ATIVIDADE AN TIMICROBIANA D E PRIME RS E AD ES IVOS SOBRE
D IFER ENTES MICRORGANIS MOS
ANT IMICROBIOL OGIC ACTIVITY OF PRIMERS AND ADHESIVE ON DIFFERENT MICROORGAN ISMS
Priscil a Paiva P ORT ER O 1 Patri ci a GRAU-GR ULLÓN 2 Rafael Gomes DITTER IC H 3
Caroli na de Andrad e Lima CH AVES 4 Eli zabet e B rasil dos SANTOS 5 Os nara M aria M ongruel GOMES 6
Resu mo: O obj etivo dest e estudo foi avaliar in vitro, por meio do t este da difus ão em ág ar, a ati vidade anti mi crobi ana de oit o si stemas adesivos: G1-Cl earfil P rotect Bond (Kuraray); G2-Clearfil S E B ond (Kuraray); G3 -One C oat SE Bond (Colt ène/Whal edent); G4-One Coat Bond (C oltène/W hal edent ); G5-Single B ond (3M/ESPE); G6-Tyrian SP E, G7-Prime&Bond 2.1 (Dentsply); G8-One St ep Plus e G9-Solução salin a fisiol ógica (grupo controle). Os microorganismos (Str eptococcus mutans, C andida
albi cans, Es cherichi a coli e Staphil oco ccus aur eus) foram semeados em ágar mitis saliv arius, em
tripli cat a e incubadas à 37° C/10 min. Em s eguida, discos d e papel filtro est erilizados foram embebidos com os prim ers ou adesivos dos sist emas adesivos, que foram m anipulados s eguindo as recomendações dos fabricantes e deposit ados na superfí ci e do ágar. As pl acas foram i ncubadas à 3 7° C/48 hs. Após este perí odo mediu-s e os di âmet ros dos hal os de ini bição bact eri ano. A anális e est atísti ca foi reali zada e veri ficaram-s e diferentes comportament os t ant o dos primer s quanto dos adesivos test ados sobre os diferent es mi croorganismos
Pal avras-cha ve: Adesivos dentinários. Mi crobiologi a. mi croinfilt ração.
Abs tract: The propose of t his study was to evaluat e in vit ro by the diffusi on agar method, t he anti mi crobiogic acti vity of ei ght adhesi ve syst ems: G1-C learfil Prot ect Bond (Kuraray); G2-Clearfil SE Bond (Kuraray); G3-One Coat SE Bond ( Colt ène/Wh aled ent); G4-On e C oat Bond (C olt ène/W hal edent); G5-Si ngle Bond (3M/ESP E); G6-Tyri an SP E; G7-P rime&B ond 2.1 (Dents ply); G8-One St ep Plus and G9-s olution s ali ne physi ological (control group), The mi croorganisms (Streptococcus mutans, C andida
albi cans, Es cherichi a coli and Staphil ococcus aureus) were s own in mitis salivarius agar, triplicated and
incubated at 37° C/10 mi n. After that, st erilizers pap er disk were wet wit h the primers or the adhesive, used by the fabri cant inst ruction and deposi ted i n t he agar surface. The pl at es were incubating at 37° C/48hs. Aft er this p eriod, the bacteria i nhibition hal os were measure. The st atisti cs anal yze was reali ze and was verify the di fferent behavior of t he primers and adhesi ve when test ed on t he different microorganis ms.
Keyword s: Dentin adhesives. Microbiol ogy. dental l eakage.
1 Mestre em Odontologi a (Clí nica Integra da) pela Unive rsi dade Estadual de Ponta G ros sa (UEPG ), Doutoranda em Dentística Restauradora pel a UNESP - Araraquara). Docente da Faculdade de Odontologia de Nova F riburgo da Univ ersidade Federal Fluminense (FO -NF /UFF). e-m ail: priscis.portero@i g.c om.br
2
Mest re em Odontologi a (Clínic a Integrada) p ela UEPG. 3
Mest re em O dontologia (Clínica Integrada) pel a Univ ersi dade Estadual de Ponta G rossa ( UEPG ). Doc ente da F acul dade de Odontologia de Nov a Frib urgo da Universi dade Fe deral Fluminense (F O-NF/ UFF ). e-mail: rafael ditt erich @yahoo.com.br 4 Mestre em Reabilitaç ão Oral pela UNESP - Araraquara.
5 Douto ra em Biol ogi a e Patolo gia Buco-dental pel a FO P-UNI CAMP. Professora de Microbiologi a e Imunologi a da UEPG. 6 Douto ra em Dentístic a Restauradora pel a UNESP-Araraquara. Professora de Dentística Rest auradora da UEPG.
INT RODUÇÃO
Com o advento da técnica do condici onament o áci do do es malt e dental i ntroduzido por Buonocore (1955) e das resi nas compos tas por Bowen (1963), diversos sistemas adesivos t êm sido lançados no mercado odontol ógico e si do i ntensament e pes quisados. A mi croi nfiltração bact eriana é consi derada a princi pal caus a de cárie secundári a (MJ ÖR, 1997), infl amação p ulpar, necrose e a ev entual neces sidade para t erapia endodônti ca depois da confecção das rest aurações (BRANNSTROM ;NYB OR G,19 71; KHALICHI et al., 2009). O selamento bi ológi co dos preparos cavit ários, dest a forma, é consi derado críti co para o sucesso clíni co de uma restau ração. A aplicação de sist emas adesi vos diret amente na s uperfí ci e dentinária é uma m anei ra de produzi r uma estrutura resis tent e cont ra a i nvas ão de bact érias (S C HERER et al., 1990; AR ENDS, RUBEN; DIJKMAN, 1990). A microinfiltração marginal oco rre através de fendas nas rest aurações e para campos (2001) a fenda marginal depende diret amente dos sist emas ad esivos e da resi na utili zada. Anusavi ce (1998), entret anto, rel at a que a pres ença dessas fendas em restaurações de resina compost a depende da contração de polimerização e do coeficiente d e expans ão t érmi ca linear do materi al rest aurador.
Para dimi nuir a possi bilid ade de cári es s ecundárias é ideal que sist emas ad esi vos apres entem potencial antimi crobiano para serem utili zados na confecção d e r estaurações d ent árias (REIS et al., 2006; IMAZ AT O et al., 2003; De M UNCK et al., 2005). Dest a forma, muit os sist emas adesivos t êm acrescentado em s uas formulações agent es antibacterianos (JE DR YCHOW SKI et al., 1983; EVR ENOL
et al., 1999; C OHEN et al., 2003; AHN et al., 2009).
Segundo alguns autores es se efeit o antibact eri ano dos adesivos dentinários dep ende dos componentes que são originalmente i ncorporados para promover adesão, i ncluindo a efeti vidade de cada componente, a longevi dade da efeti vidade, a es pécie bact eriana a que s ão s ensíveis t ais agentes, a concent ração dos componentes e o mecanismo para inibir ou mat ar bact érias (IM AZAT O et al., 2003). Outros estudos, contudo, associ am o efeito anti mi crobiano ao baixo pH des ses produtos (MEIERS e MILLER, 1996; IMATAZ O, IMAI e EBIS U, 1998).
Di ante disso, torna-se im portante av ali ar a ati vidade antimi crobiana dos diferentes pri mers e adesivos dis ponívei s comercialmente. Sendo assi m, o propósit o dess e estudo foi avali ar in vitro, através do método de difus ão em ágar, a ativi dade antimi crobiana, de oit o pri mers e adesi vos, comumente utili zados na clíni ca o dontol ógica.
MATERI AL E MÉT ODOS
Os si stemas adesivos utilizados est ão dispostos no Quadro 1. O método empregado foi o da difusão em ágar Brain Hear t Infusion ( B HI). As pl acas foram s emeadas com p ool de S aliva Total dos pesquisadores, Streptococcus mutans, Candi da al bicans, Escheri chia coli e Staphilo coccus aureus (bact eriot eca da Uni versidade Est adual de Ponta Grossa). Depois de s emeadas as placas foram lev adas à estufa a 37º C durante 10 minutos. Em segui da, papéi s de filtro esterilizados foram embebi dos nos prim ers o u n os ad esivos para aqueles de dois fras cos, para verifi car quais dest es ou s e ambos apresentam ação anti mi crobiana e após foram deposi tados s obre a superfí cie do ágar, cuja placa est ava d evi damente demarcad a para que não houves se equívocos na i denti ficação dos res pectiv os sist emas adesi vos. Os adesivos foram poli meri zados de acordo com as i nst ruções dos fabri cant es por meio do aparel ho Optilgth 600/ Gnatus. Cad a mi croorganis mo foi s emeado em t rês placas, obtendo-se t rês amostras para cada mat eri al. As placas foram i ncubadas em est ufa a 37º C durant e 48 horas, s endo que apenas para o S. mut ans a incubação foi feita em mi croaerofilia antes de s er manti da em estufa por 48 horas. Após este perí odo observou-se a formação de halos de i ni bição do cres cim ent o mi crobiano (mm), os quai s foram medidos por meio de uma régua milim et rada.
Quadro 1- Mat eri ais utilizados na p res ente p esquis a
GRUPOS SISTEMA S ADESIVOS FAB RICANTES
G1 Clea rfil Protect Bond Kurar ay
G2 Clear fil SE Bond Kurar ay
G3 One Coat SE Bond Coltène/Whaledent
G4 One Coat Bond Coltène/Whaledent
G6 Tyri an SPE Bisco
G7 Prime&Bond 2.1 Dentsply
G8 One Step Plus Bisco
G9 Solução Fisiológica ---
.
RES ULT ADOS
O posto médio dos valores dos halos de i nibi ção formados para cada sist ema adesivo frente aos microorganis mos t est ados é most rado nas T abelas 1 a 5.
Tabel a 1 – Anális e estatística realizada por meio do Test e d e Kruskal-Wallis referente à comparação de sist emas adesivos sobre S. mutans.
Sistema Adesi vo G2 (pri mer) G1 (primer) G3 (pri mer)
Posto M édi o (mm) 3,67 4,67 6,67
H = 1,93 10 ; p = 0,3808 ; 2 G. L.
Tabel a 2 – Anális e estatística realizada por meio do Test e d e Kruskal-Wallis referente à comparação de sist emas adesivos sobre C. albicans.
G4 G2 (primer)
G1
(primer)
G3 (primer)
Posto M édi o (mm) 11,0 0 ( b) Sistem a Adesivo
G3 (adesi vo)
9,67 (b) 5,33 (ab)
H = 10, 7679 ; p = 0,0293 ; 4 G.L.
Postos Médios com l et ras mi núsculas distintas di ferem est atisti cam ente entre si (p < 0, 05)
Tabel a 3 – Anális e estatística realizada por meio do Test e d e Mann-Whit ney referente à comparação de sist emas adesivos sobre E. coli.
Sistema Adesivo G1(primer ) G3(pri mer )
Posto M édio (mm) 4,00 3,00
U = 3,000 0 ; p = 0,5127
Tabel a 4 – Anális e estatística realizada por meio do Test e d e Kruskal-Wallis referente à comparação de sist emas adesivos sobre S. aureus.
Sistema Adesivo G7 G5 G2 (adesi vo) G3 (adesi vo) G4 G2 (primer) G1 (primer) G3 (primer) Posto M édio (mm)
5,50 ( a) 5,50 (a) 12,00 (ab) 6,67 (a) 11,83 (ab)
20,67 (b) 22,33 (b) 15,5 0 ( ab)
Postos Médios com l et ras mi nús culas distint as di ferem est ati sti cam ente entre si (p < 0, 05)
Tabel a 5 – Anális e estatística realizada por meio do Test e d e Kruskal-Wallis referente à comparação de sist emas adesivos sobre microorganis mos da Saliva Total.
Sistema Adesi vo G2 (primer) G1 (pri mer) G3 (primer)
Posto M édi o (mm) 3,50 7,67 3,83
H = 4,4754 ; p = 0,10 67 ; 2 G.L.
Apen as os pri mers do s sist emas adesivos Cl earfil Protect Bond, Cl earfil S E Bond e One Coat SE Bond apres entaram a formação de halos de inibi ção contra os mi croorganismos da Saliva Total e S. mut ans. Os pri mers dos Cl earfil P rot ect B ond e One Coat S E Bond t ambém apresentaram halos inibit óri os para os mi croorganismo s Escheri chia coli e St aphilo coccus aureus.
O si st ema adesivo One Co at Bond apres entou maiores hal os de ini bi ção cont ra Candi da albicans, seguido respectiv amente pel o One Co at SE B ond (adesi vo) e pelo p rimer do Cl earfil Protect Bond, mas essa diferença não foi estat isti camente signifi cante.
DIS CUSS ÃO
A mi croinfiltração b acteriana é consi derada a pri ncipal caus a da i nfl amação pulpar, necrose e a eventual necessidade para t erapia endodônti ca após a confecção de rest aurações (BR ANNSTRÖM; NYB ORG, 1971) e o s el amento biológico do preparo em denti na é considerado crítico para o s ucesso clínico d e um a restauração.
Apesar da considerável melhora nos últi mos anos dos mat eriai s odont ológicos, a formação de gaps na int erface dente/restauração continua a s er um problema associ ado às rest aurações em resi na compost a (KENSHIMA et al., 2006). A pobre adaptação à substânci a dentári a pode predispor à descol oração e colonização bact eri ana (R OULET E NOAC K, 1991).
Em estudos da composi ção das pl acas bacterianas, diversas es pécies de bact éri as t em si do encontradas e as soci adas a cárie dentári a, dentre eles o Streptoco ccus mutans (ALEXAN DER; CAW SON, 1998; HOSHINO, 1985; B EIGHT ON E LYNC H, 1995).
Para mi nimi zar essa mi croinfilt ração alguns sist emas adesivos comercial mente disponíveis (por ex.: Optib ond / Kerr, Syntac Sin gle Component / Vi vadent, Prime & Bo nd / Dents ply, Perma Qui ck / Ultradent, Sy ntac / Vi vadent, Gluma / B ayer, Pro Bond / Dentsply) t êm apres ent ado em s ua composi ção agentes anti mi crobianos como o 12-met acriloilo xidecypyri dinium bromide (M DP B), fl úor ou glut araldeído. A ativid ade antimi crobiana, entret anto, não tem si do associada apenas a es s es fatores, mas também à acidez d os sist emas adesivos (NCCLS, 2006).
Nest e estudo foi observada u ma diferença no efeit o antim icrobiano nos vári os sist emas ad esi vos avali ados. Quando primers e adesi vos est ão dispostos em dois fras cos, para verificar a ati vidade anti mi crobi ana de cad a um, t est ou-s e primers e adesivos s eparadamente com o propósito de verificar se nest es sist emas havi a di ferença na ati vidade i nibit óri a mi crobiana d estes produtos. Foi observado que o efei to antimi crobiano variou t anto em rel ação aos primers e adesivos, que apresent aram efeitos variados, quanto em rel ação ao ti po de esp éci e bact eriana. C omo foi o caso dos prim ers dos si st emas adesi vos Clearfil SE Bond, Clearfil Protect Bond e One C oat SE Bond que foram os únicos agentes que apres ent aram efeit o anti microbi ano sobre os mi croorganismos da saliva t ot al e S. m utans. No primer e adesivo do sistema One Coat SE B ond foi obs ervado efeito anti mi crobiano sobre C andida albi cans e
Staphilo coccus a ureus. O efeit o antimicrobi ano d os primers e dos adesivos está relaci onado com o b aixo
pH dest es materi ais ( pH ≤ 2), visto que as bact érias não sobrevivem em pH extremament e bai xos (MARSH; M ART IN, 1992), t endo as sim, potencial para mat ar ou inati var as bactéri as. Al ém diss o, a pres ença do fos fatado metacriloxi deci dihidrogenase no pri mer do produto Clearfil SE Bond, pode t er cont ribuído p ara a di minuição da ati vidade antimi crobiana dest e produto.
O si st ema adesivo Cl earfil P rot ect Bond foi l ançado como sendo uma nova era dos agent es adesivos aut ocondicionantes contendo um monômero funcional MDPB no primer e flúor no adesi vo. O MDPB é um agent e antibact eri ano que possui em sua composi ção amônia quat ernária com um grupo
met acril oxil, e mo stra ati vidad e anti mi crobian a cont ra st rept ococcus o rais (IM AZATO et al, 1994, 1995; LI et al., 2009). Nest e est udo, todavia, o primer apresentou efeito in ibit ório sobre as bactérias t estad as, contudo, não foi est atisti camente diferente do One Coat SE B ond. Provavelmente, o efeito antimi crobiano do Cl earfil P rot ect Bond est ej a rel aci onado com o MDPB. De acordo com LI et al., em 2009, es te efeito pode também ter sido provocado pel a liberação d e compos tos não reagidos, como o flúor e o monômero de amônia quaternária com um grupo met acriloxil, que s ão agentes catiônicos, que causam uma mu dan ça negativa na superfíci e da bact éria, caus ando danos na membrana celular e danos i rreversíveis aos constituint es do citopl as ma.
Os adesivos convenci onai s de fras co úni co: Pri me & B ond 2.1 e Si ngle Bon d apres ent aram algum efei to antimi crobiano contra Staphilo coccus aureus, mas est e foi pequeno, evidenci ando q ue o us o destes produtos devem s er reconsiderados q uando o o bj etivo for de inibir ou di minuir a proli feração d e es pécies bact erianas.
Os result ados obtidos nesta pes quis a sugerem que os diferentes sist emas adesi vos apres entam habili dad es disti ntas para prevenir ou limitar o cresci ment o b act eri ano, sendo necess árias mais pes quisas e est udos para verificar o efeito antim icrobiano de sist emas adesi vos para que s e poss a predizer o período de t empo que os componentes permanecerão ativos e s e est es dado s podem s er extrapol ados para o ambient e bucal.
CONCL US ÃO
De acordo com a metodologi a empregada, concluiu-s e que:
- Os sist emas adesivos t estados apres ent aram di ferentes comport ament os in vit ro
- Os primers dos sistemas adesi vos Cl earfil Prot ect B ond e One Coat S E B ond apresentaram ação anti mi crobi ana s obre todos os mi croorganism os t estados, apresentando os mel hores d es empenhos i n v itro na present e p esquisa.
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