6.1 PREPARAÇÃO DOS SISTEMAS POLIMÉRICOS
6.1.1 Quitosana e Goma Guar (QUIT-GG)
Os parâmetros do equipamento spray drying influenciam nas características dos sistemas particulados de quitosana e goma guar com TRI, tais como a temperatura de entrada, o blower e a quantidade de calor, de modo a controlar a eficiência térmica da secagem, alterando o rendimento (HE; DAVIS; ILLUM, 1999).
Estudos preliminares foram realizados com os sistemas particulados poliméricos de quitosana e goma guar na razão percentual 50:50 p/p (nas concentrações de 0,25% e 0,25%) secas no spray drying, com a temperatura de entrada 120° e a de saída 70°, porém essas formaram um pó muito úmido, amarelado, com alguns grumos e ao microscópio óptico observou-se uma forma bastante irregular.
Para formar um pó seco aumentou-se a temperatura de entrada para 140° e a de saída para 90°, corroborando com um estudo feito por Nascimento (2015), o qual usou esses parâmetros para obtenção de micropartículas formada apenas por quitosana apresentando um rendimento razoavelmente satisfatório com valores 56,49 ± 0,06% e para as amostras compostas por quitosana e o fármaco propranolol (2:1) rendeu 57,29 ± 0,06%. Com base nesse estudo, foi preparada uma amostra com 1% de cada polímero, porém a mesma ficou extremamente viscosa, devido ao grande aumento da massa de cada componente, dessa forma impossibilitando a secagem no spray drying, devido uma possível obstrução no bico de aspersão.
Então, foram preparadas amostras poliméricas quitosana:goma guar 50:50 p/p (nas concentrações 0,5% e 0,5%) para serem secas com e sem triancinolona, estas formaram um pó fino, com aspecto heterogêneo, ao microscópio óptico apresentou uma morfologia esférica, com rendimento de 30% e 60%, respectivamente. Ou seja, quando ocorre a secagem com fármaco este causa algum tipo de interação o qual o rendimento diminui.
6.2 RENDIMENTO
Sistemas particulados com diferentes razões percentuais de quitosana:goma guar (25:75, 50:50 e 75:25) alterando a quantidade de triancinolona (1:5, 1:10 e 1:20) foram avaliadas, a tabela 1 mostra os rendimentos dos sistemas particulados com diferentes razões polímero/polímero e fármaco/polímero.
Tabela 2 - Rendimento dos sistemas particulados de QUIT/GG com diferentes razões de fármaco/polímero e polímero/polímero Razão fármaco:polímero TR:(QUIT/GG) Rendimento ± DP (%) Razão polímero:polímero QUIT:GG 25:75 50:50 75:25 1:5 11,35 ± 3,95 19,36 ± 4,77 20,88 ± 0,45 1:10 8,31 21,44 ± 4,79 23,49 ± 3,68 1:20 --- 20,66 ---
Fonte: Dados da pesquisa.
6.2.1 Diferentes razões poliméricas QUIT/GG (25:75, 50:50 e 75:25) com TRI (1:5)
As razões poliméricas de quitosana e goma guar (75:25 p/p) foram secas por spray drying apresentando um rendimento de 20,88 ± 0,45. A proporção de QUIT/GG (50:50 p/p) rendeu 19,36 ± 4,77 %. E por fim, as QUIT/GG (25:75 p/p) renderam 11,35 ± 3,95 %.
As amostras com maior quantidade de goma guar apresentam um menor rendimento, visto que após as 24h de agitação, a goma forma um precipitado na hélice do agitador mecânico, havendo perda de amostra antes da secagem, além disso essas amostras são mais viscosas e causam mais problemas no processo de secagem, causando recorrentes obstruções da cânula do bico de aspersão do equipamento spray drying.
Devido a sua estrutura molecular pouco ramificada, a goma guar tem a propriedade de formar soluções bastante viscosas, uma vez que a proporção de galactopiranose da molécula ligada à cadeia principal dificulta a aproximação das moléculas de polissacarídeos, evitando que se agreguem e tornando, desse modo, as soluções bastante estáveis (BOBBIO; BOBBIO, 1992).
As razões poliméricas (75:25 e 50:50 p/p) de QUIT/GG com TRI (1:5 p/p) apresentaram valores de rendimentos bem próximos, não havendo uma diferença significativa. Contudo, ao realizar análise no microscópio óptico as amostras com a razão 50:50 p/p formaram partículas com melhores aspectos, porém na razão de triancinolona (1:5 p/p) ficou muito fármaco livre, podendo interferir na liberação controlada pretendida pelo sistema.
6.2.2 Diferentes razões poliméricas QUIT/GG (25:75, 50:50 e 75:25) com TRI (1:10)
Os sistemas particulados com diferentes proporções (25:75, 50:50 e 75:25 p/p) com triancinolona (1:10 p/p) foram feitos de maneira que as amostras apresentaram rendimentos 8,31%, 21,44 ± 4,79%, e 23,49 ± 3,68%, respectivamente.
Esses resultados corroboram com um estudo feito por Santos e colaboradores (2003), onde os rendimentos dos sistemas particulados formados apenas por quitosana variaram de 16,21 a 44,71%.
próximo a proporção 50:50 p/p, sendo esta última a razão escolhida devido seu valor satisfatório de rendimento, e por formarem partículas com melhores aspectos macroscópicos, mais arredondadas e com uma quantidade razoável de fármaco livre suficiente para o efeito inicial.
Com a proporção de TRI (1:10) p/p esses sistemas particulados exibiram uma quantidade de triancinolona livre. Esse fármaco disperso no meio é algo importante devido ao efeito burst no qual ocorre liberação do glicocorticoide para início da sua ação terapêutica e posteriormente a liberação prolongada. Com isso, foi escolhida a proporção de razão polimérica (50:50) para o teste in vivo com triancinolona (1:10).
6.2.3 Sistema polimérico (50:50) com razão fármaco/polímero (1:20)
Após realizar as análises e chegar a razão polimérica ideal (50:50) p/p, esta foi preparada com proporção de triancinolona (1:20), apresentando um rendimento de 20,66%, ao analisar no microscópio óptico praticamente não havia triancinolona livre, sendo essa quantidade livre importante para o início de ação do fármaco.
6.3 CURVA PADRÃO DA TRIANCINOLONA
Para a quantificação da triancinolona nos sistemas particulados poliméricos foi necessária a preparação de uma curva padrão.
Foi construída uma curva padrão a partir de soluções de triancinolona nas concentrações de 4, 8, 12, 16 e 20 µg/mL em etanol.
A tabela 2 apresenta os valores de absorbância e concentração μg/mL em 242 nm obtidos para cada concentração da curva padrão.
Tabela 3: Valores de área absoluta e concentração obtidos para a curva padrão da triancinolona por espectrofotômetro. Concentração Teórica (μg/mL) Absorbância Média ± DP DPR Concentração (μg/mL) 4 0,129 ± 0,01 7,39 3,76 8 0,278 ± 0,004 1,30 7,71 12 0,439 ± 0,009 2,10 11,98 16 0,591 ± 0,010 1,74 15,99 20 0,748 ± 0,019 2,55 20,15 *DP- Desvio padrão
*DPR- Desvio padrão relativo
A curva padrão para o método foi construída a partir de cinco concentrações e está representada na figura 10 juntamente com a equação da reta e o coeficiente de correlação (R2).
Figura 10- Curva padrão da triancinolona
Fonte: Dados da pesquisa.
O coeficiente de correlação (R2 = 0,999) está de acordo com a RDC 899/2003, o guia para validação de métodos analíticos e bioanalíticos, o qual especifica como critério mínimo aceitável o coeficiente de correlação (r) deve ser 0,99 e indica relação entre as absorbâncias e a concentração do fármaco.
6.4 EFICIÊNCIA DE ENCAPSULAÇÃO E LOADING
Existem dois métodos os quais os sistemas particulados podem encapsular o fármaco: durante a preparação das partículas (incorporação) e depois da formação das partículas (incubação). Nesses sistemas, o fármaco é fisicamente embebido na matriz ou adsorvido na superfície. A melhor eficiência de encapsulação é encontrada quando o fármaco é incorporado durante a formação das partículas, porém algumas características, tais como, método de preparo e presença de aditivos podem interferir na encapsulação (AGNIHOTRI, 2004). A tabela 3 apresenta a eficiência de encapsulação e loading das diferentes razões polímero/polímero e fármaco/polímero.
A b s. y = 0,0378x - 0,0136 R² = 0,999 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0 5 10 15 20 25 A b s. Concentração (µg/mL)