Etude des fractions oxygénées F7-F11

La composition chimique de chacune des fractions oxygénées est donnée dans le Tableau 21. Tous les sesquiterpènes de ces fractions oxygénées sont des alcools tertiaires possédant une polarité très proche. Il n’a donc pas été possible d’isoler les produits non-identifiés dans l’huile essentielle. Seule une variation quantitative est observée pour les fractions F8 à F11.

L’analyse de la fraction F7 nous permet d’identifier le (E)-nérolidol 49, alcool linéaire sesquiterpénique, malgré le fort pourcentage du cis-guai-6-èn-10β-ol 52 (66,3%). L’étude de la fraction F8 nous permet de confirmer la présence des composés identifiés dans l’huile essentielle mais surtout d’observer la présence de neuf autres alcools tertiaires sesquiterpéniques. Le squelette eudesmane est représenté par 4 de ces alcools qui sont isomères deux à deux de par la position de leur double liaison (7-épi-α 71 / 7-épi-γ-eudesmol 57 ; eudesm-6-èn-4α-ol 56 / eudesm-7(11)-èn-4α-ol 72). En revanche, les 5 autres présentent des squelettes très divers : le spathulénol 51, l’épicubénol 55, l’alismol 61, l’α-cadinol 67 et le sélin-11-èn-4α-ol 68.

L’étude des fractions F9 à F11, nous permet d’identifier le guaiol 54 et le τ-muurolol 63 (fraction F9), le τ-cadinol 64, le (E)-phytol 74 (fraction F10). Toutes les molécules précédemment citées ont été identifiées par consultation de la banque « Terpènes ». En revanche, le trans-guai-6-èn-10β-ol 59 (fraction F8), l’amorph-4-èn-10α-ol 65 (F8) et l’amorph-4-èn-10β-ol 53 (F10) n’étaient pas présents dans cette banque de spectres. Nous détaillerons leurs identifications par rapport aux données de la littérature dans la partie VIII.

Il est à noter que le β−élémol 66 et l’α-cadinol 67 coéluent sur colonnes apolaire et polaire. L’intensité des raies de résonance de RMN du ¹³C d’une molécule est proportionnelle à son abondance dans le mélange. Nous avons donc relevé l’intensité d’une raie de résonance non-superposée d’un carbone hybridé sp³ de l’α-cadinol et du β−élémol. Le pourcentage de chacun des deux constituants est donc estimé en tenant compte du ratio entre les intensités ainsi que du pourcentage relatif relevé sur colonne polaire.

Dans la fraction F10, une série de 15 raies de résonance reste non-attribuée. A l’aide d’une étude complète RMN 1D et 2D et spectrométrie de masse, il nous a été possible d’identifier

germacra-1(10),5-dièn-4α-ol 58 absent des bibliothèques de spectres. Nous détaillons son analyse structurale dans la partie VIII.

N° ^♦ Constituants Ira Irp HE F7 F8 F9 F10 F11

Eluant 95/5 80/20 80/20 80/20 0/100

Masses (mg) 1840,0 280,3 304,7 250,0 121,7 116,9 14 linalol 1080 1551 tr 0,2 0,2 - - -

47 β−élémol 1532 2094 9,1 - 16,2 25,8 26,3 25,3

49 (E)-nérolidol 1541 2049 1,1 6,8 3,5 - - - 51 spathulénol 1561 2114 tr tr 1,0 tr - -

52 cis-guai-6-èn-10β-ol 1575 1993 6,3 66,3 6,0 tr - -

53 amorph-4-èn-10β-ol 1577 2083 tr - - tr 2,2 0,6 54 guaiol 1580 2083 1,2 - 0,5 1,2 0,4 tr

55 epi-cubénol 1582 2062 tr - 1,8 tr - -

56 eudésm-6-èn-4α-ol 1604 2092 2,2 - 2,7 5,0 2,1 - 57 7-épi-γ-eudesmol 1609 2036 0,4 - 1,8 0,3 0,2 0,2

58 germacra-1(10),5-dièn-4α-ol 1611 2188 2,4 0,7 2,1 4,5 9,6 8,4

59 trans-guai-6-èn-10β-ol 1612 2158 1,4 - 1,1 3,3 5,2 6,7

60 γ-eudesmol 1614 2178 1,4 - 5,2 3,2 2,2 0,8

61 alismol 1617 2270 1,2 - 2,7 4,2 2,7 1,3 62 érémophilen-11-ol Δ9-10 1623 2198 4,2 - 14,4 5,8 4,2 1,1

63 τ-muurolol 1627 2200 0,1 - 0,2 0,5 - -

64 τ-cadinol 1630 2173 0,1 - - tr 0,6 0,1

65 amorph-4-èn-10α-ol 1641* 2210 2,2 - 0,7 1,2 2,1 19,2

66 β−eudesmol 1641* 2244 5,5 - 8,6 17,7 19,7 12

67 α−cadinol 1641* 2244 0,7 - 0,9 0,9 1,2 5,4

68 selin-11-èn-4α-ol 1643* 2238 tr - 0,5 tr - - 69 valérianol 1643* 2214 2,1 - 1,9 4,6 3,7 2,9

70 α-eudesmol 1646 2238 4,4 - 6,6 13,3 13,4 7,7

71 7-épi-α-eudesmol 1649 2228 0,5 - 1,5 1,1 0,6 tr 72 eudesm-7(11)-èn-4α-ol 1682 2310 0,4 - 1,5 0,7 0,2 - 74 (E)-phytol 2104 2620 0,3 - tr tr 0,6 tr

Total 47,2 74 81,6 93,3 97,2 91,7

L’ordre d’élution est donné sur colonne apolaire. Ir ^a et Ir ^p : indices de rétention mesurés respectivement sur colonne apolaire (BP1) et polaire (BP20). % ^a : pourcentages mesurés sur colonne apolaire, exceptés les pourcentages suivis d’un astérisque (colonne polaire). ^♦ : numérotation associée à chaque constituant faisant référence au Tableau 22.

Tableau 21 : Composés identifiés dans les fractions oxygénées F7-F11 de l’huile essentielle de F. japonica.

IV.3 Bilan de l’étude de l’huile essentielle de F. japonica

Au terme de notre étude sur la composition chimique de l’huile essentielle de Fortunella japonica (Thumb.) Swing. réalisée par CPG(Ir), CPG-SM et RMN ¹³C, nous avons mis en évidence 69 composés qui représentent 93,1% de l’huile essentielle (Tableau 22). Parmi ces constituants, 57 ont été identifiés directement par interrogation de la banque « Terpènes », 4 à partir de la banque « Littérature » et 7 uniquement par analyse CPG-SM et CPG(Ir). Un alcool tertiaire sesquiterpénique possédant le squelette germacrane, le germacra-1(10),5-dièn- 4α-ol, n’était présent dans aucune des banques de spectrométrie de masse et de RMN du ¹³C.

L’huile essentielle de Fortunella japonica (Thumb.) Swing. est caractérisée par la présence majoritaire du germacrène D 34 (14,9%), du β-élémol 47 (9,1%) et du limonène 7 (7,1%). De nombreux composés présentent une teneur supérieure à 1%. Il s’agit de :

• 5 sesquiterpènes oléfiniques : le δ−élémène 17 (5,2%), le β−élémène 22 (3,3%), le germacrène B 50 (2,4%), le (E)-β-caryophyllene 24 (1,6%), le δ-amorphène 44 (1,6%), le δ- cadinène 46 (1,0%).

• 14 alcools tertiaires sesquiterpéniques : (E)-nérolidol 49 (1,1%), cis 52 (6,3%) et trans-guai-6-èn-10β-ol 59 (1,4%), guaiol 54 (1,2%), l’alismol 61 (1,2%), eudesm-6-èn-4α-ol 56 (2,2%), l’α 70 (4,4%), β 66 (5,5%) et γ-eudesmol 60 (1,4%), érémophilen-11-ol Δ9-10 62 (4,2%), amorph-4-èn-10α-ol 65 (2,2%), valérianol 69 (2,1%) et le germacra-1(10),5-dièn-4α- ol 58 (2,4%).

Il est à noter d’une part, la forte teneur en sesquiterpènes possédant des squellettes très variés (Figure 31). L’ensemble de ces constitiuants représentent près de 85% de la composition chimique de l’huile essentielle. De plus, les alcools tertiaires sesquiterpéniques représentent quasiment la moitié (47%) de la composition chimique.

La composition chimique de cette huile essentielle de Fortunella japonica (Thumb.) Swing. se rapproche de celles décrites en Grèce et Colombie (Kentarou et al., 2007 ; Quijano et Pino, 2009) par l’abondance en germacrène D et en β-élémol et aussi par la présence des γ- et β-eudesmols. Cependant la forte teneur en sesquiterpènes ainsi que la présence de nombreux constituants peu communs dont le germacra-1(10),5-dièn-4α-ol, constitue une certaine originalité de cette huile essentielle.

Squelette germacrane Squelette humulane

germacrène D

HO

germacra-1(10),5-diène-4αol α-humulene γ-humulène

Squelette cadinane Squelette guaiane

H OH

H

τ-cadinol

H

δ-cadinène

H

HO H

alismol

H

H OH

guai-6-en-10-αol

Squelette eudesmane

OH

γ-eudesmol

OH H

α-eudesmol

OH H

β-eudesmol

Squelette élémane Squelette amorphane

H OH

β-élémol

H

δ-élémène

H

H

α-amorphène

H OH

H

amorph-4-èn-10-ol

Figure 31 : Divers squelettes monocycliques et bicycliques de sesquiterpènes retrouvés dans les huiles essentielles de Fortunella japonica.

V. COMPOSITION CHIMIQUE DE L’EXTRAIT D’HYDROLAT DE