Revista da So ciedade Brasileira de M edicina Tropical 2 8 (3 ):2 8 9 - 2 9 0 , jul- set, 199 5.
RESUM O D E TESE
AVALIAÇÃO
IN VITRO
PO RTRÊS D IFEREN TES M ÉTO D O S D A SEN SIBILID A D E D E LEV ED URA S AA N TIFÚN G ICO S A Z Ó IIC O S
Nas últimas d écad as, ho uv e mud anças exp ressiv as na ep id em io lo gia das m ico ses humanas. Há co nsenso na literatura so bre o aumento na incid ência das mico ses sistêmicas e m ud ança no esp ectro d e m icro o rganism o s causado res dessas micoses. A lém disso, novas o p çõ es terap êuticas à anfo tericina B foram desenvolvid as e há relato s de resistência de fungo s às drogas disponíveis comercialmente. Estes fato res ho je justificam reavaliar a impo rtância da pad ro nização do s testes de susceptibilid ad e de fungo s a drogas antifúngicas.
Em 1982, o National Co mmittee for Clinicai Laboratory Standards (NCCLS) estabelceu um subco m itê para d iscutir o s testes de susceptibilidade de fungo s a drogas antifúngicas, tend o em vista d esenv o lv er um m éto d o
ref erên cia ou “gold standard”.
Basead o em estud o s m ulticêntrico s, em d ezembro d e 1992, o NCCLS divulgou uma p ro p o sta d e p ad ro nização do teste de s u s c e p tib ilid a d e d e le v e d u ras a d ro g as a n ti f ú n g i c a s . O te s te d e r e f e r ê n c i a padronizad o p elo NCCLS significou um grande av anço na busca da credibilidade dos testes de av aliação in v itro d as d ro gas antifúngicas. Entretanto, a macro d iluição é teste que exige muito esp aço físico e tem po de trabalho para ser executad a e não é o méto d o eco nô m ico .
O o bjetiv o d este trabalho fo i comparar os resultados de Co ncentração Inibitória Mínima (CIMs) de fluconazo l, itraconazol e ceto co nazo l frente a 100 levduras, obtidos p elo métod o referência, co m o s resultados obtid os po r dois métod os alternativos: Etest e a microdiluição.
O Etest (A B Bio d isk, Suécia) fo i realizado rigo rosamente de aco rd o co m as instruçõ es do fabricante. A micro diluição fo i realizada de aco rd o co m os mesmos parâmetros padronizados p elo NCCLS para o m éto d o referência. As 100 leveduras foram testadas conjuntamente pelo s três métodos.
Fo i feita análise d e co rrelação pareada entre as CIMs obtid as para cada droga, referente aos 100 organismos testados, contrastando -se valores gerad o s p elo métod o referência co m aqueles o btid o s co m os 2 métod os alternativos. De aco rd o co m o critério adotado , as CIMs obtidas p elo m éto d o alternativo fo ram consideradas equiv alentes ao m éto d o -referência quand o ambas apresentaram exatamente o mesmo valor
Recebid o para publicação em 22/ 11/ 94.
IN VITRO
EV A LUA TION O F YEA STS SUSCEPTIBILITY TO A N TIFUN G A LA ZO LES, B Y USIN G TH REE D IFFEREN T TESTIN G M ETH O D S
Paralleling the increased prevalence o f fungal infectio ns has b een the introd uction o f new antifungal agents and the reco gnitio n o f resistant isolates to antifungal drugs. Co nsequently, there is a g reater need fo r a p recise in v itro
susceptibility testing method as a guide to selecting and monitoring antifungal therapy.
Despite advances represented by the recent standardization o f a macro bro th proced ure by the National Committee fo r Clinical Laboratory Standards (NCCLS), ad d itio nal effo rts are necessary for d evelo pment o f simpler and more econom ical methods.
The main purpose o f this study is to co mpare the Minimal Inhibito ry Co ncentratio n (MIC) results o f fluco nazo le, keto co naz o le and itraco nazo le o btained by the reference m acro bro th p ro ced ure w ith 2 alternativ e methods, Etest and microdilution, against 100 yeasts representing 5 different sp ecies o f relevant human pathogenic fungi.
The Etest w as p erfo rm ed acco rd ing to m anufacturer’s instructio ns. The reference m acro bro th d ilutio n m etho d and the microdilution procedure w ere bo th perfo rmed according to the pro po sed NCCLS standard.
The MIC results o btained by the macrobroth procedure w as compared “head to head ” to each o ne o f bo th alternative method s: Etest and micro dilutio n. Essential ag reem ent w as considered w hen reference results and results obtained by an alternative method agreed exactly or w ere w ithin 1 tw ofold dilution.
Etest and micro dilutio n w ere less labo r intensive than the macro bro th dilution and bo th alternative method s can be perfo rmed by any routine laboratory.
The end point readings fo r the azo les, by all 3 methods, presented p ro blems in the reading
R esumo d e Tese. Colombo AL. A v aliação in vitro p o r três diferentes métodos da sensibilidade de lev eduras a antifúngico s azólicos. Revista da So ciedade Brasileira de M edicina Tropical 28:2 8 9 - 2 9 0 , jul- set, 1995 .
ou d iferença d e ap enas 1 d iluição (v alo r referência ± 1 diluição).
A execução do méto d o referência fo i muito m ais la b o rio s a q u e am b o s o s m é to d o s a lte rn ativ o s e stu d ad o s. O s trê s m é to d o s apresentaram dificuldades na leitura de seus resultad os devido à presença do “trailing” . Os resultad os de Etest e macro d iluição tiveram ín d ic e s d e c o n c o rd ân c ia q u e v ariaram significativamente entre as co m binaçõ es de droga e esp écies d e levedura analisadas. De modo geral, estes índ ices variaram de 30% a 100% dos resultados, send o que os pio res índ ices foram o btid o s co m amostras de C. tropicalis. Entre os resultad os d isco rd antes o btid o s po r Etest e macrod iluição, as CIMs referentes ao Etest foram meno res que o s valores referência.
O s índ ices d e co nco rd ância entre CIMs obtidas p o r microdiluição e métod o-referência tiveram com po rtamento mais ho m o gêneo entre as esp écies d e leved uras testad as. Das 15 diferentes co m binaçõ es entre as 3 d rogas e 5 esp écies avaliadas, 12 apresentaram índ ices de co nco rd ância entre 80% e 100% d os resultados. Entre os resultados discordantes obtid os pelo s dois métod os, as CIMs referentes ã microdiluição foram maiores que os valo res referência.
Avanços significativos foram alcançad os na pad ro nização d e testes d e sensibilid ad e de fungo s a d ro gas antifúngicas. Entretanto , é fund amental a realização de estudos so bre a co rrelação in vitro x in vivo d e seus resultados, para permitir a análise e interp retação da significância clínica dos dados obtid os nestes testes.
interpretation. The trailing pheno m ena seen in the .macrobroth dilution w as also present in the Etest, being m anifested by the gro w th o f micro co lo nies inside the inhibitio n zo ne.
The range o f essential ag reem ent rates betw een Etest and reference metho d w as from 33% to 100%, acco rd ing to the sp ecies and drugs tested. C. tropicalis isolates pro duced the lo w est essential agreem ent rate b etw een the tw o m etho d s. A mong the d esag reem ent results betw een bo th method s, Etest generated lo w er MIC results than the reference method.
The range o f essential ag reem ent rates betw een microdilution and reference method w as from 64% to 100%, acco rd ing to the sp ecies and drugs tested. In addition, the essential agreement rates in 13 o f the 15 organism-drug co mbinatio ns tested by bo th method s, w ere >
80% . A mong the desagreement results betw een bo th methods microdilution generated higher MIC results than the reference method.
Finally, despite ad vances rep resented by the stand ardizatio n o f antifungal suscep tibility testing, additional effo rts are necessary to study
A rnaldo Lopes Colombo
Tese apresentada à Escola Paulista de Medicina para o btenção do Título de Doutor.
São Paulo, SP, Brasil, 1994