Nome: Paola Julie dos Santos da Silva Número: 24
2° ano do Ensino Médio
Trabalho de Biologia
Técnica de PCR
A técnica do PCR (Reação em cadeia da polimerase) permite realizar várias cópias de um segmento específico de DNA rapidamente e precisamente, o que antes não era possível com métodos demorados e trabalhosos.
Essa técnica foi desenvolvida nos anos de 1980 e revolucionou diversas áreas da biologia e da medicina. É utilizada para se obter a amplificação seletiva de determinada região de uma molécula de DNA, na qual apenas uma única molécula de DNA pode servir de molde para amplificação, produzindo milhares de cópias da molécula-alvo.
O procedimento envolve 3 etapas:
-1 Desnaturação
DNA genômico contendo a sequência a ser amplificada é desnaturado por aquecimento a cerca de 95°C por cerca de 30 segundos. A dupla fita é aberta (desnaturada), tornando-se uma fita única.
-2 Anelamento ou Hibridação
Após a separação das fitas, um par de iniciadores ou primers (uma fita de DNA específica para o gene que se quer estudar) complementam a fita oposta da sequência de DNA a ser amplificada. Sendo assim, um deles é complementar à sequência em uma fita da dupla-hélice de DNA e o outro é complementar à sequência na outra fita. O molde é determinado pela
posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 60°C.
-3 Extensão ou polimerização
Com o molde já identificado, a enzima DNA-polimerase adiciona as bases complementares, formando uma nova fita e então se tem novamente a duplicação da fita de DNA. Esse processo acontece a uma temperatura de 72°C. O ciclo inteiro é então reiniciado, os produtos do primeiro ciclo de replicação são então desnaturados, hibridizados e novamente replicados com DNA-polimerase. O procedimento é repetido muitas vezes até que o nível desejado de amplificação seja obtido.Na prática, a amplificação efetiva do DNA necessita de 20 a 30 ciclos de reação, com os produtos de cada ciclo servindo como DNA-molde para o próximo – dando origem ao termo “reação em cadeia” da polimerase.
Revelação:
Finalizada a PCR, o próximo passo é detectar a presença de produtos
amplificados. Em geral, isso é realizado pela eletroforese em gel de agarose (corado com brometo de etídio, ou corante similar) ou poliacrilamida
(corado pelo nitrato de prata).
Como cada etapa da reação ocorre em uma temperatura específica, a reação pode ser controlada. É utilizado um termociclador para determinar a temperatura e o tempo de cada etapa, bem como o número de ciclos de replicação.
PCR tem um grande potencial na medicina forense. Sua sensibilidade torna possível utilizar uma amostra bastante pequena (traços mínimos de sangue e tecidos que poderiam conter os restos de somente uma única célula) e ainda se obter uma “impressão digital de DNA” da pessoa da qual a amostra foi coletada, podendo assim fazer comparações com aqueles obtidos de vítimas e/ou suspeitos de casos de infração penal.
Componentes necessários:
-Amostra de DNA a ser testada;
-Par de iniciadores (primers): senso (forward) e antisenso (reverse);
-Nucleotídeos (dNTPs);
-Enzima Taq DNA polimerase;
-Solução tampão, água e cloreto de magnésio.
Equipamento:
O equipamento utilizado é chamado de Termociclador.Ele possui um bloco térmico com espaços para os tubos das reações.Esse equipamento aumenta e diminui a temperatura de acordo com a programação que foi feita pelo utilizador.
Técnica DNA Fingerprint
A técnica descrita por A. Jeffreys em 1985, localiza as regiões do genoma que não se expressam, por acumular mutações, cada indivíduo apresenta uma sequência única.
DNA fingerprinting literalmente quer dizer impressão digital do DNA, isto é, a partir da análise do DNA de um organismo este pode ser identificado ao nível do individuo. Esta técnica é muito utilizada na investigação criminal para identificar criminosos a partir de resíduos de DNA ou em testes de paternidade para identificar os pais.
As repetições das sequências são denominadas VNTR ou vinters, com o reconhecimento do tipo de VNTRs, obtem-se um padrão de bandas individual parecido com o código de barras do comércio.
Clonagem de animais
Essa técnica é feita por tecnologia de reprodução, o procedimento usa o citoplasma de um óvulo, cujo núcleo foi previamente eliminado, para inserir o núcleo de uma célula somática do animal que deseja clonar
A ovelha Dolly foi o primeiro mamífero a ser clonado com sucesso a partir de uma célula somática adulta
Ovelha Dolly
A célula resultante é estimulada a se dividir para formar o embrião que será implantado em uma mãe de aluguel. O clone nasce com o mesmo genoma do animal doador do núcleo.
A clonagem de animais selvagens pode ajudar a preservar espécies
ameaçadas de extinção. Dewey, o primeiro clone veado do mundo nasceu a partir da manipulação das células de um cervo que já estava morto.
