6.1 Resultados
6.1.2 Amplificação dos locos microssatélites e regiões intergênicas do
6.1.2.2 Espaçadores intergênicos
Figura 9: Relações entre haplótipos com base na análise conjunta de duas regiões intergênicas do cpDNA (psbA-trnH e trnL-F) para nove espécies de Leguminosae, utilizando o método Median-joining.
156 48
48 61 40 42
40
33
184
36
15
156 16 20
16
226
12 25
34 9
66
Nota: Cada círculo corresponde a um haplótipo e sua área é proporcional à frequência do haplótipo, as cores representam as espécies conforme a legenda. Cada traço transversal às linhas que ligam os haplótipos representa um evento mutacional. Os pontos vermelhos (mv = median vector) representam haplótipos hipotéticos que não foram amostrados.
Senna multijuga Tachigali denudata Albizia pedicelaris Anadenathera colubrina Cassia ferruginea Inga lanceifolia
Piptadenia gonoacantha Lonchocarpus cultratus Pterocarpus rohrii
6.1.2.2.1 Discriminação das Espécies
Os parâmetros estimados pelas funções Best Match, Best Close Match, e All species barcodes conforme implementados pelo programa Taxon DNA foram usados para analisar as sequências uni e multi-locos. Os resultados da análise best match mostraram a maior taxa de sucesso (100%) para o marcador psbA- trnH, com identificação correta de todas as sequências. A segunda maior taxa de sucesso foi observada para o marcador trnL-F, com identificação de 97,22%
das sequências, enquanto a análise conjunta dos marcadores psbA-trnH+trnL-F exibiu a menor taxa de identificação com 92,85% das sequências (Tabela 13 e Figuras 10A).
Já para a análise best close match a maior taxa de sucesso foi observada para trnL-F, com 94,44% das sequências identificadas, seguido da análise conjunta dos marcadores psbA-trnH+trnL-F, com 92,85% de sucesso, enquanto para o marcador psbA-trnH a percentagem de sucesso na identificação das sequências foi de 88,23% (Tabela 13 e Figuras 10B).
A análise All species barcodes apresentou resultado semelhante a análise best close match, a maior taxa de sucesso foi observada para trnL-F, com 86,48% das sequências identificadas, seguido de psbA-trnH+trnL-F, com 82,75% de sucesso. Enquanto para o marcador psbA-trnH a percentagem de sucesso na identificação das sequências foi de 80% (Tabela 13 e Figura 10C).
A análise All species barcodes evidenciou que dentre as sequências que não foram identificadas, quatro sequências por psbA-trnH, duas sequências por psbA-trnH+trnL-F e uma sequência trnL-F, todas eram de indivíduos de Pterocarpus rohrii.
Tabela 13- Sucesso na identificação das nove espécies de Leguminosae, com base nas análises Best Close Match, Best Match e All species barcodes para as duas regiões intergênicas do cpDNA e suas combinações.
Número de sequências (% de frequência) Loco
Best match Best close match All species barcodes
Correta Ambígua Incorreta Não identificado Correta Ambígua Incorreta Não identificado Correta Ambígua Incorreta Não identificado
psbA-
trnH 34 (100) 0 (0) 0 (0) 0 (0) 30 (88,23) 0 (0) 0 (0) 4 (11,76) 28 (80) 2 (5,71) 0 (0) 4 (11,42) trnL-F 35 (97,22) 0 (0) 1 (2,77) 0 (0) 34 (94,44) 0 (0) 1 (2,77) 1 (2,77) 32 (86.48) 2 (5.4) 1 (2.7) 1 (2.7) psbA-
trnH+
trnL-F
26 (92,85) 0 (0) 2 (7,14) 0 (0) 26 (92,85) 0 (0) 0 (0) 2 (7,14) 24 (82.75) 2 (6.89) 0 (0) 2 (6.89)
Figura 10 - Sucesso na identificação das nove espécies de Leguminosae, com base na análise
Legenda - A: Best match. B: Best close match e C: All species barcodes.
B A
C
O método de análise filogenética neighbor-joining utilizado para avaliar o poder de discriminação das espécies e o relacionamento filogenético entre os gêneros a partir dos locos psbA-trnH, trnL-F e da combinação psbA-trnH+trnL-F possibilitou recuperar grupos monofiléticos reunindo as amostras pertencentes a cada uma das nove espécies analisadas. Esta análise gerou clados com maior grau de discriminação das espécies, com bootstrap em torno de 100% para o marcador psbA-trnH (Figura 11), seguido pela combinação dos dois marcadores, psbA-trnH+trnL-F (Figura 12).
Enquanto trnL-F (Figura 13) apresentou os menores valores de bootstrap para a sustentação dos clados.
Quanto à análise filogenética (neighbor-joining) para o loco psbA-trnH, também foi observado um maior relacionamento (mais suportado) entre os gêneros do clado mimosoide da subfamília Caesalpinioideae: Inga lanceifolia, Albizia pedicellaris, Piptadenia gonoacantha, Anadenanthera colubrina e Cassia ferruginea.
Para os locos psbA-trnH, trnL-F e para a combinação psbA-trnH+trnL-F, a análise neighbor-joining recuperou grupos monofiléticos para os indivíduos amostrados da espécie Pterocarpus rohrii, no entanto foram observados agrupamentos genéticos distintos (Figuras 11, 12 e 13).
Figura 11: Dendrograma mostrando o agrupamento e relacionamento filogenético entre as nove espécies de Leguminoase estudadas, com base na análise do espaçador intergênico psbA-trnH, utilizando o método Neighbor-joining.
Inga lanceifolia 873 Inga lanceifolia 863 Inga lanceifolia 909 Inga lanceifolia 1015 Albizia pedicellaris K63 Albizia pedicellaris Leg9 Albizia pedicellaris K68 Piptadenia gonoacantha K34 Piptadenia gonoacantha K74 Piptadenia gonoacantha K81 Piptadenia gonoacantha K33
Anadenanthera colubrina 1433 Anadenanthera colubrina 1431 Cassia ferruginea K72
Cassia ferruginea K75 Cassia ferruginea 1445 Tachigali denudata K93 Tachigali denudata K94 Tachigali denudata K95 Tachigali denudata K96 Tachigali denudata K60
Pterocarpus rohrii 611 Pterocarpus rohrii 163 Pterocarpus rohrii 164
Pterocarpus rohrii 172
Senna multijuga K52 Senna multijuga K53 Senna multijuga K51 Senna multijuga K30 Lonchocarpus cultratus Leg6 Lonchocarpus cultratus K78 Lonchocarpus cultratus K80 Lonchocarpus cultratus K82 Lonchocarpus cultratus K77 100
100 100
100
100 99
100
100 92
79
100 100 100
46 99
99 99
Nota: os números representam os valores (%) de bootstraping.
Caesalpinioideae Papilionoideae
Inga lanceifolia 873 Inga lanceifolia 863 Inga lanceifolia 909 Inga lanceifolia 1015 Albizia pedicellaris K63 Albizia pedicellaris Leg9 Albizia pedicellaris K68 Piptadenia gonoacantha K34 Piptadenia gonoacantha K74 Piptadenia gonoacantha K81 Piptadenia gonoacantha K33
Anadenanthera colubrina 1433 Anadenanthera colubrina 1431 Cassia ferruginea K72
Cassia ferruginea K75 Cassia ferruginea 1445 Tachigali denudata K93 Tachigali denudata K94 Tachigali denudata K95 Tachigali denudata K96 Tachigali denudata K60
Pterocarpus rohrii 611 Pterocarpus rohrii 163 Pterocarpus rohrii 164
Pterocarpus rohrii 172
Senna multijuga K52 Senna multijuga K53 Senna multijuga K51 Senna multijuga K30 Lonchocarpus cultratus Leg6 Lonchocarpus cultratus K78 Lonchocarpus cultratus K80 Lonchocarpus cultratus K82 Lonchocarpus cultratus K77 100
100 100
100
100 99
100
100 92
79
100 100 100
46 99
99 99
Figura 12: Dendrograma mostrando o agrupamento e relacionamento filogenético entre as nove espécies de Leguminoase estudadas, com base na análise conjunta de dois espaçadores intergêncios do cpDNA (psbA-trnH e trnL-F), utilizando o método Neighbor-joining.
Albizia pedicellaris Leg9 Albizia pedicellaris K68 Albizia pedicellaris K63
Inga lanceifolia 1015 Inga lanceifolia 909 Inga lanceifolia 873 Piptadenia gonoacantha K34 Piptadenia gonoacantha K74 Piptadenia gonoacantha K81 Piptadenia gonoacantha K33 Anadenanthera colubrina 1433 Anadenanthera colubrina 1431
Tachigali denudata K93 Tachigali denudata K94 Tachigali denudata K95 Cassia ferruginea K75
Cassia ferruginea K72 Cassia ferruginea 1445
Senna multijuga K30 Senna multijuga K51 Senna multijuga K52 Senna multijuga K53 Pterocarpus rohrii 163
Pterocarpus rohrii164 Pterocarpus rohrii 172
Lonchocarpus cultratus Leg6 Lonchocarpus cultratus K80 Lonchocarpus cultratus K82 Lonchocarpus cultratus K77 100
68 99
100
100 99
96 100
88
100 100 100
100 70
67
100
Nota: os números representam os valores (%) de bootstraping.
Caesalpinioideae Papilionoideae
Albizia pedicellaris Leg9 Albizia pedicellaris K68 Albizia pedicellaris K63
Inga lanceifolia 1015 Inga lanceifolia 909 Inga lanceifolia 873 Piptadenia gonoacantha K34 Piptadenia gonoacantha K74 Piptadenia gonoacantha K81 Piptadenia gonoacantha K33 Anadenanthera colubrina 1433 Anadenanthera colubrina 1431
Tachigali denudata K93 Tachigali denudata K94 Tachigali denudata K95 Cassia ferruginea K75
Cassia ferruginea K72 Cassia ferruginea 1445
Senna multijuga K30 Senna multijuga K51 Senna multijuga K52 Senna multijuga K53 Pterocarpus rohrii 163
Pterocarpus rohrii164 Pterocarpus rohrii 172
Lonchocarpus cultratus Leg6 Lonchocarpus cultratus K80 Lonchocarpus cultratus K82 Lonchocarpus cultratus K77 100
68 99
100
100 99
96 100
88
100 100 100
100 70
67
100
Figura 13: Dendrograma mostrando o agrupamento e relacionamento filogenético entre as nove espécies de Leguminoase estudadas, com base na análise do espaçador intergênico trnL-F, utilizando o método Neighbor-joining.
Albizia pedicellaris Leg9 Albizia pedicellaris K68 Albizia pedicellaris K63 Albizia pedicellaris K64 Inga lanceifolia 1015 Inga lanceifolia 873 Inga lanceifolia 909 Piptadenia gonoacantha Leg5 Piptadenia gonoacantha K34 Piptadenia gonoacantha K33 Piptadenia gonoacantha K74 Piptadenia gonoacantha K81 Anadenanthera colubrina 1433 Anadenanthera colubrina K55 Anadenanthera colubrina K56 Anadenanthera colubrina 1431
Tachigali denudata K93 Tachigali denudata K94 Tachigali denudata K95 Tachigali denudata K60 Cassia ferruginea K75
Cassia ferruginea 1445 Cassia ferruginea K72 Cassia ferruginea K89 Senna multijuga K51 Senna multijuga K52 Senna multijuga K53 Senna multijuga K30
Pterocarpus rohrii 897 Pterocarpus rohrii 164
Pterocarpus rohrii 163 Pterocarpus rohrii 172
Lonchocarpus cultratus Leg6 Lonchocarpus cultratus K80 Lonchocarpus cultratus K82 Lonchocarpus cultratus K77 100
78 99 91
100 99
99
95 95
48 100
70
99 54
97 50
98
Nota: os números representam os valores (%) de bootstraping.
Albizia pedicellaris Leg9 Albizia pedicellaris K68 Albizia pedicellaris K63 Albizia pedicellaris K64 Inga lanceifolia 1015 Inga lanceifolia 873 Inga lanceifolia 909 Piptadenia gonoacantha Leg5 Piptadenia gonoacantha K34 Piptadenia gonoacantha K33 Piptadenia gonoacantha K74 Piptadenia gonoacantha K81 Anadenanthera colubrina 1433 Anadenanthera colubrina K55 Anadenanthera colubrina K56 Anadenanthera colubrina 1431
Tachigali denudata K93 Tachigali denudata K94 Tachigali denudata K95 Tachigali denudata K60 Cassia ferruginea K75
Cassia ferruginea 1445 Cassia ferruginea K72 Cassia ferruginea K89 Senna multijuga K51 Senna multijuga K52 Senna multijuga K53 Senna multijuga K30
Pterocarpus rohrii 897 Pterocarpus rohrii 164
Pterocarpus rohrii 163 Pterocarpus rohrii 172
Lonchocarpus cultratus Leg6 Lonchocarpus cultratus K80 Lonchocarpus cultratus K82 Lonchocarpus cultratus K77 100
78 99 91
100 99
99
95 95
48 100
70
99 54
97 50
98
Caesalpinioideae Papilionoideae