R e v is ta d a S o c ie d a d e B ra sile ira d e M ed ic in a T ro p ica l 2 7 ( l): 4 5 - 4 6 , ja n - m a r , 1 9 9 4
R E S U M O D E T E S E
PADRONIZAÇÃO DE
M ETODOLOGIAS PARA
INVESTIGAR A POSSIBILIDADE DE
TRANSFERÊNCIA D E DNA ENTRE
O
TRYPAN O SO M A C R U Z I
E O
TRIATOM ÍNEO
A prim eira etapa desse estudo consistiu na
padronização de m etodologias visando à eliminação
da infecção de triatom íneos pelo T r y p a n o s o m a
c r u z i ■ Assim , foram delineados protocolos de
experim entos com agentes tripanocidas químicos e
biológicos. Os experim entos in v i v o consistiram na
colocação de n in fas de p rim eiro estágio de
D i p e t a l o g a s t e r m a x im u s infectadas com T. c r u z i
para se alim entarem com sangue de aves, ou com
sangue de camundongos previam ente inj etados com
benzonidazol ou allopurinol riboside.
Os triatom íneos alimentados com sangue de
aves tiveram a infecção eliminada, em todos os
g ru p o s e x p e rim e n ta is que tiv era m as fezes
examinadas ao microscópio, 60 dias pós-repasto. A
m ortalidade das ninfas foi de 36,7 _+_ 4,7 % .
P or sua vez, os triatom íneos tratados com
b e n z o n id a z o l tam b ém tiv e ra m as infec çõ es
elim inadas em quase todos os casos, mas os índices
de m ortalidade das ninfas foi bem mais elevado
(72,6 _+ 15,2% ), após 60 dias. Em bora o allopurinol
riboside tenha sido menos eficaz que o benzonidazol
no tratamento das infecções d e D . m a x im u s pelo T.
c r u z i, o índice de m ortalidade associado com o uso
da droga (58,9 _+ 19,1 %) foi bem menor que aquele
observado com o uso de benzonidazol. Esses
resultados sugerem que alimentação com sangue de
aves é o m elhor método de eliminação da infecção
do T. c r u z i em triatom íneos.
Resultados prelim inares de hibridação de DNA
genôm ico de ninfas de terceiro estágio de R h o d n iu s
R e c e b id o p a ra p u b lic a ç ã o e m 0 5 /1 1 /9 3 .
STANDARDIZATION OF TH E
M ETHODOLOGY TO INVESTIGATE
TH E POSSIBILITY OF DNA
TRANSFER BETW EEN
TRYPAN O SO M A C RU ZI
AND
TRIATOM INES
In th is stu d y , w e first stan d ard ise d the methodologies employed in critical experim ents to eliminate T r y p a n o s o m a c r u z i infections from the insect vector. These infections have been treated w ith chemical and biological agents. I n v i v o
experiments consisted in allowing first instar nymphs o f D i p e t a l o g a s t e r m a x im u s infected w ith T. c r u z i to have blood meals on birds, or on mice w hich had previously been treated w ith the trypanocidal drugs benznidazole or allopurinol riboside.
The triatom ine bugs fed on b ird ’s blood had T.
c r u z i infections elim inated in all experim ental
groups, as the bugs’ feces research for the flagellate showed 60 days after the blood m eal. T he m ortality rates o f the nym phs in these experim ental groups have reached 36.7 _+ 4.7 %. By then most o f the triatomines fed on m ice’s blood and treated w ith benznidazole had also elim inated their infections; their m ortality rates however, reached 72.6 _+ 15.2% , 60 daysafter the blood meals. A lthough the allopurinol riboside has turned out to be less effective than benznidazole in treating the infections, the mortality rates associated w ith the use o f the latter drug (58.9 4_ 19.1 %) have been low er than w ith the form er. These resu lts indicate that allo w in g triatom ine bugs to have blood meals from birds is the most effective m ethod to elim inate T. c r u z i
infections.
T he aim o f stan d ard isin g the lab o ra to ry m ethodologies has been to elim inate the T . c r u z i
infections from triatom ine bugs in order to assay the hypothesis o f transfection o f D N A between these species. Nevertheless, w e considered that it w ould have been possible for the protozoan and the triatom ine to undergo lateral gene transfer in nature, because sympathy syntopy and symbiosis are present in their associations. Prelim inary assays results showed that genomic D N A from R h o d n i u s n e g l e c t u s
does hybridize w ith a T. c r u z i total D N A probe. These assays have also showed 14 bands o f cross- hybridizations that revealed hom ologous DN A
R e su m o d e T ese. N u n e s M H C F. P a d ro n iza ç ã o de m eto d o lo g ia s p a r a in v e stig a r a p o s s ib ilid a d e d e tra n sfe rê n c ia d e D N A e n tre o T r y p a n o s o m a c r u z i e o triatom ineo. R ev ista d a S o c ie d a d e B ra sile ira d e M e d ic in a T ro p ic a l2 7 :4 5 -4 6 , ja n - m a r , 199-4.
n e g l e c t u s com sonda de DNA total de T. c r u z i
m ostraram a presença de sequências homólogas
evidenciadas em 14 bandas de aproximadamente 21
a l,7 k b , na membrana de nylon. Tendo em vistaque
as ninfas foram criadas em laboratório e alimentadas
em aves, a possibilidade existe de que as sequências
de D N A teriam sido transfectadas, ancestralmente,
de um a espécie para outra e incorporadas aos
cromossom as de células germinativas. A presença
de tais sequências nas progénies de R . n e g le c tu s
sugere que a transferência teria sido perpetuada por
reprodução sexuada. Esses achados, todavia,
precisam ser reproduzidos experimentalmente em
laboratório, com diversos controles ainda não
incluídos nesse estudo, para que seja possível projetar
as possíveis implicações biológicas do achado.
sequences o f approximately 21 to 1.7kb in sizes. Considering that the third instar nym phs o f R .
n e g l e c t u s used were reared in laboratory and fed on
b ird ’s blood, we believe that the hom ologous DNA sequences may have been transfected ancestrally and that those sequences have been incorporated to the chromosomes o f the germinal cells o f the insect. The presence in the R . n e g l e c t u s progenies o f such homologous D NA sequences can be explained by sexual reproduction only. These findings, however, will have to be reproduced in the triatom ines reared and infected in the laboratory, in order to obtain all kind o f information that appear to be required to understand the mechanisms involved in DN A transfection between these specie. Finally, several control experiments will have to b e run in parallel w ith the protocols described above before any conclusion can be drawn w ith respect to possible biological implications o f the findings described here.
M aria H elo ísa C avalcante F ernandes N unes Tese apresentada ao Instituto de Ciências Biológicas da
U niversidade de Brasília para obtenção do Título d e M estre
Brasília, DF, Brasil, 1993.
