Braz. j. . vol.83 número3

(1)

www.bjorl.org

Brazilian

Journal

of

OTORHINOLARYNGOLOGY

ARTIGO

ORIGINAL

Comparison

of

microRNA

profiles

between

benign

and

malignant

salivary

gland

tumors

in

tissue,

blood

and

saliva

samples:

a

prospective,

case-control

study

夽

Ovgu

Cinpolat

a

_,

_Zeynep

_Nil

_Unal

b

_,

_Onur

_Ismi

c,∗

,

Aysegul

Gorur

d

e

Murat

Unal

c

a_Gaziantep_State_Hospital,_Gaziantep,_Turquia

b_University_of_Mersin,_Faculty_of_Pharmacy,_Department_of_{Biochemistry,}_Mersin,_Turquia

c_University_of_Mersin,_Faculty_of_Medicine,_Department_of_{Otorhinolaryngology,}_Mersin,_Turquia

d_University_of_Mersin,_Faculty_of_Medicine,_Department_of_Medical_{Biochemistry,}_Mersin,_Turquia

Recebidoem12dedezembrode2015;aceitoem23demarçode2016 DisponívelnaInternetem31demarçode2017

KEYWORDS

Salivaryglandtumor; MicroRNA;

miR-21; miR-30e; Pathogenesis

Abstract

Introduction:Salivaryglandtumors(SGTs)arerareheadandneckmalignanciesconsistingofa spectrumoftumorswithdifferentbiologicalbehaviors.

Objective:In this study we aimed to find out differential expression of microRNA profiles betweenbenignandmalignantSGTs.

Methods:Weinvestigatedthepossibleroleof95microRNAsinthe20patients withsalivary glandtumorswith comparisonof17 patientswithoutmalignancyorsalivary glanddiseases. Sixteenofthetumorswerebenign(sevenpleomorphicadenomas,nineWarthintumors),four ofthemweremalignant(twosquamouscellcarcinomas,onehighgrademucoepidermoid carci-noma,oneadenocarcinoma).Serumandsalivasampleswerecollectedfrombothpatientsand controlgroup.Tissuesamplesoftumormasseswerealsocollectedfrompatientgroup.

Results:AmongstudiedmicroRNAs miR-21,miR-23a,miR-27a,miR-223,miR-125b,miR-126, miR-146a,miR-30eweredownregulatedinthebenigngroupcomparedtocontrolgroupinthe serumsamples(p-valuesare0.04,0.00005,0.00005,0.0022,0.031,0.00008,0.044,and0.0007, respectively).WhentissuesampleswerestudiedmiR-21,miR-31,miR-199a-5p,miR-146b, miR-345wereup-regulatedinthemalignantgroupcomparedtobenigngroup(pvaluesare0.006, 0.02,0.013,0.013,0.041,respectively).miR-30eshowedstatisticallysignificantup-regulation

DOIserefereaoartigo:http://dx.doi.org/10.1016/j.bjorl.2016.03.013

夽 _Como_citar_este_artigo:_Cinpolat_O,_Unal_ZN,_Ismi_O,_Gorur_A,_Unal_M._Comparison_of_microRNA_profiles_between_benign_and_malignant

salivaryglandtumorsintissue,bloodandsalivasamples:aprospective,case-controlstudy.BrazJOtorhinolaryngol.2017;83:276---84.

∗_Autor_para_{correspondencia.}

E-mails:[email protected],[email protected](O.Ismi).

ArevisãoporparesédaresponsabilidadedaAssociac¸ãoBrasileiradeOtorrinolaringologiaeCirurgiaCérvico-Facial.

(2)

inmalignanttumorgroup’splasmasamplescomparedtobenigngroup(p=0.034).Therewas nostatisticallysignificantdifferenceinsalivasamplesbetweengroups.

Conclusion: OurresultsshowedthatdifferentmicroRNAsmayplayroleinsalivarytumor patho-genesisaccordingtobiologicalbehavior.Although therewas nodifferenceinsalivasamples betweengroups,accordingtotissueandserumsamplesmiR-21and30emayhaveanimportant role;sincetheyweredown-regulatedinbenigntumorswhereasup-regulatedinmalignantones. © 2016 Associação Brasileira de Otorrinolaringologia e Cirurgia Cérvico-Facial. Published by Elsevier Editora Ltda. This is an open access article under the CC BY license (http://

creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

PALAVRAS-CHAVE

Tumordeglândula salivar;

MicroRNA; miR-21; miR-30e; Patogenia

Comparac¸ãodeperfisdemicroRNAentretumoresdeglândulasalivarbenignose malignosemamostrasdetecido,sangueesaliva:estudocaso-controleprospectivo

Resumo

Introdução: Ostumoresdaglândulasalivar(TGS)sãolesõesmalignasrarasdecabeçaepescoço queconsistememumespectrodetumorescomdiferentescomportamentosbiológicos.

Objetivo: Nesteestudo,tivemoscomoobjetivoidentificaraexpressãodiferencialdeperfisde microRNAentreTGSbenignosemalignos.

Método: Investigamosapossívelparticipaçãode95microRNAem20pacientescomtumores deglândulassalivarescomparadoscom17pacientessemdoençamalignaoudoençasdas glân-dulassalivares;16dostumoreserambenignos(seteadenomaspleomórficos,novetumoresde Warthin),quatroerammalignos(doiscarcinomasespinocelulares,carcinomamucoepidermoide dealtograu,umadenocarcinoma).Asamostrasdesoroesalivaforamcoletadasde pacien-tesedogrupocontrole.Amostrasdetecidodostumorestambémforamcolhidasdogrupode pacientescomtumores.

Resultados: EntreosmicroRNAestudados,miR-21,miR-23a,miR-27a,miR-223,miR-125b, miR-126,miR-146a,miR-30eforaminfrarreguladosnogrupobenignoemcomparaçãocomogrupo controle nasamostras dosoro (osvalores de p são0,04, 0,00005, 0,00005, 0,0022,0,031, 0,00008,0,044 e0,0007,respectivamente).Quandoasamostrasdetecidoforamestudadas, miR-21,omiR-31,omiR-199-5p,miR-146b,omiR-345foramsuprarreguladosnogrupomaligno em relaçãoao grupobenigno(valoresdepsão0,006,0,02,0,013,0,013,0,041, respectiva-mente).OmiR-30eapresentousuprarregulaçãoestatisticamentesignificativaemamostrasde plasmadogrupodetumormalignoemrelaçãoaogrupobenigno(p=0,034).Nãohouvediferença estatisticamentesignificativaemamostrasdesalivaentreosgrupos.

Conclusão:Nossos resultados mostraram que diferentes microRNA podem desempenhar um papelnapatogeniadotumorsalivardeacordocomocomportamentobiológico.Emboranão tenhahavidodiferenc¸aemamostrasdesalivaentreosgrupos,deacordocomasamostrasde tecidoedesoro,miR-21e30epodemterumpapelimportante,jáqueforaminfrarregulados nostumoresbenignosenquantosuprarreguladosnostumoresmalignos.

creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Introduc

¸ão

Ostumoresdeglândulassalivares(TGS)compreendem ape-nas 3 a 5% de todos os tumores malignos de cabeça e pescoço;elestêmpelomenos24tiposdiferentesdeacordo com a classificação de 2005da Organização Mundial da Saúde.1 _Entre _eles, _o _adenoma _pleomórfico _é _o _tumor benigno maiscomum, enquanto o carcinoma mucoepider-moide é o maligno mais comum.2 _A _patogenia _exata _e _o caminhoparaatransformaçãomalignadetumoresde glân-dulassalivaresnãosãobemconhecidos.Emboraotabagismo e o consumo de álcool sejam fatores de risco importan-tes para carcinomas espinocelulares (CEC), de cabeça e pescoço,elesnãosãoadmissíveisparatumoresdeglândulas

salivareseexposic¸õesocupacionaisnãoparecemparticipar dapatogenia.3

(3)

Tabela1 Tiposhistopatológicosdetumores nogrupode pacientes

Tipodetumor Porcentagem

TumordeWarthin 9/20(45%)

Adenomapleomórfico 7/20(35%)

Carcinomaespinocelular 2/20(10%)

Carcinomamucoepidermoidedealtograu 1/20(5%)

Adenocarcinoma 1/20(5%)

Nesteestudo,investigamosopossível papeldosmiRNA na patogeniadotumordaglândulasalivar.Atéondesabemos, esteéoprimeiroestudoacompararosníveisdemiRNA séri-cos,dasalivaedetecidosentreasneoplasiasdeglândulas salivares.

Método

A aprovação do comitê de ética local foi obtida para o nosso estudo. Foram incluídos 20 pacientes com tumores de glândulas salivares e 17 controles saudáveis pareados parasexoeidadesemqualquerdistúrbiodeglândula sali-varoudoençassistêmicas.Amédiadeidadeparaotumor daglândulasalivarfoide53,1anoseamédiadeidadepara ogrupocontrolefoi de46,4anos.Haviadez pacientesdo sexomasculino(50%)edezdofeminino(50%)nogrupode tumoresenovepacientesdosexomasculino(52,9%)eoito dofeminino(47,1%)nogrupocontrole.Nãohouvediferença estatisticamentesignificativaemrelaçãoàidade(p=0,251) esexo(p=0,858)entreosgruposdetumoresedecontrole. Do grupo de tumor, havia 16 tumores benignos e quatro malignos.OsmalignoseramdoisCEC,umcarcinoma muco-epidermoidedealtograueumadenocarcinoma.Apenasos carcinomasespinocelularesprimáriosforamlevadosparao estudodeacordocomcritériosdeinclusãodeGaughan;8,9 os carcinomas espinocelulares metastáticos foram excluí-dos. Os benignos eram nove tumores de Warthin e sete adenomas pleomórficos. A lista dos tumores se encontra resumida na tabela 1. No grupo do tumor, um (25%) de quatronogrupomaligno e cinco (31,25%)de16 nogrupo benignoeramdosexofeminino.Emrelaçãoadiferençasde sexoeidadeentreosgruposdetumoresmalignose benig-nos,nãohouvediferençaestatísticaparasexo(p=0,807)e idade(p=0,9355).

AnálisedemicroRNA

Coletadesoro

Amostrasdesanguede5mlforamcoletadaspara7,5%EDTA com tubos de grupo de pacientesno pré-operatório e no grupocontrole.Apóscentrifugac¸ão,ossorosforamcolhidos earmazenadosa-80◦_C.

Coletadesaliva

Apósacateterizac¸ãodosductosdeglândulasalivar envol-vidos, com limão como sialogogo, 200␮L de saliva da

glândulaenvolvida foramcoletados.Asalivafoimisturada com200␮Ldesoluc¸ãodeRNAlater(QiagenInc.,Valência,

CA).Apósduashorasemtemperaturaambiente,elasforam

armazenadas a -80◦_C _em _congelador.10 _Também _foram

coletados200␮ldasalivaapartirdogrupocontrole.

Coletadetecido

As amostrasdetecidoforamtomadasapenasdogrupode tumores da glândula salivar. Durante a cirurgia do tumor daglândula salivar, umaamostradetecido tumoralde 3-4mm3_foi_usada_para_análise._As_amostras_de_tecido_foram colocadas em 1mL de soluc¸ão de RNAlater (Qiagen Inc., Valência,CA).Apósduashorasemtemperaturaambiente, foramarmazenadasa-80◦_C_em_congelador._Os_tecidos_foram

seccionados com uma lâmina cirúrgica e homogeneizados compilãoealmofariz.OisolamentodomicroRNA apartir detecidohomogeneizadofoifeitocomkitdeisolamentode microRNA(RocheDiagnosticsGmbH,Mannheim,Alemanha), deacordocomasinstruc¸õesdofabricante.

PerfildeexpressãodemicroRNA

ApósosmicroRNAseremisoladosapartirdosoro,dasaliva edotecidoporumkitdeisolamentodemicroRNA(Roche Diagnostics,GmbH, Mannheim,Alemanha),deacordocom as instruc¸ões do fabricante, as amostras de RNA foram convertidasemDNAccomousodokitdemiScriptIIRT (Qia-gen);asamostrasdeDNAcforampré-amplificadas,comkit miScriptmicrofluidicsPre-AMP(Qiagen);eaanálisede qRT--PCRfoifeitacomensaiosdemiScriptmiRNA(Qiagen)com arranjodinâmico96,96(Fluidigm)noBioMarkSystem (Flui-digm).Basicamente,foramestudados95tiposdemicroRNA.

Análisededados

Os resultados qRT-PCR foram analisados com o método 2-Ct_.11,12 _{Resumidamente,} _a _{suprarregulac}_¸ão, _ou infrarregulação de microRNA, foi comparada entre os grupos. O teste t de Student foi usado para analisar as diferenças de idade e o teste do qui-quadrado foi usado para analisar as diferenças de sexo entre os grupos. Os dados de expressão foram controlados para distribuição normal com o teste de Shapiro-Wilk. De acordo com os resultados,osdadosnãoforamdistribuídosnormalmente.O testeUdeMann-Whitneyfoiusadoparadetectardiferenças de expressão de miRNA em amostras de soro, tecidos e saliva. O valor p<0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

Resultados

Quandoostumoresbenignosforamcomparadoscomogrupo controle,oitomiRNA(miR-21,miR-23a,miR-27a,miR-223, miR-125b,miR-126,miR-146a,emiR-30e),comomostrado nafigura1,tinhaminfrarregulaçãoestatisticamente signifi-cativanogrupodetumoresbenignosemamostrasdesoro.A tabela2resumearegulaçãodonúmerodevezesevaloresp dessesmiRNA.Nãohouvesuprarregulaçãoestatisticamente significantedessesmiRNAemamostrasdesoro.

(4)

10

0

–10

–20

–30

–40

–50

–60

–70

miR-21 23a 27a 223 126 146a 125b 30e miR- miR- miR- miR- miR- miR- hsa- hsa- hsa- hsa- hsa- hsa-

hsa-Plasma controle Plasma benigno

Figura 1 Comparac¸ão de perfis de expressão domicroRNA plasmáticoentreogrupodetumoresbenignosegrupocontrole.

Tabela2 MicroRNAmostramudanc¸asestatisticamente sig-nificativas por comparac¸ão entre amostras de plasma de tumorbenignoegruposcontrolecomvaloresp

TipodemicroRNA Regulac¸ãodo númerodevezes

Valoresp

Mir-21 −2,5197 0,04

Mir-23a −13,05 0,00005

Mir-27a −21,4 0,00005

Mir-125b −4,644 0,031

Mir-126 −9,2 0,00008

Mir-30e −64,38 0,0007

Mir-146a −3,5 0,044

Mir-223 −10,34 0,0022

do heat map de agrupamento de miRNA em amostras de tecidofoimostradonafigura3.EntreessesmiRNA,miR-199 tambémmostrou suprarregulac¸ão estatisticamente signifi-cativa(p=0,042) em amostras de soro dogrupo maligno,

5

0

–5

has-miR-31 has-miR-199a

has-miR-146b

has-miR-21

has-miR-345

–10

–15

–20

Tecido maligno Tecido benigno

Figura2 Comparac¸ãodeperfisdeexpressãodomicroRNAdo tecidoentreosgruposdetumoresbenignosemalignos.

Tabela 3 Expressão de microRNA de grupo de tumor maligno comparado com o grupo de tumor benigno em amostrasdetecidoquemostramudanc¸asestatisticamente significativas

TipodeMicroRNA Regulac¸ãodo númerodevezes

Valoresp

Mir-21 +5,23 0,0006

Mir-31 +2,24 0,02

Mir-199a +2,36 0,013

Mir-146b +3,21 0,013

Mir-345 +18,063 0,041

emcomparaçãocomogrupobenigno.OmiR-30e apresen-tousuprarregulaçãode15,06vezes(p=0,034)emamostras deplasmadogrupodetumormaligno,emcomparaçãocom ogrupobenigno(fig.4).

Quandoo grupo de tumor maligno foi comparadocom o grupocontrole, miR-23a apresentou suprarregulac¸ão de 10,5vezes(p=0,02)emamostrasdesorodetumores malig-nos(dadosnãomostrados).

Não houve diferenc¸a estatisticamente significativa em amostrasdesalivaentreosgruposbenigno,malignoe con-trole.

Discussão

Desdequeforamencontradospelaprimeiravez no nema-tódeoCaenorhabditiselegans,em1993,13 _miRNAs_têm_sido investigadosporseus prováveispapéis em estados fisioló-gicosnormais e doentes em vários estudos.Eles são uma classede pequenos RNA endógenos que têmcomo alvo a expressãodogene nonívelpós-transcricional e que regu-lamnegativamenteatraduçãodoRNAmensageiro.4,14_Após transcritoviaRNA-polimeraseIIouIII,elestêmvários com-portamentosbiológicosimportantes,taiscomoproliferação, diferenciação, apoptoseemotilidade.4,14 _Essas caracterís-ticas importantes os tornam cruciais no desenvolvimento fisiológico dos tecidos e as anomalias na sua transcrição podemlevaradiferenciaçãoaberranteecarcinogênese.6

(5)

(6)

2

0

–2 has-miR-199a has-miR-30e

–4

–6

–8

–10

–12

–14

–16

Plasma maligno Plasma benigno

Figura 4 Comparac¸ão entre amostras de plasma de grupo de tumores benignose malignospara perfis de expressão de microRNA.

papel fundamental na ramificac¸ão do ducto da glândula submandibular.16

Os papéisdodesenvolvimento fisiológicoquase normal dos miRNA na carcinogênese também são investigados. Como osprimeiros sinais de seu provável papel na carci-nogênese foram encontradospor Calin et al.,17 _em _2002, pelainfrarregulaçãodemiR-15a,miR-16-1naleucemia lin-foidecrônica,vários estudossobrea relação entremiRNA e carcinogênese foram publicados. Entre os cânceres de cabeçaepescoço,ocarcinomaespinocelularéamplamente estudado por provável papel dos miRNA. Embora exista umagrande diferença entreosestudos,miR-21 éo único miRNAconstantequeapresentasuprarregulaçãonos cânce-resespinocelularesdecabeçaepescoço.6 _Ele_tem_efeitos antiapoptóticos, de proliferação celular, com promoção de invasãocelular e metástase; então, a suprarregulação dessemiRNA tambémpressupõemauprognósticoem cân-ceresdecabeçaepescoço.18 _Em_nosso_estudo,_houve_uma suprarregulaçãocincovezesmaior(p=0,0006)demiR-21em amostrasdetecidostumoraismalignosdeglândulas saliva-res,emcomparaçãocomtumoresbenignos.Houvetambém umainfrarregulaçãode2,51vezes(p=0,047)emamostras plasmáticasdegrupobenigno,emcomparaçãocomogrupo controle.EssemiRNApodeterumpapelcrucialnapatogenia dotumordeglândulasalivarenogrupobenigno.

Emnossoestudo,demonstrou-sequemiR-125bé suprar-regulado em amostras de soro de tumores benignos de glândulassalivares.OmiR-125bemiR-100sãodoismiRNAs importantesquemapeiamocromossomo11.Asalterações nessecromossomopodemlevaracânceresoraisecarcinoma mucoepidermoidedeglândulas salivares.19,20_No_estudo_de Huietal.,18_a_expressão_de_miR-125b_também_foi infrarregu-ladanocarcinomaespinocelulardecabeçaepescoço,assim comoemnossoestudo.AinfrarregulaçãodessemiRNApode causaraumentodaproliferaçãocelularecarcinogênese.19

O miR-23a e miR-27a pertencem ao agrupamento de miR 23a∼27a∼24-2 localizado no cromossomo 9q22. Eles têmmúltiplasfunçõesem ambososestadossaudável ede doença,taiscomociclocelular,proliferação,diferenciação e hipertrofiacardíaca21 _A_literatura _que_investiga _o_papel

desses miRNA na carcinogêneseé conflitante. OsmiR-23a e miR-27a mostraram ser infrarregulados no CEC oral,22 enquanto, recentemente, Peng et al. apontaram que o miR-23apromove quimiorresistência à quimioterapia com cisplatinanoCECdelíngua.23_Os_miR-23a_e_27-a_são infrarre-guladosnaleucemiapromielocíticaagudaesuprarregulados naleucemiamieloideaguda,leucemialinfoblásticaaguda, no câncer gástrico e câncer hepático.21 _Considerando _a literatura recente, é evidente que esses miRNA podem comportar-se demaneira diferente na patogenia de dife-rentescânceres;elespodematuarcomogenesupressorde tumoremumcâncerecomooncogeneemoutro.Emnosso estudo,demonstrou-sequemiR-23ae27aeram infrarregu-ladosemamostrasdesorodetumoresdeglândulassalivares benignos.OmiR-23atambémfoiinfrarreguladonogrupode tumormaligno, em comparac¸ãocom ogrupo controle em amostrasdesoro.OmiR-23apodecomportar-secomo um genesupressordetumoremambosostumoresdaglândula salivar:benignosemalignos.

Quando amostras de tecido e plasma foram compa-radas entre os tumores, houve uma suprarregulação de 2,3656 vezes (p=0,01357) de miR-199-5p em amostras de tecido e suprarregulação de 3,5 vezes (p=0,042) em amostrasdesorodetumoresmalignos.Tambémfoi demons-tradoqueessemiARNésuprarreguladonocâncerdecólon, hepatocelular, gástrico e no melanoma maligno.24,25 _No estudodeLiuetal.,26 _o_miR-31_foi_{suprarregulado}_no_CEC oraleosníveisdiminuíramapósotratamentoemrelaçãoao possívelpapeldessemiRNAcomoummarcadornessecâncer. Emnossoestudo,houveumasuprarregulaçãode2.244vezes (p=0,0208)dessemiRNAnogrupodetumorsalivarmaligno emamostrasdetecido.OmiR-146bmostrou-seimportante fator prognóstico para pacientes com câncer de tireoide papilar,maiorexpressãodessemiRNAem célulastumorais diminuiuasobrevida.27_A_expressão_de_miR-146b_também_foi aumentadaemcélulasdecâncerdetireoideanaplásicas.28 Noentanto,paracâncerdemama,aexpressãodemiR-146b causou uma redução da capacidade metastática, supri-miua atividade deNF-␬B.29 Em nosso estudo,houve uma

suprarregulação de3,21 vezes (p=0,013) demiR-146b no grupo de tumor maligno, em comparação com o grupo benigno,nasamostrasdetecidotumoral.Descobriu-seque omiR-345temumvalorprognósticonocâncerdepróstata30 ecolorretal.31_Em_nosso_estudo,_foi_{suprarregulado}₁₈_vezes (p=0,041)nogrupomaligno.ParaomiR-30e,demonstrou-se quefoisuprarreguladonocâncerhepatocelular32_e infrarre-guladonocâncerdetireoideanaplásico.33_Em_nosso_estudo, omiR-30eapresentousuprarregulaçãode15,06(p=0,034) em amostras de plasma do grupo de tumor maligno, em comparação com o grupo benigno, enquanto houve uma infrarregulaçãonogrupodetumor benignoem relação ao grupocontrole(p=0,0007)emamostrasdeplasma.

(7)

Tabela4 Estudospreviamentepublicadosrelativosàrelac¸ãoentremicroRNAetumoresdeglândulasalivar

Autor Anode

publicac¸ão

Tipode tumor

Designdoestudo Resultado

Zhang etal.36

2009 Adenoma

pleomórfico

Amostrasdetecidodeadenoma pleomórficoforamcomparadascom tecidodeglândulasalivarnormal.

VáriosmicroRNAtiveram

desregulac¸õesnogrupodotumor.

Liu etal.35

2012 CCA AmostrasdetecidodeCCAforam comparadascomadenomapleomórfico etecidosnormaisusandocultura celular.

MiR-155ésuprarreguladoemcélulas deCCAecausaproliferac¸ão, crescimentotumoraleaumentaa invasão.

Mitani etal.34

2013 ACC Amostrasdetecidotumoralforam comparadascomtecidodeglândula salivarnormal.

Expressãodeagrupamentode miR-17-92estárelacionadocom desfechoprecário.

He etal.4

2013 CCA Culturascelularesdelinhascelulares metastáticasforaminoculadasem camundongos.

MiR-181asuprimemetástaseemCCA.

Chen etal.5

2014 CCA Culturascelularesforamobtidasde linhascelularesmetastáticasenão metastáticasdeCCA.

17microRNAapresentaram desregulac¸ãoemlinhascelulares metastáticas.

Veit etal.37

2015 CCA AmostrasdetecidodeCCAforam comparadascomtecidosdeCEC.

miR-214,125a,574,199a/b-3p, 199a-5pforamsuprarreguladasnoCCA. Kiss

etal.39

2015 CCA AmostrasdetecidodeCCAforam comparadascomtecidosdeglândula salivarnormal.

SetemicroRNAforamsuprarregulados enoveforaminfrarregulados.

Kiss etal.38

2015 CCA AmostrasdetecidodeCCAforam comparadascomtecidodeglândula salivarnormal.

MiR-let-7bemiR-193bforam

infrarreguladosemamostrasdetecido.

Cinpolat etal.a

TGSbenignos emalignos

1)Comparac¸ãodeamostrasdasalivae soroentretumoresbenignos,malignos egrupocontrole.

2)Comparac¸ãodeamostrasdetecido entregruposdeTGSbenignoe maligno.

Desregulac¸ãonaexpressãode diferentestiposdemicroRNAocorrem deacordocomcomportamento biológicodoTGS.Mir-21e30esão infrarreguladosnogrupodeTGS benigno,esuprarreguladosnos malignos.

CCA,carcinomaadenoidecístico;miR,microRNA;TGS,tumoresdeglândulasalivar.

a_Estudo_apresentado.

observaram que 17 miRNA diferentes tiveram mudanças estatisticamente significativas em fold-change de linhas celularesnoCCAmetastático,em comparaçãocomosnão metastáticos.5 _Entre _os _tumores _de _glândulas _salivares benignos, os miRNAs foram investigados para o possível papelnapatogeniadosadenomaspleomórficos.Zhangetal. relataramque17 miRNAdiferentesforamsuprarregulados emamostrasdetumores,inclusiveosmiR-21.36 _Esse resul-tadonãofoiconsistentecomo nossoestudo.Nele,houve uma infrarregulação de miR-21 em amostras de soro de pacientesdogrupo detumores benignos,em comparação com o grupo controle. Essa diferença poderia ter duas explicações.Primeiramente,nossogrupodetumorbenigno eracompostopormúltiplasdoenças,enãosódeadenoma pleomórfico.Emsegundolugar,asamostrasdesoroforam estudadasnogrupocontrole,enãonasbiópsiasdetecido. Emoutroestudo,Veitetal.compararamosperfisdemiRNA deCCAeCECdaregiãodecabeçaepescoço.OsmiR-214, 125a,574,199a/b-3p e199a-5pforamsuprarreguladosno grupo deCCA.37 _Em _nosso _estudo, _o _miR-199 _também_foi suprarregulado em amostras de tecido do grupo maligno. Recentemente,Kiss etal.38 _demonstraram_possível _papel

dainfrarregulac¸ãodemiR-let-7bemiR-193b napatogenia doCCA daglândulasalivar. Novamente,em outro estudo, Kiss et al. 39 _encontraram _sete _miRNA _{superexpressos} _e novemiRNAsubexpressosemamostrasdetecidosalivarde CCA.Estudospublicadosanteriormente,comacomparac¸ão donosso,foramresumidosnatabela4.

(8)

Emboraotamanhodanossaamostradetumoresmalignos pareçapequena,houveartigospublicadosqueinvestigaram asfunçõesdemiRNAnacarcinogênesedeTGScomtamanho deamostrasemelhante.NoestudodeVeitetal.,37 _foram comparadascincoamostrasdetecidodetumordeCCAcom dezamostrasdetecidotumoral deCEC.Noestudo deLiu etal.,35 _houve_comparac_¸ão_entre_dez_casos_de_CCA_e qua-trocasosdeadenomapleomórficoeoitotecidosdaglândula parótidanormais.Recentemente,Kissetal.39 _publicaram seuestudocomapenasdoiscasosdeCCAsalivares. Consi-deramosnossosresultadossignificativosparaainvestigação dapatogeniademiRNAemTGS.

Conclusão

Comoresultado e sob aluzde artigospreviamente publi-cados e do estudo atual,pode-se especular que o miRNA desempenheumpapel napatogenia dotumor deglândula salivar.Adesregulac¸ãodotipodemiRNA diferedeacordo com o comportamento biológico. O miR-21 e o miR-30E podemterumpapel críticonodesenvolvimentodotumor deglândulasalivarcomosgenes-alvoRPS7eLIMCH1.

Conflitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconflitosdeinteresse.

Agradecimentos

OfinanciamentodesteestudofoimantidopelaUnidadede ProjetosdePesquisaAcadêmicadaMersinUniversity.

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