Determinación de precisión de la eritrosedimentación y su relación con otros parámetros hematológicos y bioquímicos en bóvidos - Determining the precision of the erythrosedimentation and its relation with other hematologic and biochemical parameters in bo

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Determinación de precisión de la eritrosedimentación y su relación con otros parámetros hematológicos y bioquímicos en bóvidos

http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n030310/031005.pdf

1 REDVET Rev. electrón. vet. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet -http://revista.veterinaria.org

Vol. 11, Nº 03, Marzo/2010– http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n030310.html

Det erm inación de precisión de la erit rosedim ent ación

y su relación con ot ros parám et ros hem at ológicos y

bioquím icos en bóvidos

Det erm ining t he precision of t he eryt hrosedim ent at ion and

it s relat ion wit h ot her hem at ologic and biochem ical

param et ers in bovines

Yépez González, Juan Carlos: Universidad de Los Andes, Facult ad de Farm acia y Bioanálisis, Cát edra Hem at ología, Mérida - Venezuela ( Nick: j uan yépez) | Chacón López, Roselyn: Universidad de Los Andes, Facult ad de Farm acia y Bioanálisis | Spagano Rizza, Giovanna: Universidad de Los Andes, Facult ad de Farm acia y Bioanálisis | Rafael, Paiva: Bufalería Sant a Elena, El Vigía Est ado Mérida, Venezuela | Pérez Depablos, Carlos Luis: Est ación Experim ent al La Judibana de la Universidad de los Andes | Rivas, Clem ent e:

Colegio de Médicos Vet erinario del Est ado Mérida, Venezuela. Dirección Post al: Cát edra Hem at ología, Facult ad de Farm acia y Bioanálisis, Escuela Bioanálisis, Cát edra Hem at ología, Universidad de los Andes, Mérida Venezuela, Sect or Cam po de Oro. Código Post al: 5101. Mérida. Dirección Correo elect rónico: j uanyepez72@hot m ail.com

Resum en

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2 se det erm inó en un Spect ronis Génesys 20. Los datos se procesaron por el program a est adíst ico St at ist ical Package for the Social Sciences versión 10. Result ando, el m ét odo de Wint robe para los búfalos una Prueba F. ( p< 0,05) com o el coeficient e de variación < 5% , y el m ét odo de West ergreen para el ganado Carora en la segunda hora una Prueba F. ( p< 0,05) com o el coeficient e de variación < 5% . Se concluye que la erit rosedim ent ación present ó precisión por m étodo de Wint robe en Búfalos, m ient ras que, el m ét odo de West ergreen la present ó a la segunda hora en el ganado Carora. Por lo que recom endam os que cada localidad det erm ine los valores de la erit rosedim ent ación dependiendo al m étodo y al bóvido ya que las variaciones hem at ológicas y bioquím icas part iculares de cada especie influyen sobre la precisión del m ét odo.

Palabras clave: Erit rosedim ent ación, velocidad de sedim entación globular, búfalos, bovinos, ganado Carora, precisión.

Abst ract

The eryt hrosedim ent at ion is essential for a good hem atologic study. The eryt hrosedim ent at ion is not specific but im port ant because it can be accelerat ed m eanwhile ot her hem at ologic and/ or biochem ical param et ers are not alt ered.

The purpose of t his work was t o det erm ine t he precision of t he eryt hrosedim entat ion and its behavior in front of ot her hem at ologic and/ or biochem ical param et ers in sam ples of buffaloes and Carora cat t le localized in t he st at e of Mérida- Venezuela. The eryt hrosedim ent at ion was m anually perform ed by using t he m et hods and procedures suggest ed for hum an beings ( Wint robe and West ergreen) .

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3 det erm ine t he values of t he eryt hrosedim ent at ion depending/ based on t he m ethod and the bovine because t he part icular hem at ologic and biochem ical variat ions of each specie have influence on t he precision of t he m et hod.

Key W ords: Eryt hrosedim ent at ion, eryt hrocyt e sedim ent at ion rat e, buffalo, bovine, Carora cat t le, precision.

I N TRODUCCI ÓN

El est udio hem at ológico const it uye una herram ient a rut inaria para la orient ación del diagnóst ico clínico de diversas pat ologías. La velocidad de erit rosedim ent ación ( VES) es una prueba esencial e im prescindible en la biom et ría hem át ica ( González 2004; Shovm an et al 2005; Vives y Aguilar 2006) .

En m edicina vet erinaria y hum ana la VES se puede alt erar ant e la presencia de procesos inflam at orios crónicos y “ ocultos” , es decir, ant es de que se present en los sínt om as y baj o la aparent e norm alidad de parám et ros hem at ológicos t ales com o: el recuent o diferencial, cuent a de leucocit os, hem oglobina ( Hb) , hem at ocrit o ( Ht o) y analít os bioquím icos de rut ina com o la prot eína C react iva. ( Cast ellot e 2008) . Adem ás, est as pruebas son eficient em ent e im port ant es para el seguim ient o del t rat am ient o y evolución de procesos m órbidos ( Zargham et al 1997) .

El m étodo de referencia para la det erm inación de la VES es el de West ergreen. Por ot ra part e el m ét odo de Wint robe es de ej ecución m ás práct ica y present a buen grado de precisión por lo que se le ha ut ilizado en Venezuela y en los Est ados Unidos ( Koepke 2002; Lem us y Villaseñor 2009; Piedras et al 2003) .

Los valores hem atológicos varían dependiendo a la localización geográfica, alim ent ación, edad, sexo, alt it ud, condición fisiológica. Diversos est udios, han descrit o la VES en diversas pat ologías e inclusive su ut ilidad para el seguim ient o de t rat am ient o. ( Aidorevich et al 1990; Beechler et al 2009; Ciaram ella et al 2005; Ferrer et al 2000; Hernández et al 2005; Ram írez et al 1999; Roldán et al 2005; Shinde et al 2009) . No obst ant e, no han est udiado la precisión de la VES en los m ét odos Wint robe y West ergreen en est os bóvidos.

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4 En el Vigía est ado Mérida, Venezuela se han int roducido especies de: búfalos (bubalus bubalis) , caracterizados por ser m ultipropósito y el ganado Carora, lechero. Am bas especies de alt ísim a product ividad para la región y el país. Por lo t ant o el obj et ivo de est e t rabaj o fue det erm inar la precisión de la VES y su com port am ient o frent e a ot ros parám et ros hem at ológicos y bioquím icos en m uest ras de est os bóvidos.

MATERI ALES Y MÉTODOS

Población a est udiar

Se seleccionaron al azar, a través de m uestreo aleatorio sim ple, 60 ej em plares de bóvidos clínicam ent e sanos: 30 búfalinos de la raza Murrah ( 15 hem bras no preñadas sin part os y 15 m achos) en la hacienda Sant a Elena en el Km 41 carret era Nacional vía Sant a Bárbara del Zulia de una población de 80 sem ovient es, los cuales son alim ent ados baj o past oreo y 30 de ganado vacuno de la raza Carora ( 15 hem bras no preñadas sin part os y 15 m achos) de la Est ación experim ent al La Judibana pert enecient e a la Universidad de los Andes Mérida, Venezuela de una población de 215 sem ovient es, alim ent ados baj o pastoreo y alim ento concentrado con edades com prendidas ent re 2 y 5 años con pesos ent re 200 – 300 Kg para los m achos y de 250 – 350 Kg para las hem bras. Am bos grupos localizados en la m ism a región geográfica, El Vigía Est ado Mérida, Venezuela con una alt it ud de 130 m snm y una tem perat ura prom edio de 32oC. Este t rabaj o se realizó aplicando los principios ét icos int ernacionales que rigen la invest igación biom édica con anim ales ( CI OMS 1985) .

Recolección y procesam ient o de las Muest ras

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5 especiales de Wint robe y West ergreen.

El est udio hem at ológico de Hb, Ht o, CHCM y cuent a de leucocit os se realizó elect rónicam ent e, en un equipo QBC Vet Aut oread analizador de m uest ras sanguíneas en el Vigía Est ado Mérida. Para el cont rol de calidad y verificación de los resultados se ut ilizó un cont rol 4C Plus Cell.

El núm ero de erit rocit o se obt uvo por el m ét odo visual direct o sugerido para hum anos, para su cont rol de calidad se hizo en dos Hem at ím et ros de Neubauer m ej orado cont ándose cuat ros cám aras, con diferencias m enor a 15 células ent re cám ara y cám ara. Para calcular el volum en corpuscular m edio ( VCM) se ut ilizó la form ula: VCM= ( Ht o/ núm ero de m illones de roj os) x 10.

Para la det erm inación del fibrinógeno ( Fb) se ut ilizaron t ubos vacut ainer de plást ico ( Bect on Dickinson and Com pany, USA) con citrato de sodio 3,8% , con proporción 1 de ant icoagulant e cit rat o de sodio al 3,8 % y 9 de sangre ( dilución 1: 10) , fueron t rasladadas inm ediat am ent e en cava de anim e a una t em perat ura ent re 2 y 8oC, con bolsas de hielo, a la Ciudad de Mérida para ser analizadas, en el laboratorio se congelaron a - 20o_{C, para ser procesadas gradualm ent e.}

El Fb se analizó por el m ét odo de Clauss, en el Coagulóm et ro BI O- BAS, a t em perat ura de 37± 0,1 oC y equipam ient o de inst rum ent os apropiados para la realización de la prueba. Se incluyeron dos plasm as cont roles de concent ración conocida del Fb, los cuales se t rat aron com o m uest ra problem a. Plasm a cont rol nivel 1 y plasm a control nivel 2 con sist em a cert ificado de control de calidad I SO 9001 I SO 13485.

La m uest ra para la det erm inación de las concentraciones de colesterol t ot al y t riglicéridos se obt uvo en t ubos lim pios y secos sin ant icoagulant es, luego se procesó por m ét odos enzim át ico colorim ét rico, ut ilizando los Kit Colest erol MR ( Crom at est ) y Triglicéridos MR ( Crom at est ) respect ivam ent e, am bos se cuant ificaron en un espect rofot óm et ro Genesys 20 ( Spect ronic I nst rum ent s, I nc.) .

Sist em a Est adíst ico

Los dat os obt enidos se procesaron por el program a est adíst ico SPSS versión 10 ( SPSS 2000) . Para la det erm inación de la precisión de la VES de los m ét odos Wint robe y Westergreen se em pleó la prueba F, est e ensayo est adíst ico perm it ió la com paración de la precisión de dos m ét odos y el coeficient e de variación de Pearson ( CV) , ya que, la invest igación m édica hum ana lo ha em pleado rut inariam ent e para describir la precisión de un ensayo. Est e m ét odo est adíst ico se aj ust ó a las exigencias de est e t rabaj o.

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6 CV de cada t riplet a y luego prom ediándolos y el CV t ot al ( CVT) , se det erm inó direct am ent e dividiendo la desviación t ípica entre el prom edio de t odos los dat os y luego m ultiplicándolos por 100. Considerándose, preciso un CV < 5% ( Henry 2007) .

Las cifras de Hb, Ht o, CHCM,VCM, cuent a de leucocit os, concent ración de Fb, t riglicéridos y colest erol t ot al se analizaron est adíst icam ent e em pleando el m odelo t de St udent para m uest ras pequeñas ( m enor a 30 dat os) , a t ravés del cont rast e de hipót esis para la diferencia de m edias, est e perm it ió obt ener la diferencia significat iva ent re los dos grupos ( búfalos y ganado Carora) . Adicionalm ent e, se corroboró aplicando la Prueba T ( devuelve la probabilidad asociada con la prueba t de st udent ) ( Chacín 1992) .

La m uest ra de este t rabaj o para la det erm inación de la precisión fue est adíst icam ent e apropiada, no obst ant e no es recom endable para determ inar los intervalos de referencia, ya que, para este fin se necesit a un gran núm ero de suj et os para t ener suficient e pot encia para asignar los lím it es superior e inferior de un rango de referencia. El Com it é Nacional de Est andarización de Laborat orios Clínicos en hum anos recom ienda 120 suj et os en cada grupo ( NCCLS 1995) .

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7 Tabla 1 . Valores prom edios de los diversos parám et ros hem at ológicos y bioquím icos y com paraciones est adíst icas de sexo en búfalos y

ganado Carora.

Bovino/ Parám et ro búfalo hem bra

búfalo m acho

Carora hem bra

Carora m acho

Hb ( g/ dL) 13,02 ( * ) 12,94 ( * ) 9,92 ( + ) 10,45( + )

Hto ( % ) 37,55( * ) 37,52( * ) 30,26( + ) 32,99( + )

CHCM ( % ) 34,65 ( * ) 34,67 ( * ) 32,90 ( + ) 31,69( + )

VCM ( fL) 45,3( * ) 44,8( * ) 43,1( + ) 43,7( + )

Eritrocit os ( x109_{L) 8125,678 ( * ) 8275,398( * ) 6398,366( + ) 6298,725( + )}

Leucocitos ( x109_L) _{10,751 ( * * ) 13,549( * * )} _{9,048( + + ) 13,087( + + )}

VES Wintrobe ( m m / h) 49,26( * ) 51,73 ( * ) 0,73( + ) 0,8( + )

VES West ergreen ( m m / h)

68,5 ( * ) 68,6( * ) 3,06( + ) 2,8( + )

VES West ergreen ( m m / 2h)

84,7( * ) 80,2( * ) 6,1( + ) 6,7 ( + )

Fb ( g/ L) 5,3 ( * ) 5,2( * ) 5,2( + ) 5,04( + )

Triglicéridos ( m g/ dL) 25,1( * ) 28,4( * ) 33,8( + ) 34,7( + )

Colest erol t ot al ( m g/ dL)

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8 Leyenda: entre búfalos ( * ) p> 0,05 ( * * ) p< 0,05 Caroras ( + ) p> 0,05 ( + + ) ( < 0,05)

Tabla 2 . Diferenciación est adíst ica de parám et ros hem at ológicos y bioquím icos ent re m achos y ent re hem bras de búfalos y ganado Carora.

Parám et ro/ Especie Machos búfalo- Carora

( valor p)

Hem bras búfalo- Carora

( valor p)

Hb ( g/ dL) < 0,05 < 0,05

Ht o ( % ) < 0,05 < 0,05

CHCM ( % ) > 0,05 > 0,05

VCM ( fL) > 0,05 > 0,05

Eritrocitos ( x109L) < 0,05 < 0,05

Leucocit os ( x109_{L) > 0,05} _{> 0,05}

Fb ( g/ L) > 0,05 > 0,05

Triglicéridos < 0,05 < 0,05

Colest erol t otal < 0,05 < 0,05

Tabla 3 . Diferenciación est adíst ica de la precisión ent re los CVT de los m ét odos Wint robe y West ergreen en búfalo y ganado Carora.

búfalo hem bra

valor p

búfalo m acho valor p

Carora hem bra

valor p

Carora m acho valor p

Wint robe-Westergreen/ 1

h

< 0 ,0 5 < 0 ,0 5 > 0,05 > 0,05

Wint robe-Westergreen/ 2

h

< 0 ,0 5 < 0 ,0 5 > 0,05 > 0,05

Westergreen/ 1 hWest ergreen/

2h

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9

DI SCUSI ÓN

Un est udio hem at ológico realizado en búfalos en la Universidad de Agricult ura Faisalabad en Pakist án ( Khalid y Rahm an 2010) , se evaluó el efect o de la recom binant e som at ropina bovina inyect adas a búfalos, a los cont roles se les inyect o solución salina est éril y obt uvieron valores para la VES de 92,63 ± 4,07 m m / h, evidentem ente por la hem odilución plasm át ica difieren al valor de la VES en búfalos report ado en est e t rabaj o ( t abla 1) .

Un t rabaj o t am bién realizado en est a Universidad de Pakist án ( Akht ar et al 2007) , se det erm inó la VES por el m ét odo West ergreen en búfalas part urient as, la lect ura sólo se realizó a la prim era hora, obt uvieron en los cont roles ( sanos) un valor de 73,1± 29 m m / h, result ado que se asem ej a al valor obt enido en est e t rabaj o ( t abla 1) .

Un estudio realizado en España ( González 2000) indicó que en los bóvidos por lo general no se det erm ina la VES, por ser nula, t al com o result o en est e t rabaj o en el ganado Carora hem bra y m acho por Wint robe ( t abla 1) , no obst ant e un increm ent o de est a debería suponer un proceso inflam at orio ( Vilke et al 2009) .

El m ét odo West ergreen present ó VES m ás elevada en el ganado Carora hem bra y m acho respect o a Wint robe ( t abla 1) . Los valores m ás altos de West ergreen se explican por la hem odilución plasm át ica de la m uestra y a la preservación del Fb conferida por el citrato de sodio, entre otras caract erísticas, estas lo determ inan com o el m étodo de referencia ( Am ilachwarl et al 1990; Suzuki et al 2001) .

Los valores de Hb, Hto y núm ero de erit rocit os present aron diferencias est adíst ica significat ivas ent re m achos y ent re hem bras de búfalos y Caroras, p < 0,05 ( t abla 2) , siendo m ás elevados en búfalos que el ganado Carora ( t abla 1) . La policit em ia es un fact or que ret rasa la VES m ient ras que la anem ia la acelera ( Brigden1999) , según est e principio era de esperar que los result ados de la VES fuera m ás acelerada en el ganado Carora, no obst ant e result ó contrario ( gráfica 1 y 2) , es decir, m ás acelerada en los búfalos ( t abla 1) , se pudiera pensar que los búfalos t enían un proceso inflam atorio o infeccioso ( Turkar y Uppal 2007) , esto se descartó ya que las cuentas leucocitarias y la concent ración del Fb no present aron diferencias est adíst icam ent e significat ivas p> 0,05 ent re búfalos y ganado Carora ( tabla 2) .

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10 m acroscópicam ente libre de lípidos, en m edicina hum ana los lípidos const it uyen un fact or ret ardante de la VES ( Brigden 1999) , este hallazgo puede explicar su poca ut ilización en los bóvidos, ya que por su alt a concent ración lipém ica, Wint robe t iende a ser nula ( González 2000) .

Esta observación m acroscópica se corroboró ya que la concent ración de triglicéridos y colesterol t ot al fueron m ás alt os y est adíst icam ent e significat ivos p< 0,05 en el ganado Carora respecto a los búfalos ( t abla1y 2) . No obst ant e, los búfalos poseen un núm ero m ayor de m icroorganism os en el rum en respect o a los bovinos ( López et al 2005) , est os pudieran increm ent ar los fact ores que aceleran la VES.

La VES en búfalos present ó precisión ópt im a p < 0,05 ( t abla 3) por el m ét odo de Wint robe, con CVI y CVT m enor al 5% ( gráfica 1) , a pesar que el m ét odo de referencia en hum anos y en búfalos es el de West ergreen, el cual en hum anos ha present ado precisión m enor al 3% ( Happe et al 2002; Wiwanit kit 2001) . West ergreen em plea dos lect uras: La prim era ( m m / 1h) y la segunda ( m m / 2h) , no obst ant e en los búfalos por lo general sólo utilizan la prim era lect ura ( Akht ar et al 2007; Khalid y Rahm an 2010; Thom as et al; 1993) .

La VES en el ganado Carora present ó m ej or precisión por el m ét odo de West ergreen en la segunda hora, p< 0,05 ( t abla 3) , con CVI y CVT m enor al 5% ( gráfica 2) . En seres hum anos para corregir los defect os de precisión, West ergreen aplica el índice de Kat z ( I CSH 1993) , no obst ant e no recom endam os aplicar est a ecuación en est e ganado ya que la im precisión de esta prim era hora de West ergreen result ó exageradam ent e alt a, por lo que sólo tendría valor clínico la segunda hora.

EN CON CLUSI ÓN la VES present ó precisión en Búfalos por el m ét odo de Wint robe m ient ras que el ganado Carora la presentó por el m ét odo de West ergreen a la segunda hora, pudiéndose const it uir en un buen m arcador biológico de la respuest a inflam at oria de pat ologías infecciosas y no infecciosas.

La int erpret ación correct a de la VES requiere el análisis de los fact ores que influyen sobre la m ism a, su com port am ient o es influenciado desde la concent ración de Hb, núm ero de erit rocit os, VCM, concent ración de lípidos plasm áticos, procesos inflam at orios, ent re ot ros.

RECOMEN DACI ON ES

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11 parám et ros hem at ológicos para invest igar la causa y de est a form a reducir los cost os y det ect ar a t iem po cualquier anom alía ocult a,

La VES se pudiera ut ilizar en el ganado Carora para el seguim ient o del nivel de sus lípidos plasm át icos, para lo cual se requieren est udios adicionales.

BI BLI OGRAFÍ A

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Recibido: 01.12.09 – Ref. prov. DIC0901B – Revisado: 22.12.09 - Aceptado: 24.02.10 Ref. def. 031005_REDVET - Publicado: 01.03.2010

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