Preparação e caracterização de sistema semi-sólido bioadesivo termo-sensível com micropartículas contendo própolis

Foram preparadas formulações poliméricas binárias contendo 15% (p/p) de P407 com 0,10 ou 0,25% (p/p) de C934P (Tabela 3), através de uma adaptação do ‘método a frio’ (SCHMOLKA, 1972), como descrito anteriormente. Após o repouso em geladeira por, no mínimo, 24 horas, incorporou-se aos géis, por gotejamento (BRUSCHI et al., 2003a), exatamente 4% (p/p) de extrato etanólico de própolis (EFEI2002), sob agitação magnética por 30 min nas temperaturas de 15, 20 e 25 °C. Após completa homogeneização, as preparações foram acondicionadas em frascos de vidro âmbar e hermeticamente fechados. As preparações foram feitas em triplicatas.

Poloxamer 407 Carbopol 934P® Extrato de própolis

SBTS-1 15 0,10 4

SBTS-2 15 0,25 4

4.2.6.9.1 Análise morfológica

A análise morfológica das micropartículas de extrato de própolis em cada sistema bioadesivo termo-sensível foi realizada por microscopia óptica por captação de imagens, através de microscópio óptico DMRXA (Leica®). Uma amostra foi colocada sobre a lâmina de vidro e as imagens foram capturadas.

4.2.6.9.2 Análise granulométrica

A determinação da distribuição de tamanho das micropartículas em cada sistema bioadesivo termo-sensível foi realizada por captação de imagens, através de microscópio óptico DMRXA (Leica®), utilizando o programa Leica® Qwin Image Analysis Systems para quantificação. As formulações foram colocadas sobre uma lâmina de vidro e, para cada campo analisado, foi realizada a distribuição de tamanho das micropartículas, usando como parâmetro para medição o diâmetro segundo Feret (BARBER, 1993). Foram medidas 3.500 partículas, no mínimo, e a distribuição de tamanho das mesmas foi determinada.

4.2.6.9.3 Avaliação preliminar da temperatura de gelificação

Os sistemas bioadesivos termo-sensíveis contendo micropartículas de própolis foram submetidos à avaliação preliminar da temperatura de gelificação (T ) de acordo com Choi

preparação líquida sob baixa temperatura, foi colocado em uma placa termostatizada. Um termômetro foi imerso na preparação a qual foi aquecida continuamente e com agitação constante. Quando a barra magnética parou de movimentar-se devido à gelificação, a temperatura foi determinada como Tsol/gel. O aquecimento máximo foi de 55 ºC. Foram

realizadas três determinações para cada preparação.

4.2.6.9.4 Determinação da densidade relativa

A densidade relativa dos sistemas bioadesivos termo-sensíveis contendo micropartículas de própolis foi determinada através de picnômetro como descrito no item 4.2.2.2.

4.2.6.9.5 Análise reológica de cisalhamento contínuo

A reometria de cisalhamento contínuo dos sistemas bioadesivos termo-sensíveis contendo micropartículas de própolis foi realizada como descrito anteiormente no item 4.2.6.1.

4.2.6.9.6 Análise reológica oscilatória

A reometria oscilatória dos sistemas bioadesivos termo-sensíveis contendo micropartículas de própolis foi realizada de acordo com o descrito no item 4.2.6.2.

4.2.6.9.7 Determinação da temperatura de gelificação

A determinação da temperatura de gelificação (Tsol/gel) dos sistemas bioadesivos

termo-sensíveis contendo micropartículas de própolis foi realizada através de análises reológicas, como descrito anteriormente no item 4.2.6.4.

4.2.6.5.

4.2.6.9.9 Avaliação in vitro da força mucoadesiva

A avaliação in vitro força mucoadesiva dos sistemas bioadesivos termo-sensíveis contendo micropartículas de própolis foi realizada de acordo com o descrito no item 4.2.6.6.

4.2.6.9.10 Determinação da seringueabilidade

A determinação do trabalho de seringueamento de cada sistema bioadesivo termo- sensível contendo micropartículas de própolis foi avaliada de acordo com o descrito no item 4.2.6.7.

4.2.6.9.11 Determinação do teor de própolis

O teor de própolis nos sistemas bioadesivos termo-sensíveis foi determinado pelo método espectrofotométrico e por CLAE. Aproximadamente 0,200 g de amostra, exatamente pesados, submetidos à extração com acetato de etila como descrito no item 4.2.2.5, obtendo- se a solução de análise.

Por espectrofotometria, o teor foi obtido pela determinação do teor de flavonóides totais. Retirou-se uma alíquota de 10,0 mL da solução de análise, adicionou-se 1,0 mL de solução de cloreto de alumínio 2% (p/V) e completou-se o volume para 25 mL em balão volumétrico com solução metanólica de ácido acético a 5% (V/V). Ao mesmo tempo, 10,0 mL da fração de acetato de etila foram diluídos em balão volumétrico de 25,0 mL com solução metanólica de ácido acético a 5% (V/V), formando a solução compensação. Após 30 minutos, foi feita a leitura em espectrofotômetro (λ = 425 nm). O resultado foi calculado de

m TF . ε = (11)

onde: TF = Teor de flavonóides totais em quercetina expresso em gramas por 100 g de preparação (%, p/p); A = Absorvância da solução teste; FD = Fator de diluição (125);

ε = Absortividade específica da quercetina (500); m = massa de preparação testada (g).

Pelo método cromatográfico, o teor de própolis nas preparações foi determinado pela quantificação de seus três principais marcadores (BRUSCHI et al., 2003b). Toda a solução de análise obtida foi levada a resíduo seco em banho-maria. O resíduo foi retomado em metanol e completado volume em balão volumétrico de 10,0 mL para a obtenção da solução-mãe (SM), a qual foi submetida a análise cromatográfica como descrito no item 4.2.2.7. Os três principais picos (marcadores) foram quantificados em massa (g) de crisina em 100g de preparação.

4.2.6.9.12 Análise estatística

Os efeitos da concentração polimérica, da presença de micropartículas de própolis e da temperatura no índice de consistência, no índice de fluxo, nas propriedades viscoelásticas (G’,

G’’, η’ e tan δ) em cinco freqüências representativas (0,60; 2,55; 5,04; 7,53; 10,0 Hz) foram

estatisticamente comparados utilizando ANOVA de três vias. Similarmente, os efeitos das concentrações dos polímeros, da presença de micropartículas de própolis e da temperatura nas propriedades mecânicas de textura foram estatisticamente avaliados através de ANOVA de três vias. Além disso, os efeitos das concentrações de P407 e C934P, assim como da presença de micropartículas de própolis, na força requerida para superar a ligação adesiva formulação- mucina e no trabalho de seringueamento foram estatisticamente avaliados através de ANOVA de duas vias. Em todos os casos de ANOVA, comparações post hoc das médias dos grupos individuais foram realizadas utilizando o teste da Diferença Honestamente Significante de Tukey. Finalmente, Teste t para dados emparelhados foi utilizado para determinar se a viscosidade dinâmica das formulações foi significantemente aumentada com o aumento da temperatura (gelificação). Em todos os casos, um nível de p < 0,05 foi aceito para denotar significância (JONES, 2002) e foi utilizado o programa Statview (Abacus Concepts, EUA).

do tensoativo, o álcool cetílico etoxilado 20-OE e propoxilado 5-OP (ACEP), miristato de isopropila (MI) e água destilada (Tabela 4).

Tabela 4 - Fórmulas de sistema precursor de fase cristalina líquida com micropartículas de

gelatina contendo própolis

Fórmula Álcool cetílico etoxilado e propoxilado (%, p/p) Miristato de isopropila (%, p/p) Água destilada (%, p/p) PFCL-1 90 10 0 PFCL-2 90 5 5 PFCL-3 85 10 5 PFCL-4 85 5 10 PFCL-5 80 10 10 PFCL-6 80 15 5

Para cada uma, pesou-se o ACEP, MI e a água. A mistura foi submetida ao aquecimento, à temperatura de 50-60ºC, e agitação magnética lenta, com o objetivo de assegurar completa homogeneização do sistema. Após resfriamento e completa homogeneização, incorporou-se 6,41% (p/p) de micropartículas de gelatina contendo própolis, sob agitação magnética constante até completa homogeneização. Cada formulação foi acondicionada em frasco de vidro âmbar hermeticamente fechado.