Vários métodos bioanalíticos para quantificação isolada de NAP ou SUM em plasma humano estão descritos na literatura, havendo uma enorme variedade de detetores utilizados, tais como espectrofotométricos (ultravioleta/visível), fluorimétricos, eletroquímicos e espectrômetros de massas. Em todos os métodos que utilizam a EM como técnica de detecção, NAP foi ionizado no modo negativo, com perda de um próton ([M-H]-) e SUM no modo positivo, ganhando um próton ([M+H]+), seja na IQPA ou na IES. Os procedimentos de extração também variam amplamente, sendo utilizadas técnicas convencionais de preparo de amostra: ELL; EPT e EFS. Shah et al. (2011), Khan et al. (2011), Ge et al. (2004) e Rhim et al. (2008) associaram ELL com EPT para NAP ou SUM e Duléry et al. (1997) associaram EPT com EFS para SUM. Em geral foram utilizadas colunas cromatográficas empacotadas com sílica ligada a grupos octadecilsilano (C18), prevalecendo o uso de eluição isocrática.
Em contrapartida, métodos bioanalíticos para quantificação simultânea de NAP e SUM em plasma humano são escassos na literatura. Patel et al. (2012) descreveram os desafios para extração e detecção simultânea de NAP e SUM em plasma e não conseguiram bons resultados para ELL ou EPT, sendo necessário utilizar a EFS, uma técnica com custo elevado. Michael et al. (2012) associaram EPT com ELL para obtenção de um procedimento de extração simultânea de NAP e SUM eficaz. Entretanto, a detecção foi realizada no modo positivo para SUM e no modo negativo para NAP. Berges et al. (2010) e Haberer et al. (2010) utilizam dois procedimentos de extração, sendo SUM extraído por EFS e NAP por EPT. Embora a opção por extrações isoladas não tenha sido justificada no trabalho, tem-se a impressão de que os autores não conseguiram desenvolver uma técnica para extração simultânea dos dois fármacos, já que o método bioanalítico foi desenvolvido para quantificação simultânea de NAP e SUM em plasma humano.
Os solventes e soluções utilizados nos procedimentos descritos em diferentes referências da literatura para extração de NAP e/ou SUM de plasma estão relatados
na Tabela 1 e as condições dos métodos descritos para quantificação de NAP e/ou SUM por CLAE-EM ou CLAE-EM/EM na Tabela 2.
Tabela 1 – Solventes e soluções utilizados nos procedimentos descritos na literatura para extração de NAP e/ou SUM de plasma.
ELL
Fármaco Referências Aditivos Solventes para extração Solventes para ressuspensão NAP/SUM MICHAEL et al., 2012. Hidróxido de sódio. MTBE e diclorometano. Solução orgânica resultante.
NAP
CHMIELEWSKA et al., 2006; KHAN et al., 2011; SHAH et al., 2011; SLATTERY; LEVY, 1979; ZAGHLOUL et al., 2003.
Ácidos ou solventes precipitantes.
Clorofórmio, acetato de etila, éter e diclorometano.
FM ou mistura de água com metanol ou acetonitrila.
SUM
BOULTON; DUNCAN; VACHHARAJANI, 2003; GE et al., 2004; SHESHALA; KHAN; DARWIS, 2012; YADAV et al., 2011.
Bases ou solventes precipitantes.
MTBE, diclorometano e
acetato de etila. FM ou metanol.
EPT
Fármaco Referências Aditivos Solventes precipitantes NAP/SUM MICHAEL et al., 2012. - Ácido tricloroacético a 60%.
NAP
CHEN et al., 2005; ELSINGHORST et al., 2011; NASIR et al., 2011; PALMA-
AGUIRRE et al., 2009; ZHANG et al., 2009.
Ácidos. Metanol, acetonitrila.
SUM RAO et al., 2012. - Acetonitrila.
EFS
Fármaco Referências Cartuchos Solventes para lavagem Solventes para extração NAP/SUM PATEL et al., 2012. Fase-reversa
(Strata-X).
Metanol, água e acetato de
amônio. FM.
NAP
DUNNE; ANDREW, 1996; FARRAR; LETZIGA; GILLBET, 2002; KHAN et al., 2010; NOBILIS et al., 2003.
Fase-reversa (Supelclean, Oasis
HLB, Bond Elut).
Metanol, água e tampões com diversos valores de pH.
Metanol, diclorometano ou mistura de metanol e tampão fosfato pH 7,0.
SUM
CHENG et al., 1998; DULÉRY et al., 1997; MCLOUGHLIN et al., 1996; TAN et al., 2007.
Ciano (BakerBond) e fase-reversa (Bond
Elut).
Metanol, água e tampões com diversos valores de pH.
Metanol, acetonitrila, água, acetato de amônio, trietilamina e ácido
Tabela 2 – Condições dos métodos descritos na literatura para quantificação de NAP e/ou SUM por CLAE-EM ou CLAE-EM/EM.
Referência Fármaco Coluna Fase Móvel Ionização/
Detecção Razão m/z
1 Dose2
(mg)
Faixa de trabalho
BERGES et al., 2010 NAP
SUM
- - - - 500
85
0,1 - 100 µg/mL
0,1 - 100 ng/mL
HABERER et al., 2010 NAP
SUM
- - - - 500
85
0,5 - 100 µg/mL
0,1 - 140 ng/mL
MICHAEL et al., 2012 NAP
SUM C18, 250 x 2,1 mm, 5 µm Acetonitrila:ácido acético 0,05% (3:2) IES(-)-EM IES(+)-EM 228,8 296,0 - -
PATEL et al., 2012 NAP
SUM C18, 50 x 2,1 mm, 1,7µm Metanol:acetonitrila:acetato de amônio 4,0 mM (70:10:20) IES(+)-EM/EM 231,1 → 185,1 296,2 → 58,1 500 85 0,05 - 100 µg/mL 0,05 - 100 ng/mL
MARZO et al., 1997 NAP - - - - 502 1 - 100 µg/mL
LÖFFLER; TERNES, 2003
NAP C18, 125 x 3 mm, 5 µm Acetonitrila:solução de ácido
acético pH 2.9 (gradiente)
APCI(-)-EM/EM 229,0 → 185,0 - -
CHEN et al., 2005 NAP C18, 100 x 3,0 mm, 3,5 µm Acetonitrila:ácido acético 0,1%, pH
4 (65:35) IES(-)-EM 229,0 - - PALMA-AGUIRRE et al., 2009 NAP - - - - 275 1 - 50 µg/mL GRACIA-LOR; SANCHO; HERNÁNDEZ, 2010 NAP Polietoxilsilano, 50 x 2,1 mm, 1,7µm
Acetato de amônio 0,1 mM e ácido fórmico 0,01% em metanol e em
água (gradiente)
IES(-)-EM/EM 229,2 → 185,2 - -
DUBREIL-CHÉNEAU
et al., 2011
NAP C18, 150 x 2 mm, 5 µm Acetonitrila:ácido acético 1 mM
(gradiente)
IES(-)-EM/EM 229,0 → 169,0 - -
ELSINGHORST et al., 2011
NAP C18, 50 x 4,6 mm, 5 µm Acetonitrila:acetato de amônio 2
mM, pH 4,0 (70:30)
IES(-)-EM/EM 229 → 185 220 0,1 - 50,0 µg/mL
SØRENSEN, 2011 NAP Éter ligado a fenil, 150 x
2 mm, 4 µm
Ácido acético 0,1% em metanol e em água (gradiente)
IES(-)-EM/EM 229 → 185 - -
GILART et al., 2012 NAP C18, 100 x 4,6 mm, 2,7 µm Acetonitrila:solução de ácido
acético pH 2.8 (gradiente)
Tabela 2 – Condições dos métodos descritos na literatura para quantificação de NAP e/ou SUM por CLAE-EM ou CLAE-EM/EM. (continuação) MCLOUGHLIN et al.,
1996
SUM Ciano, 250 x 4,6 mm, 5 µm Acetonitrila:metanol:ácido
trifluoroacético 0,1% (36:6:58)
IES(+)-EM/EM 296 → 157 100 0,5 - 50 ng/mL
DULÉRY et al., 1997 SUM C18, 150 x 2 mm, 4 µm Acetonitrila:acetato de amônio 20
mM (gradiente)
IES(+)-EM 296,1 - -
CHENG et al., 1998 SUM C18, 30 x 4,6 mm, 5 µm Metanol:acetato de amônio 0,05
M, pH 7 (15:85)
APCI(+)-EM/EM 296 → 58 25 0,2 - 20 ng/mL
DUQUESNOY et al., 1998
SUM - - - - 25 1,0 - 30 ng/mL
SRINVASU et al., 2000 SUM - - - - 100 1,56 - 50 ng/mL
XU; BARTLETT; STEWART, 2001
SUM C2, 220 x 4,6 mm, 10 µm Ácido fórmico 0,1%:
(acetonitrila:metanol (6:1)) (90:10) IES(+)-EM/EM 296,4 → 58; 157; 201; a251 - - BOULTON; DUNCAN; VACHHARAJANI, 2003
SUM C8, 100 x 4,6 mm, 5 µm Metanol:água:ácido fórmico
(90:10:0,1)
IES(+)-EM/EM 296,0 → 251,0 - -
GE et al., 2004 SUM - - - - 100 1 - 100 ng/mL
TAN et al., 2007 SUM C18, 50 x 4,6 mm, 5 µm Metanol:acetato de amônio 5 mM
(20:80)
IES(+)-EM/EM 296,4 → 58,1 - -
FERRARI et al., 2008 SUM - - - - 100 3 - 90 ng/mL
YADAV et al., 2011 SUM C18, 50 x 2,1 mm, 5 µm Acetonitrila:ácido acético 0,1%
(85:15)
IES(+)-EM/EM 296,09 → 251,06 - -
RAO et al., 2012 SUM C18, 250 x 4,6 mm, 5 µm Acetonitrila:acetato de amônio 20
mM, pH 3,5 (40:60) IES(+)-EM/EM 296,14 → 251,08; 201,13; 158,09 - - 1 Razão massa/carga. 2 Comprimidos.
3 OBJETIVOS