1, 2Amanda Catariny de Oliveira Silva, 2Sonia Gumes Andrade, 1, 2 Marcos Lázaro Silva
Guerreio
1Faculdade de Tecnologia e Ciências –FTC; 2Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz –
FIOCRUZ *marlazaro10@gmail.com
Palavras-chave: T. cruzi, Reinfecções, Clones, Citocinas.
INTRODUÇÃO: Reinfecções pelo Trypanosoma cruzi em pacientes residentes de áreas endêmicas têm sido mencionadas como fator agravante das manifestações cardíacas na doença de Chagas. Achados experimentais demonstram que animais quando submetidos a infecções sucessivas apresentam reações inflamatórias mais intensas quando comparados àqueles com infecção única. O estudo imunopatológico da tríplice infecção com cepas de diferentes Biodemas demonstrou exacerbação das lesões teciduais em músculo cardíaco e esquelético provavelmente devido ao abrigo de diferentes populações (Andrade et al., 2006) Neste trabalho, foi avaliado a influência de infecções sucessivas por clones de T. cruzi de um mesmo Biodema, com diferentes graus de virulência, na expressão de citocinas pró-inflamatórias e no agravo da miocardite crônica.
MATERIAL E METODOS: Para o presente estudo foram utilizados 140 camundongos suíços não isogênicos infectados com os clones (Col-C1/Col- C5/Col-C8) sacrificados na fase aguda (140; 200; 250; 300) todos os grupos e na fase crônica da infecção (150 dias) para os grupos Col-C5 e Col-C8. O clone Col-C1 não teve a fase crônica estudada devido a mortalidade total ao 300 dia de infecção. O grupo submetido à infecção tríplice (Col5+Col8+Col1) foi avaliado entre o 1150 e o 1300 dias. O inóculo para todos os grupos experimentais (infecção única e tríplice infecção) foi de 5 x 104 formas tripomastigotas sanguícolas do T. cruzi por via intraperitoneal. Os camundongos sacrificados na fase aguda e na fase crônica, em todos os grupos foram avaliados através da coleta do soro para a dosagem dos níveis plasmáticos das citocinas IL-12, TNF-α e IFN-γ sendo quantificadas utilizando- se o sistema Cytometric Bead Array (CBA), Becton Dickinson (BD). As lesões inflamatórias e histopatológicas foram avaliadas em secções de coração processadas e coradas pela Hematoxilina e Eosina.
RESULTADOS: Os camundongos sacrificados na fase aguda nos grupos experimentais submetidos à infecção única demonstraram no geral lesões
60 inflamatórias que variaram de discretas a moderadas, com necrose de miocélulas cardíacas e infiltrados inflamatórios mononucleares e fibrose intersticial difusa e focal (Fig 1: A-B).
Os camundongos com tríplice infecção demonstraram exacerbação das lesões que variaram na maioria dos casos de moderadas a intensas no coração e no músculo esquelético, aos 250 e 300 dia após a tríplice infecção, com relação aos animais submetidos a infecção única (Fig 1: A-B) e confirmados pela análise morfométrica (Fig 2).
Os camundongos com tríplice infecção avaliados na fase crônica 175 pós primeira infecção havia miocardite crônica em todos os casos, com lesões que variaram de discretas, moderadas a intensas e fibrose intersticial difusa e focal e presença de parasitos (Fig 1: C-D).
Z
Figura 1: histopatologia da tríplice infecção e da
infecção única.
Figura 2: morfometria da tríplice
infecção e da infecção única de secções do miocárdio
Figura 3-A: cinética dos níveis plasmáticos de IL-12 em
camundongos com infecção única e tríplice.
Figura 3-B: cinética dos níveis
plasmáticos de TNF-α em camundongos com infecção única e tríplice.
61 Os níveis plasmáticos das citocinas variaram dentro dos vários grupos com picos irregulares entre o 140 dia e o 300 dia pós-infecção. Observa-se que o clone de maior virulência (C1) apresentou maiores índices plasmáticos das citocinas IL-12 e TNF-α em relação aos clones C5, C e Tríplice infecção. A citocina INF-γ apresentou altos níveis plasmáticos logo no início da infecção com posterior redução ao longo da infecção.
DISCUSSÃO: A análise histológica e quantitativa dos infiltrados inflamatórios (miocárdio demonstrou diferença significativa nos animais submetidos à tríplice infecção quando comparados com os animais submetidos à infecção única dados de acordo com Andrade et al., (2005). Os resultados confirmaram que os animais submetidos a múltiplas infecções apresentam exacerbação das lesões inflamatórias, porém com baixos índices das citocinas pró-inflamatórias na tríplice infecção quando comparados aqueles com infecção única. Os menores índices das citocinas, devem ser atribuídos aos mecanismos imunoregulatórios regulados por IL-10 secretados por células T regulatórias como um mecanismo de autodefesa (Filardy et al., 2010).
CONCLUSÕES: As reinfecções com o T. cruzi é um fator agravante para a evolução da miocardiopatia chagásica no modelo murino da doença de Chagas. Os baixos índices das citocinas inflamatórias encontradas estão provavelmente modulados por mecanismos imunoregulatórios.
REFERÊNCIAS
ANDRADE, S.G.; CAMPOS, R.F.; SOBRAL, K.S.C.; MAGALHÂES, J.B.; GUEDES, R.S.P.; GUERREIRO, M.L. Reinfections with different strain of Trypanosoma cruzi, as a factor of aggravation of myocarditis and myositis in mice. Rev. Soc. Bras. Med. Trop., v. 39, n. 1, p. 1-8, 2006.
FILARDY A,A.; PIRES, D,R.; NUNES M,P.; TAKIYA C,M.; FREIRE-DE-LIMA C, G.; RIBEIRO-GOMES F, L.; DOSREIS G, A. Proinflammatory clearance of apoptotic neutrophils induces an IL-12low IL-10high regulatory phenotype in macrophages. J. Immunol. v. 4 185, p. 2044-2050, 2010.
62 16. Isolamento e caracterização de microrganismos fermentadores de
glicerol em anaerobiose, e caracterização dos subprodutos gerados César Rodrigo Santos Dourado (Bolsista PIBIC/CNPq)*¹, Amaro Emiliano Trindade
Silva¹.
*¹ Núcleo de Bioenergia, Graduando do 9º semestre de Farmácia, Faculdade de Tecnologia e Ciências, FTC. Avenida Luís Viana Filho, 8812, Módulo I, Nível V, Paralela. CEP 41.741-590, Salvador (BA). Email:
douradinho_digo@hotmail.com
Introdução
O glicerol é o principal subproduto na produção do biodiesel. Apesar do fato de que o glicerol puro tem inúmeras aplicações industriais, o glicerol bruto gerado na produção de biodiesel excede a atual demanda de glicerol purificado (SILES LÓPEZ et al., 2009). Além disso, a purificação do glicerol para fins comerciais, exige um processo complexo, cujos custos não são viáveis para a indústria do biodiesel (CHI et al., 2007). Sendo assim, embora seja possível a queima do excedente de glicerol bruto para obtenção de energia, a criação de biorefinarias para conversão microbiana do glicerol em produtos de maior valor econômico, é uma solução economicamente mais viável (SILES LÓPEZ et al., 2009).
Dentre os produtos de maior valor agregado oriundos da fermentação microbiana do glicerol está o 1,3 propanodiol (PDO), composto intermediário para a síntese de poliésteres, poliuretanos e polipropileno tereftalato, cujo campo de aplicação envolve diversos setores industriais (RIVALDI et al., 2007).
Objetivo
O objetivo do presente trabalho é caracterizar a versatilidade taxonômica de microrganismos cultiváveis da Chapada Diamantina par fermentar o glicerol em 1,3 PDO.
Resultados e Discussões
Isolamento e rastreamento dos isolados bacterianos para produção de 1,3 propanodiol - Foram obtidos 22 isolados microbianos, sendo 16 isolados de amostras do solo e 6 dos filtrados das águas do rio Paraguaçu. Dentre os morfotipos obtidos,12 linhagens tiveram o 16S rRNA sequenciado , sendo identificados como linhagens de cinco diferentes gêneros bacterianos: Klebsiella (n=2), Enterobacter (n=4), Pseudomonas (n=2), Burkholderia (n=1) e Serratia (n=3). Verificou-se que a linhagem FTC1302 (Klebsiella oxytoca) foi capaze de consumir completamente o glicerol no prazo de 24 horas em anaerobiose (30°C), com
63 concomitantemente produção de um composto com pico na corrida de HPLC em tempo respectivo a saída de 1,3 propanodiol (Figura 1).
Figura 1 - HPLC de culturas da linhagem FTC1302.
Caracterização do crescimento de Rhodococcus sp. – Verificou-se melhores taxas de crescimento de Rhodococcus sp. no meio com glicerina loira como fonte de carbono, a partir de 2 horas de cultivo, chegando-se a uma densidade celular final aproximadamente 2.3 X maior do que o obtido em meio com glicerol PA como fonte de carbono (dados não mostrados) Posteriormente, variando-se o pH do meio, verificou-se maiores crescimento de Rhodococcus sp em meio com o pH 8,0, atingindo-se a densidade ótica média de 3.29 no ponto de 29 hs (Figura 2).
Figura 2 – Curva de crescimento Rhodococcus sp em 1% Glicerina PA, sob diferentes
variações de pH (pH 7, 0 em azul, pH 8, quadrados vermelhos e pH 9.0, triângulos verdes, respectivamente). Cultivo em ar mantidas em anerobiose a 30ºC
64 Conclusão:
Como futuras propostas, estão a implementação de cultivos da linhagem de Rhodococus sp. e de linhagens isoladas da Chapada da Diamantina (a serem escolhidas) em maior escala, utilizando um biorreator e avaliando-se variáveis como pH, temperatura e a concentração dos produtos inicial e final.
Referências
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65 17. MICROBIOTA DOS ALIMENTOS COMERCIALIZADOS EM BARRACAS