Alzira Maria da Silva Martins

(1)

(2)

Faculdade de Ciências Farmacêuticas

Dep. Tecnologia Bioquímico-Farmacêutica

Curso de Tecnologia Químico-Farmacêutica

Dissertação

para obtenção do grau de Mestre

Alzira Maria da Silva Martins

(3)

Identificação e verificação da

resistência aos sanitizantes dos

microrganismos presentes na água

destinada ao abastecimento público

e em diferentes pontos de um

sistema de purificação .

(4)

Introdução:

Aplicações da água:

• _{Água potável}

• _{Água industrial}

• _{Água purificada}

(5)

Principais contaminantes da água

••••

_{Contaminantes particulados}

•••• Contaminantes inorgânicos

•••• Contaminantes orgânicos

(6)

Parâmetros microbiológicas da água para abastecimento público

Características químicas da água para abastecimento público

(Portaria n

°

1469 de 29/12/200)

Até 250mg/litro em íon sulfito

Sulfatos

2,0mg/litro em cloro residual

Cloro residual

Até 250mg/litro íon cloreto

Cloretos

Até 0,3mg/litro em ferro

Ferro

Até 10mg/litro em nitrogênio

Nitrogênio nítrico

Até 10mg/litro em oxigênio

Oxigênio consumido

Entre 6 a 9,5

pH

Até 1000mg/litro

Sólidos dissolvidos Totais

Cheiro de cloro levemente perceptível/ agradável

Odor Límpido Aspecto Ausência em 100 mL Coliformes Totais Ausência em 100 mL

Escherichia coli ou coliformes termotolerantes

(7)

Água purificada Limites

Condutividade < 1,3uS/cm

TOC < 0,5mg/L

Bactérias < 100UFC/mL

Água para injetáveis Limites

Condutividade < 1,3uS/cm

TOC < 0,5mg/L

Bactérias < 10UFC/mL

Pirogênio < 0,25UE/mL •

Determinação de padrões de qualidade de água,

segundo a Farmacopéia

(8)

Água de alimentação –Ponto 1

Filtros Multimeios – Ponto2

Abrandadores – Ponto 3

Filtro de Carvão – Ponto 4

Filtro de 5 micras – Ponto 5

Osmose Reversa – Ponto 6

Deionização continua – Ponto 7

Água Purificada – Ponto 8

UV- Ponto 9

Filtros de 0.05 micras – Ponto 10

Pontos de Uso –Ponto 11,12,13

Água de alimentação –Ponto 1

Filtros Multimeios – Ponto2

Abrandadores – Ponto 3

Filtro de Carvão – Ponto 4

Filtro de 5 micras – Ponto 5

Osmose Reversa – Ponto 6

Deionização continua – Ponto 7

Água Purificada – Ponto 8

UV- Ponto 9

Filtros de 0.05 micras – Ponto 10

Pontos de Uso –Ponto 11,12,13

(9)

A Edwards Lifesciences Macchi fornece na linha

cardiovascular uma extensa gama de produtos e serviços

divididos em 4 quatro grandes áreas.

Cirurgia Cardíaca

Cuidado Intensivo

Perfusão/CEC

(10)

LAVAGEM DE

COMPONENTES LAVAGEM DE FILTROS TESTE DE ESTANQUEIDADE

(11)

•Agentes químicos utilizados na higienização dos subsistemas de tratamento de água Ajuste de pH 30 Unidade de Deionização 0,3 0,5 Ácido clorídrico Ajuste de pH 30 Osmose Reversa 2,4 0,5 Ácido cítrico Ajuste de pH 30 Osmose Reversa Deionização Continua 12,8 0,4 Hidróxido de Sódio Declorinação 90 Filtros multimeios Abrandadores Filtro de Carvão 4,0 1,0 Bissulfito de sódio Desinfetante 60

Tanque de água purificada Linha de distribuição aos pontos de uso 11,9 0,5 Hipoclorito de sódio Desinfetante 01 Pontos de amostragem(externo) 7.2 70,0 Álcool Desinfetante 180 Osmose reversa Unidade deionização 2.1 PAA(0,4 5%)+H₂ O₂ (2,2%) Minncare aplicação Tempo de contato (minutos) Ponto de uso Valor final do pH Conc. de uso (%) Agente químico

(12)

Material e Métodos

Amostragem: Todos os pontos foram sanitizados com álcool 70%, seguido pela coleta em sacos estéreis de polietileno

Filtração: As amostras foram submetidas ao método de filtração de membrana 0,45 um. Incubadas em meio TSA 35°C/72 horas (contagem total), em meio m Endo Agar Less 34,5-35,5°C/22 horas (coliformes total)

(13)

Isolamento

•Contagem das colônias

•Subcultura das colônias

•Coloração de Gram

•Indol

(14)

Identificação

•BBL Crystal

•API 20 NE

Substratos enzimáticos e bioquímicos. As reações são baseadas na habilidade do microrganismo em metabolizar o substrato, provocando alteração de cor do indicador de pH.

É composto por 20 microtubos (8 testes convencionais e 12 de assimilação).

As reações durante o período de incubação, se traduzem em rinsagens espontâneas coloridas e reveladas por adição de reativos. Nos testes de assimilação as bactérias crescem se forem capazes de utilizar o substrato correspondente.

(15)

Eficácia dos desinfetantes

•Concentração inibitória mínima(CIM)

A avaliação do espectro da ação do agente químico quanto a resistência dos microrganismos é realizada através de diluições, onde é determinada a menor concentração inibitória mínima.

(16)

•Tempo de redução decimal (Valor D)

É o intervalo de tempo necessário para a redução de um ciclo logarítmico de uma população microbiana quando em contato com agentes desinfetante ou esterilizante.

(17)

0 1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

9000

U

F

C

/1

00 m

L

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

pontos de amostragem

Contagem total de heterotróficos (UFC/100mL)

(18)

Resultados

% de bactérias identificadas

Microrganismos

N° colônias

%de identificação

Pseudomonas aeruginosa 25 32.05 Pseudomonas picketti 18 23.08 Pseudomonas vesiculares 10 12.82 Pseudomonas diminuta 09 11.54 Flavobacterium aureum 05 6.42 Pseudomonas fluorescens 04 5.13 Acinetobacter lwoffi 02 2.56 Pseudomonas putida 02 2.56 Pseudomonas alcaligenes 01 1.28 Pseudomonas paucimobilis 01 1.28 Flavobacterium multivorum 01 1.28 Contagem Total 78 100.0

(19)

•Resultados

•Concentração inibitória mínima

0,06

0,50

1% Minncare

(acido peracético+ H

₂

O

₂

)

0,06

0,25

0,5% Hipoclorito de sódio

0,1

0,3

0,4% Hidróxido de sódio

0,03

0,078

0,5% Bissulfito de sódio

2,18

17,5

70% álcool

0,16

0,5% acido clorídrico

0,125

0,25

0,5% acido cítrico

E. Coli

ATCC 25922

Pseudomonas

aeruginosa

identificada

(%)

Agente químico

(20)

5 9 8 6 9 6 4 Valor D (min) 0.98 0.98 0.94 0.95 0.95 0.92 0.97 R2 30 1.27-0.1808 1% Minncare (acido peracético + H₂O₂) 54 1.50-0.1063 0.5% Hipoclorito de sódio 48 2.22-0.121 0.4% Hidróxido de sódio 36 2.02-0.1619 0.5% Bissulfito de sódio 54 1.71-0.103 70% Álcool 36 2.32-0.1502 0.5%Acido clorídrico 24 1.77-0.244 0.5% acido cítrico 6log₁₀ Log N= Log N₀-1/Dt Agente químico

Resultados

(21)

Resultados

Valor D Eschericihia coli ATCC 25922

24

4 0,90

1,11-0,24

1%Minncare

(acido peracético+H

₂

O

₂

)

24

4 0,99

1,16-0,22

0,5% Hipoclorito de sódio

30

5 0,94

1,81-0,19

0,4% Hidróxido de sódio

30

5 0,97

1,77-0,20

0,5% Bissulfito de sódio

36

6 0,98

1,31-0,17

70% Álcool

24

4 0,98

1,50-0,24

0,5% Acido clorídrico

42

7 0,95

2,05-0,12

0,5%Acido cítrico

6log

₁₀

Valor D

(min)

R

2

Log N=

Log N

₀

-1/Dt

Agente químico

(22)

Discussão

♦

Hipoclorito de sódio

♦

Valor D

♦

CIM

• P.aeruginosa

= 0,25%

• E.coli

= 0,06%

Hipoclorito de Sódio 0,5% 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 0 2 4 6 8 10 12

tempo de contato (min)

Lo g (U F C /m L) P.aeruginosa D=9min E.coli D=4min

(23)

♦

Minncare

♦

Valor D

Minncare 1% 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 0 1 2 3 4 5 6

tempo de contato (min)

Lo g (U F C /m L) P.aeruginosa D=5min E.coli D=4min

♦

CIM

• P.aeruginosa

= 0,50%

• E.coli

= 0,06%

(24)

Conclusões

A

Pseudomonas aeruginosa

foi a bactéria com

maior % de identificação e maior resistência ao

cloro.

O Hipoclorito de sódio na concentração 0,5%/

60min, mostrou-se adequado para sanitização

dos reservatórios de água, linhas de distribuição e

pontos de uso.

O Minncare

R

_{na concentração de 1%/ 180 min,}

mostrou-se adequado para sanitização das

membranas de osmose reversa e unidade de

deionização.

(25)