R e v i s t a d a S o c ie d a d e B ra s ile ir a d e M e d i c i n a T ro p ic a l 2 2 ( 1 ) : 5 7 -5 8 , ja n - m a r , 1 9 8 9
RESUMO DE TESE
C A R A C T E R IZ A Ç Ã O F E N O T ÍP IC A E G E N O T ÍP IC A D E C E P A S D E L E IS H M A N IA
IS O L A D A S D A S D IV E R SA S FO R M A S C L ÍN IC A S D A L E ISH M A N IO SE H U M A N A
N O E S T A D O D A B A H IA .
N o presente estudo foram isoladas, e caracte rizadas, 114 cepas de L e i s h m a n i a de pacientes com diferentes manifestações clínicas de leishmaniose, de diferentes regiões do Estado da Bahia. Todas as cepas foram classificadas em 3 sub-espécies: L e i s h m a n i a d o n o v a n i ( c h a g a s i ) (n = 3 5 ), L e i s h m a n i a b r a z i l i e n s i s b r a z i l i e n s i s (n = 3 9 ) e L e i s h m a n i a m e x i c a n a a m a z o -n e -n s i s (n = 4 0 ). E m alguns municípios foram isolados parasitas pertencentes a diferentes subespécies, porém não foi isolado mais de um tipo de parasita do mesmo paciente. Todas as cepas foram tipadas com painéis de anticorpos monoclonais, específicos para diversas espécies e sub-espécies de L e i s h m a n i a , das Américas e do V elho Mundo. A s determinações do zimodema e do esquizodema confirmaram, em todos os casos nos quais foram realizados, a tipagem obtida com o painel de anticorpos monoclonais. Os parasitas da mesma sub-espécie, a despeito da região de isolamento, foram homogêneos tanto no padrão de reatividade com os anticorpos monoclonais (determinação do serodema), quanto nas isoenzimas (zimodema) ou no perfil dos fragmentos de restrição do D N A cinetoplástico (es quizodema).
N a A m azônia a L . m . a m a z o n e n s i s é conside rada um parasita de roedores, o qual somente de forma ocasional infecta o homem. N osso s dados mostram uma alta percentagem de casos humanos nos quais foi isolada a L . m . a m a z o n e n s i s , e que este parasita está associado a diferentes formas clínicas da doença, incluindo a forma cutânea ( n = 2 0 ), mucocutânea (n = 5 ), e mesmo as formas visceral ( n = l l ) e a leishmaniose dérmica pós-calazar (n = 4 ).
O principal agente da leishmaniose visceral foi a L . d o n o v a n i ( c h a g a s i ) , isolada de 35 dos 46 casos ex plicados. N ão houve qualquer distinção aparente entre os quadros clínicos de leishmaniose visceral causada p elaL . d o n o v a n i ( c h a g a s i ) ou pela L . m . a m a z o n e n s i s .
A L . b . b r a z i l i e n s i s foi isolada de 29 casos de leishmaniose cutânea e 8 casos de leishmaniose cutâneo-mucosa. E sta subespécie foi também isolada de dois linfonodos aumentados de volume, em dois pacientes sem qualquer envolvimento tegumentar ou manifestação de leishmaniose visceral.
A leishmaniose muco-cutànea ou cutânea cau sada pela L .b . b r a z i l i e n s i sou pela L . m . a m a z o n e n s i s foi similar clinicamente. E xceto pela observação de que nos casos com múltiplas lesões (acim a de 5 ) o
P H E N O T Y P E A N D G E N O T Y P E C A R A C T E R IZ A T IO N OF ST R A IN S O F
L E IS H M A N IA ISO L A T E D IN THE D E F F E R E N T S C L IN IC A L FO R M S OF H U M A N L E IS H M A N IA S IS IN B A H IA STA TE.
In this study 114 strains o f L e i s h m a n i a were isolated and characterised. These strains were obtained from patients with clinical manifestations o f leish maniasis and from different areas o f the State o f Ba hia. A ll 114 isolates belonged to one o f 3 species: L e i s h m a n i a d o n o v a n i ( c h a g a s i ) (n = 3 5 ), L e i s h m a n i a b r a z i l i e n s i s b r a z i l i e n s i s (n = 3 9 ) and L e i s h m a n i a m e x i c a n a a m a z o n e n s i s(n = 4 0 ). More than one para site strain was isolated in som e Municipalities, but never from a single case. Parasites o f the same species from different geographical areas were homogeneous in monoclonal antibody reactivity pattern (serodem e), isoenzyme profiles (zymodeme), and kD N A restriction fragments profiles (schizodeme). Zymodeme and schizodeme always confirmed the characterization performed by a panel o f species and sub-species- specific monoclonal antibodies against N ew World and Old World leishmaniae.
In the Am azonian region L . m . a m a z o n e n s i s is considered a parasite o f rodents, rarely infecting man. In this study, however, a high percentage o f human cases were caused by this sub species. L . m . a m a z o n e n s i s was isolated from many different clinical pre sentations o f the disease, including cutaneous lesions (n = 2 0 ), muco-cutaneous lesions (n = 5 ) and, o f note, visceral leishmaniasis ( n = l l ) and post kala-azar dermal leishmaniasis (n = 4 ).
The principal parasite agent o f visceral leishma niasis, however, was L . d o n o v a n i ( c h a g a s i ) , isolated in 35 out o f 46 cases. N o clinical difference between cases caused by L . d o n o v a n i ( c h a g a s i ) or by ( L . m . a m a z o n e n s i s was apparent.
L . b . b r a z i l i e n s i s was isolated from cutaneous (n = 2 9 ) and muco-cutaneous ( n = 8 ) leishmaniasis. This parasite was also isolated from enlarged lymph- nodes o f two patients without apparent tegumentary involvement.
Leishmaniasis, either cutaneous or muco-cu taneous, caused by L. b. b r a z i l i e n s i s or L . m . a m a z o n e n s i s were clinically similar, except for the higher frequency o f L . m . a m a z o n e n s i s isolated from cases with multiple (more than five) lesions. In addition, there was no difference in the histopathological pattern o f lesions caused by the 2 sub-species. Distribution of lymphocyte subpopulations in the lesion infiltrates were also similar regardless o f the parasite sub-species involved.
In order to evaluate the homogeneity o f the L . m a m a z o n e n s i s strains causing different forms o f the
R e s u m o d e T ese. B a r r a i A M R C a ra c te riz a ç ã o f e n o típ ic a e g e n o tip ic a d e c e p a s d e L e i s h m a n i a i s o la d a s d a s d iv e r sa s f o r m a s c lín ic a s d a le is h m a n io s e h u m a n a n o E s t a d o d a B a h ia . R e v is ta d a S o c ie d a d e B ra s ile ir a d e M e d ic in a T r o p ic a l 2 2:5 7-58, j a n - m a r, 1 989.
isolamento de L . m. a m a z o n e n s is ocorreu com maior freqüência. N ão houve qualquer diferença no padrão histopatológico das lesões causadas pelas duas sub espécies de parasitas. A distribuição das subpopu- lações linfocitárias no infiltrado inflamatório das le sões foi semelhante a despeito do tipo de parasita isolado.
Diversas cepas de L . m. a m a zo n e n sis, isoladas de diferentes formas clínicas e de diversas regiões do Estado, exibiram um padrão de com posição protéica semelhante na eletroforese em gel de poliacrilamida, e um padrão semelhante de reatividade com os anti corpos monoclonais na técnica de imunoeletrotrans- ferência, confirmando a sua homogeneidade revelada pelo ensaio radioimunológico.
A caracterização “ in situ ” d aL .m . a m a z o n e n s is nas lesões de leishmaniose cutânea ou cutâneo-mu- cosa, assim com o de leishmaniose cutânea difusa e de leishmaniose dérmica pós-calazar, foi realizada pela técnica de imunoperoxidase, usando anticorpo mono- clonal específico para a forma amastigota de L .m . a m a z o n e n s is . A caracterização, realizada pelo mé
todo imuno-histoquímico, confirmou a classificação, realizada por anticorpos monoclonais e por isoen- zimas, nas promastigotas de cultura de parasitas isoladas dos mesmos casos.
Os resultados aqui apresentados ilustram a dificuldade de caracterizar as espécies de L e is h m a n ia com base nos aspectos clínicos, já que o mesmo parasita pode ser isolado de diferentes formas clínicas da doença. D esd e que diferentes subespécies de parasitas podem responder de forma diferente ao tratamento, é aconselhável que se realize o isola mento, e caracterização, parasitárias nos casos de leishmaniose humana. A determinação de serodemas através da reação com anticorpos monoclonais apro priados, é uma técnica útil para esta caracterização e pode ser realizada nos parasitas em cultura logo após o isolamento. Ainda mais promissora, do ponto de vista de aplicação prática, é a possibilidade de realizar a tipagem parasitária no próprio tecido da biópsia da lesão, usando anticorpos monoclonais específicos para as diversas subespécies.
disease several isolates from different clinical cases, and from different areas, were tested by methods other than serodeme and zym odeme determination. A ll tested isolates exhibited similar protein profile by SD S-selyaorylam ide gel electrophoresis, and a similar pattern o f activity with different monoclonal anti bodies by Western b lot
In attempt to develop a more efficient method for species characterization “ in situ” characterization o f L . m. a m a z o n e n s is in the lesions o f cutaneous and muco-cutaneous leishmaniasis was performed by immunoperoxidase technique using anti L .m . a m a z o n e n s is amastigote specific monoclonal antibody. Such characterization was coincident with the typing o f promastigote cultures, both serodeme and zymo deme determinations, o f parasites from the same cases.
T hese results demonstrate that L e is h m a n ia species cannot be characterized on clinical grounds, since different parasites may be isolated from indistin guishable disease presentations. This characterization o f L e is h m a n ia sub-species is o f importance, as sub species may vary in their response to treatment. M onoclonal antibody serodeme determination is a useful technique which can be performed in the initial passages o f the parasite in culture. A more rapid approach is the possibility o f typing the parasite in the lesion tissues using stage and sub-species specific monoclonal antibodies.
Aldina M aria Prado Barral Tese apresentada à Faculdade de Medicina
da Universidade Federal da Bahia para obtenção do Título de Doutor em Medicina
Salvador, Bahia, Brasil, 1988
