CARTA PATENTE Nº PI

INSTITUTO NACIONAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL MINISTÉRIO DA ECONOMIA

REPÚBLICA FEDERATIVA DO BRASIL INPI

CARTA PATENTE Nº PI 0517241-1

O INSTITUTO NACIONAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL concede a presente PATENTE DE INVENÇÃO, que outorga ao seu titular a propriedade da invenção caracterizada neste título, em todo o território nacional, garantindo os direitos dela decorrentes, previstos na legislação em vigor.

(21) Número do Depósito: PI 0517241-1

(22) Data do Depósito: 14/10/2005

(43) Data da Publicação do Pedido: 11/05/2006

(51) Classificação Internacional: A61K 31/357; A61P 33/06.

(30) Prioridade Unionista: KR 10-2004-0088413 de 02/11/2004.

(54) Título: COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, MÉTODO PARA PREPARAR A MESMA

(73) Titular: SHIN POONG PHARMACEUTICAL CO., LTD., Sociedade Coreana. Endereço: 434-4, Moknae-dong,

Ansan-shi, Gyeonggi-do 425-100, REPÚBLICA DA CORÉIA(KR)

(72) Inventor: SUNG-TAE LEE; WOO-YLE PARK; JEONG-RYUL NOH; HYEON-GUN JEONG; CHUL-KYU LEE;

HYUN-KYU JUNG; SUNG-HYUN CHUN.

Prazo de Validade: 10 (dez) anos contados a partir de 22/10/2019, observadas as condições legais

Expedida em: 22/10/2019

Assinado digitalmente por:

Vagner Luis Lastch

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"COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, MÉTODO PARÁ

PREPARAR.A ••••

MESMA"

CAMPO TÉCNICO

A presente invenção diz respeito a uma preparação combinada de 5 antimalária adnúnistrável oralmente contendo artemisinina ou seus derivados, e pironaridina ou seus sais, como ingredientes ativos, com carreadores

farmaceuticamente aceitáveis, e para um processo de preparação deste. FUNDAMENTOS DA TÉCNICA

De acordo com a Organização Mundial da Saúde (WHO),

1 O aproximadamente 3 a 5 centenas de milhões de pacientes com malária ocorrem todo ano por todo o mundo, e 90o/o deles são concentrados na África. Também, 1,5 a 2, 7 milhões de pessoas morrem de malária todo ano, e particularmente pelo menos um milhão entre eles são crianças africanas abaixo de 5. Especialmente, a região ao sul do Saara mostra a taxa de infecção 15 mais alta, taxa de morbidez, e taxa de morte. Hoje, a malária tomou-se mais grave devido à resistência ao agente antimalária pelas guerras, desorganização ambiental, re-colonização, mudança climática, e assim por diante, e particularmente, ao aumento da resistência à cloroquina e pirimetamina/ sulfadoxina.

20

25

O tratamento e preventivo de malária dependeu da medicamento cloroquina que foi fornecida pela WHO. Entretanto, conforme a resistência à cloroquina aumenta, foi urgente a necessidade para o desenvolvimento de medicamentos novas efetivas contra P. falciparum e P.vivax que têm resistência à cloroquina. Depois de desenvolver un1a medicamento nova, deve ser considerado em que forma a medicamento será preparada. A primeira linha de substituto para a cloroquina é uma forma administrável oralmente porque ele é facilmente acessível pelo organizações de serviço médico públicas como a WHO ou habitantes de áreas remotas, facilmente administrável, efetiva, e segura do que outras formas.

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Entretanto, infelizmente, não muitos medicamentos em desenvolvimento estão disponíveis para experiência em seres humanos. Um -deles é a pironaridina, que foi sintetizada como esquizonticida do sangue na China em 1970. Ele tem uma propriedade química comum com os 5 medicamentos existentes, mas bases masculinas incluindo tipo quinolina tal como amodiaquina e um mopiroquina; e tipo acridina tal como pironaridina e piraquina tendo vantagens significantes em termos de atividade, taxa de resistência, e estabilidade para a resistência (Basco e Le Bras, 1992; Peters e Robinson, 1992). Hoje, a pironaridina (forma administrável oralmente e 10 forma injetável) é listada na farmacopéia chinesa, e está no mercado com o nome de Malaridina. Entretanto, é comercialmente disponível apenas na China, não exibe seu efeito rapidamente no começo da administração, e é muito caro. Assim, não é apropriado para o público nos países em -desenvolvimento.

15 Entre derivados de artemisinina, artesunato é mais largamente usado na China e Vietnã. Ele é efetivo contra P. falciparum e P.vivax que têm resistências aos outros agentes antimalária. Agora, tablete de 50 m g de Artesunato está nos mercados do Vietnã (Mediplantex e Khanh Hoa) e China, e também é restritivamente vendido sob o nome de Arsumax® em algumas 20 áreas da África. Entretanto, este tem meia vida curta in vivo, e assim tem um

limite em curar completamente a infecção de malária.

O efeito de sinergia foi confirmado quando administrando pironaridina em combinação com artemisinina para camundongo infectado com Pasmodium yoelii que tem resistência para algumas cloroquinas. 25 Também, para o tratamento de P. falciparum que tem resistência aos muitos agentes antimalária, um estudo piloto clínico foi realizado na administração combinada de derivados de pironaridina e artemisinina. Como um resultado, quando a pironaridina foi administrada em combinação com diidroartemisinina ou artemeter, nenhuma repetição ocorreu em 7 dias e 28

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• • • • • • • • • • • • • • • • •• • • •• • ••• dias de follow-up estudos, mesmo embora o número de paciente de cada grupo foi limitado ( 40 pessoas incluindo adultos e crianças). Também, em um estudo para comparar efeitos entre a administração de cada de -diidroartemisinina e pironaridina e administração combinada destas duas, é 5 relatado que a administração de 32 mg/k g de pironaridina sozinha ou a administração combinada de 16 mg/k g de pironaridina com 6 mg/k g de diidroartemisinina são muito efetivas e têm tolerabilidade superior (Lit et al., 2002). Entretanto, esta administração combinada foi meramente para confirmar o efeito do tratamento em administrar cada medicamento individual 10 junto.

Portanto, um nova marca de medicamento antimalária que é

efetivo para forças resistentes, mas tem pouca carga econômica foi seriamente necessária porque a resistência aos agentes antimalária existentes é

aumentada, e as áreas de revolta são principalmente os países 15 -subdesenvolvidos, tais como África.

DIVULGAÇÃO DA INVENÇÃO

Os presentes inventores têm pesquisado agentes antimalária seguro, efetivo, qualidade, e barato para tratar sem complicação malária P. falciparum e P.vivax por administração oral na África e Ásia. Os inventores 20 têm experimentado várias combinações de pironaridina ou sais deste e artemisinina ou derivados deste que têm os maiores efeitos nas forças resistentes, e finalmente, confirmado que a combinação na razão em peso de 6:1 "-' 1: 1, especialmente 3:1, é a mais efetiva na eficácia e toxicidade. Além disso, os inventores descobriram que quando os dois medicamentos são 25 simplesmente misturados juntos, a artemisinina ou derivados deste são _determinados por contato direto porque sais de pironaridina têm propriedades fisico químicas de sais ácidos. Assim, os presentes inventores resolveram os problemas de estabilidade de preparação, solubilidade, e taxa de dissolução através principalmente formulando artemisinina ou derivados deste usando-se

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carreador farmaceuticamente aceitável tal como preparando-os em microcápsula ou mistura eutética, ou revestindo-os com agentes de revestimento, e depois misturando-os com sais ácidos de pironaridina para preparar uma preparação combinada. A presente invenção foi completada na 5 base da descoberta acima.

Portanto, o propósito da invenção é fornecer uma preparação combinada de antimalária administrável oralmente contendo artemisinina ou seus derivados e pironaridina ou seus sais, como ingredientes ativos, com os carreadores farmaceuticamente aceitáveis, e um processo de preparação deste.

10 BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Fig. 1 é um gráfico que mostra o resultado do teste de dissolução de artesunato da preparação combinada do Exemplo 1 em fluido intestinal simulado, água, e pH 4,0 de tampão de fosfato; e

A Fig. 2 é um gráfico que mostra o resultado do teste de 15 eluição de tetrafosfato de pironaridina da preparação combinada do Exemplo

-1 em fluido gástrico simulado, fluido intestinal simulado, água, e pH 4,0 de tampão de fosfato.

MELHOR MODO PARA REALIZAR A INVENÇÃO

A presente invenção diz respeito a urna preparação combinada 20 de antimalária adrninistrável oralmente contendo arternisinina ou seus

25

derivados, e pironaridína ou seus sais, como ingredientes ativos, com os carreadores farmaceuticamente aceitáveis, e processo de preparação deste.

Na presente invenção, derivados de arternisinina incluem diidroarternisinina, artesunato, arterneter e arteéter, mas não limitado a este. Preferivelmente, derivado de arternisinina é artesunato.

Também, sais de pironaridina incluem sais de adição ácido ,com ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido clorídrico, ácido acético, ácido metanossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido maleico, ou ácido furnárico, mas não limitado a estes. Preferivelmente, sais de pironaridina são fosfato de

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••• pironaridina.

A composição da presente invenção contém artemisinina ou seus derivados, e pironaridina ou seus sais, preferivelmente na razão em peso de 1:1 ""1:6, mais preferivelmente 1:3.

Além disso, na presente invenção, é preferível formular artemisinina ou seus derivados não para o contato com pironaridina ou seus sais. Sendo assim, artemisinina ou seus derivados podem ser formulados por principalmente formulando-os na microcápsula, forma particulada da mistura eutética, ou preparação revestida com carreador farmaceuticamente aceitável,

1 O e depois misturando-os com pironaridina ou seus sais adicionados a este em uma certa razão à artemisinina ou seus derivados. Sendo assim pode resolver esses problemas resultados do contato direto dos dois medicamentos durante a combinação com sais de pironaridina em fom1a ácida, incluindo instabilidade da preparação, solubilidade baixa, e taxa de dissolução baixa, desse 1nodo 15 fornecendo agente antimalária que mostra efeito do tratamento notável nas forças resistentes, com segurança a estabilidade do medicamento e tendo ·efeito sinérgico dos dois medicamentos.

Quaisquer carreadores convencwnms usados no campo farmacêutico podem ser usados como os carreadores fannaceuticamente 20 aceitáveis para a presente invenção. Alguns exemplos representativo destes são lactose, dextrina, açúcar, celulose microcristalina, hidróxi propilmetil celulose, hidróxi propil celulose, hidróxi etil celulose, etil celulose, metil celulose, polietileno glicol, dióxido de silicona, hidrotalcita, silicato de magnésio de alumínio, hidróxido de alumínio, silicato de alumínio, alumínio 25 meta silicato de magnésio, bentonita, e mistura destes. para a presente invenção, o carreador dispersante em fusão preferível é polietileno glicol, e a razão em peso preferível de artemisinina ou seus derivados ao polietileno -glicol é 1:0,1 '"" 1:2. Particularmente, a razão em peso de artesunato ao

poli etileno glicol é 1: 1.

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cápsula, xarope seco, agente de revestimento, e assim em. 20

25

Os exemplos que seguem ilustram a presente invenção; mas não são intencionados a limitar o escopo da presente invenção em qualquer modo.

Exemplo Preparativo 1: Preparação de Mícrocápsula de Artesunato (1)

Ingrediente Teor

Artesunato 3g

Poli etileno glicol 10000 3g

Parafina líquida 396 g

Vinte 80 4g

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em 9 g de acetonitrila. Esta solução orgânica foi dispersada em 396 g de parafina líquida (contendo 1% de Vinte 80), e foi agitada com um agitador digital (IKA, EUROST AR). Depois de preparar uma emulsão apropriada desta, o solvente foi evaporado até que 40 a 60% de acetonitrila seja 5 completamente removida desta. Assim suspensão de microcápsula resultante foi centrifugada em 41 x g durante 1 O minutos. O sobrenadante foi decantado, e depois a microcápsula foi recolocada em suspensão com 50 a.lOO ml de água para lavagem, e foi lentamente filtrada. Durante a filtração, a microcápsula foi mantida na suspensão, com movimento lento e 1 O continuamente adicionando uma água para lavagem a este para remover acetonitrila que permanece dentro da microcápsula, e endurecer a microcápsu1a.

Exemplo Preparativo 2: Preparação de Microcápsu1a de Artesunato (2)

Ingrediente Teor

15 Artesunato 3g

Polietileno glicol 10000 1,5g

Parafina líquida 396 g

Vinte 80 4g

Usando os ingredientes acima, a microcápsula foi preparada de 20 acordo com o mesmo procedimento como o Exemplo Preparativo 1.

25

Exemplo Preparativo 3: Preparação de Microcápsula de artesunato (3)

Ingrediente Teor

Artes una to 3g

Polietileno glicol 10000 6g

Parafina líquida 396 g

Vinte 80 4g

Usando os ingredientes acima, a microcápsula foi preparada de acordo com o mesmo procedimento como o Exemplo Preparativo 1.

5

artesunato ( 1)

Ingrediente

Artesunato

Poli etileno glicol 10000 Celulose Microcristalina 8

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40

40

140

O polietileno glicol como carreador dispersante em fusão, e Artesunato como ingrediente ativo foram misturados, a cerca de 20 mg de _etanol que foi adicionado, e a mistura foi suspensa em temperatura ambiente. Depois de aquecer a mistura a cerca de 80° C por fusão, ela foi rapidamente 1 O resfriada e finamente triturada. A celulose microcristalina foi adicionada a esta e misturada. A mistura foi agregada no método de granulação seca para preparar o grânulo de mistura eutética desejado contendo artesunato.

Exemplo Preparativo 5: Preparação de grânulo da mistura eutética de artesunato (2) 15 20 Ingrediente Artes una to Polietileno glicol 10000 Poloxamer F 127 Celulose microcristalina Teor (mg/preparação)

40

40 15 125

O polietileno glico1 como carreador dispersante em fusão e Artesunato como ingrediente ativo são misturados, e depois cerca de 20 mg de etanol é adicionado a esta, e a mistura é suspensa em temperatura ambiente. Depois de aquecer a mistura a cerca de 80° C por fusão, Poloxamer foi adicionado a esta, que foi rapidamente resfriada e solidificada. Depois de 25 moer finamente a mistura, a celulose microcristalina foi adicionada a esta, e a mistura foi agregada no método de granulação seca para preparar o grânulo de mistura eutética desejado contendo artesunato.

Exemplo Preparativo 6: Preparação de grânulo da mistura eutética de artesunato (3)

Ingrediente Artes una to

Poli etileno glicol 10000 Poloxamer F127 9 •• • • _{• •} • _• • • • • • • • • ••• • ••• • • • • • • •• • • • • • • • • •• • • • •

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40

15

5 Celulose de hidroxipropiln1etila 20 Celulose microcristalina

105

O polietileno glicol como carreador dispersante em fusão e artesunato como ingrediente ativo são misturados, e depois cerca de 20 mg de _etanol é adicionado a esta, e a mistura é suspensa em temperatura ambiente. 1 O Depois de aquecer a mistura a cerca de 80° C por fusão, poloxâmero e hidróxi propilmetil celulose foram adicionados a esta, que foi rapidamente resfriada e solidificada. Depois de moer finamente a mistura, a celulose microcristalina foi adicionada a esta, e a mistura foi agregada no método de granulação seca para preparar o grânulo de mistura eutética desejado contendo artesunato.

15

Exemplo Preparativo 7: Preparação de grânulo da mistura eutética de artesunato ( 4)

20

Ingrediente Artesunato

Poli etileno glicol 10000 Poloxamer F 127 Etil celulose Celulose microcristalina Teor (mg/preparação)

40

40

15

20

105

O polietileno glicol como carreador dispersante em fusão e artesunato como ingrediente ativo são misturados, e depois cerca de 20 mg de 25 etanol é adicionado a esta, e a mistura é suspensa em temperatura ambiente. Depois de aquecer a mistura a cerca de 80° C por fusão, Poloxamer e etil celulose foram adicionados a esta, e a mistura foi rapidamente resfriada e solidificada. Depois de moer finamente a mistura, a celulose microcristalina foi adicionada a esta, e a mistura foi agregada no método de granulação seca

5 10 10 • • _•• • • •

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• • _• • _••• • • _• • _••• • • _{• •••} para preparar o grânulo de mistura eutética desejado contendo artesunato.

Exemplo 1: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (1 :3) tablete

de combinação (1)

Ingrediente Teor (mg/preparação)

grânulo de mistura eutética da Preparação 4 220 Hidroxipropil celulose substituída inferior 25

tetrafosfato de pironaridina 120

crospovidona 30

lauril sulfato de sódio 15

-dióxido de silicona 3

estearato de magnésio 3

Hidroxipropil celulose em etano I foi misturado com tetrafosfato de pironaridina, agregada no método de granulação úmida, seca, e peneirada e depois o grânulo de mistura eutética do Exemplo de Preparação 4, 15 hidroxipropil celulose substituída inferior, crospovidona, lauril sulfato de sódio, e dióxido de silicona foram adicionados a este e misturados uniformemente para ter a composição acima. Estearato de magnésio foi adicionado a este para preparar um tablete.

Exemplo 2: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (1 :3) tablete

20 de combinação (2)

_Ingrediente Teor (mg/preparação)

grânulo de mistura eutética

de preparação 5 220

Hidroxipropil celulose substituída inferior 25

25 tetrafosfato de pironaridina 120

Hidroxipropil celulose 4

crospovidona 30

lauril sulfato de sódio 15

11 estearato de magnésio •• • • •

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Usando os ingredientes acima, o tablete foi preparado de acordo com o mesmo procedimento corno o Exemplo 1.

Exemplo 3: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (1 :3) tablete 5 de combinação (3)

10

15

20

25

Ingrediente Teor (mg/preparação)

grânulo de mistura eutética de preparação 6 220 Hidroxipropil celulose substituída inferior 25 tetrafosfato de pironaridina 120 Hidroxipropil celulose

,crospovidona

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio 4 30 15 3 3

Usando os ingredientes acima, o tablete foi preparado de acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 1.

Exemplo 4: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (1:3) tablete de combinação ( 4)

Ingrediente

grânulo de mistura eutética de preparação 6

Teor (mg/preparação)

220 Hidroxipropil celulose substituída inferior 25 _tetrafosfato de pironaridina 120

Hidroxipropil celulose 4

crospovidona 30

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio

15

3

3

Usando os ingredientes acima, o tablete foi preparado de acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 1.

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• • _{• •••} 'Exemplo 5: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (2:3) tablete

de combinação

Ingrediente Teor (mg/preparação)

grânulo de mistura eutética de preparação 4 220 Hidroxipropil celulose substituída inferior

tetrafosfato de pironaridina Hidroxipropil celulose crospovidona

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio 25 60 4 30 15 3 3

Usando os ingredientes ac1ma, o tablete foi preparado de acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 1.

Exemplo 6: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina ( 1 :4) tablete 15 de combinação

20

25

Ingrediente

grânulo de mistura eutética de preparação 4

Hidroxipropil celulose substituída inferior tetrafosfato de pironaridina

Hidroxipropil celulose crospovidona

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio Teor (mg/preparação) 220 25 160 4 30 15 3 3

Usando os ingredientes actma, o tablete foi preparado de acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 1.

Exemplo 7: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (1 :7) tablete de combinação

5 10 15 20 13

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Ingrediente Teor (mg/preparação)

'grânulo de mistura eutética de preparação 4 220 Hidroxipropil celulose substituída inferior 25 tetrafosfato de pironaridina 240 Hidroxipropil celulose

crospovidona

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio 4 30 15 3 3

Usando os ingredientes aCima, o tablete foi preparado de acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 1.

Exemplo 8: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina ( 1 :3) -combinação de cápsula dura

Ingrediente

grânulo de mistura eutética de preparação 4

Teor (mg/preparação)

220 Hidroxipropil celulose substituída inferior 25 tetrafosfato de pironaridina 120 Hidroxipropil celulose 4

crospovidona 3 O

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio

15 3 3

Hidroxipropil celulose dissolvido em etano! e tetrafosfato de _pironaridina foram misturados, agregados no método de granulação úmida, 25 seca, e peneirada. Depois, ter o grânulo de mistura eutética de preparação 4, hidroxipropil celulose substituída inferior, crospovidona, lauril sulfato de sódio e dióxido de silicona foram adicionados a este e misturado uniformemente para ter a composição acima. O estearato de magnésio foi adicionado a este, misturado e enchido em cápsula dura para preparar a

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Exemplo 9: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (2:3) combinação de cápsula dura

Ingrediente Teor (mg/preparação)

grânulo de mistura eutética de preparação 4 220 Hidroxipropíl celulose substituída inferior 25

tetrafosfato de pironaridina 60

Hidroxipropil celulose 4

crospovidona 3 O

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio

15 3 3

Usando os ingredientes ac1ma, a cápsula foi preparada de -acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 8.

15 Exemplo 10: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (1 :4) combinação de cápsula dura

20

Ingrediente Teor (mg/preparação)

grânulo de mistura eutética de preparação 4 220 Hidroxipropil celulose substituída inferior 25 tetrafosfato de pironaridina Hidroxipropil celulose crospovidona 160 4 30

lauril sulfato de sódio 15

dióxido de silicona 3

25 -estearato de magnésio 3

Usando os ingredientes actma, a cápsula foi preparada de acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 8.

Exemplo 11: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (I :6) mistura cápsula dura

5 10 15 20 15

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Usando os ingredientes acima, a cápsula foi preparada de acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 8.

Ingrediente

grânulo de mistura eutética de preparação 4

Hidroxipropil celulose substituída inferior tetrafosfato de pironaridina

Hidroxipropil celulose crospovidona

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio Teor (mg/preparação) 220 25 240 4 30 15 3 3

Exemplo 12: Preparação de artesunato/tetrafosfato de pironaridina (1: 1) tablete de combinação

Ingrediente Teor (mg/preparação)

grânulo de mistura eutética de preparação 4 220 Hidroxipropil celulose substituída inferior 25 tetrafosfato de pironaridina 40 Hidroxipropil celulose 4 crospovidona

lauril sulfato de sódio dióxido de silicona estearato de magnésio 30 15 3 3

Usando os ingredientes acima, o tablete foi preparado de 25 acordo com o mesmo procedimento como Exemplo 1.

,Exemplo Experimental

Exemplo Experimental!: Teste de dissolução

(1) Teste de dissolução de Artesunato em um tablete de combinação

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testado de acordo com o método de acionador (mecanismo 2) descrito na United Estado Pharmacopeia (USP). Depois de 30 minutos, a quantidade de Artesunato usando-se porções filtradas da solução sob o teste foi determinada de acordo com o método de análise seguinte.

5 Instrumento de dissolução: SR8PLUS (HANSON) Temperatura média: 37° C± 0,5° C

Meio: fluido intestinal simulado, água, pH 4,0 tampão de fosfato Velocidade de rotação: 100 RPM

Método de análise: Cromatografia de lipídeo

1 O Coluna: 4,6 mm x 25 em, ODS, 5 a 1 O J.lm de diâmetro Temperatura da coltma: 40° C

Fase móvel- pH 3,0 tampão: acetonitrila (50:50) Vazão: 0,2 ml/min.

Tampão de pH 3,0: 1,36 g de di-hidrogeno fosfato de potássio foi dissolvido 15 em 1 litro de água e ajustado a um pH 3,0±0,05 com ácido fosfórico.

A Fig. 1 mostra o resultado do teste de dissolução acima.

(2) Teste de dissolução de tetrafosfato de pironaridina em um tablete de combinação

O tablete preparado de acordo com o método do Exemplo 1 foi 20 testado de acordo com o método de acionador (mecanismo 2) descrito na

United States Pharmacopeia (USP). Depois de 30 minutos, a quantidade de Artesunato usando porções filtradas da solução sob o teste foi determinada de acordo com o método de análise seguinte.

Instrumento de dissolução: SR8PLUS (HANSON) 25 Temperatura média: 37° C± 0,5° C

Meio: gástrico fluido simulado, fluido intestinal simulado, 'água, tampão de fosfato pH 4,0

Velocidade de rotação: 100 RPM

Detector: Espectrômetro de absorção de ultravioleta (comprimento de

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onda:278nm) Coluna: 4,6nun x 25cm, ODS, 5 a 1 O 1-1m de diâmetro Temperatura da coluna: 40° C • • • • • • • • • •• • _{• •} • • ••

Fase móvel: solução de acetonitrila a 10% ajustada com ácido fosfórico para umpH2,15

5 Vazão: 1,0 ml/min.

A Fig. 2 mostra o resultado do teste de dissolução acima. Exemplo Experimental 2: Teste de estabilidade em armazenagem

Usando o tablete preparado de acordo com o método do Exemplo 1, o teste de estabilidade em armazenagem foi conduzido sob as 10 condições de temperatura de 40° C± 2° C e umidade relativa de 75% ± 5% RH. Isto é, as amostras foram retiradas por 48 semanas em um intervalo regular a partir do início e as propriedades dos tabletes foram observadas. Os ensaios de artesunato e pironaridina em un1a preparação combinada foram conduzidos de acordo com o segundo método e um teste de dissolução foi 15 conduzido de acordo com Exemplo Experimental 1.

( 1) Ensaio de Artes una to em uma preparação combinada

Cerca de 20 tabletes dos tabletes preparados de acordo com o método do Exemplo 1 foram retirados, pesados precisamente e polvilhados. Um porção do pó, equivalente a cerca de 4,0 mg de artesunato, foi exatamente 20 medido e misturado em 2 rnl de acetona e a mistura foi dissolvida bem, filtrada, evaporada e seca. 1 ml de acetonitrila foi adicionado a este resíduo e dissolvido. O produto resultante foi usado como solução de teste. Por ouro lado, 1 ml de acetonitrila foi adicionado a 4,0 mg de artesunato RS e dissolvido para obter uma solução padrão.

25 A cromatografia foi conduzida a cada 20 1-11 da solução de teste e a solução padrão. O procedimento foi conduzido de acordo com as instruções gerais na cromatografia descrita USP para calcular as áreas de pico 'de artesunato, ATe As:

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preparação padrão de artesunato convertida em anidrido (mg) x ATlAs Condição de Operação

Detector: Espectrômetro de absorção de ultravioleta (comprimento de onda: 216 nm) Coluna: 4,6mm x 25 em, ODS, 5 a 10 Jlm de diâmetro

5 Temperatura da coluna: 40° C

_Fase móvel - pH 3,0 tampão: acetonitrila (50:50) Vazão: 1,0 ml/min.

Tampão de pH 3,0: 1,36 g de Di-hidrogeno fosfato de potássio foi dissolvido em 1 litro de água e ácido fosfórico foi adicionado a este para ajustar ao pH 1

o

3,0±0,05.

(2) Ensaio de tetrafosfato de pironaridina em uma preparação combinada Cerca de 20 tabletes dos tabletes preparados de acordo com o método do Exemplo 1 foram retirados, pesados precisamente e polvilhados. Um porção do pó, equivalente a cerca de 10 mg de tetrafosfato de 15 pironaridina, foi exatamente medido e foi colocado em um frasco marrom amarelado. O tampão de fosfato (pH 7,0) foi adicionado a este para fabricar a misturam 100 ml e misturado bem. A mistura foi prontamente filtrada e o primeiro filtrado foi descartado e 5 ml do filtrado seguinte foi tomada e o tampão de fosfato (pH 7,0) foi adicionado a este para fabricá-lo a 50 ml da 20 solução de teste. Por outro lado, cerca de 1 O mg de tetrafosfato de pironaridina RS, que foi secado em 105° C para obter uma quantidade constante, foi exatamente medido e foi colocado em um frasco marrom amarelado. O tampão de fosfato (pH 7,0) foi adicionado a este para fabricar a mistura a 100 ml e dissolvido. 5 ml da mistura foi tomada deste e tampão de 25 fosfato (pH 7,0) foi adicionado a este para fabricar 50 ml de solução padrão. De acordo com a espectrometria de absorção de ultravioleta entre os métodos gerais descritos em USP, o teste de absorbância ATe As foi conduzido para a solução de teste e a solução padrão em 260 nm para medir a absorbância AT e ·As

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A quantidade de tetrafosfato de pironaridina (C29H32ClN502:4H3P04) (mg) = quantidade de preparação de tetrafosfato de

pironaridina padrão convertida em produto seco (mg) x ATlAs Condição de Operação

5 Detector: Espectrômetro de absorção de ultravioleta ( con1primento de onda: 278 nm) Coluna: 4,6mm x 25 em, ODS, 5 a 1 O 1-1m de diâmetro

Temperatura da coluna: 40° C

Fase móvel: solução de acetonitrila a 10% ajustada com ácido fosfórico para umpH 2,15

10 Vazão: 1,0 ml/min.

15

O resultado deste é mostrado em Tabela 1.

Tabela 1

Resultado do teste de estabilidade em armazenagem de artesunato e tetrafosfato de pironaridina em uma preparação combinada (Exemplo 1)

Período de Propriedade Ensaio de Teor Teste de dissolução(%)

teste (90,0 a 110,0%)

(semana) artesunato pironaridina Artesunato (mais Pironaridina (mais

do que 80%) do que 80%)

o

Nenhuma mudança 99,8 100,5 87,2 95,0 4 Nenhuma mudança 98,5 100,1 85,8 93,5 8 Nenhuma mudança 98,2 99,2 86,9 95,2 12 Nenhuma mudança 99,0 99,5 86,1 91,2 16 Nenhuma mudança 98,8 98,9 85,2 93,8 20 Nenhuma mudança 97,9 98,5 85,8 93,8 24 Nenhuma mudança 98,6 98,4 87,1 93,8 36

~

98,7 98,5 85,1 92,8 48 jNenhuma mudanç~ 98,5 98,3 86,7 91,9

Os resultados mostrados na Tabela 1 mostram 1,3% de diminuição no teor de Artesunato em uma preparação combinada e 2,2% de diminuição naquela de tetrafosfato de pironaridina depois de 48 semanas de armazenamento. Portanto, confirma-se que a estabilidade em armazenamento da preparação combinada é muito boa visto que tanto pironaridina quanto artesunato apresentaram mudança de menos 20 do que 5% nos testes de teor e de dissolução em 48 semanas.

Exemplo Experimental3: Teste de atividade antimalária in vitro

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O P. falciparum usado nesta experimento foi obtido do MR4 (Malaria Research and Reference Reagent Resource Center, Virgínia, USA) [3D7 (Países Baixos); clone sensível ao medicamento, Kl (Tailândia); subespécies de resistência a cloroquina/pirimetamina/cicloguanila, VS 1 5 (Vietnã); subespécies de resistência à cloroquina/pirimetamina, FCR3

(Gambia); subespécies de resistência à cloroquina/pirimetamina, FCB (Colômbia); subespécies de resistência à cloroquina, Tm90 C2A (Tailândia); -resistência à cloroquina/pirimetamina/mefloquina]. O protozoário foi colocado em um frasco de cultura de tecido contendo o meio de cultura 10 (RPMI-1640:Rh+ célula sangüínea vermelha, 5% de Hematocrit, 25 mM de HEPES, 24 mM de NaHC03, 0,2% de glicose, 0,03% de L-glutamina, 150

J.!M de Hipoxantina e 0,5% de albumax II) e cultivado em uma incubadora de cultura de tecido (a 37° C com fornecimento 5% de C02/95% de ar).

O teste de sensibilidade ao medicamento foi conduzido de 15 acordo com um método modificado de Deszardin et a!. (Antimicorb. Agents Chemother. 1979, 16, 710). Isto é, um medicamento foi dissolvido em 100% de DMSO e diluído repentinamente com os meios de cultura (RPMI-1640: 0,5% de albumax Il, 0,2% de glicose, 0,03% de L-glutamina e 150 ~M de _Hipoxantina) em placa de 96 reservatórios. A razão dos dois medicamentos 20 foi fixada a 1 :0, 4: 1, 3:2, 2:3, 1 :4 e 0:1 para o teste de combinação. A mesma quantidade de suspensão de parasita de P. falciparum (contendo 0,5% de parasitemia e 1 ,5% de Hematocrit) ou solução eritrocítica não infectado foi adicionado a este. A placa foi cultivada em uma incubadora (37° C e 5% de C02) por 24 horas, 10 ® de

3

[H] hipoxantina (3,7 Bq/reservatório) foi 25 adicionado a cada reservatório, a placa ainda foi cultivada por 24 horas e depois colocada em um congelador a -80° C para finalizar a reação. A placa foi descongelada novamente e centrifugada para coletar o produto granulado. A radioatividade foi medida como o espectrômetro de cintilação. A curva de regressão foi obtida a partir dos dados de Concentração-Reação e 50% de

5

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concentração inibidora (IC50) para cada produto foi calculada. O valor FIC50

(FIC= Concentração Inibidora Fracionai foi obtido como segue:

Soma FIC50= IC50 do Medicamento A em Agente Combinado I IC50 do Medicamento

A+ IC₅₀ do Medicamento Bem agente combinado I IC50 de Medicamento B

Os resultados são mostrados nas Tabelas 2 e 3.

Tabela 2

Atividades Antimalária de pironaridina, artesunato, diidroartemisinina e cloroquina P falciparum ICso (mglml) Teste 3D7 Kl VSl FCB Tm90 FCR3 C2A 1 2 1 1 2 1 2 1 2 I 2 artesunato 3,1 4,1 1,2 1,2 2,4 2,7 3,1 3,6 3,2 2,3 2,1 diidroartemisinina 0,5 0,7 0,4 0,2 0,8 0,8 0,7 0,9 0,7 0,4 0,4 pironaridina 1,7 2,6 5,3 2,2 1,0 1,5 1,3 2,0 2,6 1,3 3,1 cloroquina nd 7,5 419 446 418 121 74 56 139 206 131

Cada valor numérico representa a média de três testes. 10 nd: não determinado.

Como mostrado na Tabela 2, o IC50 de pironaridina foi similar

àquele de artesunato como 1 ,2-4, 1 mglml m seis subespécies e aquela de diidroartemisinina foi mais eficiente como 0,2-0,9 mglml.

Tabela 3

15 Bensibilidade de medicamento da combinação de pironaridina e artesunato a vários protozoários de malária

Taxa fixa de medicamentos (pironaridina: artesunato) Parasita FIC 4:1 3:2 2:3 1:4 Clone 377 FICso 1,06 1,26 2, 1,77 FIC9o 1,07 1,22 2,11 2,13 Cepa Kl FICso 1,19 1,4 1,59 1,22 FIC9o 1,24 1,54 1,75 1,37 Cepa VS1 FICso 1,07 0,96 1,25 1,37 FIC9o 1,03 0,93 1,04 1,42 CepaFCB FICso 1,35 1,66 1,43 FIC9o 1,45 1,85 1,61

Cepa Tm90C2A FICso 1,49 1,85 2,11 1,63

FIC9o 1,47 2,39 2,07 1,49 CepaFCR3 FICso 1,57 1,93 2,06 1,33 FIC9o 2,01 2,25 2,51 1,78

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Como mostrado na Tabela 3, quando a mistura de pironaridina e artesunato foi administrada, mais valores FIC foram de 1-2 para mostrar alguma atividade antagonística. Entretanto, estes são os resultados dos testes in vitro sem considerar os parâmetros farmacodinâmicos. Desta maneira, 5 análise adicional é requerida em conexão com o resultado do teste in vivo.

Exemplo Experimental4: Teste de atividade antímalária In vivo

(1) Ensaio Dose-resposta ensaio

Para observar a resposta de dose da preparação combinada de pironaridina e artesunato obtida no Exemplo 1, a atividade supressora/curativa 10 -da preparação combinada em alta dose (pironaridina

+

artesunato: 12 mg/kg

+

4 mg/kg) e baixa dose (pironaridina

+

artesunato: 0,9 mg/kg

+

0,3 mg/kg) foram comparadas com aquela de cada medicamento único usando-se o protozoário P. chabaudi ASS. Em resumo, NaYve (significando "nenhum medicamento administrado"), camundongos TFW foram intravenosamente 15 inoculados com 2 x 106 de eritrócitos parasitados com P. chabaudi ASS e depois o teste de cura foi conduzido por um curso de três dias de tratamento começando 2 dias depois da infecção como segue: os camundongos foram infectados com protozoários P. chabaudi; pironaridina/artesunato (3: 1) obtido em Exemplo 1 foi subcutaneamente administrado; o processo de infecção foi 20 observado por 28 dias; todo dia, sangue foi retirado de cada animal e a

_película sangüínea fina destes foi preparada; depois do tingimento por Giemsa, estes foram examinados se o animal foi infectado ou não com um microscópio; o sangue de camundongos que apresentaram reação negativa depois de 28 dias foi unido e sub-inoculado no camundongo na'ive; o sangue 25 unido foi diluído com 0,9% de solução salina ao volume de 2 vezes; 0,2 ml deste foi intravenosamente administrado a 5 camundongos na'ive para reinfectá-los; e a observação continuou por mais 28 dias.

Como um resultado, quando o artesunato sozinho foi administrado na dose baixa de 0,3 mg/kg ou na dose alta de 4 mg/kg, não

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••• • ••• afetou o processo de infecção. Também, a dose de 0,9 mg/kg de pironaridina sozinha foi administrada, esta não teve efeito. Entretanto, a dose de 12 mg/kg suprimiu completamente a parasitose por 28 dias. Nenhuma infecção ocorreu quando os camundongos naYve foram observados por 28 mais dias após serem 5 re-infectado pelo sangue retirado do camundongo que não apresentou qualquer infecção até depois. Quando uma combinação de pironaridina!artesunato (3: 1) foi administrada em um dose baixa de 4 mg/ kg, na dose média de 8 mg/kg ou em un1a dose alta de 16 mg/kg, todos apresentaram efeito de tratamento excelente e efetivo. Em particular, em uma 1 O dose maior do que 8 mg/kg (pironaridina + artesunato: 6 + 2), suprimiu completamente a parasitose em 28 dias, que mostra efeito altamente bom do tratan1ento. Nenhuma infecção recorreu os camundongos naYve foram observados por mais 28 dias depois de serem re-infectados pelo sangue retirado do camundongo que não mostrou qualquer infecção mesmo depois. 15 Estes resultados sugerem que a dose de artesunato mostra que a atividade

antimalária pode ser reduzida através da administração combinada. (2) Teste supressor total (teste de 4 dias)

No dia O, os camundongos foram infectados intravenosamente com 2 x 106 de eritrócitos infectado. Duas horas pós-infecção, os grupos 20 receberam o primeiro tratamento nas doses especificadas. Os camundongos foram administrados uma vez por dia nos dias de 1 a 3. No dia 4, o sangue foi retirado da veia da cauda e a película sangüínea fina foi preparada deste. Depois do tingimento com Giemsa, foi examinado se foi infectado ou não, com um microscópio. As linhas usadas aqui firam P. berghei NY -25 sensibilidade a medicamento, P. berghei PNY- resistência a pironaridina e P. berghei SANA -resistência a Artesunato. No dia seguinte após a finalização da administração, o sangue foi retirado, a película de sangüínea fina foi preparada deste e a freqüência de ocorrência foi medida por um microscópio para observar o efeito bacteriostático. A atividade bacteriostática foi estimada

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,pela comparação do nível de parasitemia entre um grupo tratado com medicamento e o grupo de controle. Os níveis efetivos de 50% e 90% (ED50,

ED90) foram calculados a partir da concentração de medicamento log e gráfico

de atividade bacteriostática e o fator de resistência no nível de ED foi 5 calculada como segue:

Fator de resistência, l9o = ED9o resistência de medicamento f ED9o sensibilidade de medicamento

Os resultados são mostrados nas seguintes Tabelas de 4 a 6. Tabela 4

Atividade Bacteriostática de artesunato em protozoários de malária no sangue

Protozoários da malária

1,0 22,5

1,2

Tabela 5

1 O Atividade bacteriostática de pironaridina em protozoário de malária em sangue

15

Protozoários da malária EDso ED9o 190

(m~/kg/dia) (mg/kwdia)

P. berJ?hei NY 6,5 (1,8-15,0) 30,0 (8,0-68,0) 1,0

P. berghei NPN 0,5 (0,1-2,0) 60,0 (13,0-260)) 2,0

P. berghei SANA 7,0 (2,7-25,0) 85,0 (32,0-300) 2,8

Tabela 6

Atividade bacteriostática de pironaridina/artesunato em protozoário de malária em sangue

Protozoários da malária EDso ED9o l9o

(mwkgldia) (mglkgldia)

P. berghei NY 1,2 (0,8-1,4) 2,0 (1,4-2,2) 1,0

P. berJ?hei NPN 1,8 (0,8-3,9) 11,0 (5,0-23,0) 5,5

P. berghei SANA 1,5 (1,3-1,6) 2,2 (1,8-2,5) 1,1

Como mostrado mas tabelas de 4 a 6, a administração de pironaridina e a administração combinada de pironaridina/artesunato (3: 1) foram altamente efetivas em P. berghei. Quando pironaridina sozinha foi administrada a cepas resistentes a pironaridinas, o ED90 foi 18 mg!kg/dia.

Entretanto, na administração combinada, ED90 foi reduzido a 11 mg!kg/dia.

25

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pironaridinas, o ED90 foi de 60 rng/kg/dia. Entretanto, na administração

-combinada, o ED90 foi reduzido a 11 mg/kg/dia. Estes resultados confirmaram

a possibilidade de que a administração combinada permita o uso de uma dose menor de pironaridina e artesunato contra cepas resistentes a pironaridinas. 5 Exemplo ExperimentaiS: Teste de toxicidade de dose repetida

Um teste de toxicidade de dose repetida de 4 semanas em ratos foi realizado com base no Padrão de Teste de Toxicidade no Korea Institute of Toxicology, que é a organização GLP de teste de toxicídade autorizado pelo OECD. Como um resultado, o NOAEL (Nenhum nível de efeito adverso 1 O observado) de pironaridina foi de 23 mg/kg e o nível de efeito claro foi de 21 O

mg/kg, tanto em machos quanto em fêmeas. E o NOAEL de artesunato foi de 30 mg/kg tanto em machos quanto em fêmeas, entretanto, na administração _combinada do Exemplo 1, o NOAEL foi de 40 mg/kg tanto em machos quanto em fêtneas e o efeito claro foi de 360 mg/kg. Estes resultados mostram 15 que a toxicidade de dose repetida por 4 semanas pode ser diluído pela

administração por combinação. APLICABILIDADE INDUSTRIAL

A composição farmacêutica da presente invenção pode fornecer o agente antimalária que apresenta efeito de tratamento notável nas 20 cepas resistentes, garantindo a estabilidade do medicamento e tendo efeito

1

REIVINDICAÇÕES

1. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que é para a administração oral para evitar ou tratar malária, compreendendo artesunato e pironaridina ou seus sais, como ingredientes ativos, com carreadores farmaceuticamente aceitáveis, em que o dito artesunato é 5

formulado em microcápsula, forma particulada de mistura eutética, ou preparação revestida com carreadores farmaceuticamente aceitáveis para não entrar em contato com dita pironaridina ou seus sais.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a razão em peso de dito artesunato para dita pironaridina ou 10

seus sais é de 1:1 a 1:6.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a razão em peso de dito artesunato para dita pironaridina ou seus sais é de 1:1 a 1:3.

4. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada 15

pelo fato de que a razão em peso de dito artesunato para dita pironaridina ou seus sais é de 1:3.

5. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o dito carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado do grupo que consiste de polietileno glicol, hidroxipropilmetil celulose, metil 20

celulose e etil celulose.

6. Composição de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o dito carreador é polietileno glicol ou hidroxipropilmetil celulose.

7. Composição de acordo com a reivindicação 6, caracterizada 25

pelo fato de que a razão em peso de artesunato para polietileno glicol é 1:0,1 a 1:2.

8. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que adicionalmente contém tensoativos.

2

9. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os ditos sais de pironaridina são sais de adição ácido com ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido clorídrico, ácido acético, ácido metanossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido maleico ou ácido fumárico.

10. Composição de acordo com a reivindicação 9, 5

caracterizada pelo fato de que dito sal de pironaridina é sal de adição ácido com ácido fosfórico.

11. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que dita composição está na forma de pó, grânulo, tablete, cápsula ou xarope seco.

10

12. Método para preparar uma composição farmacêutica para administração oral para evitar ou tratar malária, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de formular artesunato com carreadores farmaceuticamente aceitáveis e misturar o artesunato formulado com pironaridina ou seus sais, em que dito artesunato é formulado em 15

microcápsula, forma particulada de mistura eutética, ou preparação revestida com carreadores farmaceuticamente aceitáveis para não entrar em contato com dita pironaridina ou seus sais.

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Teste de dissolução de artesunato em um tablete de combinação

10 20 30 40 50

-e-. pH 4,0 Tampão de fosfato

-o- pH 6,8 Fluido intestinal simulado • _...._ Água

Teste de dissolução de Tetrafosfato de Pironariden em um tablete de combinação

o

-+- pH 1,2 (Fluido gástrico simulado) -o- pH 4,0 (Tampão de fosfato

- . - pH 6,8 (Fluido intestinal simulado)

-"'1- Água 60 70

.

mm min

41