105 VARIABILIDADE GENÉTICA E FENOTÍPICA DE LINHAGENS MONOSPÓRICAS DE Metarhizium anisopliae (Genetic and phenotypic variability of Metarhizium

anisopliae monosporic strains)

Gavião, C.F.C.1, Inglis, P.W.2, Martins, I.3, Valadares-Inglis, M.C.4

O fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae apresenta eficiência no controle de inúmeros insetos pragas de importância agrícola. O desenvolvimento de produtos e o sucesso no uso de fungos em campo dependem de uma formulação apropriada, que garanta a estabilidade e viabilidade do produto durante o processo de produção e estocagem. Transferências seriadas de fungos in vitro podem gerar instabilidade genética observada pela formação de setores, redução na esporulação e variação na morfologia e pigmentação. Degeneração fenotípica, via formação de setores, em linhagens do fungo M. anisopliae, é frequentemente acompanhada por mudanças na produção de metabólitos secundários e enzimas. A compreensão dos mecanismos relacionados a estabilidade genética de fungos, agentes de biocontrole, são essenciais para o desenvolvimento de produtos estáveis para uso em campo. Colônias monospóricas das linhagens CG34, que apresenta monomorfismo na região subtelomérica e CG100, que apresenta polimorfismo, foram produzidas a partir de isolados mantidos em nitrogênio líquido, liofilizados e re-isolados do inseto

Callosobruchus maculatos. Dez colônias de cada linhagem, nas diferentes condições

de tratamento, foram inoculadas em meio líquido para produção de micélio, o qual foi utilizado para extração de DNA genômico. Southern blots foram preparados por digestão do DNA com as enzimas EcoRI, PstI, HindIII e BamHI, e hibridizados com sonda telomérica. Observou-se variabilidade na região subtelomérica das linhagens obtidas dos mesmos isolados, mantidos na mesma condição de armazenamento, mostrando a existência de variações na região associada a telômeros, na linhagem CG34. A linhagem CG100 apresentou maior homogeneidade entre as colônias monospóricas o que sugere a existência de mecanismos específicos relacionados à estabilidade de linhagens. Observaram-se também variações morfológicas entre as colônias monospóricas obtidas a partir dos isolados, no entanto o nível de setorização das colônias foi pequeno, comparado com outros fungos.

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Biologia, graduanda, Centro Universitário de Brasília-UniCEUB 2

Biólogo, Ph.D., Pesquisador Visitante, CNPq 3

Bióloga, Técnica Nível Superior,Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia 4

106 - VARIABILIDADE SUB-TELOMÉRICA DE LINHAGENS DE Dicyma sp. E Alternaria sp. (Sub-telomeric variability among strains of Dicyma sp. and Alternaria sp.)

Jerônimo, M.A.G.1, Gavião, C.F.C.2, Inglis, P.W.3, Mello, S.C.M.4, Valadares-Inglis, M.C.5

O fungo Dicyma sp. tem se mostrado promissor no controle do mal-das-folhas, que é a principal doença da seringueira no Brasil. Vários estudos têm mostrado o elevado potencial de uso desse micoparasita em condições de campo. Já o fungo

Alternaria sp. vem sendo utilizado no controle de Senna obtusifolia L., que é uma das

principais plantas daninhas infestantes dos cultivos de soja. Linhagens de Dicyma sp. e Alternaria sp. pertencentes à coleção da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia foram analisadas quanto à variabilidade genética, utilizando-se DNA fingerprinting com sonda telomérica. Sessenta e uma linhagens de Dicyma sp. e 28 linhagens de Alternaria sp. foram cultivadas em meio líquido para produção de micélio e utilizados para extração de DNA. Southern blot das amostras foram preparados após digestão dos DNAs com as enzimas HindIII, EcoRI e PstI. Utilizou-se sonda telomérica preparadas a partir de PCR com primers específicos, marcada com 32

aPdCTP. Os resultados mostraram intensa variabilidade entre as linhagens de Dicyma, ao contrário de publicações anteriores, que mostraram grande similaridade entre as linhagens, utilizando-se RAPD. No que se refere a Alternaria sp., observou-se baixa variabilidade entre as linhagens. Monomorfismo na região subtelomérica foi observado em algumas linhagens de Dicyma e Alternaria, sugerindo duplicações nestas regiões, semelhantemente ao descrito anteriormente para Metarhizium sp. Utilizando-se sonda telomérica, foi possível observar a variação no número de cromossomos de cada linhagem dos fungos utilizados neste estudo.

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Eng. Biotecnológica, graduanda, Universidade Politécnica de Bragança, Portugal 2

Biologia, graduanda, Centro Universitário de Brasília-UniCEUB 3

Biólogo, Ph.D., Pesquisador Visitante, CNPq 4

Eng. Agr., Ph.D., Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia 5

107 - VARREDURA DAS ESTIRPES DE Bacillusthuringiensis EFETIVAS PARA O CONTROLE DE Spodoptera frugiperda E Anticarsia gemmatalis (Screening of Bacillus thuringiensis toxic against Anticarsia gemmatalis and Spodoptera frugiperda)

Batista, A.C.1, Silva, C.R.M.2, Demo, C.3, Praça, L.B.4,Monnerat, R.G.5

A utilização de agentes de controle biológico é uma alternativa viável, e bioinseticidas formulados à base de Bacillus thuringiensis vêm apresentando resultados satisfatórios no controle de lepidópteros. Uma das vantagens do emprego desta bactéria é a sua ação restrita a insetos-alvo, não afetando o ser humano e não danificando o meio ambiente. A Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia conta com um Banco de Germoplasma de Bacilos Entomopatogênicos onde estão armazenadas 1375 estirpes de B. thuringiensis oriundas de diferentes regiões do Brasil. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia destas estirpes, através de testes de patogenicidade, contra Anticarsia gemmatalis (Lep.: Noctuidae) e Spodoptera frugiperda (Lep.: Noctuidae) através de bioensaios, caracterização bioquímica, molecular e microscopia eletrônica de varredura. 1375 estirpes foram testadas em bioensaios seletivos, 31 estirpes causaram 100% de mortalidade e foram submetidas a bioensaios de dose para determinação da CL

50. Das que passaram por bioensaios de dose, cinco estirpes apresentaram CL

50 inferior ao padrão (Btk) contra A. gemmatalis e três estirpes contra S. frugiperda. As estirpes S845 e a S1905 foram as mais eficazes aos dois insetos, apresentando maior toxicidade que o padrão Btk. Em relação à caracterização molecular, nota-se ubiqüidade dos grupos de genes cry1 e cry2 e presença de grande variedade de subgrupos cry1, naturalmente esperados em estirpes efetivas contra lepidópteros. A estirpe 1905 apresenta perfil genético e bioquímico idêntico ao da linhagem padrão B. thuringiensis subsp. kurstaki (Btk). Já a estirpe 845, o perfil protéico é composto por apenas uma banda de 130 kDa e seu material genético apresenta apenas três genes para proteínas Cry. As estirpes estudadas mostraram, por meio da microscopia eletrônica de varredura, que ambas possuem cristais bipiramidais, cubóides e esféricos. Através de testes realizados, pode-se afirmar o alto potencial patogênico destas estirpes, sendo alternativas viáveis para a nova formatação de um produto biológico à base de B. thuringiensis.

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Bióloga, mestranda, Universidade de Brasília-UnB 2

Biologia, graduanda, Universidade de Brasília-UnB 3

Bióloga, mestranda, Universidade de Brasília-UnB 4

Eng. Agr., M.Sc., Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia 5