Identificação morfológica e molecular da região rDNA ITS, e dos genes β-tubulina e calmodulina dos fungos presentes em castanha do Brasil da região Amazônica, Acre e

Amapá

A identificação taxonômica clássica morfológica dos fungos isolados a partir da castanha do Brasil, coletadas em cooperativas da região Amazônica, das regiões Manicoré, Itacoatiara, Caroebe e Humaitá, e Amapá, contrastam com a análise molecular. Entretanto, a identificação taxonômica morfológica das amostras coletadas da região do Acre, corroboram com os resultados BLASTn (tabela 3).

A análise BLASTn das sequências das regiões rDNA ITS, β-tubulina e calmodulina contra amostras tipo (ex-type) de espécies de Aspergillus depositadas no Genbank, revelaram similaridade entre 99 e 100% com quatro espécies de Aspergillus. As espécies identificadas foram A. flavus, A. nomius, A. tamarii e A. fumigatus. Na região Amazônica, foram identificados 17 isolados de A. nomius e três isolados de A. tamarii. No Acre foram identificados 18 isolados de A. flavus e um isolado de A. nomius. No Amapá foram identificados 20 isolados de A. nomius e um isolado de A. fumigatus. Resultados da análise BLASTn indicam que a contaminação por aflatoxinas das castanhas do Brasil, na região Norte do Brasil, é predominantemente por isolados de A. flavus e A. nomius (tabela 3). Apesar do número total de isolados identificados de A. flavus e A. nomius ser similar, esses números variaram consideravelmente entre as regiões de coleta. A. flavus comumente encontrado no Estado do Acre, e A. nomius com maior frequência nos Estados do Amapá e Amazonas.

Aspergillus, seguida por origem geográfica da coleta, identificação taxonômica morfológica clássica, e identificação molecular para os marcadores das regiões do rDNA ITS, β-tubulina e calmodulina. Para cada classificação BLASTn, são dados os valores de cobertura, E-value, máxima de identidade para cada sequência analisada em homologia com as sequências do banco de dados NCBI, assim como o número de acesso da sequência homóloga do NCBI.

Identificação do isolado Origem geográfica Taxonomia morfológica Classificação BLASTn (rDNA ITS contra NCBI nr)

Cobertura _value E Máxima de _identidade Acesso NCBI

Classificação BLASTn (β-

tubulina contra NCBI nr)

Cobertura _value E Máxima de _identidade Acesso NCBI

Classificação BLASTn (calmodulina

contra NCBI nr)

Cobertura _value E Máxima de _identidade Acesso NCBI

CMEA 01 Acre A. flavus A. flavus 97% 0 100% AF027863.1 A. flavus 84%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 99% EF661505.1 CMEA 02 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 84%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 99% EF661514.1 CMEA 03 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 83%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 100% 0.0 100% KJ175541.1 CMEA 05 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 85%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 100% 0.0 100% KJ175541.1 CMEA 06 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 85%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 100% 0.0 100% KJ175541.1 CMEA 08 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 84%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 99% EF661505.1 CMEA 09 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 85%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 100% 0.0 100% KJ175541.1 CMEA 10 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 84%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627692.1 CMEA 11 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 82%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627693.1 CMEA 12 Acre A. flavus A. flavus 98% 0 100% AF027863.1 A. flavus 84%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 100% 0.0 100% KJ175541.1 CMEA 13 Acre A. flavus A. flavus 99% 0 100% AF027863.1 A. flavus 82%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 100% 0.0 100% KJ175541.1 CMEA 18 Acre A. flavus A. flavus 98% 0 99% AF027863.1 A. flavus 84%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627693.1 CMEA 19 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 99% AF027863.1 A. flavus 84%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627693.1 CMEA 20 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 99% AF027863.1 A. flavus 84%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627693.1 CMEA 21 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 82%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627692.1 CMEA 22 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 80%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627692.1 CMEA 25 Acre A. glaucus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 CMEA 29 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 83%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627692.1 CMEA 30 Acre A. flavus A. flavus 100% 0 100% AF027863.1 A. flavus 83%$ 0.0 99% HE577823.1 A. flavus 99% 0.0 100% JX627692.1

MAD1-

C3/I3/10 Amapá A. fumigatus A. nomius 90% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 99% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 MAD-C2/I6 Amapá A. glaucus A. nomius 96% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 MAD2-C4/I8 Amapá A. fumigatus A. nomius 92% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 MAD3-C1/I9 Amapá A. fumigatus A. nomius 94% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 MAD2-C4/I12 Amapá A. fumigatus A. nomius 94% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1

M-YAD3-

C3/I35 Amapá A. fumigatus A. nomius 97% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 M-YCD-

C3/I47 Amapá A. fumigatus A. nomius 100% 0

100% AF027860.1 _{A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1} M-CDA-

C4/I52 Amapá A. fumigatus A. nomius 100% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 M-BAD1-

C2/I74 Amapá A. fumigatus A. nomius 100% 0

100% AF027860.1

A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 M-BAD1-

C3/I75 Amapá A. fumigatus A. nomius 100% 0

100% AF027860.1 _{A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1} M-BAD3-

C2/I82 Amapá A. fumigatus A. nomius 100% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 99% AY017544.1 A. nomius 99% 0.0 100% EF661531.1 M-BAD3- Amapá A. fumigatus A. nomius 86% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 94% EF661531.1

MAK1-

C4/I196 Amapá A. fumigatus A. nomius 90% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 I3C1PL1K7 Amapá A. fumigatus A. nomius 96% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 I2C4PL4K7 Amapá A. fumigatus A. fumigatus 97% 0 100% EF669931.1 _$ A. fumigatus 100% 0.0 100% KC701201.1 I1A6PL6 Amapá A. fumigatus A. nomius 93% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 99% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 I2C5PL5NAT3

5 Amapá A. fumigatus A. nomius 95% 0 99% AF027860.1 A. nomius 97%$ 0.0 89% AY017553.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661529.1 I1C1PL1 Amapá A. fumigatus A. nomius 99% 0 99% AF027860.1 A. nomius 97%$ 0.0 96% AY017553.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661529.1 I4C1PL1 Amapá A. fumigatus A. nomius 97% 0 99% AF027860.1 A. nomius 97%$ 0.0 90% AY017553.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661529.1 I3A5PL5 Amapá A. fumigatus A. nomius 96% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 97% AY017553.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661529.1 I2C2PL2 Amapá A. fumigatus A. nomius 99% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 16C Coari A. flavus A. nomius 100% 0 100% AF027860.1 A. nomius 97%$ 0.0 95% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 44C Coari A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 99% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 90H Humaitá A. flavus A. nomius 99% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 121H Humaitá A. flavus A. nomius 92% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 127H Humaitá A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 100% AY017544.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 142H Humaitá A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 97% AY017551.1 A. nomius 99% 0.0 100% EF661531.1 161H Humaitá A. flavus A. tamarii 100% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 99% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 25I Itacoatiara A. flavus A. nomius 100% 0 100% AF027860.1 A. nomius 98%$ 0.0 97% AY017544.1 A. nomius 99% 0.0 100% EF661531.1 34I Itacoatiara A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 98% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 41I Itacoatiara A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 99%$ 0.0 97% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 64I Itacoatiara A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 99% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 65I Itacoatiara A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 98%$ 0.0 96% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 70I Itacoatiara A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 97%$ 0.0 90% AY017561.1 A. nomius 100% 0.0 99% GQ221263.1 75I Itacoatiara A. flavus A. nomius 92% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 99% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 100% EF661531.1 17M Manicoré A. flavus A. nomius 100% 0 100% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 96% AY017551.1 A. nomius 99% 0.0 100% EF661531.1 25M Manicoré A. flavus A. tamarii 100% 0 100% AF004929.1 A. tamarii 76%$ 0.0 98% HE577819.1 A. tamarii 100% 0.0 99% EU021686.1 26M Manicoré A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 97% AY017551.1 A. nomius 99% 0.0 100% EF661531.1 27M Manicoré A. flavus A. nomius 100% 0 99% AF027860.1 A. nomius 100%$ 0.0 99% AY017551.1 A. nomius 100% 0.0 99% EF661531.1 29M Manicoré A. flavus A. tamarii 100% 0 100% AF004929.1 _$

6.2 Caracterização de isolados do Gênero Aspergillus quanto a produção de