Abstract
XIII
RESUMO
A Aspergilose Invasiva é uma infecção fúngica que constitui um grave problema em alguns doentes, nomeadamente, os que apresentam uma imunossupressão grave, sendo responsável por elevada morbilidade e mortalidade. Nestes doentes, incluem-se indivíduos com neoplasia hematológica, em particular leucemias agudas, receptores de órgãos sólidos, receptores de medula óssea principalmente se submetidos a alotransplante, indivíduos que apresentam neutropenia grave e prolongada ou uma disfunção ao nível dos neutrófilos e ainda os que efectuam tratamentos com elevadas doses de corticóides.
Os doentes receptores de “stem cells”, particularmente os provenientes de dadores não aparentados, apresentam durante um elevado período de tempo, um risco acrescido de contrair Aspergilose Invasiva. Este risco é devido a alterações ao nível das mucosas, falência do enxerto, Doença Enxerto Contra Hospedeiro (DECH) e ainda, à terapêutica antimicrobiana de largo espectro bem como, ao uso de corticosteróides a que habitualmente se encontram submetidos.
Tem-se verificado que os doentes com suspeita de Aspergilose Invasiva apresentam antigénio galactomanano em circulação no organismo, um polissacarídeo ligado à parede celular do fungo e que é libertado por espécies de Aspergillus durante o seu crescimento.
Nos últimos anos desenvolveu-se um teste “Platelia®Aspergillus” – Bio-Rad, o qual
permite a detecção de antigénio galactomanano circulante em doentes que apresentam Aspergilose Invasiva. Pretendeu-se, no presente trabalho, avaliar a utilidade desta metodologia na detecção precoce de doentes com elevado risco de virem a contrair esta doença, contribuindo, desta forma, para a diminuição da sua morbilidade e da mortalidade.
Abstract
XIV
Foi estudada a detecção do antigénio galactomanano em 219 amostras de soro correspondentes a 16 doentes submetidos a alotransplante. Neste estudo foi utilizado o Kit “Platelia®Aspergillus” – Bio-Rad com uma sensibilidade ≥ 1,5 ng/ml e, paralelamente, num
número reduzido de amostras foi realizado o mesmo teste mas com um valor de cut-off ≥ 0,5 ng/ml.
Da avaliação deste estudo, ressalta que para um valor de cut-off ≥ 1,5 ng/ml o valor da sensibilidade foi de 100%, enquanto que a especificidade foi de 98,6%. No teste em que foi utilizado um cut-off ≥ 0,5 ng/ml não foi possível realizar o estudo da sensibilidade nem da especificidade, pelo facto de o número de amostras ser muito reduzido.
Pelos resultados obtidos, podemos concluir que foi possível detectar a presença de antigénio galactomanano num doente que apresentou sinais clínicos evidentes de Aspergilose Invasiva. Por tudo isto, a detecção do antigénio galactomanano pode ser considerada como um teste auxiliar no diagnóstico da Aspergilose Invasiva.
Palavras-Chave: Aspergillus fumigatus, Aspergilose Invasiva, Doença Enxerto Contra Hospedeiro (DECH), galactomanano, serologia, transplantação alogénica.
Abstract
XVII
ABSTRACT
The Invasive Aspergillosis is a fungal infection constituting a serious problem in some patients, namely the ones who show a serious immunosuppression, being responsible for high morbidity and mortality. These patients include individuals with hematological neoplasy, in particular acute leukemia, solid organ receptors, bone marrow receptors specially if submitted to allogeneic transplantation, individuals who show serious and delayed neutropenia or a neutrophil’s dysfunction and also the ones who are submitted to high corticoids doses.
The stem cells receptors patients, in particular derived from no parental donors, show during long time period, an additional risk in contracting Invasive Aspergillosis. This risk is due to alterations at a mucous level, Graft failure, Graft-Versus-Host Disease and also, to Broad-Spectrum Antimicrobial Therapeutic, as well as, to the employment of the corticosteroids to what they are usually submitted.
Has been verified that the patients with suspicious of Invasive Aspergillosis present galactomannan antigen in their organism circulation, a polysacarid associated to cellular wall of the fungi being released by Aspergillus species during their own growth.
Last years “Platelia®Aspergillus” – Bio-Rad test were developed which allows the
detection of circulating galactomannan antigen in patients who present Invasive Aspergillogis.
With this study it was intended to evaluate the utility of this methodology in the precocious detection of patients with high risk in contracting this disease, contributing to de decrease of its morbidity and mortality.
Abstract
XVIII
It was studied the galactomannan antigen detection in 219 serum samples, corresponding to 16 patients submitted to allogeneic transplantation. In this study it was used the “Platelia®Aspergillus” – Bio-Rad Kit with a sensitivity ≥ 1,5 ng/ml and pararelly, in a
reduced number of samples was made the same test but with a value of cut-off ≥ 1,5 ng/ml. By the evaluation of this study it was clear that, for a cut-off ≥ 1,5 ng/ml value, the sensitivity was 100%, on the other hand the specificity was 98,6%. On the test which we used a cut-off ≥ 0,5 ng/ml test, it was not possible to make the study neither of the sensitivity nor of the specificity, due to the fact of the number of samples being to low.
By the obtained data, we can conclude that was possible to detect the presence of the galactomannan antigen on a patient who showed clinical evident signs of Invasive Aspergillosis. Therefore, the detection of galactomannan antigen can be considered as an auxiliary test on the diagnostic of Invasive Aspergillosis.
Keywords: Aspergillus fumigatus, Invasive Aspergillosis, Graft-Versus-Host Disease (GVHD), galactomannan, serology, allogeneic transplantation.
Lista de Siglas e Abreviaturas
XXI
LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS
Acm – anticorpo monoclonal AI – Aspergilose Invasiva AN – Ácidos Nucleicos
API – Aspergilose Pulmonar Invasiva ATG – AntiTimócito Globulina BDG – β-D-glucanos
CMV – Citomegalovirus
DECH – Doença Enxerto Contra Hospedeiro DNA – Ácido Desoxirribonucleico
DO – Densidade Óptica
EBA – anticorpo monoclonal de rato EBA-2 EDTA – Ácido EtilenoDiaminoTetrAcético EE UU – Estados Unidos
EIA – Enzyme Immunosorbent Assay
ELISA – Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay
EORTC – European Organization for Research and Treatment of Cancer EPE – Empresa Pública Empresarial
FDA – Food and Drug Administration fg – fentograma
GM – Galactomanano
Lista de Siglas e Abreviaturas
XXII
HLA – Antigénio Leucocitário Humano IFI – Infecção Fúngica Invasiva
IFICG – Invasive Fungal Infections Cooperative Group IgE – Imunoglobulina E
IgG – Imunoglobulina G
IPOFG – Instituto Português de Oncologia Francisco Gentil LBA – Lavado BroncoAlveolar
LCR – Liquido Cefalo-Raquidiano MSG – Mycoses Study Group N – Normal
ng – Nanograma
NIAID – National Institute of Allergy and Infectious Diseases
µm – mícrons
PAS – Ácido Periódico de Schiff PCR – Polimerase Chain Reaction R3 – controlo negativo
R5 – controlo positivo RNA – Ácido Ribonucleico
RNA(se) – enzima que degrada o RNA SNC – Sistema Nervoso Central
STMO – Serviço de Transplantação de Medula Óssea TAC – Tomografia Axial Computorizada
TC – Tomografia Computorizada
TCAR – Tomografia Computorizada de Ata Resolução VS – valor de cut -off
Índice de Tabelas
XXV
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1 – Aspecto macroscópico (A). Colónias de Aspergillus fumigatus em meio de Sabouraud Dextrose Agar, incubadas 5 dias a 25°C. Aspecto microscópico (B). Cabeças aspergilares: conidióforos, vesículas, fiálides
e fialoconídios. 7
Figura 2 – Cabeças aspergilares na cavidade pulmonar. 13
Figura 3 – Aspergillus fumigatus causando AI num pulmão humano. Característica morfológica da ramificação dicotómica em ângulo agudo
das hifas no tecido. 15
Figura 4 – Tomografia Computorizada de um doente com Aspergilose
Pulmonar. 16
Figura 5 – Esquema da reacção da técnica “Platelia Aspergillus ELISA”. 68
Figura 6 – Diagrama de dispersão das determinações efectuadas nos 16
doentes (D1-D16). 75
Figura 7 – Estudo comparativo da cinética do antigénio GM (em algumas
amostras) no doente com Linfoma não Hodgkin. 78
Figura 8 – Comparação da cinética relativa à antigenemia do GM, entre duas sensibilidades diferentes (em algumas amostras) num doente com
diagnóstico de IFI. 80
Índice de Tabelas
XXIX
ÍNDICE DE TABELAS
Tabela 1 – Estadiamento e graduação recomendada da DECH aguda. 30
Tabela 2 – Percentagem (%) de risco de AI em doentes com culturas
positivas de Aspergillus spp.. 35
Tabela 3 – Regime de condicionamento. 62
Tabela 4 – Tipo de diagnóstico. 63
Tabela 5 – Diagnósticos/fase da doença no transplante. 64
Tabela 6 – Valores de antigénio GM determinados nos soros dos doentes
intervenientes no estudo. 74
Tabela 7 – Valores de antigénio GM em 3 doentes, considerando o valor
