Coupes histologiques

Après avoir fixer les organes (Foie, hippocampe et cortex) au formaldéhyde, afin de conserver les structures dans leur états de départ, les organes ont passé à l’inclusion qui a été faite au Centre de Pathologie de Dijon. L’inclusion permet donc de réaliser des coupes fines et régulières. Le milieu d'inclusion le plus utilisé est la paraffine. Comme la paraffine est hydrophobe, le prélèvement a d'abord subit une déshydratation (par immersion dans des bains d'alcool de degré croissant puis dans des bains de toluène) avant d'être coulé dans un moule contenant de la paraffine fondue par chauffage et devenue liquide, qui infiltre alors toute la pièce. Après refroidissement, on se trouve en présence d'un bloc de paraffine, dur, à l'intérieur duquel la pièce prélevée est incluse. Ensuite les coupes du bloc de paraffine sont faites avec un microtome permettant de réaliser des tranches de section (coupes) de 2 à 5 μm d'épaisseur.

Les coupes sont recueillies sur des lames de verre qui sont colorées en hématoxyline- éosine et vues au microscope.

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I. Caractérisation de l’arganier et de l’huile d’argan 1. Arganier

1.1 Détermination des paramètres chimiques de diffèrentes parties d’Argania spinosa

Le tableau 12 montre les paramètres chimiques de différentes parties d’Argania spinosa en terme de teneur en eau (humidité), cendres (matière minérale), lipides, protéines et en sucre. Comaparativement avec la région d’Agadir, les résultats montrent que les différentes parties de la région de Berkane, à savoir:

- l’amande est riche en protèines.

- la pulpe est riche en sucre.

- les feuilles sont riches en protéines.

- la coque est riche en sucre et faible en lipides.

Toutefois, les autres paramètres sont pratiquement les mêmes dans les différentes parties de la plante au niveau des deux régions.

Tableau 12: Composition chimique de différentes parties de la plante d’Argania spinosa

1.2 Détermination des composés phénoliques a. Evaluation quantitative des polyphénols totaux

Le dosage des phénols totaux a été évalué par la méthode colorimétrique de Folin- Ciocalteau. C’est l’une des méthodes les plus anciennes conçue pour déterminer la teneur en polyphénols, des plantes médicinales et les nourritures (Abdel-Hameed, 2009). La lecture de la densité optique à 725 nm permet de déterminer la concentration des phénols totaux en se

Partie de la

plante La région % d'humidité

% de cendres

% de lipides

% de protéines

% de sucre

Amande Berkane 1,20 3,00 20,00 10,50 65,30

Agadir 1,15 3,00 27,00 1,75 67,10

Coque Berkane 1,3 2,00 3,00 1,75 91,95

Agadir 1,5 1,00 17,00 1,31 79,19

Pulpe Berkane 73,00 3,00 8,00 5,25 10,75

Agadir 72,79 5,00 9,00 6,13 7,09

Feuilles Berkane 59,00 6,00 5,00 10,50 19,50

Agadir 60,25 7,00 6,00 7,56 19,14

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référant à la courbe d’étalon dressée à partir de concentrations connues de l’acide gallique (exprimée en mg d’acide gallique/g de matière sèche). L’acide gallique est le standard le plus souvent employé dans la méthode de Folin-Ciocalteu.

Nous nous sommes intéressés à analyser ces résultats, en mettant l’accent sur la composition des différentes parties de l’arganier (amande, coque, pulpe, feuilles et rameaux) en terme de polyphénols de deux régions Berkane et Agadir. Le dosage des polyphénols totaux a été réalisé sur les extraits méthanoliques qu’on appelle les extraits bruts, les extraits non lipidiques et les extraits hexaniques. Les résultats montrent que les teneurs en polyphénols totaux, dans les deux régions, sont plus élevées au niveau des extraits bruts (EB) suivi des extraits non lipidiques (ENL) et les extraits hexaniques (EH) des différentes parties de l’arganier : EB > ENL > EH (Figure 46).

La teneur en polyphénols totaux diffèrent d’une partie à l’autre de la plante d’arganier, nous trouvons qu’au niveau de la région de Berkane, la pulpe est la partie la plus riche en polyphénols (EB : 2,64 mg d’AG/g MS ; ENL : 2,24 mg d’AG/g MS ; EH : 0,91 mg d’AG/g MS ), tandis que l’amande est la partie la plus pauvre (EB : 0,58 mg d’AG/g MS ; ENL : 0,4 mg d’AG/g MS ; EH : 0,16 mg d’AG/g MS ) (Figure 46 B). Il en est de même pour Agadir, la pulpe contient une grande quantité de polyphénols (EB : 2,56 mg d’AG/g MS ; ENL : 1,58 mg d’AG/g MS ; EH : 1,31 mg d’AG/g MS ), que l’amande n’en possède pas (EBM : 0,4 mg d’AG/g MS ; ENL : 0,39 mg d’AG/g MS ; EH : 0,43 mg d’AG/g MS ) (Figure 46 A).

Nous pouvons donc classer la teneur en polyphénols comme suit :

- au niveau de Berkane : La pulpe > Rameaux > Feuilles > Coque > Amande.

- au niveau d’Agadir : La pulpe > Feuilles > Rameaux > Coque > Amande.

En vu d’ensemble, les deux régions contiennent des polyphénols mais avec des grandeurs un peu faible. Cependant la région de Berkane est légèrement riche en polyphénols par rapport à celle d’Agadir.

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Les résultats sont présentés en moyenne ± écart type de trois expériences différentes. La significativité entre l’extrait brut et l’extrait non lipidique et entre l’extrait hexanique est calculée par le test Anova (Sidak’s multiple comparisons); * p ≤ 0,05.

Extrait brut = extrait méthanolique ; Extrait hexanique = extrait lipidique.

Figure 46: Quantité des polyphénols totaux exprimée en mg d’acide gallique / g de matière sèche, contenue dans les différentes parties d’arganier (amande, coque, pulpe, feuilles, rameaux) de deux régions Agadir (A) Berkane (B)

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b. Evaluation quantitative des flavonoïdes

Les flavonoïdes constituent la classe polyphénolique la plus importante, avec plus de 5000 composés déjà décrits (Gomez-Caravaca et al., 2006). La détermination des flavonoïdes totaux a été effectuée par la méthode colorimétrique de chlorure d’aluminium décrite par Dehpeur (Dehpeur et al., 2009), en utilisant comme standard la quercétine. Les teneurs en flavonoïdes sont exprimées en mg Equivalent quercétine /g de matière sèche.

Les résultats du dosage des flavonoïdes suivent la même logique que ceux des polyphénols. Le dosage des flavonoïdes totaux a été réalisé sur les extraits méthanoliques, non lipidiques et hexaniques de différentes parties de la plante (amande, coque, pulpe, feuilles et rameaux) de deux régions d’Agadir et de Berkane. Les résultats montrent que les teneurs en flavonoïdes totaux, dans les deux régions, sont plus élevées au niveau des extraits bruts méthanoliques (EB) suivi des extraits non lipidique (ENL) et des extraits hexaniques (EH) des différentes parties de l’arganier : EB > ENL > EH (Figure 47).

Comme pour les polyphénols, la teneur en flavonoïdes totaux diffèrent d’une partie à l’autre de la plante d’arganier. Au niveau de la région de Berkane, la pulpe représente la partie la plus riche compartivement à l’amande, rameaux, feuilles et coque (La pulple > Amande >

Rameaux > Feuilles > Coque) (Figure 47 B). On note qu’au niveau de la plupe de Berkane, l’EB : 7,56 mg d’AG/g MS ; ENL : 4,27 mg d’AG/g MS ; EH : 2,16 mg d’AG/g MS, tandis que l’amande est la partie la plus pauvre (EB : 4,88 mg d’AG/g MS ; ENL : 3,88 mg d’AG/g MS ; EH : 0,47 mg d’AG/g MS ). Il en est de même pour Agadir, la pulpe contient une grande quantité de flavonoïdes (EB : 5,39 mg d’AG/g MS ; ENL : 2,78 mg d’AG/g MS ; EH : 1,69 mg d’AG/g MS ), que l’amande n’en possède pas (EB : 1,77 mg d’AG/g MS ; ENL : 1,25 mg d’AG/g MS ; EH : 1,3 mg d’AG/g MS ) (La pluple > Rameaux > Feuilles > Amande >

Coque) (Figure 47 B).

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Les résultats sont présentés en moyenne ± écart type de trois expériences différentes. La significativité entre l’extrait brut et l’extrait non lipidique et entre l’extrait hexanique est calculée par le test Anova (Sidak’s multiple comparisons); * p ≤ 0,05.

Extrait brut = extrait méthanolique ; Extrait hexanique = extrait lipidique.

Figure 47: Quantité des flavonoïdes exprimée en mg de quercétine / g de matière sèche, contenue dans les différentes parties d’arganier (amande, coque, pulpe, feuilles, rameaux) des deux régions Agadir (A) et Berkane (B)

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1.3 Evaluation du pouvoir antioxydant des extraits d’arganier a. Détermination de l’effet scavenger du radical DPPH

L’activité antioxydante des différents extraits d’arganier vis-à-vis du radical DPPH à été évaluée spectrophotométriquement en suivant la réduction de ce radical qui s’accompagne par son passage de la couleur violette à la couleur jaune mesurable à 517 nm. Le % de piégeage (= activité anti-radicalaire) du radical libre DPPH montre la capacité de l’extrait, à une concentration donnée, à réduire ou non les radicaux. Nos résultats exprimés en tant que concentration d’extrait (mg/mL) capable d’inhiber 50% de la réaction, les données sont résumées dans la figure 48, qui représente l’IC50 des extraits d’arganier de différentes parties de la plantes de deux régions différentes (Berkane et Agadir) vis-à-vis du radical libre DPPH.

L’activité anti-radicalaire des extraits de Berkane, l’extrait non lipidique de la coque, l’extrait non lipidique et hexanique des feuilles, l’extrait non lipidique et hexanique des rameaux; était plus importante par rapport à celle d’Agadir. L’activité anti-radicalaire des autres extraits ne présente pas une différence significative en comparant les deux régions étudiées. En vu d’ensemble, les extraits de la région de Berkane étant la région qui possède l’activité antioxydante la plus importante comparativement à la région d’Agadir.