PLEXOS ANTÍGENO-ANTICORPO EM RATOS INFECTADOS COM
P L A SM O D IU M B ER G H EI *
Carlos Eduardo T o sta
São apresentados os resultados prelim inares ãe u m estudo evolutivo da lo calização renal ãe complexos antígeno-anticorpo solúveis em ratos infectados
com P. berghei. Embora no 2P dia o anim al já apresentasse parasitos circulan tes e no 6.° dia fôsse dem onstrado anticorpos circulantes, som ente no 12.° dia ficou caracterizada a presença sim ultânea de antígeno e anticorpo, por im uno-fluorescência, nos glomérulos e arteríolas renais, correspondendo a um a que-aa do nível sérico de com plem ento. No 16.° dia o depósito glomerular era m í
nim o e o com plem ento retornou a níveis considerados normais.
Após u m confronto com os dados obtidos em outros trabalhos o A. sugere que o P. berghei possa apresentar u m a ação patogênica para o hospedeiro através da form ação ãe com plexos Ag-Ac embora acentuando a necessidade ãe estudos adicionais.
INTRODUÇÃO
A deposição de com plexos an tíg en o - anticorpo (Ag-Ac) em e stru tu ra s v ascu la res e su a posterior lesão co n stitu i um m e canism o de hipersensibilidade com um a diversas condições clínicas como o lupus eritem ato so dissem iinado, a glom erulone- írite e a dcença do soro, entre outras. P or razões h em o d in âm icas pró p rias, e n ã o por u m a afin id a d e especial d a m e m b ra n a b a sal (1) o rim é o órgão que m ais sofre a ação lesiva dêstes complexos.
Em doenças infecciosas, an a lo g a m en te, um m esm o m ecanism o po d eria e sta r presente resu ltan d o da reação de an tíg e - . nos secretados pelos m icrorganism os ou liberados em decorrência de su a lise, com
anticorpos específicos do hospedeiro.
A m aior incidência de síndrom e ne- fró tica em h a b ita n te s de áreas endêm i cas de m a lá ria n a Á frica vem m erecendo a aten ção de diversos pesquisadores. A possibilidade de um m ecanism o im unoló- gico, sugerida pela dem onstração de a n ticorpos m aláricos n a u rin a dêsses paci- en tesíõ ) e p ela ausência de
parasitos J10
local das lesões ren ais(4 ) foi refo rçad a pe la dem o n stração de depósitos glom erula-res de gam aglobulina e de com plem ento (C’) (2) e p ela presença de complexos Ag-Ac circu lan tes associada à alteração do nível sérico de com p lem en to (8). Contudo, só recen tem en te, foi c a rac te rizad a a p resen ça sim u ltâ n e a no glom érulo de antígeno plasm ódico, g am aglobulina e com plem en
to, sugerindo a ação p a to g ên ia do P. m a-lariae a trá v és d a form ação de complexos
* Trabalho da C línica de D oenças In fe c tu o sa í e Parasitárias da F.M. da U.F.R.J. e do In stitu to Bra-sileiro de Tropicologia M édica, Cx. Postal 1859, Rio de Janejro.
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Ag-Ac (15). Tam bém ex p erim en talm en te foram evidenciados, por im unofluorescên- cia, os três com ponentes de com plexos p a togênicos (Ag-Ac-C‘) no rim de Macaca
m u la tta d u ra n te a infecção por Plasmo-dium c y n o m o lg i(l).
R elatam os n e sta n o ta os resultados p relim in ares de um estudo evolutivo da deposição de com plexos Ag-Ac em rin s de rato s infectados com P. berghei.
MATERIAL E MÉTODOS
F o ram inoculados sete ra to s albinos, do sexo m asculino, de 3 m eses de idade, de lin h ag en s consanguíneas e m antidos nas m esm as condições am b ien tais e de alim entação. U tilizou-se u m a cêpa de
Plasm odium berghei p ro v en ien te d a D i visão de Zoologia do In stitu to Oswaldo Cruz (Rio de Jan e iro ) e m a n tid a em n o s so laboratório p o r repiques sem an a is em
cam undongos Swiss-55. As inoculações fo ra m feitas por via in tra p e rito n e a l com 0,25ml de sangue diluído em sa lin a (1:4) contendo um m ínim o de 40% de h em ácias p a ra sita d a s. T rês an im a is m o rre ra m n a fase ag u d a da doença. Os dem ais foram sacrificados no 2.°, 6.°, 12.° e 16° d ia de infecção, após controle de p arasite m ia . Os órgãos foram divididos sendo u m a p a rte fixada em form ol p a ra estudo histológi- co e a o u tra congelada em m istu ra de gê- lo-sêco + aceto n a e c o rta d a em criostato
(sessões de 4^. de e sp e ssu ra ).
U tilizou-se p a ra a dosagem do com ple m ento hem olítico no sôro um m icrom éto- do ad a p ta d o da técn ica de K w apinski (in
K w apinski & S nyder (6), e p a ra a av a lia ção do títu lo de anticorpos circu lan tes em pregou-se o m étodo de im unofluorescên- cia, indireto, preconizado por V oller(12). Os anticorpos depositados nos tecidos fo ra m dem onstrados por tra ta m e n to com gam ablobulina fluorescente a n ti-ra to e os an tíg en o s pelo m étddo in d ireto de im u -
nofluorescência.
RESULTADOS
Em bora o n ú m ero reduzido de an im ais analisados n ão p e rm ita u m a avaliação cronológica precisa, os dados obtidos são sugestivos d a ação de com plexos Ag-Ac.
No 2.° dia de infecção, quando a p a ra s ite m ia e ra m ín im a (380 p a ra sito s/m m 3) e o nível de com plem ento sérico d en tro dos lim ites n o rm ais (96% ), não fo ram d e m o n strad o s anticorpos circu lan tes nem qualquer alteraçã o ren al. No 6.° dia, cor respondendo a u m a elevação d a p a ra s ite m ia ocorreu in te n sa anticorpogênese es- plênica d em o n strad a por im unofluores- cência e os anticorpos circ u lan tes a lc a n ça ram o títu lo de 1:320. N esta ocasião, d e m onstrou-se nos glom érulos um depósito m ínim o de m a te ria l fluorescente de p ro vável origem plasm ódica e o com plem en to sérico n ão a p re se n ta v a alterações sig n ificativ as (Fig. 1). J á no 12.° dia, re la cionada a u m a queda do nível sérico do com plem ento p a ra 60% (segundo Tos- t a ( 9 ) , os valores n o rm ais p a r a ra to s jo - vensi, híg id o s estão com preendidos e n tre 80 e 96%) (Fig. 2), evidenciou-se a p re sen ça sim u ltâ n e a de an tico rp o s (Fig. 3) e de a n tíg en o plasm ódico (Fig. 4) nos glo m érulos e arte río la s re n ais (Fig. 5 ), q u a n do o títu lo de anticorpos circ u lan tes era de 1:1280. No 16.° dia, os depósitos re n ais eram m ínim os, o com plem ento se elevou p a ra 80% em b o ra o an im al ap resen tasse plasm ódios n o san g u e c irc u lan te e o t ítu lo de an tico rp o s se m antivesse no nível an terio r.
DISCUSSÃO E CONCLUSÃO
Como d em o n straram G e rm u th & M cK innon(3) os com plexos Ag-Ac a p re se n ta m ação pato g ên ica quan d o form ados em ligeiro excesso de a n tíg en o p a ra que sejam su ficien te m e n te pequenos p a ra se rem solúveis e, p o rta n to , circ u lan tes m as tam bém su ficien tem en te g ran d es p a ra se
rem capazes de re ag ir com o com plem en to que, a tra v és de um a ação quim iotáxi- ca(14), lev aria ao acúm ulo de polim orfo- nucleares no local, com p osterior lesão de e stru tu ra . T an to o excesso de anticorpos como de a n tíg en o pode im p ed ir o desen
volvim ento d a lesão (1), ten d o m esm o V al- des & cols.(10) com provado a possibilida de de regressão das lesões re n a is por d e pósito de com plexos solúveis a tra v és d a
secre-F ig . 1 —- R a t o n o G9 d i a de, i n f e c ç ã o . C o m p le m e n t o h e m o l í t i c o a p r e s e n t a n d o n í v e i s n o r m a i s n o s ô r o ( 9 4 % ) .
t i i i m i t»
F ig . 2 — R a t o n o 1 2 9 d i a d e in f e c ç ã o . C o m p le m e n t o h e m o l í t i c o a p r e s e n t a lim a q u e d a s i g n i f i c a t i v a ( 6 0 % ) .
tad o pelo plasm ódio ou d eco rren te de su a degradação, e sta ria em relação d ire ta com o g ra u de p arasite m ia , podendo ser in d i cado por ela. Assim ju stific a-se a a u sê n cia de com plexos patogênicos n a fase in i cial d a infecção, quando h á um g ran d e predom ínio de an tíg en o e o excesso de a n ticorpo, a p a rtir do 12.° dia, a lte ra n d o o equilíbrio an terio r, poderia ser o resp o n sável p ela m enor evldenciação de com ple xos no 16.° dia, idéia que é re fo rça d a pela elevação do nível de com plem ento sérico.
A disposição d ifu sa e o aspecto fin a m en te g ra n u la r do m a te ria l fluorescente depositado no glom érulo (Fig. 3) possuem c a ra c te ríftic a s com paráveis aos padrões obtidos por outros au to res em casos de glom enulonefrite por depósito de com ple xos solúveis (10) e o ach ad o de ac en tu a d a fluorescência n a ca m a d a elástica in te rn a de a rte río la s re n ais é explicado pelo depó sito “in loco” de com plexos Ag-Ac j á que
e sta e s tru tu ra age, como acontece com a m em b ra n a basal dos glom érulos, como su- perfífície filtra n te (1).
Poderíam os concluir que os dados ap resen tad o s são favoráveis à hipótese de que o P. berghei pode exercer u m a ação
pato g ên ica a tra v és d a form ação de com plexos Ag-Ac solúveis necessitando-se, porém , estudos adicionais.
AGRADECIMENTOS
IjF ig . 3 — G lo m é r u lo d e a n i m a l s a c r i f i c a d o n o 121? ^ d i a d e in f e c ç ã o a p r e s e n t a n d o d e p ó s i t o s d e a n t i c o r p o s
f l u o r e s c e n t e s d e d i s t r i b u i ç ã o d i f u s a e a s p e c to > f i n a m e n t e g r a n u l a r .
' J '. W .
A gradecem os aos P rofessores J. R o drigues C oura, P aulo F. A. Lopes e C
ar-F ig. 4 — Mesmo an im al apresentando m aterial an-tigên ico dem onstrado pela técnica de im
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F ig . õ — A r t c r í o l a r e n a l a p r e s e n t a n d o m a t e r i a l a n tig ê n ie o ( I F i n d i r e t a ) e m s u a p a r e d e o m a i s a c e n t u a d a m e n t e n a l i m i - t a n t e e l á s t i c a i n t e r n a . C o m a té c n i c a e m p r e g a d a p a r a d e
m o n s t r a ç ã o d e a n t i c o r p o s o b te v e .-se o m e s m o p a d r ã o d e f l u o r e s c ê n c i a .
los E. S erpa a o rien tação e o apoio, ao Dr. Jorge E. A tkins da O.P.A.S. o auxílio n a obtenção de m ateria l bibliográfico, ao Dr. Nelson Coelho P ere ira a a ju d a cons
ta n te n a execução do tra b a h o e ao Sr. Jorge dos Rem édios pelo m a te ria l foto gráfico.
SU M M ARY
This report is th e result of a p relim inary stu ã y of th e d em onstration of an tig en - antiboãy com plexes in th e kid n ey of albino rats in fected w ith P las- m odium berghei. A lthough th e presence of parasites in th e peripheral blood ivas dem on stra ted on th e 2nd day of in fectio n and th e circulating antibodies on th e 6th day by th e fluorescent antibody technique, it ivas only on th e 12th day th a t there ivere fo u n d deposits of antigen and antibody in th e glom eruli anã on th e in tern a i elastic lam ina associated w ith a decrease of th e levei of th e hem olytic com plem ent in th e serum . On th e 16th day th e glomeruli pres-ented a m in im u m deposit and th e co m plem ent reached norm al leveis.
The author suggests th a t P. berghei can act as a pathogen to th e host by means of form a tio n o f soluble a n tig en -a n tib o d y complexes. However, th is sub-ject needs additional study.
BIBLIOGRAFIA
1. COCHRANE, C. G. & DIXON, F. J. — Cell an d tissue dam age th ro u g h a n - tig en -a n tib o d y com plexes in Textbook of Im m unopathology (edited by P. A. M iescher an d H. J. M üller-E berhard) pp. 94-110, 1968. G ru n e & S tra tto n , New York an d London.
2. DIXON, F. J. — Mil. Med. 131:1233, Citado por W ard & K ibukam usoke 1969.
3. GERMUTH, F. G. & MCKINNON, G. E. — Studies on th e biological p ro - p erties of an tig e n -a n tib o d y com ple
xes. I. A naphylactic shock induced by soluble an tig e n -a n tib o d y com ple xes in unsensitized n o rm al guinea pigs. Buli. H opkins Hosp. 101: 13, 1957.
4. KIBUKAMUSOKE, J. W. & HUTT, M. S. R. — H istological fe a tu re s of th e n ep h ro tic syndrom e associated w ith q u a rta n m a laria . J. Clin. P ath . 20: 117, 1967.
1965-6. KW APINSKI, J. B. & SNYDER, M. L. — T he Im m unology of R heum atism . A ppleton — C entury, C rofts. New York, 1962.
7. O. M. S. - Im m unología dei P aludis- mo. In fo rm e de u n G rupo C ientífico de la O rganización M undial de la Sa- lud n.° 396, 1968.
8. SOOTHILL, J. F. & HENDRICKSE R. G. — Some im m unological studies of th e n ep h ro tic syndrom e of N igerian children. L ancet Sept. 23-629, 1967. 9. TOSTA, C. E. — Dados a serem p u
blicados.
10. VALDES, A. J., SENTERFIT, L. B„ POLLACK, A. D. & GERMUTH, F. G. JR . — T he effect of a n tig en excess on chronic im m une com plex glom e- ru lo n ep h ritis. Jo h n s H opkins Med. J. 124: 9, 1969.
11. VERNIER. R. L. — G lom erulonephri- tis in Textbook of Im m unopathology
(edited by P. A. M iescher an d H. J. M iiller — E b erh ard ) pp. 365 - 389, 1968. G ru n e & S tra tto n , New York and London.
12. VOLLER, A. — F luorescent antibody m ethods a n d th e ir use in m alaria research. Buli. W orld H ealth Org. 30: 343, 1964.
13. VOLLER, A. Im m onofluorescence an d hu m oral im m u n ity to Plasmo-diuin berghei. A nn. Soc. Belge Med. Trop. 45: 385, 1965.
14. WARD, P. A., COCHRANE, C. G. & MÜLLER-EBERHARD, H. J. — The role of serum com plem ent in chem o- taxis of leukocytes in vitro. J. Exp. Med. 122: 327, 1965.
