Avaliação da Cinética Espermática

O espermatozóide sofre maturação durante o trânsito e estocagem no epidídimo, adquirindo competência funcional devido a uma série de mudanças morfológicas e fisiológicas. A mudança mais óbvia com relação à maturação do espermatozóide é a aquisição da habilidade de se mover quando este entra em contato com o plasma seminal e outros meios fisiológicos. O espermatozóide deve movimentar-se através do muco cervical, atravessar o útero, entrar no oviduto e alcançar a porção da ampola onde a fertilização ocorre. Além do padrão de motilidade espermática associado a cada uma dessas regiões ser diferente, os espermatozóides são também modificados durante o transporte através do trato reprodutivo da fêmea a exemplo da capacitação. Os padrões

de motilidade do espermatozóide diferem basicamente devido a diferenças na composição físico-química dos micro-ambientes a que são expostos (MORTIMER, 1++7).

Acredita-se que a motilidade seja uma das mais importantes características associadas à habilidade de fertilização do espermatozóide. Esse parâmetro da cinética tem sido reconhecido por muito tempo como sendo essencial para o transporte do sêmen através do trato reprodutivo da fêmea e para a fertilização e é considerado uma expressão da viabilidade e integridade estrutural do espermatozóide (VERSTEGEN et al., 2002).

a) Avaliação Subjetiva da Cinética

A cinética dos espermatozóides pode ser medida subjetivamente pela avaliação da característica da onda criada com seu movimento, da proporção de células móveis e da intensidade média dos batimentos de suas caudas. Para o sêmen diluído ou congelado-descongelado tem sido amplamente utilizada a motilidade (EVANS & MAXWELL, 1++0; MORRIS et al., 2001; PERIS et al., 2004) e o vigor espermático (SOUSA, 2002; RODELLO, 2006).

Morris et al. (2001) obtiveram uma boa fidedignidade e repetibilidade da avaliação da motilidade espermática estimada de forma subjetiva após a descongelação do sêmen ovino e constataram que sua variabilidade influenciou significativamente a produção in vitro de blastocistos. A proporção de espermatozóides móveis aumentava na mesma proporção que a chance de produção de blastocistos. De acordo com os autores, a avaliação da motilidade imediatamente após a descongelação teve um maior poder de antever o potencial da produção in vitro de embriões (PIV) de uma determinada partida de sêmen que a avaliação da viabilidade espermática medida pelo +oechst 33258. Peris et al. (2004) demonstraram que, quando a porcentagem de espermatozóides de carneiros com boa motilidade decaiu, a susceptibilidade à desnaturação de cromatina aumentou. Uma relação positiva entre a motilidade espermática e a PIV pode de fato ser ainda mais forte se uma avaliação mais objetiva for utilizada no momento da descongelação a exemplo da avaliação computadorizada da cinética (MORRIS et al., 2001).

b) Avaliação Computadorizada da Cinética

O método mais conveniente de avaliação da cinética de um grande número de espermatozóides é a análise do movimento espermático assitida por computador (CASA - Computer Assisted Sperm Analysis) no qual cada trajetória da cabeça do espermatozóide é reconstituída (MORTIMER & MAXWELL, 2004). A CASA proporciona a oportunidade de acessar múltiplas características em uma única amostra de espermatozóides com alta repetibilidade. Diferenças na motilidade de células espermáticas são mais visíveis pela CASA que em métodos subjetivos (FARREL et al., 1++8).

Além da motilidade total (MT) e progressiva (MP) três valores para velocidade são comumente medidos pela CASA e usados para a descrição do movimento espermático, a velocidade curvilínea (VCL), a velocidade em linha reta ou progressiva (VSL) e velocidade média do trajeto (VAP). Cada uma dessas velocidades descreve um aspecto diferente da trajetória do espermatozóide. O trajeto curvilíneo é uma projeção bidimensional da verdadeira trajetória tridimensional. A VCL é a distância percorrida pelo espermatozóide ao longo do caminho curvilíneo percorrido, sendo calculada através da somatória das distâncias ao longo da trajetória em relação tempo gasto. O valor de VSL é determinado encontrando-se a distância em linha reta entre os primeiros e os últimos pontos da trajetória em relação ao tempo. Este valor fornece o espaço ganho dentro de um período. O valor de VAP fornece uma indicação do comprimento da trajetória geral do espermatozóide e é calculado encontrando-se o comprimento do caminho médio em relação ao tempo gasto (MORTIMER, 1++7).

A amplitude do deslocamento lateral da cabeça (AL+) é utilizada como uma aproximação do batimento do flagelo enquanto que a freqüência do batimento flagelar (BCF) foi desenvolvida baseada nos fatos de que cada ponto no vértice é resultado da mudança no batimento, e cada momento em que o caminho curvilíneo cruza o caminho médio é o resultado de um novo batimento flagelar. Os valores de retilinearidade (STR), uma comparação da linha reta com a média das trajetórias, fornecem uma indicação da relação entre o espaço ganho e a trajetória geral do espermatozóide, calculados como VSL x

VAP-1 x 100. Uma trajetória com pontos espaçados de forma uniforme e com baixa amplitude, teria um valor alto de STR, uma vez que o caminho médio seria próximo do caminho em linha reta. Uma trilha circular teria um baixo STR pois o caminho médio é a média do caminho curvilíneo. A linearidade (LIN), uma comparação da linha reta e as trajetórias curvilíneas, é uma expressão da relação entre a projeção bi-dimensional do caminho tri-dimensional adotado pelo espermatozóide e seu ganho de espaço, calculado como VSL x VCL-1 x 100. Uma trajetória circular teria uma baixa LIN, pois o caminho curvilíneo seria muito maior do que o espaço ganho. Uma alta LIN na trajetória é aquela em que o espermatozóide percorre um caminho curvilíneo com uma amplitude relativamente baixa do AL+ e a direção geral do movimento é a mesma do caminho em linha reta (MORTIMER, 1++7).

Alguns valores dos parâmetros observados pela CASA tem sido correlacionados com eventos fisiológicos. O padrão de cinética do espermatozóide no sêmen de humanos caracterizado por uma motilidade altamente progressiva associada a um significativo movimento lateral de cabeça tem sido correlacionado com a habilidade de penetrar no muco cervical (SERRES et al., 1+84; AITKEN et al., 1+85; FENEUX et al ., 1+85; MORTIMER et al., 1+86). O VCL e o VAP também têm sido utilizados para predizer resultados nos processos de fertilização visto que ambos os parâmetros são aumentados após a capacitação espermática (VERSTEGEN et al., 2002).

Uma grande possibilidade que foi criada com o uso relativamente novo de taxas de aquisição de imagens de 60 +z combinada ao aumento da resolução do sistema óptico e de melhores computadores que permitiram uma localização mais ampla das células, foi a avaliação do espermatozóide hiperativado (VERSTEGEN et al., 2002). Desta forma, vários autores têm investigado os padrões do movimento hiperativado dos espermatozóides de várias espécies e utilizado esses valores na comparação do comportamento da cinética espermática em diferentes condições fisiológicas e ambientes in vitro (MORTIMER, 1++7; ROBERTSON et al., 1+88) inclusive na espécie ovina (MORTIMER & MAXWELL, 1+++; MORTIMER & MAXWELL, 2004).

Apesar disso, pouca relação dos parâmetros mensurados pela CASA e alguns testes in vitro e in vivo usados para avaliar a qualidade do sêmen tem

sido encontrada. Para Windsor (1++7), a motilidade pós-descongelação, acessada subjetivamente ou objetivamente, não é necessariamente um bom indicador da função metabólica do sêmen. Eppleston & Maxwell (1++5) por sua vez relataram não haver nenhuma correlação entre os parâmetros como motilidade, velocidade e linearidade mensuradas pela CASA no sêmen congelado de +7 carneiros e a fertilidade obtida por inseminações laparoscópicas de mais de 5000 ovelhas. Segundo esses autores ainda, o uso da CASA mostrou pouco benefício prático considerando o alto custo do equipamento.