R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 2 0 5 - 2 0 8 , O u t - D e z , 1 9 8 4
TRYPANOSOMIASIS CRUZI: A FOLLOW-UP STUDY OF
TISSUE REACTING IMMUNOGLOBULINS IN INFECTED
PUREBRED PINSCHER DOGS
Eduardo Alves Bambirra1, Washingt on Luis Tafuri1, Luigi Bogliolo §,
Cléa Chiari
2
and Faust o Edmundo Lima Pereira
3
A n t i b o d i e s a g a i n s t s t r i a t e d m u s c l e ( c a r d i a c a n d s k e l e t a l ) w e r e s t u d i e d i n s e r u m s a m p l e s f r o m 3 6 p u r e b r e d p r e p u b e r t a l P i n s c h e r d o g s ( 1 5 C o n t r o l s w i t h o u t i n f e c t i o n a n d 2 1 i n f e c t e d w i t h T r y p a n o s o m a c r u z i f r o m 7 t o 4 0 0 d a y s a f t e r i n f e c t i o n w i t h 1 0 0 0 t r y p o m a s t i g o t e s / g r a m b o d y w e i g h t o f t h e C o l o m b i a n a s t r a i n b y t h e i n t r a p e r i t o n e a l r o u t e ) . A l t h o u g h t h r e e d i f f e r e n t i m m u n o h i s t o l o g i c a l p a t t e m s o f t i s s u e - r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s w e r e f o u n d t h e i r p r e s e n c e w a s n o t c o r r e l a t e d w i t h a n y p e c u l i a r c h a r a c t e r i s t i c s o r w i t h t h e s e v e r i t y o f t h e d i s e a s e i n e a c h p a r t i c u l a r d o g .
K e y w o r d s : E x p e r i m e n t a l t r y p a n o s o m i a s i s c r u z i . D o g . A u t o a n t i b o d i e s . T i s s u e - r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s .
T h e o c c u r r e n c e o f a u t o a n t i b o d i e s h a s b e e n r e p o r t e d d u r i n g T r y p a n o s o m a c r u z i i n f e c t i o n s in m a n a n d i n e x p e r i m e n t a l m o d e l s . I n m a n , a n a n t i b o d y r e a c t i n g w i t h e n d o c a r d i u m , v a s c u l a r s t r u c t u r e s a n d i n t e r s t i t i u m o f s t r i a t e d m u s c l e ( E V I a n t i b o d y ) w a s f o u n d i n s o m e i n s t a n c e s d u r i n g C h a g a s ’ d i s e a s e ^ . I t h a s b e e n s h o w n t h a t t h e i n v o l v e d a n t i g e n i s l o c a t e d a t t h e p l a s m a m e m b r a n e o f s t r i a t e d f i b e r s , a n d i n e n d o - t h e l i a l c e l l s o f d i f f e r e n t m a m m a l i a n t i s s u e s 5 .
I n e x p e r i m e n t a l i n f e c t i o n s , a u t o a n t i b o d i e s h a v e a l s o b e e n r e p o r t e d i n m i c e , r a b b i t s a n d m o n k e y s . I n t h e m o u s e a n t i n u c l e a r a n t i b o d i e s c o u l d b e f o u n d d u r i n g t h e i n f e c t i o n 1 0 . I n r a b b i t s a d i f f u s e f l u o r e s c e n c e w a s d e t e c t e d i n t h e m u s c l e s t r u c t u r e o f t h e h e a r t , s k e l e t a l m u s c l e a n d o e s o p h a g u s , a s w e l l a s i n a r t e r i e s f r o m t h e b r a i n a n d k i d n e y 1 2 . I t w a s r e c e n t l y s h o w n t h a t E V I
T r a b a l h o d o s D e p a r t a m e n t o s d e A n a t o m i a P a t o l ó g i c a e M e d i c i n a L e g a l d a F a c u l d a d e d e M e d i c i n a d a U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d e M i n a s G e r a i s 1 , d e P a r a s i t o l o g i a d o I n s t i t u t o d e C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s d a U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d e M i n a s G e r a i s ^ e d e P a t o l o g i a d a U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d o E s p í r i t o S a n t o ^ . T r a b a l h o r e a l i z a d o c o m a u x í l i o d o C N P q e d a F I N E P .
§ “ I n m e m o r i a m ”
E n d e r e ç o p a r a c o r r e s p o n d ê n c i a : D r . B a m b i r r a , R T u r m a l i n a , 2 7 4 - P r a d o ; C E P 3 0 0 0 0 - B e l o H o r i z o n t e - M G .
R e c e b i d o p a r a p u b l i c a ç ã o e m 5 / 9 / 1 9 8 3 .
a n d p e r i p h e r a l n e r v e a n t i b o d i e s , r e s e m b l i n g t h o s e f o u n d i n h u m a n s , w e r e p r e s e n t i n t h e s e r u m o f r h e s u s m o n k e y s 1 1 .
T h e h i g h s u s c e p t i b i l i t y o f d o g s to T . c r u z i i n f e c t i o n w a s i n i t i a l l y e s t a b l i s h e d b y C h a g a s 4 a n d h a s b e e n c o n f i r m e d b y o t h e r s ^ . E a r l i e r s t u d i e s o f t h e i m m u n o p a t h o l o g i c a s p e c t s o f t h e i n t e r a c t i o n s o f T . c r u z i i n d o g s w e r e l i m i t e d t o t h e w o r k o f M u n i z e t a l 7 a n d C o s t a & C o s t a 6 w h o d e s c r i b e d g e n e r a l a s p e c t s o f t h e s p e c i f i c h u m o r a l i m m u n i t y a g a i n s t T . c r u z i d u r i n g t h e c o u r s e o f t h e i n f e c t i o n . I n t h e p r e s e n t p a p e r w e i n v e s t i g a t e d w h e t h e r t i s s u e r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s ( a u t o a n t i b o d i e s ) c a n o c c u r i n p r e p u b e r t a l p u r e b r e d P i n s c h e r d o g s i n f e c t e d w i t h t h e T . c r u z i .
M A T E R I A L S A N D M E T H O D S
S e r u m s a m p l e s w e r e o b t a i n e d f r o m 2 1 p r e p u b e r t a l p u r e b r e d P i n s c h e r d o g s (C a n i s f a m i l i a r i s ) i n f e c t e d b y i n t r a p e r i t o n e a l r o u t e w i t h 1 0 0 0 t r y p o m a s t i g o t e s / g r a m p e r b o d y w e i g t h o f T . c r u z i , C o l o m b i a n a s t r a i n . A l i o f t h e s e d o g s h a d p o s i t i v e a n t i - T . c r u z i s e r o l o g y ( i n d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e t e c h n i q u e I I F T ) a n d p o s i t i v e p a r a s i t e m i a ( d i r e c t e x a m i n a t i o n o f p e r i p h e r a l b l o o d ) . T h e c l i n i c a i f i n d i n g s , s p e c i f i c a n t i b o d y r e s p o n s e , h e m a t o l o g i c a l , r a d i o l o g i c a l a n d e l e c - t r o c a r d i o g r a p h i c f i n d i n g s a n d m o r p h o l o g i c a l s t u d i e s ( o p t i c a n d u l t r a s t r u c t u r a l a s p e c t s ) d u r i n g t h e c o u r s e o f t h e e x p e r i m e n t a l i n f e c t i o n h a v e a l r e a d y b e e n d e s - c r i b e d 2 .
B a m b i r r a E A , T a f u r i W L , B o g l i o l o L , C h i a r i C , P e r e i r a F E L . T r y p a n o s o m i a s i s c r u z i : a f o l l o w - u p s t u d y o f t i s s u e r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s i n i n f e c t e d p u r e b r e d p i n s c h e r d o g s . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 2 0 5 2 0 8 , O u t -D e z , 1 9 8 4
R E S U L T S
S e r a f r o m u n i n f e c t e d d o g s h a d n o a n t i - 7 ’. c r u z i a n t i b o d i e s o r a u t o a n t i b o d i e s . A t v a r i o u s t i m e s p o s t - i n f e c t i o n , a s i n d i c a t e d i n F i g u r e 1 , s e r a o f t h e d o g s w e r e e x a m i n e d f o r a u t o a n t i b o d i e s . A n t i s t r i a t e d m u s - c l e a n t i b o d i e s w e r e f i r s t d e t e c t e d 2 w e e k s a f t e r t h e i n f e c t i o n , w i t h t h e m a x i m u m t i t r e o f 2 5 6 . T h e s p e c i f i c c l a s s o f t h e d e t e c t e d i m m u n o g l o b u l i n i s p r e s e n t e d o n T a b l e 1 . T h e I I F T - I g G r e m a i n e d e l e v a t e d ( > 6 4 ) in a l i p o s i t i v e d o g s d u r i n g t h e w h o l e o b s e r v a t i o n p e r i o d ( 4 0 0 d a y s ) e x c e p t i n t h r e e d o g s , i n w h i c h a u t o a n t i b o d i e s d e c r e a s e d t o t i t r e o f 1 6 i n s e r u m s a m p l e s o b t a i n e d f r o m 2 0 0 t o 4 0 0 d a y s . A n ti - 7 ^ c r u z i a n t i b o d i e s s i m u l t a n e o u s l y m e a s u r e d b y I I F T w e r e d e t e c t e d c o n - c u r r e n t l y w i t h a n t i s t r i a t e d m u s c l e a n t i b o d i e s , w i t h t h e m a x i m u m t i t r e s o f 2 , 5 6 0 ( I g M , 3 r^ w e e k o f i n f e c t i o n ) . T h e I I F T - I g A - a n t i - s t r i a t e d m u s c l e w e r e p e r s i s t e n t l y n e g a t i v e i n a l i s e r a ( T a b l e 1 ) .
T a b l e 1 - I n v e s t i g a t i o n o f t h e a n t i b o d i e s a g a i n s t s t r i a t e d m u s c l e § b y t h e I I F T * i n P i n s c h e r d o g s i n f e c t e d w i t h T r v o n n o s o m n c r u
S e r a N u m b e r o f A n t i b o d i e s t o s t r i a t e d m u s c l e
( d i l u t i o n > 1 : 8 ) d o g s I g G a l o n e I g M a l o n e I g G + I g M
I n f e c t e d 2 1 4 ( 3 3 , 3 % ) _ _ _ _ 8 ( 6 6 , 7 % )
N o n - i n f e c t e d 1 5 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
§ I n e a c h s e r u m s a m p l e f r o m t h e c h a g a s i c o r t h e - i n f e c t e d d o g s s i m i l a r t i t r e s o f s k e l e t a l a n d c a r d i a c m u s c l e a u t o a n t i b o d i e s w e r e f o u n d .
£ I n d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e t e c h n i q u e .
F i g u r e 1 - A n t i - s t r i a t e d m u s c l e ( s k e l e t a l a n d c a r d i a c ) a n t i b o d i e s i n s e r i a l s e r u m s a m p l e s o b t a i n e d f r o m P i n s c h e r d o g s i n f e c t e d w i t h T . c r u z i . E a c h p o i n t r e p r e s e n t s t h e m e a n o f 1 0 t o 2 1 s e r a t e s t e d .
S e r a c o l l e c t e d f r o m d a y 7 t o d a y 4 0 0 a f t e r t h e i n f e c t i o n w e r e a v a i l a b l e f r o m a l i t h e d o g s . A s C o n t r o ls , s e r u m s a m p l e s f r o m e a c h e x p e r i m e n t a l d o g b e f o r e t h e i n f e c t i o n , a n d s a m p l e s o b t a i n e d f r o m a n o t h e r 1 5 u n i n f e c t e d p r e p u b e r t a l p u r e b r e d P i n s c h e r d o g s w e r e u s e d . S e r a f r o m t h o s e d o g s w e r e k e p t f r o z e n a t - 2 0 ° C u n t i l t e s t e d b y t h e i n d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e t e s t ( I I F T ) f o r h o m o l o g o u s t i s s u e - r e a c t i n g a n t i b o d i e s u s i n g f l u o r e s c e i n l a b e l l e d a n t i d o g I g A , I g G a n d I g M ( M i l e s R e s e a r c h L a b o r a t o r i e s , U S A ) . A s a n t i g e n i c s u b s t r a t e s t o s t u d y a u t o a n t i b o d i e s , 2 - 4 m i c r o m e t e r - u n f i x e d c r y o s t a t s e c t i o n s o f d o g h e a r t , k i d n e y , i n t e s t i - n e , s k e l e t a l m u s c l e a n d s c i a t i c n e r v e f r o z e n t o g e t h e r in t h e s a m e b l o c k , w e r e u s e d . A l i t e s t s w e r e m a d e u s i n g s e r i a l d i l u t i o n s o f t h e s e r a f r o m 1 :2 t o 1 : 5 1 2 . C o n t r o l s o f f l u o r e s c e n t c o n j u g a t e s w e r e m a d e b y d i r e c t i n c u b a - t i o n w i t h t h e s u b s t r a t e .
B a m b i r r a E A , T a f u r i W L , B o g l i o l o L , C h i a r i C , P e r e i r a F E L . T r y p a n o s o m i a s i s c r u z i : a f o l l o w - u p s t u d y o f t i s s u e r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s i n i n f e c t e d p u r e b r e d p i n s c h e r d o g s . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 17
:
2 0 5 2 0 8 O u t -D e z , 1 9 8 4S e r a o f a l i i n f e c t e d d o g s w e r e a l s o e x a m i n e d f o r a u t o a n t i b o d i e s a g a i n s t l i v e r , k i d n e y , i n t e s t i n e ( i n t r a - m u r a l a u t o n o m i c n e r v o u s p l e x u s ) a n d p e r i p h e r a l n e r - v e , a n d a l i t h e s a m p l e s w e r e n e g a t i v e .
T h e m o r p h o l o g i c a l s t u d y o f t h e i m m u n o f l u o r e s c e n c e h i s t o l o g y o f t h e a u t o a n t i b o d i e s a g a i n s t s t r i a t e d m u s c l e s ( s k e l e t a l a n d c a r d i a c ) d e m o n s t r a t e d t h r e e b a s i c p a t t e r n s : 1 . d i f f u s e r e a c t i o n o n t h e m y o c e l l ( F i g u r e 2 a ) ; 2 . e n d o m y s i a l a n d s a r c o l e m m a l r e a c t i o n ( F i g u r e 2 b ) ; 3 . m y o f i b r i l l a r r e a c t i o n ( F i g u r e 2 c ) .
D u r i n g t h e p e r i o d o f o b s e r v a t i o n w e d e m o n s t r a t e d c h a n g e s o f t h e s e m o r p h o l o g i c a l p a t t e r n s i n t h e s a m e d o g w i t h o u t a p p a r e n t r e l a t i o n s h i p w i t h t h e c o n c o m i t a n t c l i n i c o - l a b o r a t o r i a l a s p e c t s o f t h e d i s e a - s e . W e c o u l d n o t c o r r e l a t e t h e t i t r e s o f a u t o a n t i b o d i e s w i t h t h e s e v e r i t y o f t h e d i s e a s e in e a c h p a r t i c u l a r d o g .
D I S C U S S I O N
I t h a s b e e n s u g g e s t e d t h a t a u t o a n t i b o d i e s c a n p l a y a p a t h o g e n i c r o l e in C h a g a s ’ d i s e a s e ^ . A l t h o u g h t h e p o s s i b i l i t y o f l i n k i n g t h e p r e s e n c e o f t i s s u e r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s t o t h e e l e c t r o c a r d i o g r a p h i c a l a b n o r - m a l i t i e s a n d t o s k e l e t a l a n d c a r d i a c m u s c l e a l t e r a t i o n s f o u n d b y h i s t o p a t h o l o g y a n d e l e c t r o n m i c r o s c o p y in t h e s e d o g s 2 i s a t t r a c t i v e , i t i s n o t k n o w n w h e t h e r i t is i m p o r t a n t in t h e p a t h o g e n e s i s o f l e s i o n s o r i t is m e r e l y a s s o c i a t e d w i t h it. H o w e v e r , t h e f a c t t h a t c l i n i c a i , i m m u n o l o g i c a l , e l e c t r o c a r d i o g r a p h i c a l a n d m o r p h o l o g i c a l f m d i n g s in P i n s c h e r d o g s i n f e c t e d w i t h T . c r u z f t a n d t h e c o n t i n u e d p r e s e n c e o f t i s s u e - r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s a r e s i m i l a r t o t h e f m d i n g s in h u m a n i n f e c t i o n , i n d i c a t e d t h a t t h i s h o s t is s u i t a b l e f o r e x p e r i m e n t a l i m m u n o p a t h o l o g i c s t u d i e s o f C h a g a s ’ d i s e a s e . A t p r e s e n t w e d o n o t k n o w t h e p a t h o g e n i c s i g n i f i c a n c e o f t h e a u t o a n t i b o d i e s d e t e c t e d b y i m m u n o f l u o r e s c e n c e . T h e t h r e e d e t e c t e d p a t t e r n s o f d e p o s i t o n o f t h e a u t o a n t i b o d i e s m a y r e f l e c t t h e v a - r i a t i o n o f t h e r e l e a s e o f t h e a u t o a n t i g e n i n a r e a s in t h e m u s c u l a r t i s s u e b u t w e c a n n o t c o r r e l a t e t h e m o r p h o l o g i c a l p a t t e r n s o f a u t o a n t i b o d i e s a g a i n s t s t r i a t e d m u s c l e w i t h s o m e p e c u l i a r c h a r a c t e r i s t i c o r w i t h t h e s e v e r i t y o f t h e d i s e a s e in e a c h p a r t i c u l a r d o g , a p p r a i s e d b y c l i n i c a i , e l e c t r o c a r d i o g r a p h i c a l , r a d i o l o g i c a l a n d i m m u n o l o g i c a l m e t h o d s ( c e l l u l a r a n d h u m o r a l i m m u n it y , e n d o g e n o u s a n d e x o g e n o u s a n t ig e n s , p a r a s i t e a n d n o n - p a r a s i t e r e l a t e d ) a n d m o r p h o l o g i c a l s t u d i e s ( o p t i c a l a n d u l t r a s t r u c t u r a l a s p e c t s 2 ) , s u g g e s t i n g t h a t t h e t i s s u e r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s r e p r e s e n t o n l y a e p i p h e n o m e n o n . W e a l s o c a n n o t c o r r e l a t e t h e p a t t e r n s a n d t i t r e s o f t h e a u t o a n t i b o d i e s w i t h t h e d e t e c t e d h i s t o p a t h o l o g i c a l a l t e r a t i o n s a n d / o r w i t h t h e t i t r e s o f s p e c i f i c a n t i - T . c r u z i a n t i b o d i e s .
F i g u r e 2 - I m m u n o f l u o r e s c e n c e p a t t e r n s o f a u t o a n t i b o d i e s a g a i n s t s t r i a t e d m u s c l e ( s k e l e t a l a n d c a r d i a c ) in P i n s c h e r d o g s i n f e c t e d w i t h T r y p a n o s o m a c r u z i ' . a : d i f f u s e r e a c t i o n o n t h e m y o c e l l ; b : e n d o m y s i a l a n d s a r c o l l e m m a l r e a c t i o n ; c : m y o f i b r i l a r r e a c t i o n .
C r o s s r e a c t i v i t y b e t w e e n T . c r u z i a n d h o s t t i s s u e a n t i g e n s ^ o r b i n d i n g o f p a r a s i t e a n t i g e n s t o t h e h o s t c e l l s m e m b r a n e s * 8 m a y w e [] i n d u c e a u t o i m m u n e p h e n o m e n a in p a t i e n t s w i t h C h a g a s ’ d i s e a s e . H o w e v e r , s o m e o f t h e r e a c t i o n s d e t e c t e d o n n o n
B a m b i r r a E A , T a f u r i W L , B o g l i o l o L , C h i a r i C , P e r e i r a F E L . T r y p a n o s o m i a s i s c r u z i : a f o l l o w - u p s t u d y o f t i s s u e r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s i n i n f e c t e d p u r e b r e d p i n s c h e r d o g s . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 17
:
2 0 5 2 0 8 , O u t -D e z , 1 9 8 4h u m a n s u b s t r a t e s a r e p r o b a b l y d u e t o h e t e r o p h i l e a n t i b o d i e s a n d t h e r e f o r e u n l i k e l y to b e o f p a t h o g e n i c s i g n i f i c a n c e , t h o u g h t h e y c a n b e u s e f u l a s i m m u n o l o - g i c a l m a r k e r s .
R E S U M O
F o i i n v e s t i g a d a a p r e s e n ç a d e a n t i c o r p o s c o n t r a m ú s c u l o e s t r i a d o ( c a r d í a c o e e s q u e l é t i c o ) e m a m o s t r a s d e s o r o d e 3 6 c ã e s P i n s c h e r d e r a ç a p u r a , p r é - p ú b e r e s ( 1 5 c o n t r o l e s s e m i n f e c ç ã o e 2 1 i n f e c t a d o s c o m T r y p a n o s o m a c r u z i / A i n f e c ç ã o f o i f e i t a a t r a v é s d e i n j e ç ã o i n t r a p e r i t o n e a l d e 1 . 0 0 0 t r i p o m a s -t i g o -t a s / g r a m a d e p e s o e o s c ã e s f o r a m e x a m i n a d o s e n t r e o s d i a s 7 e 4 0 0 . T r ê s d i f e r e n t e s p a d r õ e s d e d i s t r i b u i ç ã o d e i m u n o g l o b u l i n a s n o s t e c i d o s f o r a m d e m o n s t r a d o s , e m b o r a n ã o p u d e s s e m s e r c o r r e l a c i o n a d o s c o m a c a r a c t e r í s t i c a d a i n f e c ç ã o o u c o m a g r a v i d a d e d a d o e n ç a n o s d i f e r e n t e s c ã e s .
P a l a v r a s c h a v e s : D o e n ç a d e C h a g a s e x p e r i m e n t a l . C ã e s . A u t o - a n t i c o r p o s . I m u n o g l o b u l i n a s e m t e c i d o s .
R E F E R E N C E S
1. A b r a h a m s o h n J A , K l o e t z e l J K . P r e s e n c e o f T r y p a n o s o m a c r u z i a n t i g e n o n t h e s u r f a c e o f b o t h i n f e c t e d a n d u n i n f e c t e d c e l l s i n t i s s u e c u l t u r e . P a r a s i t o l o g y 8 0 : 1 4 7 - 1 5 2 , 1 9 8 0 .
2 . B a m b i r r a E A . I n f e c ç ã o e x p e r i m e n t a l d e c ã e s P i n s c h e r p e l o T r y p a n o s o m a c r u z i ( C h a g a s , 1 9 0 9 ) : r e s p o s t a i m u - n i t á r i a a o p a r a s i t a , a a n t í g e n o s e x ó g e n o s e d e t e c i d o s d o h o s p e d e i r o , n o d e c u r s o d a e v o l u ç ã o . T e s e d e d o u t o r a d o . U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d e M i n a s G e r a i s , B e l o H o r i z o n t e , 1 9 8 2 .
3 . B r e n e r Z . I m m u n i t y t o T r y p a n o s o m a c r u z i . A d v a n c e s in P a r a s i t o l o g y 1 8 : 2 4 7 - 2 9 2 , 1 9 8 0 .
4 . C h a g a s C . N o v a t r y p a n o s o m í a s e h u m a n a . E n s a i o s s o b r e a m o r f o l o g i a e o c i c l o e v o l u t i v o d o S c h i z o t r y p a n u m c r u z i
n . g e n . , n . s p . a j e n t e e t i o l o j i c o d e n o v a e n t i d a d e m ó r b i d a d o h o m e m . M e m ó r i a s d o I n s t i t u t o O s w a l d o C r u z 1: 1 5 9 - 2 1 8 , 1 9 0 9 .
5 . C o s s i o P M , D i e z C , S z a r f m a n A , K r e u t z e r E , C a n d i o l o B , A r a n a R M . C h a g a s i c c a r d i o p a t h y : d e m o n s t r a t i o n o f a s e r u m g a m m a g l o b u l i n f a c t o r w h i c h r e a c t s w i t h e n d o - c a r d i u m a n d v a s c u l a r s t r u c t u r e s . C i r c u l a t i o n 4 9 : 1 3 - 2 1 , ' 1 9 7 4 .
6 . C o s t a J F , C o s t a A . V e r i f i c a ç õ e s e x p e r i m e n t a i s s o b r e i m u n i d a d e h u m o r a l n a d o e n ç a d e C h a g a s . P u b l i c a ç õ e s M é d i c a s ( S ã o P a u l o ) 3 1 : 2 9 - 3 7 , 1 9 8 0 .
7 . M u n i z J , S o a r e s R , Q u i r o g a L , B a t i s t a S . E v o l u ç ã o d a i m u n i d a d e h u m o r a l e m c ã e s i n f e c t a d o s e x p e r i m e n t a l m e n t e p e l o S c h i z o t r y p a n u m c r u z i . R e v i s t a B r a s i l e i r a d e M a l a r í o l o g i a e D o e n ç a s T r o p i c a i s 5 : 1 9 7 - 2 0 0 , 1 9 5 3 .
8 . R i b e i r o d o s S a n t o s R , H u d s o n L . T r y p a n o s o m a c r u z i : b i n d i n g o f p a r a s i t e a n t i g e r s t o m a m m a l i a n c e l l m e m - b r a n e s : P a r a s i t e I m m u n o l o g y 2 : 1 - 1 0 , 1 9 8 0 .
9 . S a n t o s - B u c h C A , T e i x e i r a A R L . T h e i m m u n o l o g y o f e x p e r i m e n t a l C h a g a s ’ d i s e a s e . I I I - R e j e c t i o n o f a l l o g e n i c h e a r t c e l l s “ i n v i t r o ” . J o u r n a l o f E x p e r i m e n t a l M e d i c i n e
1 4 0 : 3 8 - 5 3 , 1 9 7 4 .
1 0 . S z a r f m a n A , C o s s i o P M , L a g u e n s R P , D e l a V e g a M T , A r a n a R M , S c h m u n i s G A . I m m u n o l o g i c a l s t u d i e s i n R o c k l a n d m i c e i n f e c t e d w i t h T r y p a n o s o m a c r u z i . D e - v e l o p m e n t o f a n t i - n u c l e a r a n t i b o d i e s . B i o m e d i c i n e 2 2 : 4 8 9 - 4 9 5 , 1 9 7 5 .
1 1 . S z a r f m a n A , G e r e c h t P , D r a p e r C C , M a r s d e n P D . T i s s u e - r e a c t i n g i m m u n o g l o b u l i n s in R h e s u s m o n k e y s i n f e c t e d w i t h T r y p a n o s o m a c r u z i : a f o l l o w - u p s t u d y . T r a n s a c t i o n s o f t h e R o y a l S o c i e t y f o r T r o p i c a l M e d i c i n e a n d H y g i e n e 7 5 : 1 1 4 - 1 1 8 , 1 9 8 1 .
1 2 . T e i x e i r a A R L , T e i x e i r a L , S a n t o s - B u c h C A . T h e i m m u n o l o g y o f e x p e r i m e n t a l C h a g a s ’ d i s e a s e i n m a n . A m e r i c a n J o u r n a l o f P a t h o l o g y 8 0 : 1 6 3 - 1 7 8 , 1 9 7 5 .
