinS, indicados}

pela Comissao Editorial.

. _.

. _,

« - '“ ' _s.

Visando _{analisar um tema de atualidade.}

Devem _{conter: Tituloem portuguese ingleS,Autor. Umterrno}

. . , _.

_ . . . , _: - _"

rn

Texto(portugues _{eingles), Umterms, ReferenmasBibliograficas (caso necessano).}

Os_{trabalhos nao deve}

permitam A atidão das Aresumos _e Ao,Material Áíográficas. A Ater: Título A_Abstract, "'leXOSC 3.8 A A A_{'e1atos de} Atrodução, ,.vferências A A. A Lgrangendo .português Jniterms, & K “nítem ao N , A eingles, 1exceder . iditorial, litennos, 0devem As _{citações bibliográficas}

no texto _poderãoser

expressas_{das seguintes formªs:}

—Citação direta:

—“Apesardas

aparências, filosofia”(DERRIDA, _1967,p.293).

—

“Não se mova, façade _{contaque está}

morta”(CLARAC:_{BONNIN, 1985,P-72)—}

- _{Oliveira; Leonardos (1943,}

p. 146)dizem_que ª“a_{relação da}

série São Roque com os_{granitos porfiróldes}

peqúenos é_{muito clara”.}

capacidadedo_{homemdeproduzir}

e ler símbo1os_{deve ser0ponto}

de partida da estética (BARBOSA, 1984).

—Citação de

citação: —(ETANS,

1987_{apud SAGE, 1992,}

Teses

CORRALES, Edith Alba Lua Segovia. Verificaçâo dos efeitos genotóxicosdos_{agentes antineoplásicos}

citrato _{de tamoxifen epaclitaxel. 1997. 84f.}

Dissertação (Mestrado_{em Genética e Bioquímica)}—Curso

de_{Pós—Graduação emGenética'e}

Bioquímica, Universidade_{Federal de Uberlândia, Uberlândia.}

1997-Trabalhos apresentados em eventos

NOVIS, Jorge Augusto. Extensão das ações de _{saúde na árearural. In:CONFERENCIANACIONAL} DE

SAÚDE,7. _{1980,Brasília. Anais... (Brasília: Centro}

de_{DocumentaçãodoMinistério daSaúde, 1980. p.37—}

43.)

Artigos de _periódicos

COHEN, B. I.; _{CONDOS,S.; DEUTSCH,A. S.;}

MUSlKANT,B. L. La_fuerade fracturade trestlpOSde

materiales parael mufion _{en combinacioncom}

tres espigas endodontiacalesdistintas.R. Cent.C. Biomed. Univ._{Fed. Uberlândia,Uberlândia,}

v.l3,n. 1,_p. 69—76, dez _1997.

A reprodução total_{ouparcial dos trabalhos da Revista}

é_{permitida desdeque sejacitada fonte.}

Os _{autores e co-autores receberão}

um _exemplar da _revista. Os autores_{que desejarem receber mais cópias devem comunicar}

coma Comissãoeditorialantes deassumir o custo para cópias adicionais.

Informações mais detalhadas sobre a apresentaçãode_{trabalhospara serem publicados poderaoserºbtidªs}

juntoà_{Comissão Editorial.}

Universidade Federal de Uberlândia Bioscience Journal

Editor -André Luiz Quagliatto Santos,_{Prof. Dr.}

Av. Para, 1720

38400—902 _Uberlândia—MG

Brasil — fone— _{(34) 3218-2546}