REF SC1100
Rev. B
Reagentes Espectrais para PCR em Tempo Real
Determinação da Matrix Espectral
Para Uso Diagnóstico invitro
APLICAÇÃO
O Simplexa™ Spectral Calibration Panel (Painel de Calibração do Sistema Simplexa™) da Focus Diagnostics destina-se a avaliar a resposta espectral de quatro fluorocromos (FAM, JOE, CFR610 e Q670) nos quatro canais do 3M Integrated Cycler e determinar a matriz espectral. Esse produto não deve ser utilizado para diagnóstico na investigação de qualquer doença ou quadro clínico.
RESUMO E EXPLICAÇÃO
O Simplexa™ Spectral Calibration Panel oferece quatro únicas misturas reativas (Spectral Templates) em um só reagente contendo moléculas de ácidos nucleicos de dupla fita, primers, e enzimas que são utilizadas para gerar sinais fluorescentes definidos para análise pelo software Integrated Cycler Studio. Após o Spectral Calibration Panel ser executado no 3M Integrated Cycler, a equipe de Serviços técnicos da Focus Diagnostic irá calcular e fornecer uma nova matriz espectral. Isso suporta o uso contínuo dos ensaios Simplexa™ no 3M Integrated Cycler.
Instrumentos que detectam múltiplas cores de fluorocromos com comprimentos de onda de emissão próximos necessitam de métodos corretivos para delimitar cada sinal do fluorocromo nos canais, de modo que o dado bruto de cada canal possa ser convertido em dado do fluorocromo. A maioria dos instrumentos utilizam uma combinação de “hardware” (filtros ópticos) e “software” (reações e rotinas de calibração) para distinguir o sinal de cada fluorocromo. O Simplexa™ Spectral Calibration Panel fornece um sinal de fluorescência único e puro para cada um dos quatro fluorocromos através do projeto químico de alvo único de cada Spectral Template. O Integrated Cycler Studio software mede as propriedades espectrais de cada fluorocromo e calcula valores para distinguir a contribuição do sinal de cada fluorocromo do seu canal principal e vizinhos.
PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO
O Simplexa™ Spectral Calibration Panel (SC1100) é concebido como um kit pronto para uso de modo que, descongele e carregue a mistura reativa (Template Reaction Mixes) no Universal Disc para permitir o cálculo da matriz espectral para o 3M Integrated Cycler. O Simplexa™ Spectral Calibration Panel consiste em tubos de uso único contendo misturas de reação pré-homogeneizadas e prontas para o uso (Spectral Templates) específicos para cada um dos 4 canais dos fluorocromos: SC0520 – FAM, SC0560 – JOE, SC0610 – CFR610, e SC0682 – Q670 do 3M Integrated Cycler.
Os Spectral Templates não devem ser misturados uns com os outros nem misturados com qualquer amostra de paciente ou do meio ambiente para utilização, ao contrário, são produzidas em um único reagente para ser prontamente utilizado.
MATERIAIS FORNECIDOS
A Simplexa™ Spectral Calibration Panel da Focus Diagnostics contém material suficiente para dois conjuntos de reações. Ao receber o produto, armazene todos os reagentes à temperatura entre -10 e -30 ºC (não utilize freezer do tipo frost-free). Os reagentes são estáveis até o fim do mês da data de validade indicada no pacote do kit quando armazenados à temperatura entre - 10 e -30 ºC.
Kit Description
Nome do componente REF SÍMBOLO DA CE NO
RÓTULO Cor da Tampa Número de Tubos Reações por Kit /Tubo Volume por Tubo Simplexa™ Spectral Template 520 SC0520 CONTROL A Verde 2 16/8 100 µl Simplexa™ Spectral Template 560 SC0560 CONTROL B Azul 2 16/8 100 µl Simplexa™ Spectral Template 610 SC0610 CONTROL C Vermelho 2 16/8 100 µl Simplexa™ Spectral Template 682 SC0682 CONTROL D Roxo 2 16/8 100 µl
Descrição dos componentes do Kit
Componente do Kit Descrição do Componente
Simplexa™ Spectral Calibration Panel QR-Code Card (Cartão de
códigos QR do painel de calibração do sistema Simplexa™) Parametros específicos do ensaio
MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO FORNECIDOS
1. Integrated Cycler com Integrated Cycler Studio Software versão 3.0 ou superior. 2. Universal Discs (discos universais) para uso no Integrated Cycler.
3. Fita de cobertura para o Universal Disc.
4. Micropipeta simples ou multicanal capaz de dispensar com precisão 10 µL.
5. Freezer (desgelo manual) à temperatura entre -10 e -30°C (para o armazenamento dos componentes congelados do kit). 6. Microcentrífuga.
7. Ponteiras para micropipeta estéreis, descartáveis, que não contenham RNase/DNase, e com proteção contra barreira de aerossol.
8. Luvas descartáveis sem talco.
9. Universal Disc Loading Block (bloco de carregamento do Universal Disc) VALIDADE E MANUSEIO
1. Armazene os reagentes à temperatura entre -10 e -30 °C (não utilize freezer do tipo frost-free). 2. Após retirada dos reagentes espectrais do freezer inicie o teste em até 30 minutos.
3. Não utilize reagentes após sua data de validade. 4. Não agite vigorosamente.
5. Não misture reagentes de lotes diferentes.
6. Não misture reagentes com qualquer outro material não pertencente ao kit. 7. Não exponha os reagentes à luz intensa por períodos de tempo prolongado. ADVERTÊNCIA E PRECAUÇÕES
1. Para uso de diagnóstico in-vitro. 2. Siga as precauções padrões.
3. Ao lidar com os reagentes do kit, use equipamentos de proteção pessoal, tais como (mas não limitado a) luvas e aventais de laboratório.
4. Não pipete com a boca.
5. Não fume, não beba, não coma, não manuseie lentes de contato nem se maquie em áreas em que os reagentes do kit são usados.
6. Descarte reagentes não utilizados segundo legislação local, estadual ou federal.
7. A contaminação dos reagentes pode levar a resultados errôneos. Empregue técnicas assépticas.
8. Pipete e manuseie os reagentes cuidadosamente para evitar mistura de amostras entre orifícios adjacentes.
9. Empregue técnicas de pipetagem apropriadas e mantenha sempre o mesmo padrão de pipetagem ao longo de todo procedimento para garantir valores exatos e reprodutíveis.
10. Não substitua ou misture padrões de kits de lotes diferentes ou de outros fabricantes.
11. Utilize exclusivamente o protocolo descrito neste folheto. Digressões do protocolo ou o uso de intervalos de tempo ou de temperaturas que não os especificados podem originar resultados errados.
12. O preparo do ensaio deve ser feito à temperatura ambiente (aproximadamente entre 18 a 25°C); os reagentes devem ser mantidos a temperatura ambiente ou resfriados utilizando um bloco de resfriamento, e o Universal Disc deve ser mantido resfriado no Universal Disc Loading Block enquanto as amostras são carregadas.
13. Inicie a corrida dentro de 30 minutos após a remoção dos Spectral Templates do freezer. 14. Não reutilize os Universal Discs que já foram expostos a reagentes.
15. Descarte o disco usado sem destacar nem remover a fita adesiva de cobertura.
16. A mistura reativa contém mais de 5% de glicerol, o que pode causar irritação ao ser inalado ou em contato com a pele. Se ocorrer inalação ou contato com a pele, devem-se tomar medidas de primeiros socorros.
17. Não utilize o kit se a embalagem ou o conteúdo estiverem quebrados ou danificados e entre em contato com a Focus Diagnostics. As informações de contato estão na última página deste documento.
INSTRUÇÕES DE USO
A. CONFIGURAÇÃO DO INSTRUMENTO DE PCR EM TEMPO REAL
O Manual do Operador do Integrated Cycler (Integrated Cycler Operator Manual) contém instruções sobre como configurar o software Integrated Cycler Studio e incluir definições de ensaios, programar e analisar sequências no equipamento.
B. ÁREA DE AMPLIFICAÇÃO DO PCR EM TEMPO REAL
Deve ser utilizada uma área dedicada à preparação do Universal Disc de 96 poços para Simplexa™ Spectral Calibration Panel. Utilize um bloco de preparação do Universal Disc gelado enquanto prepara o ensaio do Simplexa™ Spectral Calibration Panel. Não prepare os tubos de amostra na área de preparação dos reagentes.
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1. Descongele cada frasco dos Spectral Templates em temperatura ambiente (entre 18 e 25 °C aproximadamente). Cada frasco de componente do kit contém quantidade suficiente de reagentes para 8 reações. Antes de cada utilização, misture gentilmente os componentes individualmente e centrifugue rapidamente para precipitar o conteúdo no fundo do tubo.
Volumes dos Spectral Templates
Spectral Templates Volume / 1 reação Simplexa™ Spectral Template 520 10 µl Simplexa™ Spectral Template 560 10 µl Simplexa™ Spectral Template 610 10 µl Simplexa™ Spectral Template 682 10 µl
2. Utilize os Use the Spectral Templates em até 30 minutos após descongelado.
3. Adicione 10 µL dos Spectral Templates em cada poço diretamente conforme tabela abaixo.
4. O raio do BLANK (branco) (Raio 5 abaixo) não recebe nenhum tipo de material.
5. Cubra o disco com a Universal Disc Cover Tape (fita para o Universal Disc).
6. Coloque o Universal Disc no Integrated Cycler e inicie a corrida.
Poço Raio 1 Raio 2 Raio 3 Raio 4 Raio 5
A SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BLANK B SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BLANK C SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BLANK D SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BLANK E SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BLANK F SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BLANK G SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BLANK H SC0520 SC0560 SC0610 SC0682 BLANK
C. VERIFICAÇÃO DOS RESULTADOS
1. Examine cada corrida para determinar se esta foi válida. Use os valores listados na tabela abaixo. Critério pra um Spectral Template válido
Controle Resultado
Spectral Template 520 Detectado (0<Ct≤45) APENAS no Canal FAM (não detectado no JOE, CFR610, ou Q670) Spectral Template 560 Detectado (0<Ct≤45) APENAS no canal JOE (não detectado no FAM, CFR610, ou Q670) Spectral Template 610 Detectado (0<Ct≤45) APENAS no canal CFR610 (não detectado no FAM, JOE, ou Q670) Spectral Template 682 Detectado (0<Ct≤45) APENAS no canal Q670 (não detectado no FAM, JOE, or CFR610)
Blank Não Detectado
D. EXPORTANDO OS RESULTADOS
1. Exporte os arquivos das corridas segundo o 3M Integrated Cycler Operator Manual.
2. Envie por e-mail o arquivo de corrida para o Departamento de Serviços Técnicos da Focus Diagnostics no endereço
calibration@focusdx.com
E. CARREGANDO NOVA MATRIZ
Assim que uma nova documentação de correção spectral for recebida, carregue a nova matriz espectral segundo manual do operador do 3M Integrated Cycler.
LIMITAÇÕES
As correções espectrais são específicas para um instrumento. Esse ensaio deve ser realizado para cada 3M Integrated Cycler a cada 6 meses ou conforme necessário.
ESTUDOS CLÍNICOS
O Simplexa™ Spectral Calibration Panel não possui nenhum uso clínico. Este será utilizado para calibração espectral do 3M Integrated Cycler.
REPRODUTIBILIDADE
A reprodutibilidade do Simplexa™ Spectral Calibration Panel foi avaliada. O site interno da Focus Diagnostics avaliou a reprodutibilidade inter-instrumento, inter-operador e inter/intra-ensaio. O ensaio foi realizado por 3 operadores durante 4 dias consecutivos. Pelo menos quatro dos oito poços das replicatas para cada reagente espectral estavam sem erros para que a corrida fosse considerada válida. Nenhuma dificuldade ou erro do operador foi reportado ou observado na preparação ou corrida de todos os ensaios. Todos os componentes de variâncias dosvalores de Ct avaliadas estavam dentro do critério de aceitação estabelecido, indicando que o painel apresenta baixa variância tanto em valores de Ct como nos valores de correções espectrais como avaliados com a reprodutibilidade inter-instrumento, intra-operador e inter/intra-ensaio. Os resultados estão apresentados nas tabelas abaixo.
Estimativa dos Componentes de Variância para Valores de Ct
Fluorocromo Média de Ct Fonte de Variabilidade Variância SD %CV
CFR610 30,0 Inter-instrumento 0,08 0,28 0,9 Inter-operdor 0,03 0,17 0,6 Inter-ensaio 0,00 0,00 0,0 Intra-ensaio 0,21 0,46 1,5 Total 0,32 0,57 1,9 FAM 28,9 Inter-instrumento 0,18 0,42 1,5 Inter-operador 0,00 0,00 0,0 Inter-ensaio 0,01 0,08 0,3 Intra-ensaio 0,02 0,14 0,5 Total 0,21 0,46 1,6 JOE 28,8 Inter-instrumento 0,21 0,46 1,6 Inter-operador 0,00 0,00 0,0 Inter-ensaio 0,02 0,16 0,5 Intra-ensaio 0,03 0,16 0,6 Total 0,26 0,51 1,8 Q670 29,0 Inter-instrumento 0,04 0,20 0,7 Inter-operador 0,01 0,09 0,3 Inter-ensaio 0,05 0,22 0,8 Intra-ensaio 0,13 0,36 1,3 Total 0,23 0,48 1,7
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Estimativa dos Componentes de Variância para Valores de Matrix EspectralComponente da Matrix Fonte de Variabilidade Variância (%) SD (%)
CFR610 para 682 Inter-operador 0,0000 0,01 Inter-ensaio 0,0005 0,02 Intra-ensaio 0,0023 0,05 Total 0,0028 0,05 FAM para 560 Inter-operador 0,0010 0,03 Inter-ensaio 0,0108 0,10 Intra-ensaio 0,0296 0,17 Total 0,0414 0,20 JOE para 520 Inter-operador 0,0000 0,00 Inter-ensaio 0,0004 0,02 Intra-ensaio 0,0038 0,06 Total 0,0042 0,06 REFERÊNCIAS
1. 3M™ Integrated Cycler Studio Operator Manual (PI.MOL1101.IVD, PI.MOL1101.OUS, PI.MOL1101.QQD, PI.MOL1101UD)
O uso das sondas Scorpions® para uso diagnostic in vitro de amostras de humanos está coberta por licença à Focus Diagnostics, Inc. from DxS, Ltd.
Os Fluoróforos Black Hole Quencher™, CAL Fluor™, Quasar™ são marcas registradas da Biosearch Technologies, Inc. ('BTI'). A tecnologia dos fluoróforos Black Hole Quencher, CAL Fluor and Quasar é autorizada conforme um acordo estabelecido com a BTI, e esses produtos são comercializados exclusivamente com finalidades clínicas ou de pesquisa e desenvolvimento.
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Esse Produto e processo contém informações comerciais secretas de propriedade da Focus Diagnostics, Inc. incluindo, mas não limitado à, formulação e identidade dos reagentes, e de processos de uso do produto para ajuste da resposta espectral do Integrated Cycler. Além disso, a descrição do processo nesse folheto é objeto de direitos autorais. O preço de compra desse produto inclui o direito limitado, não exclusivo e intransferível de uso apenas da quantidade do produto comprado para prática dos processos descritos nesse folheto no Integrated Cycler do comprador.
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PI.SC1100 Rev. B Escrito em:19 de maio de 2016
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