Braz. j. . vol.83 número4

(1)

www.bjorl.org

Brazilian

Journal

of

OTORHINOLARYNGOLOGY

ARTIGO

ORIGINAL

Sulfated

glycosaminoglycans

in

human

vocal

fold

lamina

propria

夽

Sung

Woo

Park

a

,

Gustavo

Polacow

Korn

a

,

Elsa

Yoko

Kobayashi

b

,

João

Roberto

Maciel

Martins

b,c,∗

e

Noemi

Grigoletto

De

Biase

a,d,∗

a_Universidade_Federal_de_São_Paulo_{(UNIFESP/EPM),}_Escola_Paulista_de_Medicina,_Departamento_de_{Otorrinolaringologia}_e

CirurgiadeCabec¸aePescoc¸o,SetordeLaringeeVoz,SãoPaulo,SP,Brasil

b_Universidade_Federal_de_São_Paulo_{(UNIFESP/EPM),}_Escola_Paulista_de_Medicina,_Departamento_de_Bioquímica,_Divisão_de

BiologiaMolecular,SãoPaulo,SP,Brasil

c_Universidade_Federal_de_São_Paulo_{(UNIFESP/EPM),}_Escola_Paulista_de_Medicina,_Departamento_de_Medicina,_Divisão_de

EndocrinologiaeMetabologia,SãoPaulo,SP,Brasil

d_Pontifícia_Universidade_Católica_de_São_Paulo_(PUC-SP),_São_Paulo,_SP,_Brasil

Recebidoem5demaiode2016;aceitoem10demaiode2016 DisponívelnaInternetem12deabrilde2017

KEYWORDS Larynx;

Glycosaminoglycans; Vocalfolds

Abstract

Introduction:Thedistribution,concentrationandfunctionofglycosaminoglycansinthevarious vocalfoldtissuesarestillunclear.

Objective:Toevaluate thedistributionandconcentrationofsulfated glycosaminoglycansin differentlayersofthehumanvocalfoldaccordingtogenderandage.

Methods:Weused11vocalfoldsobtainedfromcadavers(7menand4women)withnolaryngeal lesion,lessthan12hafter death,andagedbetween35 and98years.Thefolds underwent glycosaminoglycansextractionfromthecoverandligament,andpost-electrophoresisanalysis. Datawerecomparedaccordingtothelayer,ageandgender.

Results:Theconcentrationofdermatansulfatewassignificantlyhigherinalllayers.No dif-ferenceswere observed inthetotal concentrations ofglycosaminoglycansinlayersstudied accordingtogender.Itissignificantlylowerinthecoverofindividualsagedbelow60years.

Conclusion:Dermatansulfate,chondroitinsulfate,andheparansulfatewereobservedinthe humanvocalfoldscover andligamentofbothgenders,with theconcentration ofdermatan sulfatebeingsignificantlyhigherinalllayers.Glycosaminoglycansconcentrationonthecover issignificantlylowerinindividualsbelow60yearscomparedwithelderly.

© 2016 Associação Brasileira de Otorrinolaringologia e Cirurgia Cérvico-Facial. Published by Elsevier Editora Ltda. This is an open access article under the CC BY license (http:// creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

DOIserefereaoartigo:http://dx.doi.org/10.1016/j.bjorl.2016.05.003

夽 _Como_citar_este_artigo:_Park_SW,_Korn_GP,_Kobayashi_EY,_Martins_JR,_De_Biase_NG._Sulfated_{glycosaminoglycans}_in_human_vocal_fold_lamina

propria.BrazJOtorhinolaryngol.2017;83:426---31. ∗_Autores_para_{correspondência.}

E-mails:jrmacmartins@yahoo.com.br(J.R.Martins),ngdebiase@gmail.com(N.G.DeBiase).

(2)

PALAVRAS-CHAVE Laringe;

Glicosaminoglicanas; Pregasvocais

Glicosaminoglicanossulfatadosnalâminaprópriadepregavocalhumana

Resumo

Introdução: Adistribuição,concentraçãoefunçãodosglicosaminoglicanosnosdiversostecidos dapregavocalaindanãoestáesclarecida.

Objetivo: Avaliaradistribuic¸ãoeconcentrac¸ãodosglicosaminoglicanossulfatadosnas diferen-tescamadasdapregavocalhumanadeacordocomosexoeaidade.

Método: Foramusadas11pregasvocaisobtidasdecadáveres(setehomensequatromulheres) semlesãodelaringe,commenosde12horasdeóbitoeentre35e98anos.Aspregasforam sub-metidasàextrac¸ãodeglicosaminoglicanosdacoberturaeligamentoeleiturapós-eletroforese. Osdadosforamcomparadossegundocamada,idadeesexo.

Resultados: A concentração de dermatan sulfato foi significativamente maior em todas as camadas.Nãoforamobservadasdiferenças nasconcentraçõestotais deglicosaminoglicanos nascamadasestudadasquantoaogênero.Ésignificantementemenoremindivíduosabaixode 60anosnacobertura.

Conclusão:Dermatamsulfato,condroitimsulfatoeheparamsulfatoforamobservadosna cober-turaenoligamentodepregasvocaishumanas, deambosossexos,sendoaconcentraçãode dermatamsulfatofoisignificativamentemaioremtodasascamadas.Aconcentraçãode glico-saminoglicanosnacoberturaésignificativamentemenoremindivíduosabaixode60anosem comparaçãocomidosos.

© 2016 Associação Brasileira de Otorrinolaringologia e Cirurgia Cérvico-Facial. Publicado por Elsevier Editora Ltda. Este é um artigo Open Access sob uma licença CC BY (http:// creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Introduc

¸ão

Aspregas vocaissãoadaptadasparaafunc¸ãodefonac¸ão.

A vibrac¸ão das pregas vocais depende de sua estrutura

histológica, especialmente da lâmina própria (LP), que é

estratificada na região da borda livre em três camadas:

superficial, intermediária e profunda. Todas são

compos-tasporcélulasematrizextracelular,diferemqualitativae

quantitativamenteentresi,principalmente quantoàs

pro-teínas fibrosas (fibras elásticas e colágenas) e proteínas

intersticiais.1

Entre as proteínas intersticiais destacam-se os

gli-cosaminoglicanos (GAGs), os proteoglicanos (PG) e as

glicoproteínas nãocolagênicas. Essas controlam a

viscosi-dade, a hidratac¸ão e o volume tecidual.2,3 _As _diferenc_¸as

nosarranjosenasquantidadesdoscomponentesdamatriz

extracelulare,ainda,asdiferentesinterac¸õesdesses

com-ponentesentresiecomascélulassãoadaptac¸õesdinâmicas

àsdemandasfuncionaisdecadatecido.4---6_No_caso_das

pre-gas vocais,essademandafuncional éa produc¸ão daonda

mucosa e, consequentemente, a vibrac¸ão do tecido e a

formac¸ãodaondasonora.7

Pawlaketal.2_foram_os_primeiros_a_estudar_os_PGs_e_GAGs

naLPdepregasvocais.Foiverificadaaexpressãode

recep-tordeácidohialurônico(AH),queratamsulfato,condroitim

sulfato,PGdeheparamsulfatoedecorimemváriasregiões,

bemcomoostiposcelularesnaLP.

Paulsen et al.8 _observaram_diminuic_¸ão _dos _GAGs

sulfa-tadosnostendões (extremidades)doligamento vocal.Foi

também observada uma perda mais acentuada de GAGs

no tendão do ligamento vocal com o processo de

enve-lhecimento. Dessa forma, essas estruturas perdem a sua

capacidade de reter água e a viscoelasticidade da prega

vocal é comprometida. Hammond et al.,9 _por _meio _de

método indireto, compararam o tecido incubado ou não

comhialuronidaseeobservaramqueaconcentrac¸ãodeAH

na LP foi maior no sexo masculino em relac¸ão ao

femi-nino.A distribuic¸ão também variou conforme ascamadas

eosexo,foimaisuniformementedistribuídanosexo

mas-culinoemaisconcentradanascamadasprofundasnosexo

feminino.10_Com_o_método_direto,_Lebl_et_al.11_e_Korn_et_al.12

verificarammaiorconcentrac¸ãodeAHnaLPdosexo

femi-ninoem relac¸ão aomasculinoe tendênciaadiminuircom

oenvelhecimento.Comoa hialuronidasebovinatesticular

nãoéespecíficaparaAH,podeterdegradadooutrosGAGs

presentes na LP, como condroitin sulfato, o que

explica-ria a diferenc¸a encontrada nos dois estudos,se houvesse

tambémdiferenc¸anasconcentrac¸õesdasdemaisproteínas

intersticiais.

O conhecimento da distribuic¸ão e concentrac¸ão das

macromoléculas intersticiais, que têm especificidades e

característicasdiversas,nascamadasdaLPfuncionalmente

estratificadas trará auxílio na compreensão da fisiologia

normaldafonac¸ão,doenvelhecimento,bemcomonos

pro-cessospatológicoscomalterac¸ãodaondamucosa.

Assim,oobjetivodesteestudofoiverificaradistribuic¸ão

e a concentrac¸ão dos glicosaminoglicanos sulfatados nas

diferentescamadasdaprega vocal deacordo com osexo

eaidade.

Método

Estudoexperimentalprospectivo

Foram usadas 11 pregas vocais obtidas em necropsias de

(3)

laringeenvolvidaemcausamortis,commenosde12horas

de óbito e entre 35 e 98 anos. O projeto foi aprovado

pelo Comitê de Ética em Pesquisa de uma universidade

(CEP1203/07).Aslaringesforamremovidasdoscadáverese

transportadasemrefrigerac¸ãoatéolaboratório,ondeforam

dissecadas.Aspec¸asforamavaliadascomousodecâmerae

sistemadevídeocomaumentode25vezeseforam

excluí-dasaquelasnasquaisforamobservadasquaisquerlesõesou

alterac¸õesestruturais, taiscomo pólipos,sulcosou

leuco-plasias.

Foiusadaaleatoriamenteumapregavocaldecada

indi-víduo,queforamsubmetidasàdecorticac¸ãocomauxíliodo

sistemadevídeo.Foramisoladostrêsfragmentos:cobertura

(epitélioecamada superficialdaLP),ligamento(camadas

intermediáriaeprofundadaLP)emúsculo.Desses, foram

usadosacoberturaeoligamento.

Para a extrac¸ão de GAGs dos tecidos, o fragmento da

camada da prega vocal foi picotado com bisturi,

homo-geneizado e desidratado em acetona, por 18 horas, em

temperaturaambiente.Emseguida, oexcessodeacetona

foi removido por centrifugac¸ão, 4.000× g, 15 minutos,

e o precipitado secado em estufa. Para cada 1mg de pó

secoforamadicionados100␮Lde maxatase4mg/mL em

Tris-HCl 0,05M+NaCl 1M, Ph 8 e incubado a 60◦_C, _por

18 horas. Após a incubac¸ão, a protease foi inativadapor

aquecimento a 100◦_C, ₂₀ _minutos. _À _soluc_¸ão _foi

adicio-nado,emrefrigerac¸ão,ácidotricloroacético90%parauma

concentrac¸ãofinalde10%.Asoluc¸ãofoihomogeneizadae

deixadaa4◦_C_por₁₀_minutos._Após_esse_período,_seguiu-se

centrifugac¸ãoa4.000×g,por15minutos.Osobrenadante

foiseparadoeadicionou-seetanolabsoluto(trêsvolumes);a

soluc¸ãofinalfoimantidaa-20◦

C,porpelomenostrêshoras.

Seguiu-secentrifugac¸ãoa10.000× g,30minutos,eo

pre-cipitadoobtidofoisecadoavácuoeguardadoa-20◦_C_até

asanálises.13,14

Em seguida, o precipitado obtido nos procedimentos

anterioresfoinovamentesuspensoemáguadestilada(10␮L

para cada 1 mg de tecido seco) e 5 ␮L dessa soluc¸ão

foramaplicadosemlâminadegeldeagarose,tampão

1,3-diaminopropanoacetato,pH9,esubmetidosaeletroforese

(5V/cm, umahora, em refrigerac¸ão) para separac¸ão dos

diversosGAGs.10,11_Como_padrão,_foi_usada_mistura_de_GAGs

1␮g/mL(heparamsulfato+dermatamsulfato+condroitim

sulfato).Apósaeletroforese,ogelfoisecadosobventilac¸ão,

emtemperaturaambiente,ecoradocomazuldetoluidina

0,1% em ácido acético 1% e etanol 50%. Após 10

minu-tos,o gel foi descoradocom soluc¸ão deácido acético 1%

eetanol 50%esecado em temperaturaambiente;as

ban-dasobtidasforamquantificadaspordensitometria(fig.1).

Aconcentrac¸ão dosGAGsfoi expressaem ␮g/gdetecido

seco.15

Os dados foram submetidos a análise estatística. Para

comparar os valores da concentrac¸ão de GAGs quanto

ao sexo e à faixa etária foi usado o teste não

para-métrico de Mann-Whitney. Para comparar os valores da

concentrac¸ão de GAGs nas diferentes camadas da prega

vocalfoiusadootestenãoparamétricodeWilcoxon

pare-ado. Foram feitas as estatísticas descritivas da variável

quantitativa:concentrac¸ãoporcamadapormeiodamédia

emediana;edesviospadrãomínimoemáximoparaapontar

a variabilidade. Também foi usada a análise de variância

com medidas repetidas (univariada), pois as observac¸ões

CS -

DS -

HS -

Figura1 Bandasobtidasapóscoloraçãocomazuldetoluidina 0,1%emácidoacético1%eetanol50%soluçãoedescoloração com ácido acético 1% e etanol 50% que foramquantificadas pordensitometria. Opadrãoencontra-se àesquerdada ima-gem(seta).CS,condroitimsulfato;DS,dermatamsulfato;HS, heparamsulfato.

nas diferentes camadas sãorelativas a um mesmo

indiví-duo. Para a comparac¸ão daconcentrac¸ão dos GAGsentre

as camadas da prega vocal, a matriz de covariância das

observac¸ões deummesmo indivíduodevia terumaforma

específica. Quando essa forma específica não foi

encon-trada e devido ao pequeno tamanho da amostra o teste

foi corrigido com base na correc¸ão de Huynh-Feldt. Para

identificaçãodasdiferençasentreasconcentrações,foram

feitas comparac¸ões duas a duas, com o teste de

Bonfer-roni.Foiverificadotambémsehouveexistênciadeinterac¸ão

(efeito de interac¸ão) nos resultados, ou seja,

comporta-mentos diferenciados em func¸ão de outra variável. Para

todosostestes foi consideradoo nível designificânciade

5%(p≤0,05).

Resultado

Nopresenteestudo,foramavaliadaspregasvocais(PPVV)de

11indivíduos,quatrodosexofemininoesetedomasculino.

Cincoindivíduostinhamaté60anoseoutrosseis,maisde

60.

Emrelac¸ãoàconcentrac¸ãodeGAGssulfatados,nãofoi

observadadiferenc¸asignificativaentreacoberturaeo

liga-mento(tabela1).

Nas camadas cobertura e ligamento, em relac¸ão à

concentrac¸ão deGAGssulfatados quanto aosexo, nãofoi

observadadiferenc¸asignificativa(tabela2).

Nasdiferentescamadas,nacomparac¸ãodaconcentrac¸ão

de GAGs sulfatados quanto à faixa etária, foi observada

diferenc¸a significativa na cobertura. Pacientes acima de

60anosapresentaramvaloressignificativamentemaioresdo

quepacientesaté60(tabela3efig.2).

Aosecompararaconcentrac¸ãodeCS,DSeHSna

cober-turaenoligamento,observou-semaiorconcentrac¸ãodeDS

nasdiferentescamadas,porémsemdiferenc¸asignificativa

nacomparac¸ãoentreascamadas(tabelas4e5).

Atabela5 refere-seà concentrac¸ãode GAGsquantoà

(4)

Tabela1 Concentrac¸ãodeGAGsnacoberturaeligamento dapregavocal

Variáveis GAGs(␮g/gpesoseco)

Cobertura

Média±Desviopadrão 302,7±224,9 Mediana(Mínimo-máximo) 217,3(83,9-802,9)

Total 11

Ligamento

Média±Desviopadrão 379,3±198,6 Mediana(Mínimo-máximo) 322,5(117-681)

Total 11

p-valora _0,334

a_p_-valor_do_teste_não_paramétrico_de_Wilcoxon_pareado.

Aanáliseestatísticanãofoipossível,devidoaonúmerode pregasvocaisemcadacategoria.

Discussão

Algunscomponentesdamatrizextracelularnapregavocal sãomaisconhecidoseestudados,comoelastinaecolágenos, e,maisrecentemente,oAH.Noentanto,outros componen-tesdamatrizextracelular,comoGAGsePGs,nãotêmsido

GAGs (µg/g peso seco)

Até 60 anos

Faixa etária

250,0 500,0 750,0 1.000,0

Acima de 60 anos

∗

Camada superficial

Figura2 Box-plotdacoberturaporfaixaetária.

estudadosquantoasuafunc¸ãoe importânciana fisiologia dapregavocalhumana.

Assim, considerando a fisiologia da prega vocal na produc¸ãodevozeaspropriedadesdistintasjáconhecidas,

Tabela2 Concentrac¸ãodeGAGsquantoaosexonacoberturaeligamento

Variáveisporsexo F

GAGs(␮g/gpeso

seco)

M

GAGs(␮g/gpeso

seco)

p-valora

Cobertura

Média±Desviopadrão 346,8±307 277,5±187,4 0,571

Mediana(Mínimo-máximo) 224,4(135,7-802,9) 182,2(83,9-535,2)

Total 4 7

Ligamento

Média±Desviopadrão 490,1±222,3 316±167,9 0,257

Mediana(Mínimo-máximo) 554,9(169,7-681) 280,6(117-632,1)

Total 4 7

a _p_-valor_do_teste_não_paramétrico_de_{Mann-Whitney.}

Tabela3 Concentrac¸ãodeGAGsdeacordocomafaixaetárianoslocais:coberturaeligamento

Variáveisporfaixaetária Acimade60 anos

Até60anos p-valor

Cobertura

Média±Desviopadrão 436,6±226,6 141,9±54,7 0,018a

Mediana(Mínimo-máximo) 441,1

(182,2-802,9)

135,7 (83,9-231,4)

Total 6 5

Ligamento

Média±Desviopadrão 410,3±201,2 342,1±211,9 0,584

Mediana(Mínimo-máximo) 429,2

(117-632,1)

236,1 (169,7-681)

Total 6 5

(5)

Tabela4 Concentrac¸ãodeGAGs(CS,DSeHS)nasdiferentescamadasdapregavocal

Variáveisporconcentrac¸ão CS DS HS p-valora

Cobertura

Média±Desviopadrão 29,9±28,8 233,7±187,8 39,1±36,7 <0,001

Mediana(Mínimo-máximo) 19,1(0-82,5) 178,9(70,2-670,1) 27,2(0-110,5)

Total 11 11 11

Comparac¸õesmúltiplas

CS×DS 0,009

CS×HS 1,000

DS×HS 0,009

Ligamento

Média±Desviopadrão 45,6±54,4 273,8±119 60±55,3 <0,001

Mediana(Mínimo-máximo) 23,9(2,9-156) 289,2(103,5-444,3) 48,5(5,7-161,1)

Total 11 11 11

Comparac¸õesmúltiplas

CS×DS 0,009

CS×HS 1,000

DS×HS 0,009

p-valorb _0,477 _0,374 _0,657

a_p_-valor_do_teste_não_paramétrico_de_Wilcoxon_pareado.

b _Comparac_¸ões_múltiplas:_p_-valor_do_teste_não_paramétrico_de_Wilcoxon_pareado.

opresenteestudoverificouapresenc¸aeaconcentrac¸ãode

GAGssulfatadosnapregavocalhumana:nacobertura,onde

predominaacamadasuperficialdalâminaprópria,eno

liga-mento.Acoberturaeoligamentotêmfunc¸õesdistintasna

formac¸ãodaondamucosa,bemcomoconstituic¸ão

histoló-gicacaracterísticaemrelac¸ãoaproteínasfibrosas,elastina

ecolágeno.1,7 _A_separac_¸ão_entre_cobertura_e_ligamento,_e

entreligamentoemúsculo,ésegurapormeiodedissecc¸ão

comvisãoampliada.

Aconcentrac¸ãototaldeGAGssulfatadosfoicomparada

nasdiferentescamadasemostroudistribuic¸ãosemelhante

(tabela1).Tambémnãohouvediferenc¸asignificativa

consi-derandoasdiferentescamadaseosexo(tabela2).Outros

autores, embora com método diferente, sem separac¸ão

emcamadas,tambémnãoobservaramdiferenc¸anosGAGs

totaisemrelac¸ãoaosexo.16,17

Considerando a faixa etária, no entanto, foi

obser-vada diferenc¸a estatisticamente significativa entre as

concentrac¸ões dosGAGs na cobertura,com maiores

valo-res em indivíduos acima de 60 anos (tabela 3). A maior

concentrac¸ãodeGAGsemidosospodetambémestar

relaci-onadaàdiminuic¸ãodeoutrassubstânciasempregasvocais,

como o próprioAH, conforme observadopor Leblet al.11

e Korn et al.,12 _pois _a _sua _concentrac_¸ão _é _calculada _em

termos de ␮g/peso seco do material da prega vocal. No

ligamentonãohádiferenc¸aestatisticamentesignificantena

concentrac¸ãodeGAGs,sejaconsiderandoosexoouaidade

(tabelas2e 3).Paulsen etal.8_observaram_diminuic_¸ão_dos

GAGssulfatadosnostendõesdoligamentovocal,istoé,nas

extremidadesdoligamento,bemcomoperdamais

acentu-adadeGAGsnotendãodoligamentovocalcomoprocesso

deenvelhecimento.

Tabela5 Concentrac¸ãodeGAGsquantoasexoefaixaetárianoslocais:coberturaeligamento

Sexofeminino Sexomasculino

Até60anos Acimade 60anos

Cobertura

Média±Desviopadrão 183,6±67,7 510,1±414,1 114,2±28,5 399,9±151,9 Mediana(Mínimo-máximo) 183,6

(135,7-231,4)

510,1 (217,3-802,9)

118,2 (83,9-140,5)

441,1 (182,2-535,2)

Total 2 2 3 4

Ligamento

Média±Desviopadrão 425,4±361,5 554,9±26,7 286,6±113,4 338±215,2 Mediana(Mínimo-máximo) 425,4

(169,7-681)

554,9 (536-573,8)

236,1 (207,1-416,4)

301,5 (117-632,1)

(6)

Hammond et al.,9 _em _um _estudo _que _relacionava _a

concentrac¸ãodeelastinaobservadaem pregasvocaiscom

aidadeegênero,nãoencontraramdiferenc¸aexpressivaem

termos de sexo, mas umadiferenc¸a importante e

signifi-cativapôdeservistaquantoàidadedospacientes.Pregas

vocaisdeadultosmostravamelastinaemquantidademenor

do que a da populac¸ão idosa. No entanto, esse aumento

em densidadedeelastina nãosignificavanecessariamente

aumentodaelasticidadedapregavocal,poisasfibras

obser-vadasnosidososapresentavamestruturaalterada.

Assim, a modificac¸ão na estrutura de elastinas e na

concentrac¸ãodeAHedeGAGssulfatadospodeestar

rela-cionada ao envelhecimento do tecido, com consequente

repercussãonaproduc¸ãodaondamucosaevoz.

QuandocomparadosseparadamenteostrêstiposdeGAGs

(condroitim,heparame dermatamsulfato) entrea

cober-turaeoligamento,nãohouvediferenc¸asignificante.Porém,

tantonacoberturacomonoligamento,acomparac¸ãoentre

os tipos de GAGs evidenciou de modo significante maior

concentrac¸ãodedermatamsulfato(tabelas4e5).Pawlak

et al.2 _fizeram _estudo _sobre _a _presenc_¸a _e _distribuic_¸ão

de GAGs e proteoglicanos na prega vocal com anticorpos

antiqueratamsulfato,antiproteoglicanosdeCS,

antiprote-oglicanosdeHSeantidecorin.Osdadosforamquantificados

segundo colorac¸ão comparada com amostra de pele

nor-mal,em 0---3+. Osautoresobservaramqueratam sulfatoe

decorin(quepodeseligarcovalentementeaQSouDS)em

componentesfibrilaresdalâminaprópria.Decorincom

pre-domínionacamadasuperficial(2+)emrelac¸ãoàscamadas

profundaseQSnasprofundasemrelac¸ãoàsuperficial.CS

foi observadoapenasem citoplasmade célulasdalâmina

própria (2+). Proteoglicanos de HS foram observados na

lâmina basal e nosvasos sanguíneos, bem como em

cito-plasma demacrófagose provavelmentefibroblastos(2+).

Diante dosresultados, osautoresassinalam para a

prová-velimportânciadafibromodulina(ligadacovalentementea

QSnascamadasprofundasedecorinnasuperficial,ambas

relacionadasàregulac¸ãodotipoetamanhodecolágeno

pro-duzido).OsautoresnãoestudaramDS,oGAGencontradoem

maiorconcentrac¸ãonopresenteestudo. Suapresenc¸aem

grandequantidadenasduas camadasdapregavocal deve

sermaisbementendida,bemcomoamaiorquantidadede

GAGsobservadacomoenvelhecimento.

Osdados dopresente estudosinalizam para a

necessi-dadedenovaspesquisascommaiornúmerodeindivíduos,

enãoapenasdeGAGssulfatados,bemcomodosdiferentes

tiposdePGsformadosdesualigac¸ãoàsdiversasestruturas

proteicas,parao entendimentodafunc¸ãodecada GAGe

PGnafisiologiadapregavocalenquantofontesonora.

Conclusão

1. Dermatamsulfato,condroitimsulfatoeheparamsulfato

foramobservadosna coberturae noligamento de

pre-gas vocais humanas, de ambos os sexos, sendo que a

concentrac¸ãodedermatamsulfatofoisignificativamente

maioremtodasascamadas.

2. Não foram observadas diferenc¸as significantes nas

concentrac¸ões dos GAGs sulfatados entre cobertura e

ligamento,segundoosexo.

3. A concentrac¸ão de GAGs na cobertura é

significativa-mente menor em indivíduos abaixo de 60 anos, em

comparac¸ãocomidosos.

Conflitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconflitosdeinteresse.

Referências

1.HiranoM.Phonosurgery:basicandclinicalinvestigations. Oto-logia(Fukuoka).1975;21:239---440.

2.Pawlak AS,HammondT, HammondE,GraySD. Immunocyto-chemicalstudyofproteoglycansinvocalfolds.AnnOtolRhinol Layngol.1996;105:6---11.

3.Gray SD, Titze IR, Chan R, HammondTH. Vocal fold prote-oglycans andtheirinfluence onbiomechanics.Laryngoscope. 1999;109:845---54.

4.KieltyCM,WhittakerSP,GrantME,ShuttleworfCA.TypeIV col-lagenmicrofibrils: evidencefor a structural association with hyaluronan.JCellBiol.1992;118:979---90.

5.IozzoRV.Matrixproteoglycans:frommoleculardesignto cellu-larfunction.AnnuRevBiochem.1998;67:609---52.

6.JacksonRL,BuchSJ,CardinAD.Glycosaminoglycans: molecu-lar properties,protein interactions,and roleinphysiological processes.PhysiolRev.1991;71:481---539.

7.GraySD,TitzeIR,AlipourF,HammondTH.Biomechanicaland histologicalobservationsofvocalfoldfibrousprotein.AnnOtol RhinolLaryngol.2000;109:77---85.

8.Paulsen F,KimpelM,Lockemann Ute, Tillmann B.Effects of ageing on theinsertion zonesof human vocal fold. J Anat. 2000;196:41---54.

9.HammondTF, ZhouR, HammondEH,PawlakA,GraySD.The intermediatelayer:amorphologicstudyofelastinand hyalu-ronicacidconstituentsofnormalhumanvocalfolds.JVoice. 1997;11:59---66.

10.ButlerJE,HammondTH,GraySD.Genderrelateddifferencesof hyaluronicaciddistributioninhumanvocalfold.Laryngoscope. 2001;111:907---11.

11.Lebl MDA, Martins JRM, Nader HB, Simões SM, De Biase N. Concentration and distribution of hyaluronic acid in human vocalfolds.Laryngoscope.2007;117:595---9.

12.KornGP,MartinsJR,ParkSW,MendesA, KobayashiEY,Nader HB, et al. Concentrationof hyaluronic acid in human vocal foldsinyoungand oldsubjects.OtolaryngolHeadNeckSurg. 2011;145:981---6.

13.Dietrich CP, Dietrich SMC. Electrophoretic behavior of aci-dic mucopolysaccharides in diamine buffers. Anal Biochem. 1976;70:645---7.

14.VeigaDF,BussolaroRA,KobayashiEY,MedeirosVP,MartinsJR, GarciaEB,etal.Glycosaminoglycansofabdominalskinafter massive weight loss in post-bariatric female patients. Obes Surg.2011;21:774---82.

15.MartinsJRM,FurlanettoRP,OliveiraLM,MendesA,Passerotti CC,ChiamoleraMI,etal.Comparisonofpracticalmethodsfor urinaryglycosaminoglycansandserumhyaluronanwithclinical activityscores inpatientswithGrave’sophthalmopathy. Clin Endocrinol.2004;60:726---33.

16.HahnMS,KoblerJB,ZeitelsSM,LangerR.Midmembranousvocal foldlaminapropriaproteoglycansacrossselectedspecies.Ann OtolRhinolLaryngol.2005;114:45l---62l.