ELETROFORESE CAPILAR PRINCÍPIOS E A PLICAÇÕES APLICAÇÕES PROF. MARCONE AUGUST

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ELETROFORESE CAPILAR

PRINCÍPIOS E APLICAÇÕES

PROF MARCONE AUGUSTO LEAL DE OLIVEIRA PROF. MARCONE AUGUSTO LEAL DE OLIVEIRA

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EXPERIMENTO DE TISELIUS (1937)

Separação de parcial de proteínas constituintes do soro sanguíneo (Prêmio Nobel de 1948)g ( )

2 4 239 . 0 r k Q T ⎟ ⎠ ⎞ ⎜ ⎝ ⎛ = Δ ⎠ ⎝ ΔT – diferença entre o

centro e a parede do tubo

Q d id d d tê i

Q – densidade de potência

(Watts/m3₎

K – condutividade térmica r – raio do tubo

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1930 FRONTEIRA MÓVEL A. TISELIUS

1948 PRÊMIO NOBEL Uppsala University, Suécia

Colunas de 300 μmμ S. HJERTÉN

Uppsala University, Suécia

1979 Capilares de 100 μm F. M. EVERAERTS

Separação de 16 ânionsp ç Eindhoven University of Technology, Holanday gy,

1981 Capilares de 75 μm J. JORGENSON

FSCE – teoria simplificada University of North Carolina, EUA

LIF d t t d R ZARE

LIF – detector de R. ZARE

fluorescência Stanford University, EUA

induzida por laser E. YEUNG

Iowa State University, EUAy,

Detectores E. EWING

Eletroquímicos Pennsylvania State University, EUA

1984 MEKC S TERABE

1984 MEKC S. TERABE

Kyoto University, Japão

1986 INSTRUMENTOS COMERCIAIS

1987 CGE B. KARGER

Northeastern University, EUA

1991 CEC KNOX e GRANT

separação de HPA´s University of Edinburg, Escócia

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(5)

(6)

INSTRUMENTAÇÃO

1-Fonte de alta tensão 2-Eletrodos

6-Compartimento estabilizado termicamente

3-Reservatórios para eletrólito e amostra

4-Capilares 5-Injeção 6-Compartimento estabilizado termicamente 4-Capilares

7-Detectores 5-Injeção

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PROPRIEDADES DO CAPILAR

- sílica fundida (dióxido de silício amorfo SiO₂) revestido com poliimida ou acrilamida (15 µm);

com poliimida ou acrilamida (15 µm);

- dimensões precisas (25 a 75 µm d.i. x 330 µm d.e.); alta constante dielétrica;

- alta constante dielétrica;

- baixa condutividade elétrica; resistência mecânica;

- resistência mecânica; - maleabilidade;

resistência ao ataque químico; - resistência ao ataque químico;

- alta transmissão óptica para um intervalo apreciável de

i t d d (190 990 )

comprimento de onda (190 a 990 nm);

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Si OH O SILANOL SÍLICA FUNDIDA O Si O Si O O H silanóis vicinais (ponte de hidrogênio) Si O Si O O H (ponte de hidrogênio) Si OH + H₂O Si O Si O O Si O Si silanol dissociado pK_a = 5,9 Si O Si O O: Si O Si SILOXANO Si O- + H+ O Si O Si OH silanol isolado Si O H O OH Si OH silanóis geminais OH SUPERFÍCIE SOLUÇÃO

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MODOS

DE

Ã

INJEÇÃO

h HIDROSTÁTICA vácuo h P + ELETROCINÉTICA +

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DETECTORES UTILIZADOS EM CE

Limites de detecção aproximados Limites de detecção aproximados

Detector

NNoo _{de Mol}_{de Mol} _Molaridade*_Molaridade*

Detector

NNoo _{de Mol}_{de Mol} _Molaridade_Molaridade

Absorvância no UV/vis Absorvância no UV/vis 1010--1313 –– 1010--1616 1010--55 –– 1010--77 Absorvância indireta Absorvância indireta 1010--1212 –– 1010--1515 1010--44 –– 1010--66 Fluorescência Fluorescência 1010--1515 –– 1010--1717 1010--77 –– 1010--99 Fluorescência indireta Fluorescência indireta 1010--1414 –– 1010--1616 1010--66 –– 1010--88 fluorescência induzida por laser

fluorescência induzida por laser 1010--1818 –– 1010--2020 1010--1313 –– 1010--1616

16 16 1717 88 1010 Espectrometria de massas Espectrometria de massas 1010--1616 –– 1010--1717 1010--88 –– 1010--1010 Amperometria Amperometria 1010--1818 –– 1010--1919 1010--77 –– 1010--1010 Condutividade Condutividade 1010--1515 1010--1616 1010--77 1010--99 Condutividade Condutividade 1010--1515 –– 1010--1616 1010--77 –– 1010--99 Índice de refração Índice de refração 1010--1414 –– 1010--1616 1010--66 –– 1010--88 10 10 1717 ₁₀₁₀ 1919 ₁₀₁₀ 1010 ₁₀₁₀ 1212 Radiométrico Radiométrico 1010--1717 –– 1010--1919 1010--1010 –– 1010--1212

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I

_T

0

Fonte de luz Capilar Fotodetector

abc

A

=

log

1 =

abc

T

A

= log

=

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(14)

(15)

MOBILIDADE ELETROFORÉTICA

E

+ +

-+ e Fr a Fr +

-E

Z

F

6 F

_atrito

6 π

η

r

_i

v

_i

F

_elétrica

=

Z

_i

e

E

F

=

E

v

μ

i

=

Mobilidade do íon correspondente a sua velocidade _{limite v}

i em um campo elétrico de valor unitário

i

e

q

Z

i i i

e

E

6 π

η

r

v

Z

=

i i i i

r

η

π

6 q

r

η

π

6 e

Z

μ

=

(16)

B A C Injeção

-

+

Comprimento efetivo i

e

q

Z

Detector i i i i

r

η

π

6 q

r

η

π

6 e

Z

μ

=

mAu i i

η

Tempo, min www.ceandcec.com/meekc.htm

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MOBILIDADE ELETROOSMÓTICA-FLUXO NORMAL OHP PLANO DE CISALHAMENTO

-IHP E S ÍC SOLUÇÃO

+

SUPERFÍCIE CAMADA COMPACTA CAMADA DIFUSA

+

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Detector

mAu

Detector

Injeção

μ

_osm Tempo, min

+

-+

-μ μosm + ef μ μosm

v

_obs

v

b

v

_obs

=

v

_osm

v

-ef μ μosm obs

v

(19)

A

C

B

A

H

_x

B

x

Cu

u

A

H

=

+

C

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q

μ

i ef

r

η

π

6 q

μ

=

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Simultaneous determination of first-line anti-tuberculosis drugs

b ill l t h i i di t UV d t ti

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(23)

Simultaneous separation of five fluoroquinolone antibiotics by

ill l t h i

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(25)

Determination of Losartan Associated with Chlorthalidone or

H d hl thi id i C l b C ill Z El t h i

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(27)

Simultaneous analysis of spartame, cyclamate, saccharin and

lf K b CZE d UV d t ti

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An alternative method for rapid quantitative analysis of

j it i t f tt id b CZE

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Standard fatty acid electropherogram of (1) C18:0, (2) C18:1 9t, (3) C18:1 9c, (4) C16:0, (5) C18:2cc, (6) C18:3ccc, (7) C13:0 (PI), all with concentration of 0.50 mmol

L-1. B- Soy Oil, C- Olive Oil, D- Butter, E- Margarine, F- Filled Cookie, y , , , g , ,

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A Rapid Method for Total Β-Escin Analysis in Dry, ydroalcoholic A Rapid Method for Total Β Escin Analysis in Dry, ydroalcoholic

and Hydroglycolic Extracts of Aesculus hippocastanum L. by Capillary Zone Electrophoresis

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