Associação de
Vibrio cholerae
com o zooplâncton de águas estuárias
da Baía de São Marcos/São Luis – MA, Brasil
Association between
Vibrio cho le ra e
and zooplankton of estuaries
of São Marcos Bay/São Luis – MA, Brazil
Eloisa da Graça do Rosario Gonçalves
1, Maria José Saraiva Lopes
2,
Eurípedes Gomes de Oliveira
1e Ernesto Hofer
3RESUMO
Fo i inve stiga do , no pe río do de o utub ro de 1997 a o utub ro de 1998, a po ssíve l a sso cia çã o de Vibrio c holerae co m o zo o plâ ncto n do s e stuá rio s do s rio s Anil e Ba ca nga , e m Sã o Luis – MA, Bra sil, a pre se nça da fo rm a viá ve l, m a s nã o cultivá ve l de Vibrio
c holerae O1 e a co rre la çã o e ntre pH, sa linida de e te m pe ra tura da á gua co m a so b re vivê ncia da b a cté ria . Am o stra s de zo o plâ ncto n
fo ra m co le ta da s e m do is po nto s fixo s e m ca da e stuá rio . O m é to do clá ssico de iso la m e nto e im uno fluo re scê ncia dire ta fo ra m e m pre ga do s na de te cçã o da b a cté ria . Na s 52 a m o stra s o b tida s de zo o plâ ncto n ho uve pre do m ínio de Co pe po de s. O cultivo pe rm itiu a o b te nçã o de 55 iso la do s de Vibrio c holerae nã o O1. Os so ro grupo s O1 e O139 fo ra m de m o nstra do s, re spe ctiva m e nte e m 37 ( 71,1%) e 17 ( 32,7%) na im uno fluo re scê ncia . Fo rm a s viá ve is, m a s nã o cultivá ve is de Vibrio c holerae O1 fo ra m de te cta da s e m 70,8% da s a m o stra s e studa da s. Co rre la çã o significa tiva fo i co nsta ta da e ntre sa linida de e pH da á gua e iso la m e nto de
Vibrio c holerae.
Palavras-chave s: Vibrio c holerae. Eco lo gia . Zo o plâ ncto n. Ba ía de Sã o Ma rco s.
ABSTRACT
This study wa s ca rrie d fro m Octo b e r 1997 to Octo b e r 1998 with the purpo se o f inve stiga ting the link b e twe e n the spe cie s Vibrio
c holerae a nd zo o pla nk to n in the e stua rie s o f rive rs Anil a nd Ba ca nga in Sã o Luis, Ma ra nhã o . Re se a rch o f via b le b ut no n
cultura b le fo rm s o f Vibrio c holerae O1, a nd a na lyze the co rre la tio n b e twe e n pH va lue s, sa linity a nd wa te r te m pe ra ture with the pre se nce o f b a cte ria in zo o pla nk to n sa m ple s. The tra ditio na l m e tho d o f cultiva tio n a nd fluo re sce nt a ntib o dy te chniq ue we re a pplie d to de te ct the b a cte ria . A to ta l o f 52 sa m ple s o f zo o pla nk to n we re co lle cte d. The re wa s a pre do m ina nce o f Co pe po da . The culture e na b le d 55 iso la te s o f Vibrio c holerae no n- O1. The se ro gro ups O1 a nd O139 we re ide ntifie d in 37 ( 71.1%) a nd 17 ( 32.7%) sa m ple s re spe ctive ly b y the fluo re sce nce . Via b le b ut no n cultura b le fo rm s o f Vibrio c holerae we re de te cte d in 70.8% o f the sa m ple s studie d. A significa nt co rre la tio n wa s e sta b lishe d b e twe e n sa linity a nd the wa te r’s pH va lue a nd Vibrio c holerae.
Ke y-words: Vibrio c holerae. Eco lo gy. Zo o pla nk to n. Sã o Ma rco s Ba y.
1 . De par tame nto de Pato lo gia da Unive r sidade Fe de r al do Mar anhão , São Luis, MA. 2 . De par tame nto de Oc e ano gr afia da Unive r sidade Fe de r al do Mar anhão , São Luis, MA. 3 . Lab o r ató r io de Zo o no se s B ac te r ianas da Fundaç ão Instituto Oswaldo Cr uz, Rio de j ane ir o , RJ .
Apo io financ e ir o : CAPES
En de r e ço par a cor r e spon dê n ci a: Dr a. Elo isa da Gr aç a do Ro sar io Go nç alve s. De pto
de Pato lo gia/UFMA. Pr aç a Madr e De us 2 , Té r r e o , B air r o Madr e De us, 6 5 0 2 5 - 5 6 0 São Luis, MA.
Te l: 5 5 9 8 2 2 1 -0 2 7 0
e - mail: r e gio nalsb mt@ e lo . c o m. b r Re c e b ido par a pub lic aç ão e m 1 6 /1 0 /2 0 0 3 Ac e ito e m 1 9 /0 5 /2 0 0 4
O padr ão e pide m io ló gic o da c ó le r a te m passado po r
mudanç as signific ativas nas últimas déc adas em dec orrênc ia do
proc esso de endemizaç ão, em que exac erbaç ões da doenç a são interc aladas po r perío do s silenc io so s, seguindo um padrão
sazonal2 5. Vários mec anismos foram propostos para explic ar a
sobrevivênc ia do bac ilo nos períodos interepidêmic os, sendo as
evidências epidemiológicas e laboratoriais mais consistentes com a
existência de reservatórios ambientais. Esta hipótese fora defendida
por Robert Koch, em 1884, após isolar o vibrião de água de um
tanque em Calcutá20. Minuciosos trabalhos de revisão registram estudos
em vários países nas primeiras décadas do século XX, demonstrando
No Brasil, foram isolados Vibrio cho lera e O1 e não-O1 em
afluentes de estações de tratamento de esgotos, na década de 70 e
início dos anos 8 01 4 2 3. Peixes, ostras, camarões e caranguejos
constituem fontes de infecção, sendo identificados como causa de
epidemias ou casos isolados de cólera nos Estados Unidos, Itália,
Portugal e Austrália, entre outros países9. Estudos revelam, ainda, a
associação de V. cholerae O1 com plantas aquáticas e fitoplâncton17 18.
Copépodes marinhos albergam uma flora bacteriana composta
por membros da família Vibrionaceae3 2, o que foi confirmado por
microscopia eletrônica1 5. A interação com o zooplâncton parece
ser decisiva na sobrevivência ambiental do V. cho le ra e, conforme
tem sido observado em microecossistemas experimentais21 5 1 6.
Fatores ambientais, destacando-se pH, temperatura, salinidade
e concentração de nutrientes exercem importante influência nessa
interação, sendo o V. cho le ra e mais ativo em condições que se
aproximam das c arac terístic as naturais dos estuários1 6 2 4 2 8 3 1.
Nessas c ondiç ões, c ontudo, o c ultivo de V. cho le ra e O1 pelo
método classicamente utilizado, ao contrário de V. cho le ra e não
O1 , é bastante difícil nos períodos interepidêmicos.
O e m pr e go da im un o fluo r e s c ê n c ia in dir e ta pa r a a
demonstração da bactéria em amostras de água e, posteriormente,
a associação com a contagem direta de células viáveis, permitiram
a detecção de formas viáveis, mas não cultiváveis do vibrião colérico
em ambientes aquátic os8 3 3. Antic orpos monoc lonais c ontra a
fração “A” do antígeno somático do V. cho le ra e O1 , assim como
c o ntr a o deter minante antigênic o do lipo po lissac ar ídeo do
sorogrupo O1 3 9 , aliados à técnica direta de coloração, elevaram
a sensibilidade, especificidade e valor preditivo positivo e negativo
do método a 1 0 0 %, quando testado no campo1 1 1 2.
O Estado do Maranhão foi atingido pela epidemia de c ólera
que o c o rreu no c o ntinente sulameric ano a partir de 1 9 9 1 ,
havendo registro da doenç a na c apital, São Luis, de 1 9 9 2 a 1 9 9 5 .
O munic ípio lo c aliza-se às mar ge ns da B aía de São Mar c o s,
o nde daságuam as vár ias b ac ias hidr o gr áfic as do e stado1 0.
Co m nasc e nte no inte r io r da Ilha de São Luis, de stac am-se
o s r io s B ac anga e Anil ( e xte nsão de 9 . 5 0 0 m e 1 3 . 8 0 0 m,
respec tivamente) , os quais perc orrem áreas urbanas e c om os
quais as populaç ões ribeirinhas mantêm estreita relaç ão. O
desenvolvimento deste trabalho levou em c onta estes dados,
tendo o objetivo de investigar a presenç a de V. c ho le ra e em
assoc iaç ão c om a ric a fauna zooplanc tônic a da região.
MATERIAL E MÉTODOS
A área de estudo c ompreende os estuários dos rios Anil e
Bac anga que perc orrem a Ilha de São Luis e deságuam na Baía
de São Marc os, tendo sido definidas 2 estaç ões de amostragem
( 1 e 2 ) , em cada estuário. O estuário do rio Anil recebe influência
direta de águas marinhas c osteiras, enquanto o estuário do rio
B ac anga enc ontra-se limitado, em parte, por uma barragem
artificial e por comportas que são abertas a intervalos trimestrais.
As c oletas de zooplânc ton foram feitas em intervalos mensais,
de outubro de 1 9 9 7 a outubro de 1 9 9 8 , empregando-se rede de
plânc ton, c onfec c ionada c om malha de 6 5 mm de abertura, em
arrastos horizontais, subsuperficiais, durante 5 minutos. O material foi dividido em 2 partes: uma para o estudo bacteriológico, mantido
em frascos estéreis, à temperatura ambiente; outra, em frascos contendo solução de formaldeído a 4 %, neutralizado com borato de sódio, destinada à identificação do zooplâncton. Medidas de pH,
temperatura e salinidade da água foram tomadas in loco,
utilizando-se salinometer/termômetro Beckman e pHmeter Hanna HI 9 0 2 5 C.
A identific aç ão dos organismos zooplanc tônic os foi feita
seguindo c ritérios morfológic os c lássic os estabelec idos3 4 5 3 0.
O material destinado ao cultivo bacteriano foi centrifugado a
3.000rpm, durante 10 minutos, sendo feitas lavagens do sedimento por 3 vezes com água destilada. Tanto o sedimento final, quanto o sobrenadante foram semeados em 10ml de água peptonada contendo
1% de NaCl. Após incubação a 37oC por 6 horas, o crescimento foi
semeado em Agar-TCBS. De 3 a 5 colônias ( sacarose positivas e
negativas) foram submetidas a estudo bioquímico. Todas as amostras não halofílic as, c ompatíveis bioquimic amente c om a espéc ie
V. c ho le ra e foram submetidas à soroaglutinaç ão, empregando-se antíge no s so mátic o s do s so r o gr upo s O1 e O1 3 9 e do s
sorotipos Inaba e Ogawa, produzidos no Laboratório Nac ional de Referênc ia de Cólera, IOC/FIOCRUZ, Rio de Janeiro.
Par a a r e alizaç ão da imuno fluo r e sc ê nc ia dir e ta fo r am empregados anticorpos monoclonais contra os sorogrupos O1 e
O1 3 9 ( New Horizons Diagnostics Corp. Columbia, MD) , marcados com fluoresceína, sob forma liofilizada e reconstituída com 1 ml
de água de stilada ante s do uso . Amo str as de zo o plânc to n conservadas em formalina foram centrifugadas,
confeccionado-se esfregaços com o confeccionado-sedimento, em lâminas de vidro com poços circulares. Controles positivos e negativos foram incluídos em todos
os testes. Cada poço foi coberto com 1 0 ml do anticorpo, sendo as
lâminas inc ubadas em c âmara úmida, à temperatura de 3 7oC,
durante 3 0 minutos e, em seguida, lavadas com salina tamponada,
em dois ciclos de 1 0 minutos. A leitura foi feita em microscópio de fluorescência, com comprimento de onda BP 4 5 0 -4 9 0 mm e
lâmpada HBO 5 0 , em aumento de 4 0 0 vezes.
Vinte e quatro amostras de zooplâncton recém coletadas e não
fixadas com formalina, recolhidas no período de maio a outubro de 1 9 9 8 foram utilizadas para a pesquisa das formas viáveis, mas não
cultiváveis, conforme técnica descrita por Brayton e cols6.
RESULTADOS
Foram obtidas 5 2 amostras de zooplânc ton, identific
ando-se grande variedade de organismos. A distribuiç ão nos diferentes
meses de coleta revela o predomínio de Copepoda ( concentração superior a 5 0 % em relaç ão aos outros grupos) em 9 8 ,1 % das
amostras provenientes do Rio Anil e em 8 6 ,5 % das amostras do
Rio Bacanga. As Figuras 1 e 2 mostram a variedade de organismos
identific ados nos estuários.
Não houve isolamento de V. cho le ra e O1 e O1 3 9 no c ultivo
em TCB S. O método permitiu, no entanto, a obtenç ão de 5 5
isolados de V. cho le ra e não O1 a partir de 1 4 amostras c oletadas
de dezembro de 1 9 9 7 a setembro de 1 9 9 8 . Foram identific ados
os tipos bioquímic os I, II e III de Heiberg1 3, havendo predomínio
do tipo II ( Tabela 1 ) .
HOLOPLÂNCTON Tintinnida
Copeepoda ( Calanoida) Fa vella ehrenbergi Claparide y
Euca la nus pile a tus Giesbrecht, 1 8 8 8 Lichman Jorgensen, 1 9 2 4
Aca rtia lilljebo rgi Giesbrecht, 1 8 9 2 Tintinno psis sp Centro pa ges velifica tus Dana, 1 8 4 9 Decapoda
Centro pa ges bra chia tus Dana, 1 8 4 9 Lucifer faxoni Borradaille, 1915
La bido cera fluvia tilis F. Dahl, 1 8 9 4
Pa ra ca la nus cra ssiro stris F. Dahl, 1 8 9 4 Ostrocoda
Pa ra ca la nus a culea tus Giesbrecht, 1 8 8 8 Hydromedusae
Pse udo dia pto m us a cutus F. Dahl, 1 8 9 4
Tem o ra turbina ta Wright, 1 8 3 6 Rotifera
Tem o ra stylifera Dana, 1 8 4 8 Bra chio nus plica tilis Po ntelo psis vilo sa e Brady, 1 8 8 3 O F Muller, 1 7 8 6
Po ntelo psis sp Nematoda
Euca la nus sewelli Dana, 1 8 4 9 Isopoda
Ca la no pia a m e rica na F. Dahl, 1 8 9 4 Amphipoda
Po nte lina plum a ta L. Oliveira, 1 9 4 7
Cla uso ca la nus furca tus Brady, 1 8 8 3 Chaetognatha
Sa gitta sp
Copepoda ( Cyclopoida) Sa gitta e nfla ta
Oitho na hebes Giesbrecht, 1 8 9 1
Oitho na o swa ldo cruzi L. Oliveira, 1 9 4 7 Appendicularia
Oitho na na na Giesbrecht, 1 8 9 2 Oik o ple ura dio ica Oitho na sim ple x Claus, 1 8 6 3
Hem icyclo ps tha la ssius Vervoort y Ramires, 1 9 6 6 MEROPLANCTON
Meso cyclo ps sp Gasrropoda ( larva)
Cyclo ps sp Bivalvia ( veliger)
Term o cyclo ps sp Polychaeta ( trocofora)
Apo cyclo ps pa na m ensis Marsh, 1 9 8 2 Brachyura ( zocas)
Co ryca eus giesbrechti F. Dahl, 1 8 9 4 Cirripedia ( cypris e nauplii)
Onca ea m edia Giesbrecht, 1 8 9 1 Copepoda ( nauplii)
Onca ea sp Porcelanidae ( larva) Pennacidae ( larva)
Copepoda Harpaticoida Echinodermata ( larva)
Euterpina a cutifro ns Dana, 1 8 9 2 Insecta ( larva)
Atheylla sp Pisces ( ovos)
Erga silus sp
Ha rpa tico ides sp
Ta bela 1 - Distribuiçã o de Vibrio cholerae em a sso cia çã o co m o zo o plâ ncto n do s estuá rio s do s rio s Anil e Ba ca nga – Sã o Luis / MA ( o utubro de 1997 a o utubro de 1998) .
Vibrio cho lera e não O1 /não O1 3 9 Vibrio cho lera e O1 * * Vibrio cho lera e O1 3 9 * * Bacanga Anil Bacanga Anil Bacanga Anil
Ano/mês 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2
1 9 9 7
out - - - + + - - - -
-nov - - -
-dez 1 ( II) - - 4 ( I; III) + + - - + + - -1 9 9 8
jan 5 ( II) - - - + + + + - - - +
fev 3 ( I; II) 2 ( II) - - + + - - - + -
-mar 5 ( II) 6 ( I; II) - 3 ( II) + - + + - - - -abr 8 ( I; II) 1 1 ( I; II) - - - + + + + + + +
mai 2 ( I; II) 1 ( II) - - - + + + - - +
-jun - 2 ( I; II) - - + + + + + - - +
jul - - - - + + + + - - -
-ago - - - - + + + + - - + +
set 2 ( I;II) - - - + + + + + - + +
out - - - + + - -
-1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 8 , -1 -1 número de isolados em cada amostra; I; II; III grupos bioquímicos de Heiberg; + presença da bactéria; - ausência da bactéria ; * processo clássico de isolamento; * * imunofluorescência direta
HOLOPLÂNCTON Tintinnida
Copeepoda ( Calanoida) Fa vella ehrenbergi Claparide y
Euca la nus pile a tus Giesbrecht, 1 8 8 8 Lichman Jorgensen, 1 9 2 4
Aca rtia lilljebo rgi Giesbrecht, 1 8 9 2 Tintinno psis sp Centro pa ges velifica tus Dana, 1 8 4 9 Am pho re lo psis sp Euca la nus pile a tus Giesbrecht, 1 8 8 2 Co ndo nello psis sp Pa ra ca la nus cra ssiro stris F. Dahl, 1 8 9 4
Pse udo dia pto m us a cutus F. Dahl, 1 8 9 4 Cladocera
Tem o ra stylifera Dana, 1 8 4 8 Diaphanossoma brachyurum Lievin, 1848
Euca la nus sewelli Dana, 1 8 4 9 Bosm onopsis deitersa Richardi, 1895 Alo na sp
Copepoda ( Cyclopoida) Chaetognatha
Oitho na hebes Giesbrecht, 1 8 9 1 Sa gitta sp Oitho na o swa ldo cruzi L. Oliveira, 1 9 4 7
Hem icyclo ps tha la ssius Appendicularia
Vervoort y Ramires, 1 9 6 6 Oik o ple ura sp Ca ligus elo nga tus Nordman, 1 9 4 3
Hem icyclo ps tha la ssius Hydromedusae
Vervoort y Ramires, 1 9 6 6 Nematoda
Meso cyclo ps sp Isopoda
Cyclo ps sp Amphipoda
Eucyclo ps sp Ostrocoda
Apo cyclo ps pa na m ensis Marsh, 1 9 8 2
MEROPLANCTON Copepoda Harpaticoida Gasrropoda ( larva)
Euterpina a cutifro ns Dana, 1 8 9 2 Bivalvia ( veliger)
Atheylla sp Polychaeta ( trocofora)
Erga silus sp Brachyura ( zocas)
Ha rpa tico ides sp Cirripedia ( cypris e nauplii) Copepoda ( nauplii)
Rotifera Porcelanidae ( larva)
Bra chio nus plica tilis O F Muller, 1 7 8 6 Pisces ( ovos e larvas)
Bra chio nus a ngula ris Gosse, 1 8 5 1
Bra chio nus rubens Ehrenberg, 1 8 3 8
Bra chio nus qua dride nta tus Hermann, 1 7 6 6
Bra chio nus ca lciflo rus Pallas, 1 7 6 6
Asco m o rpha sp
Asplarichna sp
Figura 1 - Zo o plâ ncto n enco ntra do no estuá rio do Rio Anil / Sã o Luis – MA ( o utubro de 1997 a o utubro de 1998)
Vibrio cho lera e O1 foi demonstrado, pela imunofluorescência direta, em 3 7 ( 7 1 ,1 % ) amostras de zooplânc ton, enquanto o
V. c ho le ra e O1 3 9 , em 1 7 ( 3 2 ,7 % ) . Em 1 2 amo stras fo ram evidenciados os dois sorogrupos ( Tabela 1 ) .
Formas viáveis, mas não cultiváveis estavam presentes em 1 7
( 7 0 ,8 %) das 2 4 amostras estudadas. No material corado havia tanto
organismos inteiros quanto fragmentos, tendo-se c onstatado a associação bacteriana com os dois tipos de estrutura ( Figura 3 ) .
positivas, enquanto todas as amostras do sorogrupo O1 3 9 foram
coletadas na mesma faixa de temperatura.
DISCUSSÃO
O estudo da interaç ão de V. c ho le ra e c o m zo o plânc to n
apresenta dific uldades espec ífic as quando realizado in situ, em
decorrência da multiplicidade de fatores envolvidos no fenômeno
e das freqüentes mudanças das condições ambientais em estuários. No pr e s e n te e s tudo , dua s s itua ç õ e s dis tin ta s po de m s e r identificadas, levando-se em conta que os sorogrupos não O1 foram
estudados no estado cultivável, enquanto os sorogrupos O1 e O1 3 9 , no estado viável, mas não cultivável, características fisiológicas
essencialmente distintas, sendo o estado não cultivável considerado forma de resistência, capaz de sobreviver em condições ambientais
adversas por períodos prolongados7.
O c onjunto do zooplânc ton c oletado demonstra a grande
diversidade de grupos, compatível com a riqueza e dinâmica próprias do ambiente estuarino. A determinação do percentual de cada grupo dentro da comunidade zooplanctônica demonstrou clara
predominância da classe Copepoda em 98,1 % das amostras coletadas no estuário do Rio Anil e em 86,5% das amostras do Rio Bacanga, dados semelhantes aos encontrados anteriormente nos mesmos
ambientes21.
Houve maior variedade de espécies entre os copépodes no Rio Anil, observando-se a presença de quetognatos em moderada concentração no período de janeiro a junho de 1 9 9 8 . No Rio Bacanga chamou a atenção a maior variedade de Rotifera e a
presença de Cladocera, grupos que são mais bem adaptados a
ambientes aquáticos com baixa salinidade2 7. Registramos que as
águas do Rio Bacanga são represadas por uma barragem, sofrendo menor influência das marés, o que poderia estar influenciando o padrão de distribuição zooplanctônica nesse estuário.
A ausênc ia de detec ç ão do sorogrupo O1 de V. c ho le ra e
pe lo método c lássic o de c ultivo está de ac ordo c om outros
pesquisadores71 5 2 3. A hipótese de que a concentração de bactérias
diminui no ambiente a ponto de não permitir o crescimento nos meios de cultura parece não se justificar, a partir da constatação de formas viáveis, mas não cultiváveis em associação com a flora
e fauna aquáticas8 1 5. Estudos demonstram que cada copépode
pode ser colonizado por até 1 04 bactérias, o que seria suficiente
para produzir infecção em pessoas com acloridria. Durante o
b lo o m de zooplâncton a proliferação de bactérias se acentua,
tornando este risco ainda maior7.
Os meio s de enr iquec imento e seletivo s r o tineir amnete
empregados no estudo de amostras ambientais foram desenvolvidos para material clínico, de modo que as alterações metabó lic as
Fi gu r a 3 - Im u n o f lu o r e s c ê n c i a d i r e ta : Vib r io c h o le r a e O1 e m a sso c i a ç ã o c o m o rga n i sm o zo o p la n c tô n i c o .
A salinidade da água manteve média de 24,5 partes por mil na
estação 1 e de 22,4 partes por mil na estação 2 do rio Bacanga. O nível mais elevado foi registrado nos meses de dezembro de 1997 e
janeiro de 1998. A partir de fevereiro, houve redução chegando a
1 1 ,5 e 1 2 ,7 partes/mil, no mês de abril, nas estaç ões 1 e 2 ,
respectivamente.
No rio Anil os níveis mantiveram-se ac ima de 3 0 partes por
mil, exc eto nos meses de setembro e outubro de 1 9 9 8 , quando foram registrados os valores de 2 3 ,2 e 2 9 ,7 .
A temperatura da água manteve-se entre 2 8 ,1 e 3 1 ,3OC no
estuário do Rio Bac anga e entre 2 7 ,2 e 2 9 ,8OC, no Rio Anil. Em
ambas as áreas notou-se elevaç ão de 2 graus durante o período c huvoso.
Com relação ao pH, houve variação de 6 ,5 a 9 ,8 no estuário do rio Bacanga e de 6 ,2 a 9 ,0 no estuário do rio Anil. Níveis superiores
a 9 ,0 foram registrados nos meses de maio, junho e julho nas duas estações de amostragem do Rio Bacanga, enquanto no rio Anil verificou-se pH de 9 ,0 no mês de julho, em ambas as estações.
Co efic iente de c o rrelaç ão linear ( r) fo i c alc ulado entre variações dos fatores ambientais abióticos e número de de amostras
positivas para V. cho le ra e ( Tabela 2 ) . Não foi possível o cálculo
do coeficiente em relação ao V. cho le ra e nã o O1, isolado das
amostras do rio Anil, uma vez que apenas duas amostras foram
Ta bela 2 - Co eficientes de co rrela çã o linea r ( r) entre va ria çã o de pH, sa linida de e tem pera tura e núm ero de a m o stra s po sitiva s pa ra V. cholerae – Sã o Luis/MA ( o utubro de 1997 a o utubro de 1998) .
Parâmetro Vibrio cho lera e não O1 /não O1 3 9 * Vibrio cho lera e O1 * * Vibrio cho lera e O1 3 9 * * ambiental Bacanga Anil Bacanga Anil Bacanga Anil pH 0 ,6 3 - 0 ,6 7 0 ,9 8 -0 ,8 9 -0 ,8 7 Salinidade -0 ,8 9 - 0 ,5 2 0 ,5 4 0 ,3 3 -0 ,2 4 Temperatura 0 ,0 0 1 - 0 ,0 0 1 0 ,0 0 1 0 ,0 0 1 -- coeficiente não calculado; * processo clássico de isolamento; * * imunofluorescência direta
exibidas pelas formas não c ultiváveis poderiam interferir na c apac idade de multiplic aç ão e c resc imneto bac teriano nos meios
disponíveis1 5.
A imunofluoresc ênc ia direta revelou V. cho le ra e O1 em 3 7
( 7 1 ,1 % ) das 5 2 amostras de zooplânc ton, o que, aliado ao
enc ontro das formas viáveis, mas não c ultiváveis, demonstra a sobrevivênc ia do vibrião nos estuários dos rios Anil e Bac anga. No mater ial c o r ado havia tanto o r ganismo s inteir o s, c o mo
fragmentos, tendo sido observado a assoc iaç ão da bac téria, na forma viável, mas não c ultivável, c om os dois tipos de estrutura. A observaç ão das lâminas não permitiu identific ar qual grupo
estava espec ific amente envolvido na assoc iaç ão. No entanto, a c onstataç ão do predomínio da c lasse Copepoda em 9 8 ,1 % das amostras do rio Anil e em 8 6 ,5 % , do rio Bac anga, indic a forte possibilidade da assoc iaç ão c om estes grupos de organismos.
O reconhecimento do fenômeno ganha maior importância ao
se considerar a manutenção do potencial infeccioso da bac téria
nessa condição, conforme demonstrado em trabalho experimental7.
A adesão direta de V. cho le ra e a superfíc ies c ontendo quitina
favoreceria a produção de cólera, uma vez que nessa situação a
bactéria está mais protegida dos efeitos do pH ácido2 6.
Ressalta-se, ainda, o encontro de V. cho le ra e O1 3 9 em 3 2 ,7 %
das amostras, uma vez que o surgimento deste patógeno, em
1 9 9 2 , despertou a nec essidade de vigilânc ia epidemiológic a em
relaç ão ao seu po ssível envo lvimento da gênese de do enç a
diarréic a semelhante à c ólera c lássic a1.
A análise dos fatores ambientais bióticos e abióticos permitiu identificar flutuação sazonal, traduzida pela presença de organismos
da classe Rotifera, pela acentuação do pH e da temperatura e pela
diminuição da salinidade no estuário do rio Bacanga durante a estação
chuvosa. No rio Anil este comportamento foi observado de forma menos definida, pela presença de quetognatos em concentração
moderada na estação 2 e pelas elevações de pH e temperatura
registradas no período chuvoso, mantendo-se a salinidade em valores
elevados. A comparação deste último parâmetro entre os dois estuários mostra níveis mais baixos no rio Bacanga em todos os meses, o que
pode ser explicado pela presença de uma Barragem, cujas comportas
são abertas a intervalos trimestrais.
A distribuição das 1 4 amostras de zooplâncton das quais foram
obtidos os isolados de V. cho lera e não O1 mostrou que 1 2 ( 8 5 ,7 %)
foram oriundas do estuário do rio Bacanga. Destas, 10 foram coletads
no período das chuvas, coincidindo com as variações dos fatores
ambientais e da composição zooplanctônica, o que caracteriza o
padrão sazonal de distribuição de V. cho lera e neste estuário.
A salinidade parece ter exercido a maior influência no isolamento
bacteriano, considerando-se a acentuada diminuição de seus níveis
no mesmo período de obtenção das amostras positivas. O coeficiente de correlação de - 0 ,8 9 indica que à medida que os níveis de
salinidade diminuíram, maior número de amostras positivas foram
detectadas. Esta observação foi reforçada pela obtenção de isolados
bacterianos a partir de apenas duas amostras de zooplâncton dentre
as 26 provenientes do estuário do rio Anil, onde a salinidade
manteve-se ( exceto por dois memanteve-ses) acima de 3 0 partes por mil.
O coeficiente de correlação de 0,63 observado em relação ao pH
mostrou que a alcalinidade do meio também favoreceu o isolamento
bacteriano, embora esta correlação seja menos intensa. Já as discretas
variações da temperatura da água não exerceram influência na presença da bactéria ( r= 0,001) .
Flutuação sazonal definida não foi observada em relação ao
sorogrupo O1 que foi demonstrado pela imunofluorescência direta
em associação com o zooplâcton em, pelo menos, uma estação
de amostragem durante todo o período de estudo. Este padrão se repetiu com o sorogrupo O1 3 9 , cuja distribuição, embora não
tenha sido tão uniforme quanto o V. cho le ra e O1 , também não se
relacionou às condições climáticas. A análise dos fatores ambientais
demonstra correlação positiva moderada no rio Bacanga ( r= 0 ,6 7 ) e muito acentuada no rio Anil ( r= 0 ,9 8 ) entre variações de pH e
encontro do vibrião nas amostras de zooplâncton. Os coeficientes
de c orrelaç ão entre variaç ões da salinidade mostraram pouc a
influê nc ia de s te fa to r na a s s o c ia ç ã o do s o r o gr upo O1 e zooplâncton. Da mesma forma, não houve correlação significativa
entre detecção de V. cho le ra e O1 e temperatura.
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