Efficiency of Sperm Gradient Processing and HA-binding Test for the Selection of Sperm with Normal Protamine, Intact DNA and Normal Morphology

Original Article

Eficiency of Sperm Gradient Processing and HA-binding Test for the

Selection of Sperm with Normal Protamine, Intact DNA and Normal

Morphology

MT. Taghadosi, M.Sc.1_{, M. Tavalaee, M.Sc.}2_{, SH. Razavi, Ph.D.}1

M. Mardani, Ph.D.1_{, MH. Nasr Esfahani, Ph.D.}2, 3✚

1. Anatomy Department, Faculty of Medicine, Isfahan University 2. Embryology and Andrology Department, Royan Institute

3. Isfahan Fertility and Infertility Center

✚ Corresponding Address: P.O.Box:19395-4644, Embryology and Andrology Department, Royan Institute, Tehran, Iran

Email: mh_nasr@med.mui.ac.ir

Abstract

Received: 13/Mar/2007, Accepted: 4/Sep/2007

Objective: The aim of this study was to examine the efficiency of HA-binding test

and sperm gradient processing method for the selection of sperm with normal pro-tamine, intact DNA and normal morphology.

Materials and Methods: The study was conducted on 29 patients undergoing ICSI.

Semen analysis was carried out according to WHO criteria. Semen samples were divided into three equal portions. One portion was left untreated (control), the sec-ond portion was used for HA-binding (HA: Hyaluronic acid) and the third portion underwent PureSperm gradient processing. Then, the three portions were evalu-ated to examine protamine deficiency (Chromomycin A3 staining), sperm morphol-ogy (Papanicolaou staining) and DNA integrity (Sperm Chromatin Dispersion Test). Coefficients of correlation and student t-test were carried out using SPSS 11.5 and P-value lower than 0.05 was considered as significant.

Results: The mean number of sperm abnormality, protamin deficiency, and DNA

fragmentation in HA binding and sperm gradient processing groups were significant-ly decreased as compared to the control group (p<0.05). In addition, sperm gradient processing was superior to HA-binding method in the selection of sperm with normal protamine, intact DNA and normal morphology.

Conclusion: Both HA-binding and sperm gradient processing methods were

effec-tive in the selection of sperm with better quality in terms of normal morphology, nor-mal protamine content and DNA integrity. However, sperm gradient processing was superior to HA-binding method in the selection of normal sperm.

Keywords: HA-binding Assay, Semen Processing, Protamine Deficiency, Sperm Morphology, DNA Fragmentation

HA-binding

تست و مرپسا رويپ نايدارگ طسوت مرپسا يزاس

هدامآ يياراك يبايزرا

يعيبط يژولوفروم و ملاس

DNA

،يعيبط نيماتورپ اب مرپسا باختنا يارب

،

Ph.D. ینادرم دمحم ،1

،

Ph.D. يوضر زانهش ،2

،

M.Sc. يياوت هيضرم ،1

،

M.Sc. یسدقت رهاطدمحم

✚ 3 ،2 _{Ph.D. يناهفصارصن نيسحدمحم}

حيرشت مولع هورگ ،یکشزپ هدکشناد ،ناهفصا يکشزپ مولع هاگشناد .1 یژولوردنآ -يسانش نينج هورگ ،نايور هدکشهوژپ .2

ناهفصا يرورابان و يروراب زكرم .3

يژولوردنآ–يسانش نينج هورگ ،نايور هدکشهوژپ ،19395 -4644 :يتسپ قودنص نارهت :هبتاکم سردآ ✚

Email: mh_nasr@med.mui.ac.ir :كينورتكلا تسپ

هدیکچ

86/6/13 :هلاقم شريذپ ،85/12/22 :هلاقم تفايرد

،يعيبط نيماتورپ اب مرپسا یزاسادج تهج مرپسا رويپ نايدارگ و HA-binding شور ود یياراک یبايزرا :فده * يعيبط يژولوفروم و ملاس DNA لمع ماجنا تهج ناهفصا یرورابان و یروراب زکرم هب هدننک هعجارم رورابان جوز 29 هعلاطم نيا رد :اه شور و داوم *

هس هب نميس ياه هنومن سپس .دش ماجنا WHO رايعم قبط نميس عيام نيتور زيلانآ .دنتفرگ رارق یسررب دروم ICSI و (Hyaluronic acid binding: HA) کينورولايه ديسا هب لصتم یاه مرپسا هورگ ،لرتنک هورگ :دندش ميسقت شخب يژولوفروم يبايزرا ،روکذم یاه هورگ زا کي ره یور رب سپس .مرپسا رويپ نايدارگ طسوت هدش یزاس هدامآ یاه مرپسا هورگ هدافتسا اب) DNA نويساتنمگارف و (CMA3 يزيمآ گنر طسوت) نيماتورپ دوبمک ،(وئاوكيناپاپ يزيمآگنر طسوت) مرپسا

.دش هسياقم و زيلانآ SPSS11.5 رازفا مرن زا هدافتسا اب هدمآ تسد هب جياتن .تفرگ ماجنا (SCD تست زا DNA نويساتنمگارف دصرد و نيماتورپ دوبمک ،يعيبطريغ يژولوفروم اب مرپسا دصرد دهد يم ناشن جياتن :اه هتفاي * يرامآ ظاحل زا نميس هورگ هب تبسن مرپسا رويپ نايدارگ طسوت هدش يزاسهدامآ و HA هب لصتم ياه مرپسا هورگ ود رد يژولوفروم اب مرپسا يزاسادج هب تبسن رويپ نايدارگ طسوت مرپسا يزاس هدامآ شور هواع هب .(p=0/001) تسا هتفاي شهاک .تسا هدرک لمع HA-binding شور زا رتهب ملاس DNA و يعيبط نيماتورپ و ادج هب رداق يراد ينعم روط هب HA-binding و رويپ نايدارگ شور ود ره هک دهدیم ناشن جياتن :يريگ هجيتن * شور هب تبسن مرپسا رويپ نايدارگ شور هچرگا .دشاب يم DNA تماس و يعيبط نيماتورپ و يژولوفروم اب مرپسا ندومن .دراد يرتشيب یياراک ،رتهب تيفيک اب مرپسا یزاسادج رد HA-binding

DNA نويساتنمگارف ،مرپسا یژولوفروم ،نيماـتورـپ دوبـمک ،مرپسا یزاس هداـمآ ،HA-binding تست :ناگژاو ديلك

226-231 :تاحفص ،86 ناتسمز ،4 هرامش ،مهن لاس ،هتخاي یکشزپ همانلصف

همدقم

کمخت مــساــپوــتــيــس لــــخاد هــب مرــپــسا قــيرزــت هزورـــــما ناونع هب (Intracytoplasmic Sperm Injection: ICSI)

دريگ یم رارق هدافتسا دروم یرورابان نامرد تهج بسانم شور کي حاقل یارب یعيبط عناوم همه ،ICSI شور رد هكنيا دوجو اب .(1)

،دوش یم هتشاذگ رس تشپ ،(یموزورکآ شنکاو و یريذپ تيفرظ) و دراد یصاخ تيمها هتسه نيتامورک تماس و مرپسا غولب اما یمرپسا عون باختنا هب هتسباو هدمع روط هب حاقل تيقفوم نازيم دوش یــم هدافتسا قــيرزــت تهج کينكت نــيا یــط هــک تــسا دوجو مرپسا غولب یبايزرا تهج یددعتم ياه صخاش .(2-4)

A₂ نيئتورپ يترارح كوش و (زانيکوفسف نيتارک) زاينک نيتارک .دراد

اهرکرام نيا هلمج زا (Heat shock protein A₂: HspA₂)

زانيک نيتارک یااب تيلاعف دهد یم ناشن تاقيقحت .(6 ،5) تسا تسا طبترم نادرم رد یرورابان اب HspA₂ نايب حطس شهاک و

دوجو مرپسا غولب يبايزرا تهج زين یرگيد ياه صخاش .(8 ،7) یفاضا نوتسيه روضح مرپسا هتسه غولب ياه صخاش هلمج زا .دراد یزيمآ گنر اب بيترت هب هک تسا مرپسا هتسه رد نيماتورپ دوبمک اي ناشن تاعلاطم .(9) دنوش یم صخشم A₃ نيسيامومورک و ولب نيلينآ

زا یكي دناوت یم کينورولايهديسا هب مرپسا لاصتا تيلباق دهد یم .(4) دشاب مرپسا یيامساپ ياشغ غولب مياع یديراکاس يد یطخ رميلپ کي نانورولايه اي کينورولايهديسا و سوروفووا سولوموک سكلپمک ،نز یلسانت هاگتسد رد هک تسا

PH-20 نييتورپ طسوت هدنز مرپسا .(10 ،8) دراد دوجو نميس عيام

لصتم کينورولايهديسا هب ،دراد دوجو نآ یيامساپ ياشغ یور هک رد کينورولايه ديسا هب مرپسا لاصتا نياربانب .(12 ،11) دوشیم تيلباق ،غولب دناوت يم هک دوب دهاوخ یبوخ صخاش هاگشيامزآ طيحم ،تسا طبترم نادرم یروراب اب هک ار مرپسا یموزورکآ تماس و تايح

.(4) دهد ناشن یحطس یاه نيئتورپوكيلگ رد یتارييغت زين زنژوتامرپسا یط لاصتا یارب یياهروتپسر داجيا هک دهدیم خر مرپسا ييامساپ ياشغ ار کينورولايهديسا و (Zona Pllucida: ZP) فافش هقطنم هب

یفاضا مساپوتيس نداد تسد زا اب تارييغت نيا .دنک یم ليهست نامز مه مرپسا هتسه رد نيماتورپ طسوت نوتسيه ینيزگياج و

.(14 ،13 ،4) تسا اب ،نميس نيتور زيلانآ زا سپ يرورابان نامرد زکارم رد هزورما و تسا نژورته فلتخم دارفا رد نميس تيفيک هک نيا هب هجوت نميس عيام ،دراد دوجو هتينژورته نيا زين درف کي ياه لازنا رد يتح يژولوفروم و رتشيب كرحت اب) ملاس ياه مرپسا يزاسادج تهج ار زا يكي هک دننک يم يزاــس هداــمآ و دنهد يم وشتسش (يعيبط .(15) تسا يهاگشيامزآ حاقل ياه کينكت رد لحارم نيرتمهم

،Density gradient centrifugation ،Swim-up

یاه شور دوجو اب ،(15) درک هراشا glass wool filtration

زا يكي مرپسا رويپ نايدارگ کينكت ،مرپسا یزاس هدامآ توافتم تسا يرورابان نامرد زکارم رد هدافتسا دروم ياه شور نيرت لومعم لباق شهاک ثعاب و دراد ار يعيبط ياه مرپسا يزاسادج يياناوت هک

DNA بيسآ ياراد و CMA₃+ ياه مرپسا دصرد رد يا هظحام

یزاس هدامآ فلتخم یاه شور رب هواع ،ريخا تاعلاطم .(16) دوش يم رب اهنآ ساسا هک دننک یم داهنشيپ ار یرگيد یاــه شور ،مرپسا یزاسادج شور ،هلمج زا ،تسا مرپسا یدركلمع و یلوكلوم راتخاس

HA-binding تست و (18) Zeta شور ،(17) مرپسا کيتروفورتكلا HA-binding تست رثا هسياقم ،هعلاطم نيا زا فده نياربانب .(19)

،یعيبط نيماتورپ اب مرپسا یزاسادج یارب مرپسا نايدارگ شور و .تسا یعيبط یژولوفروم و ملاس DNA

اه شور و داوم

هدننک هعجارم رورابان جوز 29 زا نميس یاه هنومن هعلاطم نيا رد تسد هب ICSI لمع ماجنا تهج ناهفصا یرورابان و یروراب زکرم هب

زا زيهرپ زور 3-4 زا سپ ،يراذگ کمخت زور رد نميس عيام .دمآ یارب نميس یاه هنومن ،راميب تياضر مرف تبث اب و دش هدامآ تبراقم نميس عيام نيتور زيلانآ .تفرگ رارق هدافتسا دروم قيقحت نيا ماجنا مزا .دش ماجنا یرون پوكسوركيم طسوت ،(20) WHO رايعم قبط

هراشا دراوم زج هب هعلاطم نيا رد یفرصم داوم یمامت تسا رکذ هب .تسا هدش هيهت (U.S.A) امگيس تکرش زا نتم رد هدش

مرپسا یزاس هدامآ

اب نآ شخب کي .دش ميسقت شخب هس هب نميس ياه هنومن

Pure Sperm (Nidacone, Guthenburg, نايدارگ زا هدافتسا

دش هدامآ ICSI شور ماجنا يارب 80: 40 یاه تظلغ اب Sweden)

Ham’s+FCS%10 طيحم اب ،نآ رگيد شخب ود و (I يبرجت) ميسقت هورگ ود هب و (هقيقد 5 تدم هب رود2000 ژويفيرتناس) وشتسش يبرجت) کينورولايهديسا هب لصتم یاه مرپسا هورگ زا دنترابع هک دش رگيد هورگ و تفرگ ماجنا اهنآ یور رب HA-binding تست هک (II یاه هورگ زا کي ره یور رب سپس .لرتنک هورگ ناونع تحت نميس (وئاوكيناپاپ يزيمآ گنر طسوت) مرپسا يژولوفروم يبايزرا ،روکذم طسوت) نيماتورپ دوبمک ،(20) WHO رايعم ساـــسا رــب

هدافتسا اب DNA نويساتنمگارف و (9) A₃ نيسيامومورک يزيمآ گنر

ماجنا (Sperm Chromatin Dispersion: SCD) تست زا

.(21) تفرگ

HA-binding تست

کينورولايهديسا یرتيلوركيم 40 هرــطــق کــي ادــتــبا حطس یور (Biocoat Inc; Fort Washington, PA)

نويسناپسوس زا رتيلوركيم 30 ،ندش کشخ زا سپ ،هتشاذگ ما تدم هب ما .دش هداد رارق نآ یور (رتيل يليم ره رد نويليم 20*106) مرپسا

بسانم طيحم اب ما حطس سپس .تفرگ رارق قاتا یامد رد هقيقد 10 کينورولايهديسا هب هديبسچن مرپسا ات دش هتسش یمارآ هب (Ham’s)

کشخ ات تفرگ رارق قاتا یامد رد روکذم ما .دوش ادج ما حطس زا .دوش

)A₃ نيسيامومورك يزيمآ گنر( نيماتورپ دوبمك یبايزرا

(1 هب 3 تبسن هب کيتسا ديسا و لوناتم) یونراکويتاسكيف لولحم رتيل يليم ره رد نويليم 10 تظلغ اب نميس هنومن اب يواسم تبسن هب ،یزيمآ گنر تهج هدش هدامآ یاه ما یور رب رتيلوركيم 100 هزادنا هب ماجنا روظنم هب .دوش کشخ ات دش هداد رارق قاتا یاوه رد و هتشاذگ

رتيلوركيم 100 اب هقيقد 20 تدم هب دياسا ره ،CMA₃ يزيمآ گنر

رد رتيل يليم رب مرــگ0/25) دش يزيمآ گنر CMA₃ لولحم زا

رتيل يليم 32/9 و راوم 0/1 کيتسا ديسارتيل يليم 7 :نيولا کمرفاب 10لماش pH=7 راوم 0/2 تظلغ اب و Na₂HPO₄ و 7H₂O زا

وشتسش لورسيلگ رفاب طسوت اهدياسا سپس (MgCl₂ زا راوم يليم

زا هدافتسا اب و دندش تنوم (1: 1) یواسم تبسن هب رفاب نيمه اب و

(BX51, Tokyo, Japan) Olympous تنسرولف پوكسوركيم

دصرد .دش شرامش مرپسا 100 زور نامه رد 460-470 رتليف اب گنر اــب مرــپــسا و (CMA₃+₎ ناــشــخرد درز گــنر اــب مرــپــسا

هبساحم Olysia رازــفا مرن زا هدافتسا اب (CMA₃-₎ هريت درز

.(9) دش

DNA _{نويساتنمگارف یبايزرا}

:نيياپ بوذ هــجرد اــب) دـــصرد1 زوراـــگآ زا دــصرد 0/7 اب نميس هنومن اب دارگ يتناس هجرد 37 یامد رد (low melting

هک یما یور رب و طولخم رتيل يليم ره رد نويليم 5-10 تظلغ نتشاذگ اب و دش هتشاذگ دوب هديشوپ دصرد0/65 زوراگآ اب لبق زا دارگ یتناس هجرد 4 یامد رد هقيقد 4 تدم هب ،نآ یور رب لما کي رد یقفا تروص هب ما ره ،اه لما ندرک ادج اب سپس .تفرگ رارق و قاتا یامد رد هقيقد 7 تدم هب لامرن 0/08 کيرديرلکديسا لولحم رارق lysing لولحم رد هقيقد 25 تدم هب و دش هداد رارق یكيرات رد

بيترت هب و وشتسش رطقم بآ اب هقيقد 5 تدم هب همادا رد .تفرگ کشخ زا دعب و دش هتارديهد هقيقد 2 ،دصرد100 و 90 ،70 لكلا رد یزيمآ گنر 1: 1 تبسن هب PBS و Wright گنر لولحم اب ،ندش

پوكسوركيم طسوت و وشتسش یلومعم بآ اب هقيقد 10 زا دعب و نويساتنمگارف نازيم ناوتیم شور نيا زا هدافتسا اب .دش یسررب یرون و هتسه فارطا هلاه دوجو هب هجوت اب لولس عون 5 تروص هب ار DNA

هتسه) DNA نويساتنمگارف اب یاه مرپسا دصرد .درک یسررب نآ هزادنا

و (هدش degrade مرپسا لولس و هلاه نودب ،کچوک هلاه اب مرپسا

(طسوتم هلاه و گرزب هلاه اب مرپسا هتسه) DNA نويساتنمگارف نودب

نويساتنمگارف سكيدنا) DFI تروص هب عومجم رد هک دش یبايزرا

.(21) دش نييعت (DNA

یرامآ زيلانآ

يگتسبمه بيرض يرامآ ياه نومزآ زا هدافتسا اب اه هداد زيلانآ (t-test و Descriptive ،Correlation Coefficient)

هک یتروص رد و تفرگ ماجنا SPSS11.5 رازــفا مرــن طسوت

.دش بوسحم راد ینعم یرامآ ظاحل زا ،دوب p<0/05

اه هتفاي

نيماتورپ دوبمک ،یمرپسا یاهرتماراپ یبايزرا زا لصاح جياتن صخشم 1 لودج رد ،(DFI) DNA نويساتنمگارف و (CMA₃+)

.تسا هدش دوبمک یاراد ،یعيبطريغ یژولوفروم اب مرپسا نيگنايم هسياقم ،لرتنک هورگ هس رد DNA نويساتنمگارف و (CMA₃+₎ نيماتورپ

.تسا هدش هداد ناشن ،1 رادومن رد ،II يبرجت و I يبرجت یعيبطريغ یژولوفروم اب یاه مرپسا دصرد ،رادومن نيا هب هجوت اب شهاک لرتنک هورگ هب تبسن II يبرجت و I يبرجت هورگ ود رد تسا راد ینعم یرامآ ظاحل زا دروم ود ره رد بيترت هب هک هتفاي اب مرپسا نيگنايم هسياقم هواــع هب .(p=0/009 و p=0/001)

ناشن II يبرجت و I يبرجت هورگ ود رد یعيبطريغ یژولوفروم

هک یروط هب تسا یرادینعم فاتخا یاراد یرامآ ظاحل زا دهدیم هب تبسن Iيبرجت هورگ رد مرپسا کيژولوفروم یاه يراجنهان دصرد تسا هتفاي یرتشيب شهاک لرتنک هورگ اب هسياقم رد ،II يبرجت هورگ .(p<0/01)

ياراد ياه مرپسا نميس ياهرتماراپ تاصخشم :1 لودج

DNA _{نويساتنمگارف ياراد ياه مرپسا و نيماتورپ دوبمك} ICSI _{ديدناك ناراميب رد}

نيگنايم±

رايعم ياطخ رثكادح لقادح رتماراپ

75/03±6/2 160 10 ره رد نویلیم 106( مرپسا تظلغ )رتیل يلیم

48/27 ±2/77 65 5 مرپسا كرحت دصرد

70/75±2/61 98 38 ریغ يژولوفروم اب ياه مرپسا دصرد يعیبط

60/68±2/99 98 28 ياه يراجنهان ياراد ياه مرپسا دصرد مرپسا رس كيژولوفروم

62/41±2/8 86 25 دوبمك ياراد ياه مرپسا دصرد

)CMA3 +( نیماتورپ

35/73±4/92 67 10 ياراد ياه مرپسا دصرد

(DFI) DNA نویساتنمگارف

دوبمك ،یعيبطريغ یژولوفروم اب یاه مرپسا دصرد نيگنايم هسياقم :1رادومن

a, b, c _{:هورگ هس رد} DNA _{نويساتنمگارف و} )CMA₃+_{( نيماتورپ}

)a&b: Significant, b&c:Significant, a&c: Significant(

نيگنايم فاتخا دوشیم هظحام 1 رادومن رد نينچمه يبرجت هورگ ود رد (CMA₃+₎ نيماتورپ دوبمک یاراد یاه مرپسا

ظاحل زا ،لرتنک هورگ اب (p=0/002) II يبرجت و (_p=0/001) I دوبمک یاراد یاه مرپسا نيگنايم هواع هب .تسا رادینعم یرامآ یاراد زين II يبرجت و I يبرجت هورگ ود رد _(CMA

3

+₎ نيماتورپ

رد نيماتورپ دوبمک نازيم هک یروط هب ،تسا یرادینعم فاتخا تسا هتفاي یرتشيب شهاک ،II يبرجت هورگ هب تبسن I يبرجت هورگ نويساتنمگارف یاراد یاه مرپسا دصرد نيگنايم هسياقم .(p=0/004)

دصرد دهدیم ناشن زين (1رادومن) روکذم هورگ هس رد DNA

يبرجت و I يبرجت هورگ ود رد DNA نويساتنمگارف یاراد یاه مرپسا

زا دروم ود ره رد بيترت هب هک هتفاي شهاک لرتنک هورگ هب تبسن II هسياقم نينچمه .(p=0/01) و (p=0/001) تسا رادینعم یرامآ ظاحل

I يبرجت هورگ ود رد _DNA نويساتنمگارف یاراد یاه مرپسا نيگنايم یرادینعم فاتخا یاراد یرامآ ظاحل زا دهدیم ناشن II يبرجت و

DNA نويساتنمگارف یاراد یاه مرپسا دصرد هک یروط هب .دنتسه

تسا هتفاي یرتشيب شهاک ،II يبرجت هب تبسن I يبرجت هورگ رد .(p=0/01)

و (CMA₃+) نيماتورپ دوبمک نيب هطبار 4 و 3 ،2 ياهرادومن رد

0 20 40 60 80 100

Semen[a] HA-bound sperm[b] Processed sperm[c]

ﺩﺭﺹﺩ ﺍﺱپﺭﻡﻩﺍی ﺏﺍ ﻡﻭﺭﻑ

ﻭﻝﻭژی ﻍیﺭﻁﺏیﻉی، کﻡﺏﻭﺩ پﺭﻭﺕﺍﻡیﻥ ﻭ

DNA

ﻑﺭﺍگﻡﻥﺕﺍﺱیﻭﻥ

Ab CMA3+ DFI

100

80

60

40

20

0

و ن

يماتورپ دوبمك

،یعيبط

ريغ

یژولوفروم

اب یاه مرپس

ا دصرد

DNA

نو

يس

اتنمگ

ارف

90

80

70

60

50

40

30 20

30 40 50 60 70 80 90

80

70

60

50

40

30

20

10

40 50 60 70 80 90

100

80

60

40

20

0

20 30 40 50 60 70 80 90

ناشن روکذم یاه هورگ زا کي ره رد مرپسا کيژولوفروم یاه یراجنهان و نيماتورپ دوبمک نازيم نيب هطبار رگنايب 2 رادومن .تسا هدش هداد یرامآ ظاحل هب هک تسا لرتنک هورگ رد مرپسا یعيبطريغ یژولوفروم ،II يبرجت هورگ رد نينچمه .(p=0/018 و r=0/436) تسا راد ینعم

نيا اما .(3رادومن) (p=0/012 و r=0/538) تسا رادینعم طابترا نيا

I يبرجت هورگ رد ،دوش یم هظحام 4 رادومن رد هک روط نامه طابترا .(p=0/335 و r=0/201) تسين راد ینعم یرامآ ظاحل زا

و یعيبطريغ یژولوفروم اب یاه مرپسا دصرد نيب هطبار :2رادومن )p=0/018 و r=0/436( نميس هورگ رد )CMA3

+_{( نيماتورپ دوبمك}

یعيبطريغ یژولوفروم اب یاه مرپسا دصرد نيب هطبار :3رادومن ديسا هب لصتم یاه مرپسا هورگ رد )CMA₃+( نيماتورپ دوبمك و

)p=0/012 و r=0/538( کينورولايه

یعيبطريغ یژولوفروم اب یاه مرپسا دصرد نيب هطبار :4رادومن هدش یزاس هدامآ یاه مرپسا هورگ رد CMA₃+( نيماتورپ دوبمك و

)p=0/335 و r=0/201( مرپسا رويپ نايدارگ طسوت

ثحب

ینامرد شور تهج نميس یزاس هدامآ لومعم روط هب هزورما ،دوجو نيا اب .دريگ یم ماجنا نايدارگ یاه کينكت طسوت ICSI

و باختنا تهج ار یتوافتم و ديدج یاــه شور ريخا تاعلاطم و یلوكلوم راتخاس رب ،اهنآ ساسا هک هدرک یفرعم مرپسا یزاسادج

Semen [a] HA-bound sperm [b] Processed sperm [c]

یعيبط ريغ دصرد

یعيبط ريغ دصرد

یعيبط ريغ دصرد

CMA

3

+

CMA

3

+

CMA

3

+

لاصتا تست ،اه شور نيا زا یكي .تسا مرپسا یدركلمع تاصخشم باختنا تهج ديدج شور کي ناونع هب کينورولايهديسا هب مرپسا شور ،نونک ات اما .(19) تسا هدش داهنشيپ ICSI نامرد یارب مرپسا

لومعم تروص هب هک مرپسا نايدارگ یاه شور اب HA-binding

هتفرگن رارق یبايزرا دروم ،دنوش یم هدافتسا مرپسا یزاس هدامآ رد

HA-binding تست نيب هسياقم ،هعلاطم نيا زا فده اذل .تسا

زا کي مادک هک دوش صخشم ات تسا مرپسا رويپ نايدارگ شور و

ICSI نامرد تهج مرپسا باختنا رد یرتشيب يياراک ،شور ود نيا

اب مرپسا دصرد هک دهد يم ناشن قيقحت نيا زا لصاح جياتن .دراد نويساتنمگارف نينچمه و نيماتورپ دوبمک ،يعيبطريغ يژولوفروم شهاک مرپسا رويپ نايدارگ شور و HA-binding تست رد DNA

تسا رتشيب مرپسا رويپ نايدارگ شور رد شهاک نيا نازيم اما دباي يم .(1رادومن) لاصتا تيلباق هک غلاب ياه مرپسا ،دنداد ناشن ناراكمه و رازوه ياراد و دنرادن کيمساپوتيس هدئاز ،دنراد ار کينورولايهديسا هب دنتسه ييااب حطس رد DNA تماس رظن زا و يعيبط يژولوفروم

،22 ،14 ،4) دنهد يم ناشن ار يرت نيياپ يموزومورک يدييولپونآ و رد کيژولوفروم ياه يراجنهان شهاک ،زين هعلاطم نيا رد .(23 دش هدهاشم نميس هب تبسن کينورولايهديسا هب لصتم یاه مرپسا هلحرم رد کينورولايهديسا ياه هدنريگ هک يياجنآ زا .(p=0/009)

زنژويمرپسا دنور رد يصقن هنوگ ره و دوش يم داجيا زنژويمرپسا و دوش مرپسا ييامساپ ياشغ غولب لماكت مدع ثعاب تسا نكمم قافتا هلحرم نيا رد زين مرپسا نيتامورک مکارت و يدنب هتسب نينچمه لماكت اب تسا نكمم ،مرپسا نيتامورک حيحص مکارت مدع و دتفا يم نياربانب ،دشاب نامز مه مرپسا ييامساپ اشغ يحطس ياه نيئتورپ دوبمک صقن ،دنوش يم لصتم کينورولايهديسا هب هک يياه مرپسا .(p=0/002) دوب دهاوخ رتمک اهنآ رد نيماتورپ

،DNA نويساتنمگارف للع زا يكي دهد يم ناشن تاعلاطم

هلحرم نيا رد نيماتورپ شهاک و تسا نيتامورک يدنب هتسب رد صقن و دوش نيتامورک حيحص مکارت مدع ثعاب دناوت يم زنژويمرپسا زا نيا زا .(24) ددرگ يلسانت هاگتسد ياهريسم رد DNA بيسآ ثعاب

و نيماتورپ دوبمک ياراد ياه مرپسا دصرد مه ،IIيبرجت هورگ رد ور هک دباي يم شهاک DNA نويساتنمگارف ياراد ياه مرپسا دصرد مه

يسناوک و رازوه طسوت کينورولايهديسا هرابرد يلبق تاعلاطم اب .(23 ،22 ،14 ،4) دراد تقباطم و نيماتورپ دوبمک نيب هطبار هب طوبرم یاهرادومن هدهاشم اب نيب دوشیم صخشم ،هورگ هس رد مرپسا کيژولوفروم یاه يراجنهان ینامز مه مرپسا رس یريگ لكش و نيماتورپ طسوت نوتسيه ینيزگياج رد طابترا نيا اما .تسا زنژويمرپسا هلحرم هب طوبرم هک دراد دوجو هب تبسن نيماتورپ دوبمک یتينژورته شهاک هدنهد ناشن ،4 رادومن نايدارگ طسوت مرپسا یزاس هدامآ زا سپ مرپسا یعيبطريغ یژولوفروم .تسا مرپسارويپ زا یدادعت رب هواع و تسا ييااب یتينژورته یاراد نميس هنومن یعيبطريغ و یعيبط یاه مرپسا زا یا هعومجم ريز یاراد ،اه تيسوكل یتينژورته نيا ندرب نيب زا یاه هار زا یكي مرپسا یزاس هدامآ هک تسا اذل تسا رتشيب مجح هب نزو تبسن یعيبط یاه مرپسا رد .(16) تسا یاراد یاه مرپسا ،مرپسا رويپ نايدارگ یاه هيا رد ژوفيرتناس زا سپ دنوش یم نيشن هت رت عيرس ،دنرت مکارتم هک یعيبط نيتامورک راتخاس هک دشاب هتشاد دوجو زين یياه مرپسا نايم نيا رد دراد لامتحا و

یعيبطريغ ،لكش رظن زا یلو تسا یعيبط اهنآ نيتامورک راتخاس نايدارگ طسوت هدش یزاس هدامآ یمرپسا هنومن رد هک یروط هب .دنتسه زا رتشيب هتسه تماس دوبهب نازيم تسا هدش هداد ناشن مرپسارويپ نوسنويلموت جياتن اب و تسا مرپسا یعيبط یژولوفروم دوبهب نازيم یمرپسا هنومن رد تشاد راظتنا ناوتیم نياربانب .(25) دراد تقباطم یعيبطريغ یژولوفروم نيب ،مرپسارويپ نايدارگ طسوت هدش یزاس هدامآ یرادینعم طابترا نيماتورپ دوبمک یاراد یاه مرپسا دصرد و مرپسا .دشاب هتشادن دوجو هب هک مرپسا رويپ نايدارگ شور دهدیم ناشن هعلاطم نيا جياتن دناوت يم ،دوش يم هدافتسا يروراب کمک زکارم رد لومعم تروص ،DNA تماس و یعيبط يژولوفروم اب مرپسا يزاسادج رد

هک يا هعلاطم رد .دنک لمع رتهب ،HA-binding تست هب تبسن

هب مرپسا لاصتا يياناوت اب طابترا رد شناراكمه و يي گنوه طسوت ،تفرگ ماجنا IVF کينكت زا لصاح جياتن و کينورولايهديسا

،HA-binding تست هب تبسن مرپسا يژولوفروم هک دش هداد ناشن

تست شزرا و دراد IVF زا لصاح جياتن اب يراد ينعم هطبار

حاقل زا لصاح جياتن تيعضو ييوگ شيپ هرابرد ،HA-binding

رد نينچمه .(26) تسا دودحم نميس نيتور زيلانآ هب تبسن يمرپسا ياهرتماراپ نيب هطبار يور رب نوسنيلموت طسوت هک يا هعلاطم ،تفرگ ماجنا مرپسارويپ نايدارگ شور زا دعب و لبق DNA بيسآ و

هب يزاس هدامآ زا دعب مرپسا يعيبط يژولوفروم نازيم دش هداد ناشن

DNA تماس یاراد یاه مرپسا دصرد و هتفاي دوبهب دصرد138 نازيم

رويپ نايدارگ طسوت يزاسهدامآ زا سپ يا هظحام لباق روط هب زين یژولوفروم ،رضاح هعلاطم رد هک يلاح رد .(25) دباي يم شهاک مرپسا هب و HA-binding تست ماجنا زا سپ دصرد124 نازيم هب مرپسا

دوبهب مرپسارويپ نايدارگ طسوت يزاس هدامآ زا سپ دصرد167 نازيم .تفاي

يريگ هجيتن

HA-binding تست هک تفرگ هجيتن ناوت يم ناياپ رد

يلو دوش رتهب تيفيک اب ياه مرپسا یزاسادج ثعاب دناوت يم یزاسادج) لمع نيا رد مرپسارويپ نايدارگ طسوت یزاس هدامآ شور هجوت دياب اما .دراد يرتشيب يياراک ،(رتهب تيفيک اب ياه مرپسا و ثنوم یلسانت هاگتسد رد یعيبط روط هب کينورولايهديسا تشاد تارثا هدام نيا دور يم راظتنا نياربانب .دراد دوجو سوروفووا سولوموک کي مرپسارويپ هک یلاح رد ،(10 ،8) دشاب هتشادن حاقل دنور رب یيوس .(19) دراد يمس تيصاخ زين يکدنا و تسا (یعونصم) کيتتنس هدام دناوت یم شور ود ره زا یبيکرت و HA-binding تست ور نيا زا

.دشاب رتهب تيفيک اب مرپسا باختنا تهج یبسانم شور

رکشت و ريدقت

»ر.پ 85/25866« هرامش يتاقيقحت حرط جياتن هلاقم نيا دوخ ركشت و ريدقت بتارم هلاقم ناگدنسيون و تسا نايور هدكشهوژ پ هاگشناد حيرشت مولع شخب ناراكمه ،نايور هدكشهوژ پ نيلوئسم زا ار يرورابان و يروراب زکرم لنسرپ و ناكشزپ ،ناهفصا یكشزپ مولع .دنراد يم زاربا ناهفصا

References

1. Palermo G, Joris H, Devroey P, Van Steirteghem AC. Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte. Lancet. 992; 340:17-18

2. Foresta C, Rossato M, Garolla A, Ferlin A. Male infertility and ICSI: are here limits? Hum Reprod. 1996; 11: 2347-2348

Mitochondrial DNA deletions and nuclear DNA fragmentation in testicular and epididymal human sperm. Hum Reprod. 1997; 12: 2784-2791

4. Huszar G, Ozenci CC, Cayli S, Zavaczki Z, Hansch E, Vigue L. Hyaluronic acid binding by human sperm indicates cellular maturity, viability, and unreacted acrosomal status. Fertil Steril. 2003; 79(Suppl 3): 1616-1624

5. Huszar G, Vigue L. Spermatogenesis-related change in the synthesis of the creatine kinase B-type and M-type isoforme in human spermatozoa. Mol Reprod Dev. 1990; 25, 258-262.

6. Huszar G, Vigue L. Incomplete development of human spermatozoa is associated with increased phosphokinase concentration and abnormal head morphology. Mol Reprod Dev. 1993; 34: 292-298 7. Huszar G, Stone K, Dix D, Vigue L. Putative creatine kinase M-isoform in human sperm is identified as the 70-kilodalton heat shock protein HspA2. Biol Reprod. 2000; 63: 925-932

8. Huszar G, Celik-Ozenci C, Cayli S, Kovacs T, Vigue L, Kovanci E. Semen characteristics after overnight shipping: preservation of sperm concentrations, HspA2 ratios, CK activity, cytoplasmic retention, chromatin maturity, DNA integrity, and sperm shape .J Androl. 2004 Jul-Aug; 25(4): 593-604

9. Nasr-Esfahani MH, Razavi S, Mardani M. Relation between different human sperm nuclear maturity tests and in vitro fertilization J Assist Reprod Genet. 2001; 18: 219-225

10. Cayli S, Jakab A, Ovari L, Delpiano E, Celik-Ozenci C, Sakkas D, Ward D, Huszar G. Biochemical markers of sperm function: male fertility and sperm selection for ICSI. Reprod Biomed Online. 2003; 7(4): 462-468

11. Cherr GN, Yudin AI, Li MW, Vines CA, Overstreet JW. Hyaluronic acid and the cumulus extracellular matrix induce increases in intracellular calcium in macaque sperm via the plasma membrane protein PH-20. Zygote. 1999; 7: 211-222

12. Vines CA, Li MW, Deng X, Yudin AI, Cherr GN, Overstreet JW. Identification of a hyaluronic acid (HA) binding domain in the PH-20 protein that may function in cell signaling. Mol Reprod Dev. 2001; 60: 542-552

13. Huszar G, Vigue L, Oehninger S. Creatine kinase immunocytochemistry of human sperm-hemizona complexes: selective binding of sperm with mature creatine kinase-staining pattern. Fertil Steril. 1994; 61: 136-142

14. Huszar G, Sbracia M, Vigue L, Miller DJ, Shur BD. Sperm plasma membrane remodeling during spermiogenetic maturation in men: relationship among plasma membrane beta 1, 4-galactosyltransferase, cytoplasmic creatine phosphokinase, and creatine phosphokinase isoform ratios. Biol Reprod. 1997; 56: 1020-1024

15. Soderlund B, Lundin K. The use of Silane-coated silica particle for density gradient centifugation in in vitro fertilization. Human Reproduction. 2000; 15: 857-860

16. Sakkas D, Manicardi G, Tomlinson M, Mandrioli M, Bizzaro D, Bianchi PG, Bianch U. The use of two density gradient centrifugation techniques and the swim-up methode to separate spermatozoa with chromatin and nuclear DNA anomalies. Human Reproduction. 2000; 15: 1112-1116

17. Ainsworth C, Nixon B, Aitken RJ. Development of a novel electrophoretic system for the isolation of human spermatozoa. Hum Reprod. 2005; 20: 2261-2270

18. Philip J. Chan, John D. Jacobson, Johannah U. Corselli, William C. Patton. A simple zeta method for sperm selection based on membrane charge. Fertil Steril. 2006; 85: 481-486

19. Jakab A, Sakkas D, Delpiano E, Cayli S, Kovanci E, Ward D, Ravelli A, Huszar G. Intracytoplasmic sperm injection: a novel selection method for sperm with normal frequency of chromosomal aneuploidies Fertil Steril. 2005; 84(6): 1665-1673

20. World Health Organization: WHO Laboratory manual for the examination of human semen and semen-cervical mucus interaction. Cambridge, United Kingdom: Cambridge University Press; 1999

21. Fernandez JL, Muriel L, Rivero MT, Goyanes V, Vazquez R, Alvarez JG. The sperm chromatin dispersion test: a simple method for the determination of sperm DNA fragmentation. Journal of Andrology. 2003; 24: 59-66

22. Huszar G, Corrales M, Vigue L. Correlation between sperm Creatine phosphokinase activity and sperm concentrations in normospermic and oligospermic men. Gamete Res. 1988; 19: 67-75 23. Kovanci E, Kovacs T, Moretti E, Bray-Ward P, Ward DC, Huszar G. FISH assessment of aneuploidy frequencies in mature and immature human spermatozoa classified by the absence or presence of cytoplasmic retention. Hum Reprod. 2001; 16: 1209-1217

24. Cho C, Jung-Ha H, Willis WD, Goulding EH, Stein P, Xu Z, et al. Protamine 2 deficiency leads to sperm DNA damage and embryo death in mice. Biol Reprod. 2003; 69: 211-217

25. Tomlinson M.J, Moffatt O, Manicardi G.C. Bizzaro D, Afnan M, Sakkas D. Interrelationships between seminal parameters and sperm nuclear DNA damage before and aftr density gradient centrifugation: implication for assisted conception. Hum Reprod. 2001; 10: 2160-2165