Proposta de um molde proposicional de percurso

4.1. Acide 13-cis-rétinoïque

Au 9ème jour de gestation, 14 souris de race C57 BL ont été gavées d'une dose unique de 400 mg/Kg d'acide 13-cis rétinoïque en suspension dans de l'huile de sésame à la concentration de 20 mg/ml, La solution a été préalablement homogénéisée par ultra-sons et agitation au vortex.

Soixante-quatre embryons âgés de 9,5 à 17 jours sont prélevés dans le liquide physiologique de Locke, dessinés à la caméra lucida et mesurés. Les embryons traités sont comparés à 75 embryons témoins issus de 9 souris C57BL.

Deux embryons de chaque stade ont été fixés à la glutaraldéhyde afin d'être examinés au microscope électronique à balayage.

Les embryons destinés à une approche histologique subissent une dissection de l'extrémité céphalique. Des coupes sériées de lOpm ont été colorées par le bleu de toluidine pH 3,8 ce qui permet une étude morphologique et histochimique des malformations rencontrées.

Des embryons de 9.5 jours (prélevés 6 heures après l'administration d'acide rétinoïque), de 10 et 11 jours ont été soumis soit à la coloration supra-vitale au sulfate de bleu de Nil afin d'apprécier les sites de mort cellulaire présents dans les arcs branchiaux, soit au mélange pyronine-vert de méthyle selon la méthode d'Unna-Brachet pour repérer les cellules dérivées des crêtes neurales céphaliques et les sites de dégénérescence cellulaire.

D'autres embryons de 9.5, 10 et 11 jours, fixés dans la glutaraldéhyde, ont été inclus dans l'Epon 812 et des coupes d'environ 400 A colorées à chaud par le bleu de toluidine ont été réalisées dans le plan frontal.

La souche des C57 BL, utilisée pour l'étude décrite ci-dessus, s'est éteinte. L'expérience a été refaite avec les même doses sur des C57 BL d'autres souches, provenant de la firme Iffa Credo Belgique et sur des NMRI sans résultat à ce jour. Ce fait explique le caractère incomplet de la série et l'absence d'analyse

morphométrique.

Un nouveau modèle impliquant l'administration d'une dose de 60 à 70 mg/Kg d'acide ail trans rétinoïque, au 9ème jour de gestation à des souris NMRI, a été mis en oeuvre (Abbot et al., 1989, 1990). Les résultats préliminaires n'ont pu être joints à la présente étude pour des raisons évidentes, les molécules étant différentes. Cependant, une étude non reprise dans le présent travail, mais

réalisée par notre équipe, a permis de préciser la nature des morts cellulaires suscitées par l’administration de rétinoïdes (voir discussion).

4.2. Méthyl-triazène

Une dose orale unique de 1,5 mg de méthyl-triazène (Sigma) en solution dans de l'huile de sésame est administrée à 14 souris gestantes de race NMRI au 10 ème jour de gestation. 126 embryons ont été collectés. Des embryons d'âge gestationnel compris entre 10,5 et 17 jours ont été observés, dessinés et mesurés à la caméra lucida dans la solution physiologique de Locke. Les embryons traités sont comparés aux 108 embryons témoins issus de 7 souris NMRI. Deux embryons de chaque stade ont été fixés à la glutaraldéhyde afin d'être observés au microscope électronique à balayage. Les autres embryons ont été fixés dans le liquide de Serra. Le profil droit des extrémités céphaliques d'embryons de 14 à 17 jours a été mesuré selon l'analyse morphométrique mise au point dans notre laboratoire. Des embryons de chaque stade sélectionnés pour l'étude histologique ont été colorés au bleu de toluidine. Des embryons de 10,5 jours prélevés 6h. après l'administration de méthyl-triazène ont été soumis au mélange pyronine-vert de méthyl selon Unna-Brachet. D'autres embryons de 11 j, fixés dans la glutaraldéhyde, ont été inclus dans l'Epon 812, et des coupes

d'environ 400 A, réalisées dans le plan frontal, ont été colorées par le bleu de toluidine à chaud.

Ayant le souci de cibler, par nos agents tératogènes, le même stade morphologique, nous avons été tenté d'administrer la même dose de méthyl- triazène à 9 jours de gestation. Nous n'avons pas obtenu d'anomalies morphologiques apparentes chez les embryons prélevés.

4.3. Radiations ionisantes

Les souris utilisées dans le cadre de cette étude appartierment à la race NMRI. Douze souris ont été irradiées à 8 jours de gestation par une dose unique de 2Gy (111 embryons survivants ont été récoltés) tandis que 13 souris ont été irradiées à 9 jours (132 embryons survivants). Les embryons traités sont comparés aux 99 embryons témoins issus de 9 souris NMRI. (Tableau 2).

Tableau 2: Distribution selon l'âge de prélèvement du nombre d'embryons survivants (V) et résorbés (R) après une dose unique d'irradiation de 2 Gy à 8 j ou à 9 j.

Nombre d'E prélevés à 2Gyà8j (Po.l) 2Gyà9j (Po.2) Témoins (T) V. R. V. R. V. R. 9J 7 12 2 12 lOJ 10 12 2 10 IIJ 7 1 8 10 12J 12 1 12 11 13J 18 3 22 10 14J 23 16 2 12 1 15J 20 23 8 11 16J 6 3 6 31 11 17J 8 2 21 19 12 total 111 132 99

Les souris ont été placées dans une cage (20 X 20 X 13cm) sur une table de traitement. La source d’irradiation est placée au dessus de la table à une distance de 0.8 m pour le Cobalt et à 1.1 m pour l’accélérateur. Une dose de 2 Gy est administrée à mi-hauteur de la souris soit à une profondeur de 3 cm. L'irradiation a été délivrée par une bombe à Cobalt-60 THERATRON 780 (AECL Medical, Kanata, Canada) ou par un accélérateur linéaire SATURNE 11+ (CGR-GE, Bue, France). Ces deux machines sont utilisées en clinique pour la radiothérapie et sont régulièrement testées et calibrées. Des embryons âgés de 8 V2 ou 9 1 /2 à 17 jours ont été recueillis dans le liquide physiologique de Locke, dessinés à la chambre claire, fixés dans la solution de Serra, colorés par le bleu de toluidine. Certains embryons de 9 jours ont été observés par la coloration supravitale au bleu de Nil. Des coupes d'embryons de 9 et 10 jours ont été colorées par le mélange pyronine-vert de méthyle selon Unna-Brachet. Deux embryons de 16 et 17 jours sont soumis à la coloration in toto au Bleu- alcian-sulfate d'alizarine selon Watson.

Deux embryons de chaque stade, particulièrement dysmorphiques, ont de surcroît été fixés dans la glutaraldéhyde 3% et observés au microscope électronique à balayage.

C. RESULTATS

1. Effets tératogènes de l’acide 13-cis-rétinoïque