Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical
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REFERÊNCIA
CUBA, César Augusto Cuba; BARRETO, Air Colombo; MARSDEN, Philip Davis. Leishmania
mexicana: aspectos taxonómicos y rareza de la infección humana en Três Braços, Bahia, Brasil.
Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, Uberaba, v. 17, n. 3, p. 115-122, jul./set.
1984. Disponível em:
ARTIGOS
LEISH M ANIA M E X IC A N A
: ASPECTOS TAXONÓMICOS Y RAREZA
DE LA INFECCIÓN HUMANA EN TRÊS BRAÇOS, BAHIA, BRASIL
1
C é sa r A u g u st o C u b a Cu b a , A ir C o lo m b o Ba r r e t o y
P h ilip D a v is M a r sd e n
2
D e l e s t ú d i o d e 5 1 s t o c k s d e L e ish m a n ia a i s l a d o s d e p a c i e n t e s h u m a n o s d e
l e i s h m a n i a s i s c u t a n e o m u c o s a e n T r ê s B r a ç o s , B a h i a , B r a s i l , lo s a u t o r e s d e s c r ib e n , en d e t a lle , e l a n á l i s i s d e lo s d o s ú n i c o s s t o c k s d e L . m exicana, i d e n t i f i c a n d o u n o d e e llo s
c o m o L. m e x ic a n a am azonensis. E l o tr o a i s l a d o p e r m a n e c e e n p o s i c i ó n t a x o n ó m i c a n o d e f i n i d a p u e s c o n s i d e r á n d o s e l e c o m o u n m i e m b r o d e L. m exicana, e n c u é n t r a n s e
d i f i c u l t a d e s p a r a s u i d e n t i f i c a c i ó n s u b e s p e c ífic a . E v a l u a n t a m b i é n lo s p a r â m e t r o s
b i o l ó g i c o s e i s o e n z i m á t i c o s y d i s c u t e n e l p a p e l d e lo s a n t i c u e r p o s m o n o c l o n a l e s e n la t i p i f i c a c i ó n d e é s t o s s to c k s .
L o s a u t o r e s r e m a r c a n la r a r e z a d e la t r a n s m i s i ó n d e p a r á s i t o s d e i c o m p l e j o L. m e x ic a n a e n e s ta r e g ió n , a u n c u a n d o e s t u d i e n e p i d e m i o l ó g i c a m e n t e p o r m a i s d e 8 a n o s la i n fe c c ió n h u m a n a .
P a la b ra s claves: L e i s h m a n i a m e x i c a n a . L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s . T ra n sm isió n h u m a n a. A sp e c to s ta x o n ó m ic o s.
D u ra n te los estú d io s ep idem iológicos efectua- d os p o r n o so tro s e n T rê s B raço s, B ahia, rec o n o c id a á re a en d ê m ic a d e L eish m an iasis C u ta n e o m u c o sa , h em o s aisla d o n u m e ro sa s m u e stra s d e L e i s h m a n i a de o rig en h u m an o . C u id a d o sa c a ra c te riz a c ió n e iden tific ac ió n d e e so s p a rá sito s h a sido re a liz a d a , em - p le á n d o se c rité rio s b iológicos, b io q u ím ico s e inm u- no ló g ico s4 . D e las 51 m u e stra s a isla d as de h u m an o s c o n le sio n e s c u tâ n e a s, 4 9 (9 6 % ) fu ero n tip ificad a s co m o sien d o L e i s h m a n i a b r a z i l i e n s i s b r a z i l i e n s i s , ra z ó n p o r la cu a l co n sid e ra m o s é s ta á re a co m o d e casi ex c lu siv a tra n sm isió n h u m a n a p o r éste p ará sito .
M o tiv o de la p re se n te co m u n ica ció n co n stitu y e el estú d io d e los o tro s d o s aislad o s, los ú n ic o s no tip ificad o s c o m o L . b. b r a z i l i e n s i s d esc rib e los c a so s, clinicos, la e v a lu a c ió n b io ló g ica de los org an ism o s, los re su lta d o s de los estú d io s iso e n zim ático s e inm uno- lógicos y d isc u te la s d ific u ltad e s e n c o n tra d a s e n la ap lic a c ió n d e alg u n o s p a râ m e tro s de id e n tifica ció n de u n a d e la s m u e stra s en ca ra c te riz a c ió n .
1. T ra b a jo p a rc ia lm e n te fin a n c ia d o p o r el C N P q P I D E V 4 0 3 6 8 2 y W H O /T D R - R E . G r a n t S p e c ia l P ro g ra m m e for R e se a rc h a n d T ra in in g in T ro p ic a l D ise a se s. 2. F a c u ld a d e d e C iê n c ia s d a S a ú d e e N ú c le o de M e d ic in a
T ro p ic a l U n iv e rsid a d e d e B ra sília B ra sília D F -B rasil.
R e c e b id o p a ra p u b lic a ç ã o em 1 8 /7 /8 4 .
M A T E R I A L Y M É T O D O S
O b s e r v a c i o n e s C l í n i c a s
P a c ie n te / . I. S., n in a d e 14 an o s de edad, que te m a u n a lesió n c u tâ n e a u lc e ra d a de 3 cm d e diâm etro, lo c a liz a d a en el te rc io m edio de la p iern a d erech a, con un m es de d u rac ió n . E n té rm in o s clínicos la lesión no pu d o se r d ife re n c ia d a d e los c a so s cu tân e o s produ- cid o s p o r L . b r a z i l i e n s i s b r a z i l i e n s i s .
L a in tra d e rm o rre a c ió n de M o n ten eg ro fue po sitiva co n 12 m m d e d iâ m etro . E l te st de inm uno- flu o re sc en cia in d ire cta ( I F I ) fue negativo y se m antuvo así siste m á tic a m e n te d u ran te to d o el seguim iento (m ás de 6 an o s d e sp u é s d ei tratam ie n to ). L a pacien te fue tra ta d a co n N ifu rtim o x (L a m p it), p o r M a rsd e n 11, o b se rv á n d o se re sp u e sta ex c elen te y co m p leta cica- triz a c ió n de la h erida.
P a c ie n te 2 . M . J. S. U n s t o c k d e L e i s h m a n i a fue aisla d o e n Ju lio d e 1978 d e este nino de 11 anos de e d a d p ro c e d e n te d e u n a a isla d a región ru ral en la H a c ie n d a T a b o q u in h a , 15 km al sureste de T rês B raço s. E l p ac ie n te te n ía 6 lesio n es c u tâ n e a s sim ulta n ea m e n te , en los b ra z o s y tro n co , to d as ellas con ap ro x im a d a m e n te 4 m eses de du ració n . L os tests dia g n ó stic o s d e ru tin a m o stra ro n lo siguiente: prueba c u tâ n e a d e M o n te n eg ro positiva, frotices de las
C u b a C A C , B a r r e t o A C , M a r s d e n P D . L e ish m a n ia m ex ic an a : a s p e c to s t a x o n ó m i c o s y r a r e z a d e la i n f e c c i ó n h u m a n a e n T r ê s B r a ç o s , B a h i a , B r a s i l . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 1 1 5 - 1 2 2 , J u l - S e t , 1 9 8 4
lesiones negativa p a ra am astig o tas; h isto p ato lo g ía con la derm is fu ertem ente in filtrad a com célu las pias- m áticas, linfócitos y m acrófagos, no fue visto gra- nulom a; polim o rfo n u cleares esta b a n p rese n tes. L a serología p resen tó un títu lo de I F I d e 80. L a inoculación in tra d érm ic a de h a m ste rs ( M e s o c r i c e t u s a u r a t u s ) reveló form as am astig o tas dei p ará sito .
O b s e r v a c io n e s d e L a b o r a t o r i o
A m bos stocks de L e ish m a n ia fu ero n aislad o s p o r la inoculación en la n ariz y p a ta s p o ste rio re s de ham sters, de un h o m ogeinizado de tejidos de las biopsias de los p acien tes, siendo id e n tificad o s co n el código L T B -0 0 1 6 (P a c ie n te 1) y L T B -0 0 5 5 (P a c ie n te 2), respectivam ente. D e sp u é s de crio p reserv ad o s ( - 1 9 6 °C ) fueron d ep o sita d o s en el b a n c o de c e p as dei L ab o rato rio de P ro to z o o lo g ía d e la U n iv ersid a d e de B rasília, Brasil.
L os siguientes p arâ m etro s p a ra la iden tificació n fueron estudiados:
a) C o m p o rta m ie n to dei p ara sitism o en los h am ste rs in clu y en d o las c a ra c te rístic a s de d esarro llo de la lesión, evolución e histología.
b) M o rfo lo g ía de am astig o tas. F ro tic e s de las lesiones ex p e rim en tale s fueron fijados en fluído de B ouin y c o lo re ad o s p o r G iem sa. L os am astig o tas fueron m ed id o s (d im e n sio n es dei la rg o p o r a n c h o ) a p artir de las m icro fo to g rafias to m a d a s de las lâm in as colo read as, de ac u erd o a lo re p o rta d o p o r S h aw & L a in so n 16. P re p a ra c io n e s co lo re a d a s d e las ce p as padrón de L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s (P H 8 ) y L . b r a -z i l i e n s i s g u y a n e n s i s (M 4 1 4 7 ) o b te n id a s de R. L ainson, fueron u tiliza d as p a ra la co m p arac ió n m or- fológica y biom étrica.
c) C o m p o rta m ie n to en m edio 3 N (N N N ) y en otro s m édios de cultivo. U tiliza m o s los m ed io s líqui dos de L IT (liv er infusion try p to se ) y de S chneider (D ro so p h ila rev ised m edium ) y el bifásico de D ifco ( U S A M R U 19), con 15% de sangre d esfib rin a d a de conejo.
d) P a d ró n d e d e sa rro llo en el tu b o digestivo de L u t z o m y i a l o n g i p a l p i s .
L os in se cto s fu ero n o b te n id o s de la co lo n ia de la W ellco m e P a ra sito lo g y U n it, B elém , P a rá y de n u estra co lo n ia d e la U n iv ersid a d e de B rasília. C in- cu e n ta (5 0 ) h em b ra s d e L u . L o n g i p a l p i s fueron
p u e sta s a alim e n tar, a trav é s d e la piei d e pollito s de 3 d ia s d e n acid o s, en u n a m e z c la de san g re de conejo in a c tiv a d a y cu ltiv o dei stock L T B -0055^® . P a r a le lam en te, o tro lote d e in secto s e ra p u esto a su c cio n a r d irec tam en te so b re las lesio n es n o u lc e ra d a s de h a m ste rs in fec tad o s con L T B -0 0 5 5 , de a c u e rd o a la m e to d o lo g ia de L a in so n 7. L os flebótom os fueron d ise ctad o s en tre los 5 y 7 d ia s d e sp u és d e a lim e n tad o s y el tu b o d igestivo e x a m in a d o co n m ic ro sco p io d e c o n tra ste de fases. L o s critério s de ev o lu ció n d escrito s p o r L a in so n & S h aw 8 en el in se c to fueron to m a d o s en con sid eració n .
e ) M o b ilid ad e le c tro fo ré tic a de las isoen zim as.
P a ra la p re p a ra c ió n de los lisad o s d e p ro m as- tigotas, cu ltiv a m o s los p a rá sito s en fra sco s de 2 5 0 ml de c a p a c id a d , co n ten ie n d o 50 m l d e ag a r san g re D ifco. L o s p ro m a stig o ta s cre cie ro n en 5 - 6 m l d ei sobre- n a d a n te (so lu ció n sa lin a fisiológica). U n frotis co- lo re a d o p o r G ie m sa fue p re p a ra d o de los o rg an ism o s c o se c h a d o s “ in v itro ” p a ra la co n firm a ció n d e la m orfo lo g ía típ ic a y a u sê n c ia d e co n tam in ac ió n .
L os estú d io s iso e n zim ático s fu ero n ejec u tad o s p o r el e x a m e n d e la m o b ilid ad e lec tro fo rética, en gel fino de alm id ó n , d e 10 en zim as: a s p a rta to am ino- tra n sfe ra sa E .C . 2 .6 .1 .1 . (A S A T ); a la n in o am i- n o tra n sfe ra sa E .C . 2 .6 .1 .2 ( A L A T ), fosfoglucom u- ta sa E .C . 2 .7 .5 .1 (P G M ); g lu co sa fosfato iso m e ra sa E .C . 5 .3 .1 .9 ( G P I); m a la to d eh id ro g e n asa E .C . 1 .1 .1 . 37 ( M D H ); en z im a m á lic a E .C . 1 .1 .1 .4 0 (M E ); g lu co sa - 6 - fosfato d e h id ro g e n a sa E .C . 1 .1 .1 .4 9 ( G 6 P D ); am in o p e p tid a sa (cy to so l) E .C . 3 .4 .1 1 .1 . ( P E P ); m a n o sa fo sfato iso m e ra sa E .C . 5 .3 .1 .8 . (M P I) y fo sfa ta sa ac id a E .C . 3 .1 .3 .2 . (A C P ).
R E S U L T A D O S
a) C o m p o rta m ie n to en H a m ste rs
E l stock L T B -0 0 16 fue fácilm en te aisla d o d e las lesio n es n o d u la re s d e los h am ste rs. G ra n d e s h istio- cito m a s fu ero n p ro d u cid o s co n sta n te m e n te p o r el p ara sitism o d e éste stock. S iste m ática m en te el tiem po d e in c u b ac ió n fué de 4 0 d ia s, en m edia, ca lc u lad o de los d iv erso s p a sa je s (h a m ste r p a ra h am ste r) dei m a te ria l d e la s resp e ctiv as le sio n e s ex p erim en tales.
L a m e tá sta sis fue un fenô m en o co n sta n te , pre- se n tán d o se en lo c aliza cio n e s d iv e rsa s tales co m o b ase de la co la, b o lsa s e scro tales, p a ta s an terio res y orejas. L a v isc eraliza ció n , en b a z o e hígado, ta m b ié n fue estab lecid a. E l p a ra sitism o fué in te n so y los am as- tig o tas fuero n tip ica m en te d e L . m e x i c a n a . E n los co rte s histo ló g ico s de los h istio cito m as num ero so s m a cró fag o s llen o s de p a rá sito s fu ero n siem pre o b se r vad o s (F ig u ra 1).
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F ig . 1 - F o to g ra fia de las le sio n e s d e sa rro lla d a s p o r la m u es- tra L T B -0 0 1 6 ,L e i s h m a n i a m e x i c a n a a m a z o n e n s i s , 45 d ias d e sp u é s de in o c u la d a . N ó te se la fo rm ac ió n d e g ra n d e lesión p a ra s ita ria m e ta stá s ic a e n la p a ta a n terio r.
E l cu a d ro p a ra sita rio d escrito es c a ra c te rístic o de las infeccio n es p o r p a rá sito s dei com plejo L . m e x i c a n a y c o n tra sto con la evo lu ció n dei p a ra sitism o
o b se rv a d o con el sto ck L T B -0 0 5 5 , cu y o aislam iento p rim á rio fue o b te n id o de um h a m ste r que no m ostró lesiones en los lo cales d e in o cu lació n (n a riz y patas p o ste rio re s) d u ra n te 2 1 6 d ia s d esp u és de inoculado. Sin em bargo, c u a n d o el an im al fue n ec ro p siad o , los frotices co lo re a d o s dei b a z o m o stra ro n ab u n d an tes am astig o tas que, c u a n d o in o c u lad o s en un segundo h a m ste r d e sa rro lla ro n n ó d u lo s su b cu tán eo s, 2 m eses d esp u és d e la infección, n o u lc erativ o s y eritem atosos. C in co p asaje s de h a m ste r p a ra h a m ste r d e los a m as tig o tas de éste sto ck no alte ra ro n la evolución dei p a ra sitism o e n d ic h o s anim ales.
L a evo lu ció n d e la infecció n no m udó m acros- có p ica m en te. N o se o b se rv o m e tástasis c u ta n e a y la v isc eraliza ció n fué m a rc a n te con ab u n d a n te s p ará sito s en el b a z o y en m e n o r n ú m e ro e n el hígado.
E n los fro tices y c o rte s histológicos de las lesio n es d ei h a m ste r (L T B -0 0 5 5 ) fuero n observ ad o s n ú m e ro m o d e ra d o de p ará sito s. L a b io m e tría de las form as am astig d tas estab leció _ lo s siguientes resul tados: long itu d 4 .3 x 2 .9 y m (X 3 .2 y m ) y an chura, 2.5 x 2 .2 y m ( X 2.3 y m ). B io m étricam en te son co m p atib les co n lo s d e L . m e x i c a n a .
b) C o m p o rta m ie n to “ in v itro ” en m edio 3 N y otro s m edios.
A m b a s le ish m a n ias (L T B -0 0 16 y L T B -0 0 5 5 ) m o stra ro n ráp id o y exp lo siv o cre scim ien to d espués dei aisla m ien to p rim á rio cu a n d o se m b ra d as en agar sangre sim ples ( N N N , 15% de sangre de conejo desfib rin a d a), a g a r sangre D ifco , U S A M R U y L IT . E n m edio líq u id o d e S ch n eid er (su p lem en ta d o con 2 0 % de su ero b o v in o fetal), 17-30 x 10^ prom asti- g otas p o r m l fu ero n facilm en te ob ten id o s, con 5 dias de crescim iento.
c) C o m p o rta m ie n to en el tu b o digestivo de L u . lo n g i p a l p i s .
E sfu erzo s fu ero n h ec h o s p a ra in fectar 5 0 L u . l o n g i p a l p i s em p lea n d o los p ro m astig o ta s de L T B - 0 0 5 5 . L os 23 ejem p lares b ien alim e n tad o s que fuim os c a p a c e s de e x a m in a r, p o ste rio rm en te , fallaro n p a ra in fec tarse y p e rm itir el d e sa rro llo de éste stock. E sto ac o n te c ió ta n to cu a n d o u sam o s el p ro ced im ièn to de in fección p o r alim e n tac ió n d e form as de cultivo com o cu a n d o alim e n ta d a s d irec tam en te , en las nódulos p a ra sita rio s no u lc e ra d o s d e las infecciones expe rim e n tale s. (15 in se c to s e x a m in a d o s de éste lote).
C u b a C A C , B a r r e t o A C , M a r s d e n P D . L e ish m a n ia m ex ic an a : a s p e c to s t a x o n ó m i c o s y r a r e z a d e la i n f e c c i ó n h u m a n a e n T r ê s B r a ç o s , B a h i a , B r a s i l . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 1 1 5 - 1 2 2 , J u l - S e t , 1 9 8 4
C o n L T B -0 0 1 6 , un típ ico p a d ró n de evolución su prapilário fue co n siste n tem en te o b te n id o en L u . l o n g ip a l p is . Infeccio n es m a siv a s p o r los p a rá sito s se distrib u y ero n p o r estô m ag o , c a rd ias, esôfago d e los insectos, p ero siem pre re sp e ta n d o el triân g u lo p o s terior.
d) A n álisis de las iso en zim as.
L os siguientes resu ltad o s fueron o b ten id o s dei análisis de los p erfiles iso e n zim ático s co n seg u id o s p o r
la elec tro fo résis de 9 d e las 10 en z im a s em p lea d as (M E no p rese n tó re su lta d o s conclusivos):
1 - P o r co m p arac ió n , e n la m ism a p la c a electro- forética, los p erfiles en z im á tic o s o b ten id o s co n el stock L T B -0 0 5 5 fueron d istin to s de L . b r a z i l i e n s i s b r a -z i l i e n s i s (L T B -0 0 4 2 , L T B -0 0 9 6 y M 4 0 3 5 ), d e L .
b r a z i l i e n s i s g u y a n e n s i s (M 4 1 4 7 ) e in distinguible de
L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s (P H 8 ), co n las enzim as A S A T , A L A T , M D H , M P I, P E P y G P I . L a F ig u ra 2 p re se n ta los d ia g ra m a s y las resp e ctiv as fotografias to m a d a s de las p la c a s elec tro fo réticas.
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F ig . 2 - R e p re sen tac io n es d ia g ra m á tic a s d e la p o sic ió n d e la s b a n d a s o b te n id a s c o n las e n z im a s A L A T
A S A T , G P I, M D H , P E P y M P I y fo to g rafias de los re sp e c tiv o s p a d ro n e s e le ctro fo ré tico s. L a flec h a seflala, e n A L A T y A S A T , la p o sic ió n d e L . b. g u y a n e n s i s c o m o re fe re n cia p a ra L T B -0 0 5 5 , p u e s el
2 - S iete en z im a s (A S A T , A L A T , M D H , G 6 P D , M P I, A C P y G P I ) identificarem el stock L T B -0 0 1 6 , co m o iso e n zim ática m en te indistinguible d e L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s (P H 8 ) (re su lta d o s no p re se n ta d o s).
3 - U n a b a n d a p ro m in e n te de d esp laz am ien to elec tro fo rético rá p id o fue el perfil en z im á tic o o b ten id o co n L T B -0 0 5 5 y G 6 P D , cu a n d o c o m p a ra d o co n las d o s b a n d a s m á s le n tas p re se n ta d a s p o r L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s (F ig u ra 3). L T B -0 0 5 5 es u n a L . m e
x i c a n a , p ró x im a a L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s .
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1 2 3 4 S 6
G 6 P D
D IS C U S IO N
E n á re a s en d ê m ic as de leish m an iasis m uco- c u tá n e a es g en e ralm e n te co n sid erad o , sobre eviden cias u n ic am e n te clin icas, q ue el p a rá sito agente etio- lógico de la en fe rm e d ad sea L e i s h m a n i a b r a z i lie n s is . L esio n es c u tâ n e a s m u y rec ien te s se p rese n tan en lo c alid ad e s co n tra n sm isió n ac tiv a y co n stan te, com o es el c a so de é s ta e x te n sa á re a en d ê m ic a en el E sta d o de B ahia. E n é s ta situ ació n ep idem iológica es ne- c e sa ria la c o rre c ta id e n tificació n de los p ará sito s, pues le ish m a n iasis c u tâ n e a p u ed e ser ta m b ién c a u sa d a por p a rá sito s d ei c o m p le jo L . m e x i c a n a . C e rta s lesiones clin icam en te son in d iferen ciab les de las c a u sa d a s por L . b r a z i l i e n s i s . L a s im p lica cio n es p ro g n ó sticas y te ra p ê u tic a s son ev id en te s p a ra el clínico que estu d ia ésto s p acien tes.
A fírm a se q ue el p a ra sitism o h u m a n o p o rL . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s es su m am en te raro^ sin em bargo o tra s su b e sp ec ies de L . m e x i c a n a e sta ría n cau sa n d o infecciones h u m a n a s en el V alle dei R io D o ce , C a- ratin g a, M in a s G e ra is, B ra s il1'*.
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1 2 3 4 5 6
8 § 8
i i iB B Ba n d a o scu r a p r o m in e n t e □ Ba n d a d é b il
( a )
Ba n d a d é b ü n o sie m p r e revela da .F ig. 3 - R e p re s e n ta c ió n d ia g ra m á tic a y fo to g rafia de la po sic ió n d e la b a n d a e le c tro fo ré tic a o b te n id a c o n la e n z im a G 6 P D y el sto c k L T B -0 0 5 5 c u a n d o c o m p a ra d a c o n las c e p a s d e refe re n cia.
L a á re a en d ê m ic a de B a h ia to d a v ia p resen ta e c ó to p o s en q ue algu n as aso cia cio n e s biológicas a p a re n te m e n te se m an tien en : L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s , L . m e x i c a n a sp y P r o e c h i m y s in h e r i n g i
d e n i g r a t u s1 y ta m b ié n la p rese n cia , en densid ad es v ariab les, de L u . f l a v i s c u t e l l a t a, con o cid o único v ec to r d e L . m e x i c a n a a m a z o n e s i s10. T o d o s esos e lem en to s de la c a d e n a epid em io ló g ica se en c u en tra n en p eq u e n o s focos de flo re sta s p o co p e rtu rb a d a s, con árb o le s alto s y en ‘'c a p o e ira s ” . P ro b a b lem en te , la m u d a n z a d e los h á b ito s d e los flebótom os co n trib u y a p a ra el surgim iento d e c a so s esp o rá d ico s de p a ra si tism o h u m a n o p o rL . m e x i c a n a , co m o es el ca so de los p a c ie n te s estu d ia d o s en este trabajo. L a ex iste n cia de esp ecies de fleb o to m in eo s altam en te antropofilicos, en T rê s B raço s, ab re la p o sib ilid ad de que ta le s insectos se a n tra n sm iso re s de le ish m a n ias n o id en tificadas (B a rre to el al, e n p re p a ra ció n ).
N u e s tra p ac ie n te n.° 1 (L T B -0 0 1 6 ) p a ra sita d a p o r L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s a c o stu m b ra b a a tra- b a ja r en un m icrofoco d e L u . f l a v i s c u t e l l a t a , próxim o a la p e q u e n a c h a c ra en que sus p ad re s la b o ra b an . L o d e sc rito es sugestivo de la p ro b ab le tran sm isió n dei p a rá sito en éste am b ien te m o d ificad o p o r el hom bre.
P o r o tro lado, vários son los m éto d o s actual- m en te d isp o n ib les q ue p erm iten la ca ra c te riz a c ió n e id e n tificació n d e los p a rá sito s dei gênero L e i s h m a
C u b a C A C , B a r r e t o A C , M a r s d e n P D . L e ish m a n ia m ex ic an a : a s p e c t o s t a x o n ó m i c o s y r a r e i a d e la i n f e c c i ó n h u m a n a e n T r ê s B r a ç o s , B a h i a , B r a s i l . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 1 1 5 - 1 2 2 , J u l - S e t , 1 9 8 4
n i a ^ . E n treta n to , algunos p ro ce d im ie n to s co n tin u án todavia siendo técn icas so fisticad as d e la b o ra tó rio s de investigación bien eq u ip ad o s (H ib rid iz a c ió n dei A D N , enzim as de restricción); o tra s té c n ic a s, m ás accesibles, son de p rác tico em p leo en la b o ra to rio s de los trópicos (isoenzim as, a n ticu e rp o s m o n o c lo n ales usados com o reactivos serológicos en I F A T y inm unoperoxidasa) y tam b ién , la c a ra c te riz a c ió n biológica “ in vivo” (ev o lu ció n en fleb ó to m o s y ham sters) e “ in vitro” (cultivos)®.
C uando se pretende ev a lu a r las c a ra c te rístic a s fenotípicas y genotípicas de los stocks de L e i s h m a n i a obtenidos de p acientes, v ecto res y rese rv a to rio s, algunas dificultades o cu rren en su in te rp re tac ió n . A parentem ente esos p ro b lem as ta x o n ó m ic o s e staría n relacionados con la falia de algunos “ m a rc a d o re s” inm unobiológicos (an ticu erp o s m ono clo n ales) e isoen- zim áticos, p ara tipificar cierto s p a rá sito s. E sto p o d ría ser com prensible, pues c o n sid eráse q u e los p a rá sito s p ertenecientes al gênero L e i s h m a n i a se en c u en tra n en una fase de evolución y co n sta n te esp eciació n .
M uy recien tem en te n u e stro g ru p o 1 h a en co n trado dificultades p a ra la id e n tificació n su b e sp ec ífica de stocks de L e i s h m a n i a a isla d o s d e P r o e c h i m y s i n h e r in g i d e n i g r a tu s , ro ed o res c a p tu ra d o s en T rê s B raços. L os p ará sito s fu ero n d istin to s de L . m e x i c a n a m e x ic a n a y de L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s cu a n d o provados po r la I F A T , u tiliza n d o u n a b a te ria de anticuerpos m o n o clo n ales. Iso e n z im á tic a m e n te los m ism os tres stocks, no p u d ie ro n ser distin g u id o s unos de otros con 9 en z im a s y p a re c e n ser p ró x im o s aL . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s d e la cu a l se se p a ra n con las enzim as G P I, P E P y A L A T .
N u e stro sto ck h u m a n o L T B -0 0 5 5 p re se n tó un com p o rtam ien to p ec u lia r ap a re n te m e n te m ix to , p a r ticipando d e las c a ra c te rístic a s d e am b o s co m p lejo s ( L . m e x i c a n a y L . b r a z i l i e n s i s ) . F a lló p a ra re u n ir los critérios que d e fm e n L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s . A sí, biologicam ente p rese n tó un d e sa rro llo rela tiv a m en te lento en los h am ste rs in o c u lad o s y no d e te c ta m o s histiocitom as ni m e tástasis de los p a rá sito s. C om - prendem os las lim itaciones de las o b se rv a cio n e s “ in vivo” que incluyen p o te n cia lm e n te p ro b lem as de variació n de te m p eratu ra , en B rasília, afe cta n d o el bioterio, y a la p ro b ab le influ en cia g en ética q ue los ham sters, no isogénicos, p o d rían o fre ce r (B ra d le y )2; p o r ejem plo los an im ales rec o n o cie n d o sólo algunos antígenos (P e re z )15, y, a la v aria ció n g en ética que los propios p a rá sito s (L T B -0 0 5 5 ) p o d ría n p rese n tar.
E l fra c a so en d e s a rro lla r L T B -0 0 5 5 en el tubo d igestivo de L u . l o n g i p a l p i s , no p u ed e ser atrib u íd o a un p ro lo n g ad o tiem p o de cu ltiv o “ in v itro ” . E l aisla d o te n ia po co s subcultivos y adem ás, falló p ara infectar los in secto s co m o a m astig o tas en la lesio n es de los h am ste rs. N o p u d im o s e s ta b le c e r e n to n ce s el p a d ró n S u p ra p ila rio 8 c a ra c te rístic o d e los p a rá sito s d ei com - p lejo L . m e x i c a n a . U su a lm e n te , la s infeccio n es con L . m e x i c a n a m e x i c a n a , L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s y L . d. c h a g a s i son e x tre m a m e n te in te n sa s en L u . lo n
g i p a l p i s , in fec tad o s ex p e rim en talm en te co n p ro m as- tig o tas o am astig o tas. L o s flag elad o s son n u m e ro so s y se d istrib u y e n a lo largo dei in te stin o m e d io (e s tôm ago) y a n te rio r (esô fag o , c a rd ia s, faringe, pro- b ó sc id e), em erg ien d o , frecu e n tem en te , p o r el ex tre m o co rta d o dei esôfago. E s ta fa lta de a d a p ta c ió n p a ra L u . l o n g i p a l p i s de algunos sto ck s de L e i s h m a n i a aisla d o s d e n u e s tra á re a d e estúdios-* favorece la h ipotesis d e la utilización d e especies locales d e flebóto m os, com o m odelos de padro n izació n biológica p o r el v e c t o r \ L a in s o n 1 dice e x istir u n a re stric c ió n n a tu ra l al h o sp e d a d o r in v e rte b ra d o (flebótom o), ex istie n d o u n a ríg id a aso cia ció n en tre la esp ecie d e flebótom o y su esp ec ie de L e i s h m a n i a; p o r ejem plo, la aso cia ció n L u . u m b r a t i l i s y L . b r a z i l i e n s i s g u y a n e n s i s . W al- to n 18, u sa n d o esp ec im en e s p a n a m e n o s d e L u . g o m e z i y L u . tr a p i d o i, fallaro n p a r a e s ta b le c e r infecciones con u n a c e p a de L . b r a z i l i e n s i s b r a z i l i e n s i s (M -l 2 8 7 ) dei B rasil, p ro b a b le m e n t m e jo r a d a p ta d a a esp ec i m e n es de L u . w e llc o m e i.
B io q u ím ic am e n te L T B -0 0 1 6 es u n a L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s . E sto s re su lta d o s fu ero n confir m a d o s p o r M c M a h o n P r a tt & D a v id 12, co n la u tili za ció n de 5 an tic u e rp o s m o n o c lo n ales q ue se m os- tra ro n to ta lm e n te re a c tiv o s y ad e m á s, p o r lo s resu l ta d o s o b te n id o s en n u e stro la b o ra to rio , u tiliza n d o los rea ctiv o s m o n o c lo n ales en la té c n ic a de I F A T .
S in em b arg o , L T B -0 0 5 5 es u n m iem b ro dei co m plejo L . m e x i c a n a , cu a n d o e x a m in a d o s los p a d ro n e s iso e n zim ático s de 6 en z im a s, p e ro dife- re n c ía se de L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s c o n G 6 P D .
In m u n o ló g ic am e n te e s ta m e zc la de c a ra c te rís tic as fen o típ ica s e x h ib id as p o r L T B -0 0 5 5 se evi- d e n c ia rio n m ejor, c u a n d o M c M a h o n P r a tt & D a v id 12 a n a liz a ro n los re su lta d o s o b te n id o s co n 16 a n tic u e r po s m o n o c lo n ales. C in co de esos a n ticu e rp o s esp ecie y su b e sp ec ie esp ec ífico s p a ra L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s (in clu so p a ra L T B -0 0 1 6 - T rê s B ra ç o s 0 4 ) re a c c io n a ro n p o sitiv am en te . E l an álisis de L T B -0 0 5 5 y los 11 an tic u e rp o s m o n o c lo n ales esp ec ífico s p a ra
L . b r a z i l i e n s i s , d e m o stro re a c tiv id a d c ru z a d a co n 5 de ellos. D e sd e q u e ni la c e p a p a d ró n de L . m e x i c a n a a m a z o n e n s i s de T rê s B raç o s (L T B -0 0 1 6 ) rea ccio n a- ro n con aq u ello s 5 m o n o c lo n ales, p e n sa m o s que éste sto ck d e L T B -0 0 5 5 es u n a L . m e x i c a n a , co n nivel su b e sp ecífico indefinido h a s ta el p re se n te m o m en to , y ag u a rd an d o , p o ste rio re s estú d io s q ue p e rm ita n final m e n te e s ta b le c e r su sta tu s ta x o n ó m ic o .
P o r o tro lado, n o so tro s no c o m p re n d em o s h a s ta a h o ra el significado epid em io ló g ico de éste h allaz g o y n o sa b em o s ex p lic a r co m o éste p a rá sito a c tú a en la n a tu ra le z a en tre su s h o sp e d ad o res, v ecto res y re se r vató rio s. P a re c e ser v erd a d que la infecció n h u m a n a es e x tre m a m e n te ra ra , a p e s a r de h a b e r aisla d o g ran n ú m e ro de stocks de L e i s h m a n i a en tre los p ac ie n tes de T rê s B raços.
D e sc o n o c e m o s q ue p eso ta x o n ó m ic o te n d ría é s ta v a ria ció n iso e n z im á tic a p a ra tip ificar L T B -0 0 5 5 , n o o b sta n te , se n ala m o s su p re se n c ia ag u a rd an d o el aisla m ien to d e n u ev o s sto ck s sim ilares, en la m ism a á re a d e T rê s B raç o s, que d e m u e stre n su co n siste n te frecu en cia. A l resp ecto , es im p o rta n te frisar el con- c e p to de la n e c e sid a d de estu d ia rse m u ch as m u e stras de L e i s h m a n i a y m u c h as en z im a s p a ra te n e r firm eza en la c a ra c te riz a c ió n bio q u ím ica^.
S U M M A R Y
I n a s t u d y o f 5 1 s t o c k s o /L e is h m a n ia is o l a te d
f r o m p a t i e n t s w i th c u t a n e o u s l e i s h m a n i a s i s in T r ê s B r a ç o s , B a h i a , B r a z i l 4 9 w e r e c h a r a c t e r i z e d a s L. b raz ilie n sis brazilien sis. O n l y tw o L. m e x ica n a s t o c k s w e r e id e n tiji e d . O n e w a s s u b s p e c i a t e d a s L. m e x ic a n a am azo n en sis. T h e o t h e r d i f f e r e d f r o m t h i s s p e c ie s a n d to d a t e r e m a i n s u n s p e c ia t e d . T h e b i o l o g i c a l p a r a m e t e r s , i s o e n z y m e a n a l y s i s a n d m o
-n o c l o -n a l a -n t i b o d y f i -n d i -n g s r e l a t i -n g to th e s e tw o s t r a i n s a r e d is c u s s e d . T r a n s m i s s i o n o f p a r a s i t e s o f t h e m e x ic a n a c o m p l e x to m a n h a v e b e e n r a r e in t h i s
r e g io n d u r i n g t h e 8 y e a r s o f s t u d y o f t h e h u m a n
in fe c tio n .
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