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Resumo de Tese Rev. bras. hematol. hemoter. 2003;25(2):121-124
Mari n a A. Couti n ho
Or i entador
Di mas T. Covas
Resum o
Os objetivos deste estudo foram avaliar, com metodologia de cultivo in-vitro de progenitores hematopoéticos, o efeito das drogas STI571 e citarabina sobre a proliferação de células mononucleares de paci-entes com leucemia mielóide crônica, o crescimento de colônias hematopoéticas CFU-GM, estudar por mé-todo de citometria de fluxo a porcentagem de células apoptóticas e identificar a presença do gene de fusão BCR/ ABL nas colônias sobreviventes por RT-PCRe FISH nas amostras de pacientes com leucemia mielóide crô-nica após exposição das células à citarabina e STI571 a cada tempo e concentração determinada das drogas. Foi utilizado, como material, sangue periférico e medu-la óssea, obtida por punção aspirativa esternal ou da crista ilíaca posterior, de pacientes com LMC Ph positi-vo na fase crônica, durante o processo clínico de trata-mento e avaliação. Sangue periférico de doadores vo-luntários normais usados como controle. Células mononucleares de sangue periférico e medula óssea foram separadas por gradiente de Ficoll-Hypaque, sub-metidas a tratamento com as drogas citarabina e STI571 em diferentes concentrações e pelos tempos de 24, 48
e 72 horas, avaliadas quanto à proliferação, crescimento de colônias CFU-GM, apoptose e identificação da pro-gênie pelas técnicas de FISH e RT-PCR. Nos ensaios de proliferação, a citarabina teve efeito inibitório não sele-tivo proporcionalmente à dose, mas não em relação ao tempo de exposição, tanto em controles normais, como na LMC. O STI571 foi também dose dependente e não tempo dependente, no entanto houve efeito seletivo sobre as células LMC em baixas doses; em dose elevada inibiu também os controles normais. Nos ensaios clonogênicos, a citarabina demonstrou efeito inibitório dose e tempo dependente e não seletivo, quanto ao STI571, não se demonstrou diferença estatisticamente significante entre tempo e dose nas células da LMC, também com efeito seletivo em baixas doses, sobre estas células. A quantificação da apoptose não demons-trou diferença significativa na maioria dos ensaios. RT-PCR BCR/ ABL realizado em 16 colônias mostrou-se positivo em 12 e negativo em 4 colônias. Positividade pelo FISH foi encontrada em 18 colônias, resultado inconclusivo em 4 e não informativo em 4. Em nenhum caso foi definitivamente negativo. O desenvolvimento desse trabalho demonstrou a factibilidade do emprego desse conjunto de metodologias para o estudo de mo-dalidades terapêuticas da LMC e demonstração do efei-to clonal seletivo dessas terapias.
Pal avr as-ch ave:Leucemia mielóide crônica; cé-lulas progenitoras hematopoéticas; ensaio clonogênico; proliferação; citarabina; STI571; RT-PCR; hibridização in-situ por fluorescência; BCR/ ABL.
Resumo de Tese/Thesi s
Efei tos do STI571 e da ci tar abi n a sobr e a pr ol i fer ação e a sel eção “ i n
-vi tr o” de cél ul as pr ogen i tor as h em atopoéti cas n a l eucem i a m i el ói de
cr ôn i ca A
Effects of STI571 an d cytar abi n e i n h em atopoi eti c pr ogen i tor cel l pr ol i fer ati on an d
“ i n -vi tr o” sel ecti on i n ch r on i c m yel oi d l euk em i a.
Di ssertação para obten ção do ti tulo de mestrado em Hematologi a pelo Departamen to de Clín i ca Médi ca da Faculdade de Medi ci n a de Ri bei rão Pr eto-USP.
Cor r espondênci a par a:Mari n a A. Couti n ho Falta o en dereço
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Rev. bras. hematol. hemoter. 2003;25(2):121-124 Resumo de Tese
Summar y
The goals of thi s study were to assess usi n g the i n -vi tro hematopoi eti c progen i tor cellsculture method, the effectsof STI571 and cytarabine in chronic myeloid l eu k em i a ( CM L) pa t i en t s’ m on on u cl ea r cel l s, i n vest i ga t i n g t h e beh a vi or of t h e gr ow t h of h em a t opoi et i c col on i es CFU-GM, st u d yi n g t h e percen tage of apoptoti c cells after treatmen t by flow cytometry an d i den ti fyi n g the presen ce of the fusi on gene BCR/ABL by RT-PCR and FISH in the survival CML colon i es after exposure to STI571 an d cytarabi n e at differen t timesan d drug con cen tration s. The materials used were CML Ph posi ti ve peri pheral blood an d bon e marrow from pati en ts i n fi rst chron i c phase, collected by ster n al or posteri or i li ac cr est pun ctur e, duri n g the cl i n i ca l eva l u a ti on pr ocess. H ea l thy vol u n teer s’ peripheral blood wasused asa control. Peripheral blood an d bon e marrow mon on uclear cells were separated by Fi coll-Hypaqu e gr adi en t, an d r ecei ved i n -vi tr o tr eatmen t wi th STI571 an d cytar abi n e at di ffer en t con cen trati on s for 24, 48 an d 72 hours, an d assessed after that for proli ferati on i n dex, CFU-GM colon i es growth, percen tage of apoptotic cellsan d iden tification of the fusi on gen e BCR/ABL by FISH an d RT-PCR. By the proli ferati ve assays, we cou ld demon strate that cytar abi n e had a n on -sel ecti ve i n hi bi tor y effect proporti on al to the drug dosage, but n ot related wi th
exposu r e ti me, both for n or mal an d for CML cells. STI 571 w a s d ose d epen d en t a l so a n d n ot ti m e depen den t, however, showed a selective effect over CML cells i n lower doses an d wi th hi gh doses i n hi bi ted n or-mal con trol cellsat the same way. By clon ogen ic assay, cytarabi n e showed a dose an d ti me depen den t an d n on -selecti ve i n hi bi tory effect. No stati sti c di fferen ce was seen by the same assay un der STI571 treatmen t, compari n g ti mes an d doses of the drug. It showed, i n the same way, selecti ve effect i n lower doses i n CML cells. Apoptosi s qu an ti fi cati on was n ot stati sti cally significant in the majority of experiments. RT-PCRBCR/ ABL per for med on 16 colon i es was posi ti ve i n 12 an d n egati ve i n 4 colon i es. Posi ti vi ty by FISH was foun d i n 18 colon i es, i n con clusi ve i n 4 an d n on -i n for mati ve i n 4. FISH was n ot defi n i tely n egati ve i n an y colon y. The development of thisresearch showed the availability of thi s group of techn i ques for the study of a vari ety of therapeuti c modali ti es for CML.
K ey w o r d s: Ch r on i c m yel oi d l eu k em i a ; hem atopoi eti c pr ogen i tor cells; clon ogen i c assay; proliferation ; cytarabin e; STI571; RT-PCR; fluorescen t i n -si tu hybri di zati on ; BCR/ABL.
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