Rev. Soc. Bras. Med. Trop. vol.9 número2

SCANNING ELECTRON MICROSCOPY AND X-RAY SPECTROSCOPY

APPLIED TO MYCELIAL PHASE OF

SPOROTHRIX SCHENCKII *

M. T hibau t * * and NI. Ansel * * *

S c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y a p p l i e d t o l h e m y c e l i a l p h a s e o f Sp o r o t h r i x s c h e n c k i i s h c w s a m a t t e d m y c e l i u m w i t h c o n id i a o f a r e g u l a r p a t t e r n . X - R a y

m i c r o a n a l y s is a p p l i e d i n e n e r g y d i s p e r s i v e s p e c t r o s c o p y a n d a l s o i n w a v e l e n g t h d i s p e r s iv e s p e c t r o s c o p y r e v e a l s t h e p r e s e n c e o f s e v e r a l e l e m e n t s o f M e n d e l e e f s c l a s s i fi c a ti o n .

I N T R O D U C T I O N

E l e m e n t a l m i c r o a n a l y s i s a s e f f e c t e d

u n d e r t h e s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p e

e q u i p p e d w i t h X - R a y s p e c t r o m e t e r s p e r -

m i t s t h e d s t e c t i o n i n a s a m p l e o f a l i t h e

e l e m e n t s o f M e n d e l e e f s c l a s s i f i c a t i o n c o m -

p r i s e d b e t w e e n B e r y l i u m a n d U r a n i u m . W e

t h o u g h t i t a d v i s a b l e t o a p p l y t h i s t e c l m i -

q u e t o o u r r e s e a r c h o n p a t h o g e n i c f u n g i

i n M a n . T h e p r e s e n t p a p e r r e p o r t s o u r r e -

s u l t s o n t h e m y c h e l i a l p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k ii.

M A T E R I A L A N D M E T H O D S

F i v e d a y s ’ c u l t u r e s o f S p o r o t h r i x s c h e n ­ ck ii ( 1 ; 2 ) a r e c o m p l e t e l y c l e a r e d o f t h e i r f o o d m a t e r i a l ( S a b o u r a u d g l u c o s e a g a r ) .

F o r s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y , t h e c u l ­

t u r e s a r e f i x e d a t + 4 o f o r 2 4 h o u r s i n

5 % g l u t a r a l d e h y d e i n p h o s p h a i e b u f f e r ,

p H 7 ,2 , t h e n i n 2 % o s m i u m t f i t r o x i d e i n

t h e s a m e b u f f e r f o r 2 h o u r s . A f t e r f i x -

a c t i o n , t h e y a r e c a r r i e d o v e r t o a l u m i n i u m

s l i d e - c y l i n d e r s a n d s t u c k o n t h e m w i t h

s i l v e r l a c q u e r s o a s t o s e c u r e t h e c o n d u c -

t i v i t y o f t h e e l e c t r o n s . T h e n t h e y a r e f r o z -

e n i n l i q u i d n i t r o g e n a t — 1 8 0 ° C a n d e x a - m i n e d w i t h J e m 5 0 A s c a n n i n g e l e c t r o n

m i c r o s c o p e f i t t e d w i t h a c r y o - u n i t .

F o r X - R a y s p e c t r o m e t r i c a n a l y s i s , t h e

u n f i x e d c u l t u r e s a r e a l s o c a r r i e d o v e r t o

a l u m i n i u m s l i d e - c y l i n d e r s a n d s t u c k o n

t h e m w i t h s i l v e r l a c q u e r . T h e s a m p l e s a r e

p l a c e d i n a v a c u u m e v a p o r a t o r w h e r e t h e y

a r e p l a t e d w i t h a l u m i n i u m . F o r t h i s i n -

v e s t i g a t i o n , w e u s e d o n t h e o n e h a n d t h e

J e m 1 0 0 B J e o l e l e c t r o n m i c r o s c o p e e q u i p p ­

e d w i t h a n e n e r g y d i s p e r s i v e s p e c t r o m e -

t e r ( E D A X s y s t e m ) a n d o n t h e o t h e r h a n d

t h e C a m e c a M E B 0 7 s c a n n i n g e l e c t r o n

* L a b o r a t o i r e d e P a r a s i t o l o g l e e t M y c o l o g i e , U . E . R . C o r d e l i e r s , 1 5 , r u e d e l ’E c o l e d e M é d e c l n e , 7 5 2 7 0 — F a r l s - C E D E X 0 6 — F r a n c e .

• * C h a r g e d e R e c h e r c h e a u C . N . R . S .

* * * C h e f d e T r a v a u x a l a F a c u l t é d e M é d e c i n e d e P a r i s .

58

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. IX — P 2

m i c r o s c o p e e q u i p p e d w i t h a w a v e l e n g t h

d i s p e r s i v e s p e c t r o m e t e r , t h e n t h e C a m e - b a x s y s t e m , c o m b i n i n g i n t h e s a m e a s s e m -

b l y a n e l e c t r o n m i c r o p r o b e w i t h t h r e e

w a v e l e n g h t X - R a y d i s p e r s i v e s p e c t r o m e -

t e r s a n d a s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p e .

W i t h t h e C a m e b a x s y s t e m , t h e a n a l y s i s i s

p e r f o r m e d w i t h t h e h e l p o f a n i n c l i n e d

s p e c t r o m e t e r t h a t i s c a p a b l e o f u s i n g s a m -

p l e s u p t o 1 m m e n d i a m e t e r .

T h e g e n e r a l m e t h o d u s e d i n e l e m e n t a l

a n a l y s i s b y X - R a y s p e c t r o s c o p y i s t h i s :

t h e X - R a y s p e c t r e e m i t t e d u n d e r i m p a c t

o f a b e a m o f e l e c t r o n s i s c o m p o s e d p a r t l y

o f a c o n t i n u o u s s p e c t r e a n d p a r t l y o f a

n u m b e r o f c h a r a c t e r i s t i c l i n e s d e p e n d i n g

o n t h e a t o m s o f t h e a n t i - c a t h o d e . T h e

s m a l l s u r f a c e o f t h e b o m b a r d e d s a m p l e

w h i c h p l a y s t h e p a r t o f t h e a n t i c a t h o d e

s e n d s o u t i n a l i d i r e c t i o n s X - R a y s w h o s e

s p e c t r a l a n a l y s i s i s e f f e c t e d b y m e a n s o f

t h e s p e c t r o m e t e r . T h e v o l u m e i n v e s t i g a t -

e d w i t h t h i s t e c h n i q u e i s 5 . 0 0 0 n 3 - T h e

c r y s t a l d e t e c t o r s u s e d a r e : a c i d p o t a s s i u m

p h t h a l a t e ( K A P ) , l i t h i u m f l u o r i d e ( L I F )

a n d p e n t a e r y t h r i t o l ( P E T ) .

T h e c u l t u r e s o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i

i n i t s m y c e l i a l p h a s e a r e a n a l y s e d t h r o u g h

t h e c o m b i n e d p r o c e s s o f s c a n n i n g e l e c t r o n

m i c r o s c o p y a n d X - R a y s p e c t r o s c o p y . A f t e r

o b t a i n i n g s e c o n d a r y e l e c t r o n i m a g e s u n d e r

s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y , s o m e e l e ­

m e n t s b e l o n g i n g t o M e n d e l e e f s p e r i o d i c a l

c l a s s i f i c a t i o n a r e i n v e s t i g a t e d u n d e r X - R a y

s p e c t r o s c o p y .

R E S U L T S

1 ) S t u ã y u n d e r s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s ­

c o p y .

T h e s e c o n d a r y e l e c t r o n i m a g e s g i v e n

b y s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y s h o w

t h a t t h e h y p h a e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i

a r e r e c u m b e n t a n d m a k e a t h i c k m a t

( F i g s . 1 a n d 2 .). T h e c r e e p i n g m y c e l i u m

b r a n c h e s i n a l i d i r e c t i o n s a n d i s f i n e l y

i n t e r t a n g l e d ( F i g s . 2 , 3 a n d 4 ) . T h e p l a i n

o v o i d c o n i d i a a r e s u p p o r t e d d i r e c t l y b y

u n d i f f e r e n t i a t e h y p h a e o f t h e v e g e t a t i v e

m y c e l i u m . T h e y b e a r n o o r n a m e n t s o n

t h e i r e x t e r n a i s u r f a c e s ( F i g s . 5 a n d 6 ) .

2 ) S t u ã y u n d e r e n e r g y d i s p e r s i v e s p e c -i -i o s c o p y .

T h e s t u d y o f t h e m y c e l i a l p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i , u n d e r J e m tO C B - w i t h E d a x s y s t e m , p e r m i t s t h e e n u m e r a t i o n o f

t h r e e e l e m e n t a l c h e m i c a l c o n s t i t u e n t s

i d e n t i f i e d b y t h e i r K > l i n e s . T h e P E T c r y s ­

t a l d e t e c t o r i n d i c a t e s t h e p r e s e n c e o f c a l -

c i u m , s u l p h u r a n d p h o s p h o r u s ( F i g s . 7 , 8

a n d 9 ) .

3 ) S t u ã y u n d e r w a v e l e n g t h d i s p e r s i v e

s p e c t r o s c o p y .

a ) W i t h t h e s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s ­

c o p e M E B 07 C u m e ^ a ...

T h i s a n a l y s i s o f t h e m y c e l i a l p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i c o n f i r m s t h e r e s u l t s o b t a i n e d u n d e r e n e r g y d i s p e r s i v e s p e c t r o s c ­

o p y . T h e L I F c r y s t a l r e v e a l s t h e a b s e n c e

o f t h e f o l l o w i n g e l e m e n t s : c o p p e r , n i e k e l ,

c o b a l t , i r o n , m a n g a n e s e , c h r o m i u m , v a n a -

d i u m a n d t i t a n i u m . T h e Z n K “ l i n e c o m e s

f r o m t h e s l i d e c y l i n d e r ( F i g . 1 0 ) . W i t h t h e

P E T c r y s t a l d e t e c t o r a p p e a r t h e K / 3 a n d

K > l i n e s o f c a l c i u m a n d t h e s u l p h u r a n d

p h o s p h o r u s K « l i n a s . P o t a s s i u m a n d c h l o -

r i n e a r e n o t i d e n t i f i e d ( F i g . fl.1 ). T h e K A P

c r y s t a l d e t e c t o r r e v e a í s t h e a b s e n c e o f

S

ili­

c o n , m a g n e s i u m , s o d i u m a n d f l u o r i n e ; t h e

a l u m i n i u m K * l i n e p r o c e e d s f r o m t h e s l i d e

a n d m e t a l l i z a t i c n o f t h e c u l t u r e s ( F i g . 1 2 ) .

b ) W i t h t h e C a m e b a x s y s t e m .

T h e e x a m i n a t i o n o f t h e m y c e l i a l p h a s e

p e r m i t s t h e d e t e c t i o n o f e i g h t e l e m e n t a r y

c h e m i c a l c o m p o n e n t s . W i t h t h e L I F c r y s ­

t a l d e t e c t o r , t h e f o l l o w i n g e l e m e n t s a r e

d e t e c t é d ( F i g . 1 3 ) : c a l c i u m ( K /3 2 l i n e ) ,

i o d i n e ( L r l i n e ) . W i t h t h e P E T c r y s t a l d e ­

t e c t o r , t h e c h a r a c t e r i s t i c s p e c t r a o f t h e

f o l l o w i n g e l e m e n t s a r e d e t e c t e d ( F i g . 1 4 ) :

i o d i n e (L /3 a n d L r l i n e s ) , c a l c i u m (K l/3,

K '< I a n d K ' I I l i n e s ) , p o t a s s i u m (K /3

a n d K “ l i n e s ) , c h l o r i n e ( K r l i n e ) , s u l p h u r

( K “ l i n e ) , p h o s p h o r u s ( K /3 a n d K x l i n e s ) .

W i t h t h e K A P c r y s t a l d e t e c t o r , t h e f o l l o ­

w i n g e l e m e n t s a r e d e t e c t e d ( F i g . 1 5 ) :

p h o s p h o r u s (K°= I a n d I I l i n e s ) ,

Silicon

( K /3 a n d K * l i n e s ) , p o t a s s i u m ( K * l i n e ) ,

m a g n e s i u m ( K * l i n e ) , s u l p h u r ( K x l i n e ) .

W i t h t h e s e t h r e e m e t h o d s , t h e n a t u r a l

Mar.-Abril, 1975

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

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n a m e l y c a r b o n , h y d r o g e n , o x y g e n a n d

n i t r o g e n , a r e n o t i n v e s t i g a t e d . A s t o t h e

n e g a t i v e r e s u l t s , t h e s e t e c h n i q u e s m a y n o t

p r o v e t o b e u s e f u l f o r i n f i n i t e s i m a l q u a n -

t i t l e s . T h e c o m p a r a t i v e s t u d y o f t h e r e ­ s u l t s s h o w s t h a t m i c r o a n a l y s i s p e r f o r m e d

w i t h t h e C a m e b a x s y s t e m i s m u c h m o r e

s e n s i t i v e t h a n t h a t p e r f o r m e d w i t h t h e

J e m 1 0 0 B J e o l o r w i t h t h e M E B 0 7 C a -

m e c a .

D I S C U S S I O N

A p e r u s a l o f t h e l i t e r a t u r e h a s e n a b l e d

u s t o f i n d t h a t s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s -

c o p y ’h a d b e e n u s e d i n a n u m b e r o f p u b l i s h -

e d w o r k s f o r i n v e s t i g a t i o n i n t o p a t h o g e n i c

f u n g i . I t o , N o z a w a , S u s u k i a n d S e t o -

g u t i ( 9 ) s t u d i e d t h e s t r u c t u r e s o f s e v e r a l

s t r a i n s o f D e r m a t o p h y t e s o f M ic r o s p o r u m , E V id e r m o p h y to n a n d T n c h o p h y t o n g e n e - r a . T o s t i , V i l l a r d i t a , F a z z i n i a n d S c a l i n i

(2 3 ) a n a l y s e d t h e i n v a s i o n o f h a i r b y D e r ­

m a t o p h y t e s u n d e r t h e s c a n n i n g e l e c t r o n

m i c r o s c o p e . T h i b a u t a n d A n s e l ( 1 8 , 1 9 , 2 0 )

u s e d t h e s a m e m e t h o d f o r s t u d y i n g R h i

-z o p u s a r r h i -z u s , R . e q u i n u s a n d R . n i g n -ca n s a n d g a v e a n e w d e s c r i p t i o n o f t h e p e r i t h e c i u m o f E m e r i c e ll a n id .u lu .n s. T h e

s u r f a c e s t r u c t u r e o f t h e s p o r e s o f D e r m a ­

t o p h y t e s s a p r o p h y t e s a n d p a r a s i t e s i s o b -

s e r v e d b y S m i t h a n d S a n d l e r ( 1 6 ) . T h e

c o n i d i a o f t h e M ic r o s p o r u m . g y p s e u m c o m -

p l e x w e r e a n a l y s e d w i t h t h i s t e c h n i q u e b y

V i s s e t ( 2 4 ) . A n d s o w a s t h e m o r p h o l o g y

o f a s c o s p o r e s o f N a n m z z i a a n d A r t h r o d e r

-m a b y P a d h y e a n d C a r -m i c h a ê l ( 1 5 ) .

i n v e s t i g a t i o n o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i b j

m e a n s o f t h e s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s -

e o p e , s h o w s t h e s u r f a c e m o r p h o l o g y t h e

r e c u m b e n t h y p h a e a n d t h e u n d i f f e r e n ü a t c

e o n í d l o p h o r e s , a l i o f w h i c h a r e u s e d i n t a -

Aon cm ic

s t u d i e s . T h e y p e r m i t t o c l a s s i i i t h i s f u n g u s a m o n g t h e S p o r o t r i c h e ?

X - R a y m i c r o a n a l y s i s p e r m i t s i n v e s t i g a t ­

i o n o f b i o l o g i c a l s a m p l e s w h i c h h a v e n o t

b e e n s u b m i t t e d t o f i x a t i o n , d e h y d r a t i o n ,

i m b e t í d i n g a n d c o l o u r i n g . T h i s m e t h o d a s

p e r f e c t e d b y C a s t a i n g ( 5 ) w a s f i r s t a p -

p l i e d t o m e t a l l u r g i c a n d m i n e r a l o g i c s a m ­

p l e s . I t w a s t h e n a p p l i e d t o b i o l o g y . I n

t h i s f i e l d m i c r o a n a l y s i s w a s u s e d t o s o l v e

d i f f e r e n t t y p e s o f p r o b l e m s s u c h a s t h e

a n a l y s i s o f n a t u r a l m i n e r a l c o n t e n t o f

t i s s u e s b y B o y d e , S w i t s u r a n d F e r n h e a d

( 4 ) ; t h e i d e n t i f i c a t i o n o f a c c i d e n t a l l y i n -

t r o d u c e d f o r e i g n m a t e r i a l b y G a l l e a n d

B e r r y ( 7 ) , B e r r y ( 1 ) .

I n t h e a n i m a l f i e l d o f b i o l o g y , M a r t o j a

( 1 3 , 1 4 ) r e s o r t e d t o m i c r o a n a l y s i s t o s h o w

t h e d i s t r i b u t i o n o f m e t a i s i n i n s e c t s , a n d

c a l c i u m i n t h e t h y r o i d g l a n d o f s o m e

m a m m a l s . I n p l a n t b i o l o g y , T h u r s t o n a n d

R u s s ( 2 2 ) u s e d t h e s a m e t e c h n i q u e t o s t u ­

d y t h e s t r u c t u r e g r a n u l e s i n F is r h e r e l l a

a m b i g u a , a f i l a m e n t o u s b l u e g r e e n a l g a . I n M y c o l c g y , G a y ( 8 ) a p p l i e d X - R a y s p e c -

t r o s c o p y t o t h e s t u d y o f t h e o o s p o r e s i n S a p r o l e g n i a f u ^ c a t a . A n d w e w e r e l e d ,

t h r o u g h t t h i s t e c h n i q u e , t o o b s e r v e r e l e -

v a n t d i f f e r e n c e s i n n a t u r a l c h e m i c a l c o n ­

t e n t o f s e v e n s p e c i e s o f A s p e r g i l l a c e a e

( 2 1 ) a n d u n p u b l i s h e d r e s u l t s .

C l o s e i n v e s t i g a t i o n w a s e l a b o r a t e d o n

t h e u l t r a s t r u c t u r a l c y t o l e g y o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i b y T h i b a u t ( 1 7 ) , b u t f e w a u t h o r s i n v e s t i g a t e d i t s b i o c h e m i s t r y . B l a n k ( 3 )

d e t e r m i n e d c h i t i n b y a p p l y i n g a m e t h o d

b a s e d o n X - R a y d i f f r a c t i o n . M a r i a t ( 1 1 ,

1 2 ) s h o w e d t h a t t h e c e l l s o f t h e y e a s t

p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i c o n t a i n

m u c h m o r e d e o x y r i b o n u c l e i c a c i d t h a n

t h o s e o f t h e m y c e l i a l p h a s e . B i ê v r e ( 2 )

i d e n t i f i e d a n u m b e r o f e n z y m e s : c a t a l a s e ,

a c i d p h o s p h a t a s e s , e s t e r a s e s , p e r o x y d a s e s .

H e a l s c m e a s u r e d o u t t h e v a r i o u s q u a n t i -

t i e s o f l i p i d s , n u c l e i c a c i d s , g l y c o g e n , p o l y -

o s i d e s a n d p r o t e i n s . L l o y d a n d B i t o o n

‘'1 0 ) i s o l a t e d a n d c l e a n s e d a n e p t i d o —

' • h a m n o m a n n a n p u r i f i e d i n t h e v e a s t o h a -

s e . B u t n o m i c r o a n a l y s i s a p p l i c a t i o n s h a . d

b e e n m a d e o n S p o r o t h r i x s c h e n c k i i . I n

f a c t , w e d i d n o t f i n d a n y d i f f e r e n c e

b e t w e e n t h e r e s u l t s o b t a i n e d w i t h t h e e l e c -

t r c n m i c r o s c o p e J e m 1 0 0 B e q u i p p e d w i t h

E D A X s y s t e m a n d w i t h t h e s c a n n i n g e l e c ­

t r o n m i c r o s c o p e M E B 0 7 C a m e c a . O n t h e

o t h e r h a n d , w a v e l e n g t h s p e c t r o m e t r y p e r ­

f o r m e d w i t h t h e C a m e b a x s y s t e m i s m u c h

m o r e s e n s i t i v e t h a n t h e d i s p e r s i v e o r n o n -

- d i s p e r s i v e s p e c t r o m e t r i c m e t h o d s u s e d

u n t i l n o w . T h i s t e c h n i q u e d i s c l o s e s e i g h t e l e m e n t a r y c h e m i c a l c o m p o n e n t s i n t h e

60

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. IX — N? 2

C O N C L U S I O N S

1 ) S c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y p r o v - e d t o b e v e r y e f f i c i e n t f o r r e s e a r c h o n

t h e m y c e l i a l p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i .

I t p e r m i t t e d t o d i s c o v e r t h a t t h e c o n i d i o -

p h o r e s a r e u n d i f f e r e n t i a t e d f r o m t h e v e -

g e t a t i v e m y c e l i u m . S o t h a t S p o r o t h r i x s c h e n c k i i i s d e f i n i t e l y a S p o r o t r i c h e .

2 ) A n a l y t i c a l e l e c t r o n m i c r o s c o p y a l -

l o w s t o p r o v i d e c h e m i c a l i n f o r m a t i o n

w i t h o u t r e s o r t i n g t o a v a r i e t y o f s t a i n i n g s

o r t o d i f f e r e n t i n s t r u m e n t s . T h e a b s e n c e

o f p r e v i o u s P r o c e s s i n g a l l o w s t h e p r e s e r v - a t i o n o f e l e c t r o l y t e s . T h e c o m b i n a t i o n o f

e l e c t r o n m i c r o s c o p y w i t h X - R a y m i c r o a n a ­

l y s i s e n a b l e s t h e d e t e c t i o n o f c h e m i c a l e l e ­

m e n t s c o n t a i n e d i n t i s s u e s . T h e a d v a n t a g e

i s t h a t t h e y p e r m i t s i m u l t a n e o u s d e t e c ­

t i o n o n t h e s a m e s a m p l e o f t h e v a r i o u s

e l e m e n t s o f M e n d e l e e f s p e r i o d i c a l c l a s s i ­

f i c a t i o n . T h i s a n a l y s i s b e i n g e f f e c t e d

j o i n t l y w i t h i n v e s t i g a t i o n b y s c a n n i n g m i ­

c r o s c o p y , a r t e f a c t s a r e s u r e t o b e a v o i d e d .

3 ) M i c r o a n a l y s i s e n a b l e s t o d e t e c t d i f

f e r e n c e s i n t h e e l e m e n t a r y c h e m i c a l c o n s -

t i t u t i o n o f s o m e g e n e r a o f p a t h o g e n i c f u n -

g i a n d a l s o o f d i f f e r e n t s p e c i e s o f t h e s a m e

g e n u s ( 2 1 ) .

4 ) W a v e l e n g t h s p e c t r o m e t r y w i t h t h e

C a m e b a x s y s t e m i s m u c h m o r e s e n s i t i v e

t h a n t h e o t h e r t w o m e t h o d s .

R E S U M O

S p o r o t h r i x s c h e n c k i i f o i e s t u d a d o e m m i c r o s c o p i a e l e t r ô n i c a . F o r a m o b s e r ­ v a d o s c a r a c t e r e s d a s h í f a s e d o s e s p o r o s , v á r i o s e l e m e n t o s d a c l a s s if i c a ç ã o p e r i ó d ic a f o r a m p o s t o s e m e v i d ê n c i a g r a ç a s à m i c r o - a n á l i s e a r a io s X .

R E F E R E N C E S

1 . B E R R Y J . P . , N é p h r o c a l c i n o s e e x - p é r i m e n t a l e p a r i n i e c t i o n d e n a r a - t h o r m o n e . E t u d e a u m i c r o a n a l y s e u r à s o n d e é l e c t r o n i q u e . N é p h r o n . 7 : 9 7 - 1 1 6 , 1 9 7 0 .

2 . B I E V R E C . id e , E t u d e b i o c h i m i q u e e t c y t o l o g i q u e d e s f o r m e s l e v u r e s e t f i l a m e n t e u s e s d e S p o r o t h r i x s c h e n ­ c k ii . T h è s e D o c t o r a t è s S c i e n c e s N a - t u r e l l e s , P a r i s , 1 9 7 0 .

3 . B L A N K F . , O n t h e c e l l w a l l s o f d i - m o r p h i c f u n g i c a u s i n g s y s t e m i c i n f e c - t i o n s . C a n . J . M ic r o b io l. I : 1 - 5 , 1 9 5 4 .

4 . B O Y D E A ., S W I T S U R J . R . a n d F E R N H E A D R . W ’., A p p l i c a t i o n o f t h e s c a n n i n g e l e c t r o n p r o b e X - R a y m i c r o a n a l y z e r t o t h e d e n t a l t i s s u e s . J . U ltr . R e s . 5 : 2 0 1 - 2 0 7 , 1 9 6 1 .

5 . C A S T A I N G R . , A p p l i c a t i o n d e s s o n ­ d e s é l e c t r o n i q u e s à u n e m é t h o d e d ’a n a l y s e p o n c t u e l l e c h i m i q u e e t c r i s - t a l l o g r a p h i q u e . T h è s e S c i e n c e s , P a r i s ( O . N . E . R . A . ) 9 2 — C h a t i l l o n s o u s B a g n e u x , 1 9 5 2 .

6 . G A L L E P . . A n a l y s e c h i m i q u e p o n e - t u e l l e d e s i n c l u s i o n s i n t r a - c e l l u l a i r e s p a r s p e c t r o g r a p h i e d e s r a y o n s X . A p p l i c a t i o n à 1’é t u d e d e s c e l l u l e s r é - n a l e s . T h è s e S c i e n c e s P a r i s ( L ’E x - p a n s i o n , P a r i s ) , 1 9 6 5 .

7 . G A L L E P . e t B E R R Y J . P . , C y t o - c h i m i e é l é m e n t a i r e u l t r a s t r u c t u r a l e s u r c o u p e s u l t r a f i n e s d e p o u m o n . L e p o u m o n e t le c o e u r , 25: 3 0 7 - 3 1 7 , 1 9 6 9 .

8 . G A Y J . L ., X - R a y m i c r o a n a l y s i s i n t h e d e v e l o p m e n t o f o o s p o r e s o f t h e f u n g s S a p r o l e g n i a . M ic r o n . 3 : 1 3 9 - 1 4 3 , 1 9 7 2 .

9 . I T O Y „ N O Z A W A Y . , S U S U K I H . a n d S E T O G U T I T . , S u r f a c e s s t r u c - t u r e s o f D e r m a t o p h y t e s a s s e e n b y t h e s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p e . S a b o u r a u d i a , 7 : 2 7 0 - 2 7 2 , 1 9 7 0 .

1 0 . L L O Y D K . O . a n d B I T O O N M . A „ I s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o f a p e p t i - d o r h a m n o m a n n a n f r o m t h e y e a s t f o r m o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i . S t r u c - t u r a l a n d i m m u n o l o g i c a l s t u d i e s . J. I m m u n o l . 1 0 7: 6 6 3 - 6 7 1 , 1 9 7 1 .

1 1 . M A R I A T F . , S u r l a t e n e u r e n a c i - d e s n u c l é i q u e s d e s f o r m e s l e v u r e s e t m y c é l i e n n e s d e S p o r o t h r i x s c h e n k i i . C. R . A c a d . S c . 2 4 8 : 3 4 6 8 - 3 4 6 9 , 1 9 5 9 .

Mar.-Abril, 1975

Rev. Soc. Bras. Med.. Trop.

61

13. M A R T O J A M . , R é p a r t i t i o n d u c a l - c i u m d a n s l a g l a n d e t h y r o i d e d e q u e l - q u e s M a m m i f è r e s . C . R . A c a ã . S C . 272: 3 1 7 3 - 3 1 7 5 , 1 8 7 1 .

2 0

. 14 . M A R T O J A R . , D e s i n s e c t s e t d e s

m é t a u x . L a R e c h e r c h e , 1 8 : 1 0 7 4 ­ 1 0 7 5 , 1 9 7 1 .

1 5 . P A D H Y E A . M . , a n d C A R M I C H A E L J . W . , A s c o s p o r e m o r p h o l o g y o f 2 1

iN a n n iz z ia a n d A r t h r o d e r m a s p e c i e s b y s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y . S a -b o u r a u ã i a , 1 0 : 3 1 3 - 3 1 4 , 1 9 7 2 .

1 6 . S M I T H J . M . B „ a n d S A N D L E R W . J . U . , T h e s u r f a c e s t r u c t u r e o f s a p r o p h y t i c a n d p a r a s i t i c d e r m a t o - 2 2 p h y t e s s p o r e s . M y c o p a t h o l o g i a e t M y c o lo g ia a p p l i c a t a , 4 3 : 1 5 3 - 1 5 9 , 1 9 7 1 .

1 7 . T H I B A U T M . , E t u d e b i o l o g i q u e , m o r -p h o l o g i q u e , c y t o l o g i q u e e t t a x i n o m i - q u e d u S p o r o t h i c h u m s c h e n c k i i ( H e t - k o e n e t P e r k i n s ) d e B e u r m a n n e t G o u g e r o t : D o l i c h o a s c u s s c h e n c k i i ( H e t P ) T h i b a u t e t A n s e l 1 9 7 0 . T h è s e D o c t o r a t d ’E t a t è s S c i e n c e s , P a r i s 2 3

( D a c t y l o S o r b o n n e , P a r i s ) , 1 9 7 0 .

18 . T H I B A U T M . e t A N S E L M . , E s s a i d ’u t i l i s a t i o n d u m i c r o s c o p e é l e c t r o n i - q u e à b a l a y a g e , p o u r 1’é t u d e m o r p h o - l o g i q u e d e s c h a m p i g n o n s . A n n a l e s ã e P a r a s ito lo g ie h u m a i n e e t c o m p a r é e , 2 4 46: 1 0 3 - 1 0 7 , 1 9 7 1 .

19. T H I B A U T M . e t A N S E L M . , N o u - v e l l e d e s c r i p t i o n d ’u n p é r i t h è c e d ’A s

-c o m y -c è t e . A n n a l e s ã e P a r a s ito lo g ie h u m a i n e e t c o m p a r é e , 4 7 : 1 5 9 - 1 6 7 , 1 9 7 2 .

T H I B A U T M . e t A N S E L M . , E x a - m i n a t i o n o f m y c o l o g i c a l s a m p l e s b y m e a n s o f t h e s c a n n i n g e l e c t r o n m i ­ c r o s c o p e . R e v . S o c . B r a s . M e d . T r o p . 7 : 7 9 - 8 5 , 1 9 7 3 .

T H I B A U T M . e t A N S E L M . , R e - c h e r c h e s e n s p e c t r o m é t r i e à R a y o n s X s u r l a c o n s t i t u t i o n c h i m i q u e é l é - m e n t a i r e d e V A s p e r g illu s f u m i g a t u s F r é s é n i u s e t d e V A s p e r g í liu s n i g e r v a n T i e g h e m . J . M ic r o s c o p ie , 1 7 : 1 0 0 , 1 9 7 3 .

T H U R S T O N E . L . a n d R U S S J . C ., S c a n n i n g a n d t r a n s m i s s i o n e l e c t r o n m i c r o s c o p y a n d m i c r o a n a l y s i s o f s t r u c t u r e d g r a n u l e s i n F i s c h e r e l l a a m b í g u a . S c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s ­ c o p y . P r o c e e d i n g s o f t h e f o u r t h a n - n u a l s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p e s y m p o s i u m ( C h i c a g o , e d . I . I . T . R e ­ s e a r c h I n s t i t u t e ) , 1 9 7 1 .

T O S T I A . , V I L L A R D I T A S . , F A Z - Z I N I M . L . a n d S C A L I C I R . , C o n - t r i b u t i o n t o t h e k n o w l e d g e o f d e r m a - t o p h y t i c i n v a s i o n o f h a i r . J o u r n a l o f I n v e s t i g a t i v e D e r m a t o lo g y , 5 5 : 1 2 3 ­ 1 3 4 , 1 9 7 0 .

Mar.-Abril, 1975

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

63

F i g . 1

F i g . 2

F i g . 3

F i g . 4

F i g . 5

— C u l t u r e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i i n i t s m y c e l l a l p h a s e . S e c o n d a r y e l e c t r o n i m a g e o b t a i n e d b y s c a n n i n g e l e c t r o n m i - c r o s c o p y . M y c e l i u m p a d d e d .

— C u l t u r e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i i n i t s m y c e l i & l p h a s e . S c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y . M y c e l i u m p a d d e d a n d p l a i n o v o i d c o n i d i a .

— C o n i d i a a n d c r e e p i n g m y c e l i u m o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i a s s h o w n b y t h e s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p e .

— T h e m y c e l l a l p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i ( s c a n n i n g e l e c ­ t r o n m i c r o s c o p y ) . C r e e p i n g m y c e l i u m b r a n c h i n g o u t i n a l i d i r e c t i o n s a n d f i n e l y i n t e r t a n g l e d . T h e p l a i n o v o i d c o n i d i a a r e s u p p o r t e d d i r e c t l y b y u n d i f f e r e n t i a t e h y p h a e .

— T w o o v o i d c o n i d i a . T h e y b e a r n o o r n a m e n t s o n t h e i r e x t e r ­ n a i s u r f a c e s .

F i g . 7 — C a K « X - R a y i m a g e o b t a i n e d b y e n e r g y d i s p e r s i v e s p e c t r o s - c o p y ( J e m 1 0 0 B w i t h E d a x s y s t e m ) . P E T c r y s t a l d e t e c t o r ; a c c e l e r a t i n g v o l t a g e 4 0 K v .

F i g . 8 — S K cc X - R a y i m a g e o b t a i n e d b y e n e r g y d i s p e r s i v e s p e c t r o s - c o p y ( J e m 1 0 0 B w i t h E d a x s y s t e m ) . F E T c r y s t a l d e t e c t o r ; a c c e l e r a t i n g v o l t a g e 4 0 K v .

F i g ; 9 — P K<x X - R a y i m a g e o b t a i n e d b y e n e r g y d i s p e r s i v e s p e c t r o s - c o p y ( J e m 1 0 0 B w i t h E d a x s y s t e m ) . P E T c r y s t a l d e t e c t o r ; a c c e l e r a t i n g v o l t a g e 4 0 K v .

F i g . 1 0 — S t u d y o f t h e m y c e l i a l p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i u n d e r w a v e l e n g t h d i s p e r s i v e s p e c t r o s c o p y ( M E B 0 7 ) . T h e L I F c r y s ­ t a l d e t e c t o r r e v e a l s t h e a b s e n c e o f c o p p e r , n i c k e l , c o b a l t , i r o n , m a n g a n e s e , c h r o m i u m , v a n a d i u m , a n d t i t a n i u m . T h e Z n K « l i n e c o m e s f r o m t h e s l i d e c y l i n d e r . C o n d i t i o n s r e q u i r e d f o r d e t e c t i o n : a c c e l e r a t i n g v o l t a g e 2 0 K v , c u r r e n t d e l i v e r e d 4 0 0 n A , 1 0 0 p u l s e s / s e c o n d .

Mar.-Abril, 1975

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

67

Sp o r o t h r ix s ch e n c k i i . L! F .

F i g . 1 2 — S t u d y o f t h e m y c e l i a l p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i u n d e r w a v e l e n g t h d i s p e r s i v e s p e c t r o s c o p y w i t h K A P c r y s t a l d e t e c t o r ( M E B 0 7 ) . N o e l e m e n t s a r e d e t e c t e d e x c e p t t h e A l K<x X - R a y i m a g e d u e t o t h e s l i d e c y l i n d e r a n d m e t a l l i z a t i o n o f c u l t u r e . C o n d i t i o n s r e q u i r e d f o r d e t e c t i o n : a c c e l e r a t i n g v o l t a g e 2 0 K v , c u r r e n t d e l i v e r e d 1 0 0 n A , 1 0 0 p u l s e s / s e c o n d .

68

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. IX — N? 2

»h i p n >

S p o r o t h r i x

S p o r o t h r i x s c h e n c k i i K A P

F i g . 14 — S t u d y o f t h e m y c e l i a l p h a s e o f S p o r o t h r i x s c h e n c k i i u n d e r w a v e l e n g t h d i s p e r s i v e s p e c t r o s c o p y ( C a m e b a x s y s t e m ) . W i t h P E T c r y s t a l d e t e c t o r a r e i d e n t i f i e d : I c d i n e (L /3 a n d L « l i n e s ) , c a l c i u m ( K /3 , K « I a n d I I l i n e s ; , p o t a s s i u m ( K p a n d K<* l i ­

n e s ) , c h l o r i n e (K cc i i n e ) , s u l p h u r (K /3 a n d K rc l i n e s ) , p h o s - p h o r u s ( K /3 a n d K<x l i n e s ) . T h e f o l l o w i n g c o n d i t i o n s a r e r e ­ q u i r e d f o r d e t e c t i o n : 2 0 K v , 5 0 n A .