- Capítulo 4: Primeiro relato de predação de cistos de Giardia spp. e oocistos de
Cryptosporidium spp. pelos protozoários ciliados Sterkiella e Vorticella spp. oriundos
do sistema combinado de tratamento de esgoto.
- Capítulo 5: Detecção de Enterocytozoon bieneusi pelos métodos moleculares em amostras de esgoto bruto e efluente tratado de um sistema combinado de tratamento de esgoto no Brasil.
Capítulo 1: Remoção de protozoários patogênicos pelo sistema combinado de tratamento Filtro Anaeróbio seguido de Biofiltro Aerado Submerso: Caracterização de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium em amostras de esgoto, biofilme e lodo.
Resumo
Giardia spp. e Cryptosporidium spp. tem causado inúmeros surtos de diarreia devido
a ingestão de agua contaminada com cistos e oocistos. Essas formas infectantes exibem acentuada resistência a várias condições ambientais (temperatura, umidade, pH) e à cloração o que contribui para a disseminação desses organismos no meio ambiente. A maioria dos surtos epidêmicos dessas parasitoses foi ocasionada pela contaminação dos mananciais por esgotos, sendo que são poucos os estudos sobre esses protozoários em esgoto sanitário que recebe efluente hospitalar. Sistemas de tratamento biológico de esgoto albergam uma grande diversidade de organismos patogênicos, sendo que no Brasil há poucas pesquisas sobre a eficiência de remoção de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. pelos sistemas combinados de tratamento de esgoto.Tendo em vista essa situação, foram avaliadas amostras de esgoto, efluentes, biofilme e lodo provenientes de um sistema combinado de tratamento (Filtro Anaeróbio seguido de Biofiltro Aerado Submerso) que trata esgoto sanitário que recebe efluente hospitalar oriundo da área da saúde da Universidade Estadual de Campinas. Cistos e oocistos foram recuperados dessas amostras pelo método de centrífugo- concentração e filtração em membranas. Das 144 amostras analisadas de esgoto bruto e efluentes, 22,2% foram positivas para Giardia spp., enquanto que
Cryptosporidium apresentou positividade de 6,2%. Nas amostras de diferentes pontos
colhidos da biomassa imobilizada, o número total por litro de Giardia spp. foi de 98.000 e somente um ponto apresentou positividade para Cryptosporidium spp. sendo registrados 30.000 oocistos/L. Já nas amostras de lodo, foi encontrado um número médio de 7.800 cistos/L. Quanto à remoção de Giardia spp. pelo sistema, obteve-se valor médio de 92,9%. Os grupos genéticos de Giardia spp. detectados foram C e BIV oriundos do esgoto bruto e AII oriundo do efluente tratado. Não foi possível calcular o valor de remoção de Cryptosporidium pelo sistema.
Introdução
A diarreia é o principal sintoma gastrointestinal decorrente da ingestão de água contaminada contendo patógenos como Vibrio cholerae, Shigella sp., Escherichia coli O157:H7 Campylobacter sp., Giardia spp., Cryptosporidium spp. e os microsporídios (WHO, 2005, 2009; FLETCHER et al., 2012).
Kamizoulis (2008) relatou que a ocorrência de surtos epidêmicos de gastroenterite resulta do aumento das concentrações dos patógenos no esgoto, sendo que no mesmo há uma variação de 101/L a 1010 organismos/L (bactérias, helmintos,
protozoários e vírus) tendo como maiores concentrações: coliformes termotolerantes (108/L a 1010/L), Vibrio cholerae (102/L a 105/L), Ascaris lumbricoides (10/L a 103/L),
Ancylostoma/Necator (10/L a 103/L), Cryptosporidium sp. (101/L 104/L), Giardia
duodenalis (102/L a 105/L) e vírus entéricos (105/L a106/L). Dessa forma, evidencia-se
a importância da pesquisa de patógenos nesse tipo de amostra.
Diferentemente do esgoto doméstico, há poucos dados sobre a concentração desses patógenos em esgoto hospitalar, já que os estudos existentes enfatizam as pesquisas sobre a resistência das bactérias e a detecção de parasitos em efluentes de sistemas de tratamento de esgoto e água (CARRARO et al.,2016; CAMA e MATHISON, 2015).
O protozoário patogênico Giardia duodenalis causa a giardiose em humanos, sendo transmitido pela rota fecal oral, mediante contato humano-humano (antroponótica), animal-humano (zoonótica) ou por meio de ingestão de água e alimentos contaminados com cistos (CAMA e MATHISON, 2015; RYAN e CACCIÒ, 2013). Globalmente, 280 milhões de pessoas são infectadas por Giardia e nos Estados Unidos aproximadamente 1,2 milhões de novos casos são registrados anualmente (YODER et al., 2012; ANKARKLEV et al., 2012). A prevalência de giardiose em humanos é variável de 0,4% a 7,5% nos países desenvolvidos e nos países em desenvolvimento é de 8,0% a 30,0% (FENG e XIAO, 2011).
Cryptosporidium spp. é um protozoário causador da criptosporidiose cuja
transmissão ocorre pela rota fecal-oral, por meio da ingestão de alimentos e água contaminados com oocistos. Além disso, inúmeros surtos de gastroenterite provocados por esse parasito mediante a ingestão de água de consumo contaminada
com oocistos têm sido registrados nos Estados Unidos (PAINTER et al., 2015; MIYAMOTO e ECKMANN, 2015).
Nesse país, no período compreendido entre 2000 a 2008, foram também registrados 74.800 casos de criptosporidiose devido a ingestão de alimentos contaminados (SCALLAN et al., 2011) enquanto que somente no biênio de 2011 a 2012 já foram relatados 17.321 casos da parasitose, sendo que a maioria deles foi associada com águas de recreação (PAINTER et al., 2015).
Sistemas de tratamento biológico de esgoto albergam uma grande diversidade de organismos patogênicos e diante desse cenário, há inúmeras pesquisas envolvendo a detecção e a remoção de patógenos como Giardia spp. e
Cryptosporidium spp. provenientes desses sistemas (KITAJIMA et al., 2014;
HACHICH et al., 2013; IZQUIERDO et al., 2011).
Os sistemas combinados anaeróbios-aeróbios que utilizam reatores com biofilmes têm sido amplamente implementados devido a possibilidade de se trabalhar com alta concentração de biomassa, boa eficiência de remoção de compostos orgânicos, maior estabilidade às variações da composição do afluente e a choques de carga, de temperatura e de toxicidade, e menor preocupação em relação a separação de sólidos (CHAN et al., 2009; VON SPERLING, 1996).
Entretanto, no Brasil, há poucos estudos que avaliam a remoção de protozoários patogênicos pelos sistemas com biomassa imobilizada em relação aos sistemas convencionais de tratamento de esgoto.
No Egito, em um sistema combinado de tratamento constituído por reator anaeróbio híbrido seguido de biofiltro aeróbio com biomassa, Tawfik et al., (2015) pesquisaram Giardia e Cryptosporidium em amostras de efluentes, encontrando positividade para cistos de Giardia em 72,0% das amostras de esgoto e efluentes, sendo atingida uma remoção de 100,0% do parasito pelo sistema. Quanto a
Cryptosporidium, houve uma positividade desse parasito em 81,8% das amostras de
efluente, entretanto os autores não relataram valor de remoção para Cryptosporidium. Samie e Ntekele (2014) analisaram 79 amostras de efluentes oriundas de sistemas combinados (reatores anaeróbios e aeróbios) e de lodos ativados na África do Sul, encontrando uma positividade de Giardia spp. de 31,6% e valores de remoção de 40,0% (filtros biológicos) e 20,0% (Lodos ativados).
Poucas pesquisas relatam uma eficiência de remoção de 100% de cistos de
Giardia spp. pelos sistemas combinados de tratamento (TAWFIK et al., 2015; SAMIE
e NTEKELE, 2014) e para Cryptosporidium spp., mesmo quando registrada sua ocorrência em amostras de esgoto; muitas vezes não é possível estimar valores remoção porque não há concomitância da presença do protozoário nas amostras de afluentes e efluentes.
Diante desse cenário, a proposta desse estudo foi avaliar a eficiência de remoção de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. por um sistema combinado anaeróbio/anóxico/aeróbio com biomassa imobilizada. Nossos resultados evidenciam a importância da adoção desse tipo de sistema para a remoção de parasitos do afluente contribuindo para a redução do impacto dos efluentes no meio ambiente, evitando a disseminação desses patógenos.
Material e Métodos
O estudo de protozoários patogênicos e microfauna em amostras de esgoto e efluentes sob supervisão da profa. Dra. Regina Maura Bueno Franco, Dra. Isabel Cristina Vidal Siqueira-Castro, sendo realizado pela aluna de doutorado Sandra Yamashiro.
Esse presente trabalho foi vinculado ao projeto de pesquisa Filtro anaeróbio seguido de biofiltro aerado submerso: produção de biomassa, desnitrificação e remoção de patógenos (projeto FAPESP/processo n°: 11/21878-9), supervisionado pelo Prof. Dr. Edson Aparecido Abdul Nour do departamento de Saneamento da Faculdade de Engenharia Civil, Arquitetura e Urbanismo da Universidade Estadual de Campinas e executado pelo aluno de doutorado Mário Luiz Rodrigues Foco.
Caracterização do sistema combinado Anaeróbio/Anóxico e Biofiltro Aerado Submerso.
O sistema combinado foi constituído pelas seguintes unidades: Filtro Anaeróbio/Anóxico (FA ou FAA) com volume útil de 298,7 L, Biofiltro Aerado Submerso (BAS) com volume de 131,5 L e decantador (DEC) com 188,5 L de volume (Figura 1). Ambos os reatores anaeróbio/anóxico e aeróbio foram preenchidos com
anéis tipo “pall ring” produzidos em polipropileno reciclado com dimensões de 38,0 mm x 38,0 mm (diâmetro x altura), área superficial de 128 m2.m-3e índice de vazios de
89%. Ambos os reatores apresentaram fluxo ascendente de esgoto.
Esse sistema foi operado em escala piloto nas dependências do Laboratório de Processos Biológicos (LABPBIO) localizado na Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) Campinas, SP.
Figura 1. Sistema combinado piloto de tratamento de esgoto Filtro Anaeróbio seguido de Biofiltro Aerado Submerso instalado no Laboratório de Processos Biológicos (LABPBIO) na Universidade Estadual de Campinas-SP.
A alimentação do sistema foi realizada com esgoto sanitário que recebia efluente hospitalar proveniente de uma região da Cidade Universitária Zeferino Vaz, Campinas, SP, onde estão situados: Hospital das Clínicas, creche, almoxarifado, agências bancárias, centros médicos e vários restaurantes na qual circulam mais de10 mil pessoas diariamente (UNICAMP, 2016).
O Hospital de Clínicas (HC) da UNICAMP é considerado um centro de excelência médica, constituindo hospital de referência na região metropolitana de Campinas gerando 25% do total do esgoto produzido pela Universidade; apresenta uma capacidade física de 419 leitos e área construída de 66.164,26m2 e consumo de
água de 9.227 mil m3/mês (UNICAMP, 2016). Assim, um volume de 700 L de
esgoto/dia com vazão de 25 L/h era tratado pelo sistema combinado em estudo. FA
Controle Operacional do Sistema
O tratamento do esgoto bruto pelo sistema combinado Anaeróbio/Anóxico- Aeróbio em estudo ocorreu em quatro etapas, a saber (Tabela 1):
Tabela 1. Etapas de operação do sistema combinado.
Etapa Q
(L.h-1) q (L.h-1)
q/Q Tempo de Detenção Hidráulica (H)
Anae Anox Aer SC
1 24,6 0 0 12,1 0,0 5,4 25,1
2 12,3 0,5 12,1 0,0 5,4 22,6
3 24,6 36,9 1,5 6,0 6,1 5,4 20,5
4 73,8 3,0 6,0 6,1 5,4 19,4
Q: vazão de alimentação; q: vazão de recirculação; q/Q: razão de recirculação; Anae: Filtro anaeróbio; Anox: Anóxico; Aer: Biofiltro Aerado Submerso; SC: Sistema Combinado; H: horas
A primeira etapa consistiu em avaliar o início de operação do sistema combinado, visando verificar o seu comportamento durante o estabelecimento do equilíbrio dinâmico, principalmente em relação às variáveis que indicaram a formação de uma biomassa ativa no filtro anaeróbio (FA) e, no BAS, em função das taxas de carga orgânica. Nessa etapa foi também avaliada a capacidade do sistema em degradar matéria orgânica e converter nitrogênio amoniacal em nitrito e nitrato, em função das taxas de carga orgânica e amoniacal aplicado.
As segunda, terceira e quarta etapas da operação do sistema foram caracterizadas pela recirculação de efluente nitrificado do BAS para o início do sistema (entrada do FA), visando promover a desnitrificação e consequente remoção de nitrogênio, utilizando-se como fonte de carbono para este processo, os ácidos orgânicos voláteis (AOV) presentes no reator anaeróbio.
A avaliação foi realizada em 4 etapas nas quais ocorreu o aumento da razão da recirculação (q/Q= 0, 0,5; 1,5; e 3,0) entre os reatores.
Avaliação das variáveis físicas e químicas das amostras de esgoto e efluentes do sistema combinado FA seguido de BAS.
Para o monitoramento físico-químico, quinzenalmente, amostras de esgoto e de efluentes foram acondicionadas em frascos de polipropileno de 1L em temperatura
ambiente e levadas até o Laboratório de Saneamento da Faculdade de Engenharia Civil, Arquitetura e Urbanismo, UNICAMP, onde foram processadas.
As análises físico-químicas das amostras de esgoto e efluentes incluíram as seguintes variáveis: pH, temperatura, oxigênio dissolvido (OD), alcalinidade total (AT), alcalinidade parcial (AP), ácidos orgânicos voláteis (AOV), demanda química de oxigênio (DQO), nitrito, nitrato, Nitrogênio Total Kjeldahl e a série de sólidos. As metodologias utilizadas foram baseadas de acordo com Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 22th.
Para as variáveis alcalinidade e ácidos orgânicos voláteis foram empregados os métodos de Ripley et al., (1986) e Dilallo (1961), respectivamente.
A avaliação do sistema combinado FA seguido de BAS quanto à eficiência de desnitrificação do esgoto por meio da recirculação do efluente tratado foi realizada pelo aluno de doutorado Mário Luiz Rodrigues Foco sob orientação do prof. Dr. Edson Aparecido Abdul Nour do departamento de Saneamento da Engenharia Civil, Arquitetura e Urbanismo da Universidade Estadual de Campinas.
Colheita das amostras de esgoto bruto, efluentes, biofilme e lodo para pesquisa de Giardia spp. e Cryptosporidium spp.
No período de janeiro de 2013 a junho de 2014, quinzenalmente, foram colhidas ao longo do sistema, 36 amostras de: 1L de esgoto bruto, 1L de efluente do FA, 1L de efluente do BAS e 2 L do efluente do decantador (tratado), conforme os tempos de detenção hidráulico de cada reator (Figura 2), totalizando 144 amostras.
Figura 2. Representação esquemática do horário da colheita de amostras de acordo com o tempo de detenção hidráulico de cada reator biológico do sistema combinado de tratamento FA seguido de BAS e colheita de biofilme imobilizado e lodo entre as etapas de operação do sistema combinado FA seguido de BAS.
Após cada etapa (1, 2, 3 e 4) de operação do sistema combinado (Figura 2), 5 amostras de biomassa imobilizada de cada ponto diferente do BAS (t, A, B, C, D) e 5 amostras de 1L do lodo do decantador foram colhidas (Figura 3).
Figura 3. Representação do BAS e amostragem de biomassa imobilizada no meio suporte de diversos pontos (t, A, B, C, D) do reator aeróbio: (a) BAS; b (ponto t); (c) retirada de meio suporte do ponto t; (d) retirada da coluna de PVC interna contendo meios suportes. (e): coluna de PVC contendo os meios suporte. (f): colheita da biomassa aderida.
A
B
D C
A pesquisa de cistos de Giardia spp., oocistos de Cryptosporidium spp. nas amostras de esgoto, efluentes, biofilme e lodo foi conduzida no Laboratório de Protozoologia do Departamento de Biologia Animal, Instituto de Biologia / UNICAMP (Figura 4; Tabela 2).
Figura 4. Representação esquemática das etapas da pesquisa de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. em amostras de esgoto e efluentes.
Tabela 2. Metodologia empregada para pesquisa de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras de esgoto bruto, efluentes, biofilme imobilizado e lodo do sistema combinado de tratamento FA seguido de BAS.
Tipo de Amostra Volume colhido
Pesquisa de parasitos Referências
Esgoto bruto Biofilme Lodo Efluente (FA) Efluente (BAS) 1L 40 mL 1L 1L 1L Centrífugo-concentração (1.500 x g) com solução de Tween 80 a 1%, seguido de Reação de Imunofluorescência Direta utilizando o kit diagnóstico Celllabs®. Microscopia eletrônica de varredura para pesquisa de cistos de Giardia spp. e formas de desenvolvimento de Cryptosporidium spp.
Amostras positivas na RID submetida à Nested-PCR: para Giardia genes - Triosefosfato Isomerase (tpi); Beta- giardina (bg); 16S. Para Cryptosporidium – gene 18S.
Modificado de Cantusio Neto et al., (2006); França (2007);
Modificado de Sulaiman et al., 2003: GoTaq®
Colorless Master Mix; Temperatura de anelamento 48C por 45 segundos; Caccio et al., (2002) e Lalle et al., (2005) Modificado de Appelbee et al., (2003): Primeira reação: aquecimento inicial de 96 por 2 min., 34 ciclos (96C por 45s, 58C por 30s, 72C por 45 s e extensão final de 72C por 4 min.). Segunda reação: as mesmas condições acima com temperatura de anelamento 55C por 30s.
Efluente Tratado 2 L Técnica de Filtração em Membranas (1.500 x g) com solução de Tween 80 a 1%, seguido de Reação de Imunofluorescência Direta utilizando o kit diagnóstico Celllabs®. Amostras positivas na RID submetida à Nested- PCR: gene Triosefosfato Isomerase (tpi); Beta-giardina (bg); 16S.
Franco et al., (2001) modificado;
Modificado de Sulaiman et al., 2003: GoTaq®
Colorless Master Mix; Temperatura de anelamento 48C por 45 segundos; Caccio et al., 2002 e Lalle et al., 2005 Modificado de Appelbee et al., 2003: Primeira reação: aquecimento inicial de 96 por 2 min., 34 ciclos (96C por 45s, 58C por 30s, 72C por 45 s e extensão final de 72C por 4 min.) Segunda reação: as mesmas condições acima com temperatura de anelamento 55C por 30s.
Para a confirmação morfológica dos cistos e oocistos foi utilizado o corante vital DAPI (4’6- diamidino- 2- phenylindole) na diluição 1: 5000 nas mesmas amostras submetidas a RID. A visualização da RID foi feita através de microscópio de epifluorescência com filtro de excitação de 450 a 490 nm e filtro de barreira de 520 nm e a visualização dos protozoários marcados com DAPI com filtro de excitação 365 a 400 nm e um filtro de barreira de 395nm.
Após a enumeração dos cistos e oocistos presentes nas amostras, o cálculo da estimativa do número de cistos e oocistos/L para cada amostra foi feito com base na fórmula: X= (n/K) x (S/A), sendo: X= número de cistos ou oocistos/L; n= número médio de oocistos ou cistos visualizados nos poços da lâmina de IFA; K= volume de sedimento examinado (L); S= volume total do sedimento obtido (L); A= volume da amostra processada, conforme Foco et al., (2011).
Estudo da remoção de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. pelo sistema combinado de tratamento de esgoto.
A remoção (%) dos protozoários patogênicos em estudo foi estimada subtraindo-se o número de cistos/oocistos detectados nas amostras do efluente final do número de cistos e oocistos detectados na entrada do sistema (esgoto bruto).
Microscopia eletrônica de varreduras em amostras de biomassa imobilizada para pesquisa de cistos de Giardia spp. e formas de desenvolvimento de
Cryptosporidium spp.
O protocolo de fixação das amostras de biomassa imobilizada foi realizado de acordo com França (2007), sendo apresentado na Figura 5:
Figura 5. Etapas do protocolo de fixação das amostras de biomassa imobilizada do Biofiltro Aerado Submerso para a visualização de cistos de Giardia spp. e formas de desenvolvimento de Cryptosporidium spp. na microscopia eletrônica de varredura.
Extração do DNA genômico e caracterização molecular a partir das amostras positivas para Giardia spp. e Cryptosporidium spp..
A caracterização molecular de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. foi efetuada nas amostras dadas como positivas durante a visualização da reação de imunofluorescência direta. Amostras dadas como suspeita de Giardia spp. também foram submetidas à extração e nested-PCR
Para a extração do material genético dos cistos de Giardia spp. e oocistos de
Cryptosporidium spp. foram utilizados os kits comerciais ZR Fungal/Bacterial DNA
(Zymo Research®) e PowerSoil® DNA Isolation kit (Mobio), respectivamente, ambos
de acordo com as instruções do fabricante. Ao final da extração, 100 µL de DNA foram obtidos e armazenados a -20oC. A nested-PCR das amostras de DNA para cada gene
(tpi, beta-giardina e 16S), conforme as condições citadas (Tabela 2).
Após confirmação das bandas em gel de agarose, os produtos da PCR foram purificados pelo kit Ilustra GFXTM PCR DNA and Gel Band Purification (GE® Health care, UK) e depois foram enviados para sequenciamento na empresa Helixxa Bases for Life, utilizando o aparelho Applied Biosystems® 3500 Genetic Analyzer.
A edição das sequências dos produtos da PCR foi realizada com o programa BioEdit Sequence Alignment Editor versão 7.2.5 (HALL, 1999) e para a determinação do grupo filogenético de Giardia spp. procedeu-se com o método Máxima Verossimilhança (TAMURA, 2011) com o programa Mega 5.0 (TAMURA et al., 2011). Para a escolha do melhor modelo de substituição de nucleotídeos, foi utilizado o J.ModelTest. As análises foram conduzidas usando o método de substituição de nucleotídeos General Time Reversible (GTR) e Tamura-Nei, ambos com correção Gamma-4. Centrífugo- concentração das amostras de biomassa imobilizada Adesão do sedimento em lamínulas de 13 mm com poli-L- lisina. Etapa de fixação: glutaraldeído; tetróxido de ósmio e lavagem com tampão fosfato por
10 min. Desidratação das amostras com etanol 30%, 50%, 70%, 90% e 100%, Secagem em câmara de ponto crítico ; cobertas com camada fina de metal ouro-paládio
A análise do posicionamento genético de Giardia spp foi realizado comparado com sequências referência do parasito para os genes tpi, beta-giardina e 16S, obtidas do GenBank.
Análise estatística
Previamente à análise estatística, cada variável foi agrupada de acordo com os meses das etapas de recirculação correspondentes: 1a etapa (janeiro a abril de 2013);
2a etapa (maio a julho de 2013); 3a etapa (agosto a outubro de 2013); 4a etapa
(novembro de 2013 a junho de 2014).
O teste de Shapiro-Wilk foi aplicado para verificar se os dados do número de cistos/L e oocistos/L e físico-químicos são normais com a finalidade de definir qual tipo de teste (paramétrico ou não paramétrico) seria aplicável para analisar uma possível diferença significativa do número de parasitos/L e dados físicos-químicos entre os pontos esgoto bruto, efluente anaeróbio, efluente aeróbio e tratado.
Os resultados do teste citado acima mostraram anormalidade dos dados, sendo então aplicado o teste não paramétrico Kruskall-Wallis. A correlação de Spearman foi aplicada para verificar a existência de uma eventual correlação entre o número de parasitos/L e variáveis físicas e químicas. Em ambos os testes foram considerados somente valores p ≤ 0,05 como significantes. Os valores de de Spearman foram classificados, a seguir:
0 a 0,19: positivo ou negativo indica correlação muito fraca 0,2 a 0,39: positivo ou negativo indica correlação fraca 0,4 a 0,59: positivo ou negativo indica correlação moderada 0,6 a 0,79: positivo ou negativo indica correlação forte 0,8 a 1,0: positivo ou negativo indica correlação muito forte
Fonte: http://www.statstutor.ac.uk/resources/uploaded/spearmans.pdf
Essas análises foram conduzidas utilizando o pacote estatístico R versão 3.2.5 (R Core Team, 2014).
Resultados
A caracterização das variáveis físicas e químicas de cada ponto amostrado (esgoto bruto, efluente anaeróbio, efluente aeróbio e efluente tratado) nas quatro etapas de recirculação do sistema combinado FA seguido de BAS foi determinada em paralelo com a avaliação do sistema (Tabelas 3, 4, 5 e 6).
Em todas as etapas, as médias do pH no esgoto bruto e efluente anaeróbio foram próximas situando-se na faixa da neutralidade (Tabelas 3, 4, 5 e 6). Entretanto, o efluente anaeróbio apresentou um valor da média ligeiramente maior ao do esgoto bruto devido ao metabolismo do filtro anaeróbio, consumindo ácidos orgânicos