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Rev. Soc. Bras. Med. Trop. vol.8 número5

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(1)

r

T H E A V IR U L E N C E O F T H E C U L T IV A T E D P F S T R A I N O F T R Y P A N O -

S O M A C R U Z I . V I — T H E E F F E C T O F A N T I L Y M P H O C Y T I C S E R U M

IN D O G S .

Humberto Menezes *

T h e u s e o f a n t i l y m p h o c y t i c s e r u m ( A L S ) i n d o g s s u p p r e s s e d t h e i m m u n e

r e s p o n s e o f a v a c c l n a t e á a n d s i m u l t a n e o u s l y A L S t r e a t e d a n i m a l , in c r e a s e d t h e

i n f e c t i v i t y o f a v i r u l e n t s t r a i n a n d d id n o t i n d u c e a t y p i c a l i n f e c t i a n - d i s e a s e in

3 d o g s r e c e i v i n g t h e s e r u m a n d t h e a v i r u l e n t

P F

s t r a i n .

I N T R O D U C T I O N

T h e a n t i l y m p h o c y t i c s e r u m ( A L S ) i n t h e o n l y s u b s t a n c e t h a t r e a l l y c a n b e c o n - s i d e r e d a s a n i m m u n o s u p r e s s i v e a g e n t ( M e ­ d a w a r 12) . T h e i m p a i r m e n t o f t h e i m m u n e r e s p o n s e i n a n i m a i s t r e a t e d w i t h A L S a n d i n f e c t e d w i t h

P . b e r g h e i

a n d

T . r h o d e s i e n s e

( W a l k e r 22) ,

T . b r u c e i

a n d

T . c o n g o le n s e

( L u c k i n s 11) ,

B C G a n ã L e i s h m a n i a e n r i e t t i i

( B r y c e s o n e t a l . 5) h a v e b e e n a l r e a d y r e s -

c r i b e d . 1

T h e e n h a n c e m e n t o f e x p e r i m e n t a l

t r y

-p a n o s o m ia s is c r u z i

i n a n i m a i s , w i t h i m m u ­ n o s u p r e s s i v e d r u g s w a s d e m o n s t r a t e d b y T h i e r m a n e t a l . 20, C a m a r g o e t a l s . e , K u m a r e t a i s . 9 B r e n e r e t a l . 3 a n d M e n e z e s 17.

A i m i n g t o c o n f i r m t h e a v i r u l e n c e o f t h e

T . c r u z i

l o n g t e r m c u l t i v a t e d

Y

s t r a i n , t h a t w e d e s i g n a t e d

P F

s t r a i n , w e d e p r e s s e d t h e i m m u n e r e s p o n s e o f m i c e w i t h P r e d n i s o - l o n e ( M e n e z e s 15!16) a n d a n t i p r o l i f e r a t i v e a g e n t s ( M e n e z e s 17) . _

I n a p r e v i o u s p a p e r w e h a v e d e m o n s t r a ­ t e d t h e i m m u n o g e n i c a c t i v i t y o f t h e

P F

s t r a i n t o d o g s ( M e n e z e s 13) a n d w e i n t e n d t o s t a b l i s h n o w t h a t t h e a f o r e s a i d a v i r u ­ l e n c e i s a l s o p r e s e n t i n d o g s s u b m i t t e d t o a p o w e r f u l l i m m u n o s u p p r e s s i v e a g e n t - t h e

A I S .

M A T E R I A L A N D M E T H O D S

A —

V a c c in e s .

— T h e l i q u i d p h a s e o f t h r e e t u b e s w i t h 1 5 d a y s o l d c u l t u r e o f t h e

P F

s t r a i n , i n P a c k c í h a n i a n m e d i u m , w a s c e n t r i f u g e d a n d t h e s e d i m e n t w a s h e d s e v e - r a l t i m e s i n s a l i n e s o l u t i o n . T h e f i n a l s u s - p e n s i o n h a d a l m o s t 1 0 8 p a r a s i t e s p e r m l , w i t h 8 5 % o f m o b i l e f o r m s a n d a b o u t 3 % o f t r y p o m a s t i g o t e s . A n o t h e r v a c c i n e w a s p r e p a r e d b y a s i m i l a r m a n n e r , h a v i n g a l ­ m o s t 7 0 % o f m o b i l e f l a g e l l a t e s a n d a c o n - c e n t r a t i o n o f 2 , 9 x l 0 6 p a r a s i t e s p e r m l w i t h m o r e o r l e s s 3 % o f t r y p o m a t i g o t e s . B o t h s u s p e n s i o n w e r e u s e d i m m e d i a t l y a f t e r p r e - p a r a t i o n a n d w i l l b e d e s i g n a t e d a s

v a c c in e .

B —

A n i m a i s .

— P i v e l i t t e r - m a t e p u p p i e s o f a c o m m o n m i x e d r a c e w e r e e m p l o y e d i n t h i s e x p e r i m e n t a n d b e l o n g e d t o t h e g r o u p

(2)

254

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. VIII — N? 5

n a m e d

F r 5 9 A .

T h e a g e o f t h e a n i m a i s , a t t h e b e g i n i n g o f t h e e x p e r i e n c e w a s 4 m o n t h s a n d t h e m e a n b o d y w e i g h t 4 , 0 k g .

T h e d o g F r 5 9 - 2 p e r t a i n e d t o a n o t h e r g r o u p a n d w a s m a n t h s o l d , w e i g h t i n g 0 , 9 5 k g a t t h e s t a r t o f t h e e x p e r i m e n t .

C —

A n t i l y m p h o c y t i c s e r u m

( A L S ) — T h e s e r u m w a s p r e p a r e d f o l l o w i n g t h e t e - c h n i q u e d e s c r i b e d b y A b a z a e t a i s . 1, f r o m t h o r a c i c d u c t l y m p h o c y t e s o f d o g s , i n j e c t - e d i n h o r s e . T h e A L S w a s a p u r i f i e l g l o - b u l i n w i t h t h e l e u c o - a g l u t i n a t i o n t i t e r o f 1 / 5 1 2 .

A l i t h e e x a m i n a t i o n s d o n e i n t h e a n i ­ m a i s , p r e v l o u s l y a n d / o r d u r i n g t h e e x p e r i ­ m e n t , a r e s h o w n i n T a b l e s .

T h e d o g s s u b m i t e d t o t h e A L S t r e a t - m e n t r e c e i v e d , e v e r y t w o d a y s , a n i n t r a - m u s c u l a r i n j e c t i o n o f 2 0 0 . 0 0 0 I U o f P e n i c i l - l i n - P r o c a i n e . * * .

T h e v i r u l e n t i n f e c t i o . n s w e r e d o n e b y i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n s o f b l o o d f o r m s o f t h e v i r u l m t

Y

s t r a i n , o b t a i n e d f r o m m i c e a t t h e 8 th d a y o f i n f e c t i o n .

G r o s s a n d h i s t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n w a s p e r f o r m e d o n s e v e r a l o r g a n s o f a l i t h e a n i ­ m a i s .

R E S U L T S A N D C O M M E N T S

I t c a n b e c o n c l u d e d f r o m t h e o b s e r v a - t i o n o f t h e G r a p h I a n d T a b l e s 1 - 3 t h a t t h e d o g s v a c c i n a t e d w i t h t h e

P F

s t r a i n o f t h e

T r y p a n o s o m a c r u z i

h a d n e i t h e r p o s i t i v e p a - r a s i t o s c o p y n o r m o r t a l i t y d u r i n g t h e n i n e m o n t h s d u r a t i o n o f t h e e x p e r i m e n t .

F r o m t h e 3 v a c c i n a t e d a n d A L S t r e a t e d d o g s , t h e f i r s t p r e s e n t e d a l i ( e x c e p t o n e ) s e r o l o g i c a l a n d p a r a s i t o l o g i c a l t e s t s n e g a -

t i v e ( T a b l e 1 ) . T h e a n i m a l h a d n o i n f l a - m a t o r y i n f i l t r a t i o n i n t h e m y o c a r d i u m ( F i g . 1 ) , b u t h a d m i c r o a b c e s s i n t h e l i v e r ( F i g . 2 ) , l e s i o n s u r e l y n o t r e l a t e d t o

T r y p a n o s o m a

c r u z i

i n f e c t i o n .

T h e s e c o n d d o g h a s s h o w n 3 p o s i t i v e b l o o d c u l t u r e s , b e i n g t h e l a s t 3 n e g a t i v e . T w o b l o o d i n o c u l a t i o n s i n m i c e w e r e p o s i ­ t i v e t o o , b u t t h e l a s t 4 w e r e n e g a t i v e . A l i t h e x e n o d i a g n o s i s ( 1 0 ) g a v e n e g a t i v e r e - s u l t s . T h e C F T ( G u e r r e i r o & M a c h a d o t e s t ) b e c a m e p o s i t i v e s i n c e t h e f i r s t p o s i t i v e h e -

moculture and remained as such tíU the

e n d o f t h e e x p e r i m e n t ( T a b l e 2 ) .

I n t h e l i v e r , a n i n f i l t r a t i o n o f t h e t r i a l s b y n e u t r o p h i l e s s e e m s d u e t o a n a s c e n d e n t p y o g e n i c i n f e c t i o n .

N o p a r a s i t e s c o u l d b e d e t e c t e d i n t h e s e ­ v e r a l h i s t o l o g i c s e c t i o n s e x a m i n e d ( F i g . 9

&

12) .

T h e t h i r d v a c c i n a t e d d o g h a d o n l y 1 p o s i t i v e b l o o d c u l t u r e o u t o f 9 , a n d t h e l a s t 3 w e r e n e g a t i v e . T h e C F T , w i t h t h e s a m e b l o o d s a m p l e , g a v e d i s c o r d a n t r e s u l t s i n 2 d i f f e r e n t l a b o r a t o r i e s ( T a b l e 3 ) . T h e o t h e r p a r a s i t o l o g i c a l t e s t s w e r e n e g a t i v e a n d t h e E C G p r e s e n t e d n o a b n o r m a l i t i e s .

N o m a c r o s c o p i c a l t e r a t i o n s w e r e s e e n . T h e h i s t o p h a t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n d e m o n s - t r a t e d t h e p r e s e n c e o f g r a n u l o m a t o u s l e - s i o n s i n t h e m y o c a r d i u m ( F i g s . 5 - 6 ) a n d i n t h e l i v e r ( F . g s . 3 - 4 ) . T h e l e s i o n s w e r e s i m i ­ l a r i n b o t h o r g a n s a n d c o m p o s e d o f h i & t i o - c y t e s e n v o l v e d b y e o s i n o p h i l e s a n d l y m p h o ­ c y t e s . A n o u t l i n e o f g i a n t c e l l a p p e a r e d i n t h e c a r d i a c l e s i o n ( F i g . 6 ) . N o p a r a s i t e s w e r e s e e n a n d w e n e v e r f o u n d a s u c h l e s i o n i n A m e r i c a n t r y p a n o s o m i s i s . I t w a s c a u s e d , p r o b a b l y , b y a n o t h e r p a r a s i t e ( g r a n u l o m a f o r m i n g ) , s t i m u l a t e d b y t h e i m m u n e s u p - p r e s s i o n .

A f t e r a h i g h d o s e o f a p o t e n t A L S a n d s i m u l t a n e o u s v a c c i n a t i o n w i t h a l i v e a v i r u - l e n t s t r a i n o f

T . c r u z i,

a l i t h e 3 d o g s r e m a i n - e d a l i v e w i t h n o r m a l E C G . I n s p i t e o f t h e t r a n s i e n t p o s i t i v e b l o o d c u l t u r e s a n d b l o o d i n o c u l a t i o n s i n t w o d o g s a n d t h e p e r s i s t e n t p o s i t i v e C F T i n o n e o f t h e m a n d o s c i l a t i n g i n a n o t h e r , t h e r e s u l t o f t h e e x p e r i m e n t m u s t b e c o n s i d e r e d a s v e r y g o o d , s i n c e w e k n o w f r o m t h e l i t e r a t u r e t h a t t h e s i m u l t a ­ n e o u s u s e o f l i v e ( v i r u l e n t o r l o w v i r u l e n t ) p a r a s i t e s a n d i m m u n o s u p r e s s i v e a g e n t s i n - d u c e s h i g h p a r a s i t e m i a , s e v e r e d a m a g e a n d f r e q u e n t l y t h e d e a t h o f t h e e x p e r i m e n t a l a n i m a i s ( C a m a r g o e t a l s . G; M e n e z e s 17; B r y - c e s o n e t a l . 5 ; W a l k e r 2 2 ; T h i e r m a n e t a l . 20 a n d V i l c h e s e t a l . 21) .

T h e a g g r a v a t i n g r o l e o f t h e A L S c o u l d b e o b s e r v e d w i t h t h e a n i m a l F r 5 9 A - 4 ( T a ­ b l e 4 , G r a p h I , F i g . 1 0 ) .

V e r y i n t e r e s t i n g w a s t h e c a s e o f t h e d o g F r 5 9 - 2 ( T a b l e 6 ) v a c c i n a t e d a n d s i m u l t a - n e o u s l y t r e a t e d w i t h A L S .

A s e x p e c t e d , t h e i m m u n e r e s p o n s e o f t h i s a n i m a l w a s b l o c k e d a n d w h e n , 3 0 d a y s

l a t e r , h e w a s c h a lle n g e d , b e c a m e i n t e c t e d

a n d d i e d o f a n a c u t e t r y p a n o s o m i a s i s , w i t h

(3)

254

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. VIII — N9 5

n a m e d

F r 5 9 A .

T h e a g e o f t h e a n i m a i s , a t t h e b e g i n i n g o f t h e e x p e r i e n c e w a s 4 m o n f c h s a n d t h e m e a n b o d y w e i g h t 4 ,0 k g .

T h e d o g F r 5 9 - 2 p e r t a i n e d t o a n o t h e r g r o u p a n d w a s m a n t h s o l d , w e i g h t i n g 0 ,9 5 k g a t t h e s t a r t o f t h e e x p e r l m e n t .

C —

A n t i l y m p h o c y t i c s e r u m

( A L S ) — T h e s e r u m w a s p r e p a r e d f o l l o w i n g t h e t e - c h n i q u e d e s c r i b e d b y A b a z a e t a i s . 1, f r o m t h o r a c i c d u c t l y m p h o c y t e s o f d o g s , i n j e c t - e d i n h o r s e . T h e A L S w a s a p u r i f i e l g l o - b u l i n w i t h t h e l e u c o - a g l u t i n a t i o n t i t e r o f 1 / 5 1 2 .

A l i t h e e x a m i n a t i o n s d o n e i n t h e a n i ­ m a i s , p r e v i o u s l y a n d / o r d u r i n g t h e e x p e r i - m e n t , a r e s h o w n i n T a b l e s .

T h e d o g s s u b m i t e d t o t h e A L S t r e a t - m e n t r e c e i v e d , e v e r y t w o d a y s , a n i n t r a - m u s c u l a r i n j e c t i o n o f 2 0 0 . 0 0 0 I U o f P e n i c i l - l i n - P r o c a i n e . * * .

T h e v i r u l e n t i n f e c t i o n s w e r e d o n e b y i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n s o f b l o o d f o r m s o f t h e v i r u l e n t V s t r a i n , o b t a i n e d f r o m m i c e a t t h e 8 th d a y o f i n f e c t i o n .

G r o s s a n d h i s t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n w a s p e r f o r m e d o n s e v e r a l o r g a n s o f a l i t h e a n i ­ m a i s .

R E S U L T S A N D C O M M E N T S

I t c a n b e c o n c l u d e d f r o m t h e o b s e r v a - t i o n o f t h e G r a p h I a n d T a b l e s 1 - 3 t h a t t h e d o g s v a c c i n a t e d w i t h t h e

P F

s t r a i n o f t h e

T r y p a n o s o m a c r u z i

h a d n e i t h e r p o s i t i v e p a - r a s i t o s c o p y n o r m o r t a l i t y d u r i n g t h e n i n e m o n t h s d u r a t i o n o f t h e e x p e r i m e n t .

F r o m t h e 3 v a c c i n a t e d a n d A L S t r e a t e d d o g s , t h e f i r s t p r e s e n t e d a l i ( e x c e p t o n e ) s e r o l o g i c a l a n d p a r a s i t o l o g i c a l t e s t s n e g a - t i v e ( T a b l e 1 ) . T h e a n i m a l ' h a d n o i n f l a - m a t o r y i n f i l t r a t i o n i n t h e m y o c a r d i u m ( F i g . 1 ) , b u t h a d m i c r o a b c e s s i n t h e l i v e r ( F i g . 2 ) , l e s i o n s u r e l y n o t r e l a t e d t o

T r y p a n o s o m a

c r u z i

i n f e c t i o n .

T h e s e c o n d d o g h a s s h o w n 3 p o s i t i v e b l o o d c u l t u r e s , b e i n g t h e l a s t 3 n e g a t i v e . T w o b l o o d i n o c u l a t i o n s i n m i c e w e r e p o s i ­ t i v e t o o , b u t t h e l a s t 4 w e r e n e g a t i v e . A l i t h e x e n o d i a g n o s i s ( 1 0 ) g a v e n e g a t i v e r e - s u l t s . T h e C F T ( G u e r r e i r o

&

M a c h a d o t e s t ) b e c a m e p o s i t i v e s i n c e t h e f i r s t p o s i t i v e h e - m o c u l t u r e a n d r e m a i n e d a s s u c h t i l l t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t ( T a b l e 2 ) .

I n t h e l i v e r , a n i n f i l t r a t i o n o f t h e t r i a l s b y n e u t r o p h i l e s s e e m s d u e t o a n a s c e n d e n t p y o g e n i c i n f e c t i o n .

N o p a r a s i t e s c o u l d b e d e t e c t e d i n t h e s e ­ v e r a l h i s t o l o g i c s e c t i o n s e x a m i n e d ( F i g . 9

& 12).

T h e t h i r d v a c c i n a t e d d o g h a d o n l y 1 p o s i t i v e b l o o d c u l t u r e o u t o f 9 , a n d t h e l a s t 3 w e r e n e g a t i v e . T h e * C F T , w i t h t h e s a m e b l o o d s a m p l e , g a v e d i s c o r d a n t r e s u l t s i n 2 d i f f e r e n t l a b o r a t o r i e s ( T a b l e 3 ) . T h e o t h e r p a r a s i t o l o g i c a l t e s t s w e r e n e g a t i v e a n d t h e E C G p r e s e n t e d n o a b n o r m a l i t i e s .

N o m a c r o s c o p i c a l t e r a t i o n s w e r e s e e n . T h e h i s t o p h a t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n d e m o n s - t r a t e d t h e p r e s e n c e o f g r a n u l o m a t o u s l e - s i o n s i n t h e m y o c a r d i u m ( F i g s . 5 - 6 ) a n d i n t h e l i v e r ( F . g s . 3 - 4 ) . T h e l e s i o n s w e r e s i m i ­ l a r i n b o t h o r g a n s a n d c o m p o s e d o f h i s t i o - c y t e s e n v o l v e d b y e o s i n o p h i l e s a n d l y m p h o ­ c y t e s . A n o u t l i n e o f g i a n t c e l l a p p e a r e d i n t h e c a r d i a c l e s i o n ( F i g . 6 ) . N o p a r a s i t e s w e r e s e e n a n d w e n e v e r f o u n d a s u c h l e s i o n i n A m e r i c a n t r y p a n o s o m i s i s . I t w a s c a u s e d , p r o b a b l y , b y a n o t h e r p a r a s i t e ( g r a n u l o m a f o r m i n g ) , s t i m u l a t e d b y t h e i m m u n e s u p - p r e s s i o n .

A f t e r a h i g h d o s e o f a p o t e n t A L S a n d s i m u l t a n e o u s v a c c i n a t i o n w i t h a l i v e a v i r u - l e n t s t r a i n o f

T . c r u z i,

a l i t h e 3 d o g s r e m a i n ­ e d a l i v e w i t h n o r m a l E C G . I n s p i t e o f t h e t r a n s i e n t p o s i t i v e b l o o d c u l t u r e s a n d b l o o d i n o c u l a t i o n s i n t w o d o g s a n d t h e p e r s i s t e n t p o s i t i v e C F T i n o n e o f t h e m a n d o s c i l a t i n g i n a n o t h e r , t h e r e s u l t o f t h e e x p e r i m e n t m u s t b e c o n s i d e r e d a s v e r y g o o d , s i n c e w e k n o w f r o m t h e l i t e r a t u r e t h a t t h e s i m u l t a ­ n e o u s u s e o f l i v e ( v i r u l e n t o r l o w v i r u l e n t ) p a r a s i t e s a n d i m m u n o s u p r e s s i v e a g e n t s i n - d u c e s h i g h p a r a s i t e m i a , s e v e r e d a m a g e a n d f r e q u e n t l y t h e d e a t h o f t h e e x p e r i m e n t a l a n i m a i s ( C a m a r g o e t a l s . ° ; M e n e z e s 1 7 ; B r y - c e s o n e t a l . 5 ; W a l k e r 2 2 ; T h i e r m a n e t a l.'-'° a n d V i l c h e s e t a l . 21) .

T h e a g g r a v a t i n g r o l e o f t h e A L S c o u l d b e o b s e r v e d w i t h t h e a n i m a l F r 5 9 A - 4 ( T a ­ b l e 4 , G r a p h I , F i g . 1 0 ) .

V e r y i n t e r e s t i n g w a s t h e c a s e o f t h e d o g F r 5 9 - 2 ( T a b l e 6 ) v a c c i n a t e d a n d s i m u l t a - n e o u s l y t r e a t e d w i t h A L S .

A s e x p e c t e d , t h e i m m u n e r e s p o n s e o f t h i s a n i m a l w a s b l o c k e d a n d w h e n , 3 0 d a y s l a t e r , h e w a s c h a l l e n g e d , b e c a m e i n f e c t e d a n d d i e d o f a n a c u t e t r y p a n o s o m i a s i s , w i t h

(4)

Sct.-Out., 1974

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

255

DAYS AFTER INFECTIO N OR VACCINATION

t h e E C G p r e s e n t i n g A V b l o e k ( T a b l e 6 ) , p s e u d o - c y s t s a n d i n f l a m a t o r y r e a c t i o n i n t h e b u n d l e o f H i s ( F i g . 1 1 ) a n d p o s i t i v e p a r a s i t e m i a ( T a b l e 6 ) .

T h e a c t i v i t y o f t h e A L S w a s d e t e c t e d b y t h e e n h a n c e m e n t o f t h e Y i n f e c t i o n a n d a l s o b y t h e h i s t o l o g i c a l t e r a t i o n s o b s e r v e d i n t h e l y m p h o i d o r g a n s o f t h e t r e a t e d d o g s ( F i g s . 7 - 8 ) . T h e h i g h a b s o l u t e c o u n t i n g o f l y m p h o c y t e s i n A L S t r e a t e d a n i m a i s d o e s n o t m e a n w e a k n e s s i n t í h e a c t i v i t y o f t h e s e r u m , s i n c e i t i s w e l l k n o w n t h a t n o c l o s e c o r r e l a t i o n e x i s t s b e t w e e n t h e n u m b e r o f l y m p h o c y t e s , i n t h e p e r i p h e r a l b l o o d , a n d t h e i m m u n o s u p p r e s s i v e e f f e c t o f t h a t a g e n t ( D e n m a n e t a i s . 7 ; L e v e y e t a l . 10 a n d A r g y r i s e t a l . 2 ) . I n t h e l y m p h o y d t i s s u e o f t h e A L S t r e a t e d a n i m a i s a l m o s t a l i t h e s m a l l l y m p h o c y t e s w e r e s u b s t i t u t e d b y l a r g e p r o - l i f e r a t i v e c e l l s ( F i g . 8 ) , a s s e e n b y I w a s a k l e t a i s . 8 a n d W o o d r u f f e t a l . 2 3 .

T o t h o s e i n t e r e s t e d i n t h e m e c h a n i s m o f a c t i o n o f t h e A L S w e r e c o m e n d a r e v i e w o f M i t c h i s o n . 18.

I t s e e m s t h a t , i n t h e p r e s e n t e x p e r i m e n t , b l o o d c u l t u r e w a s t h e b e s t t e c h n i q u e f o r t h e d e t e c t i o n o f

T . c r u z i

i n t h e b l o o d s t r e a m , s u r p a s s i n g t h e b l o o d i n o c u l a t i o n a n d t h e x e n o d i a g n o s i s .

C O N C L U S I O N S

A n t i l y m p h o c y t i c s e r u m w a s a b l e t o e n - . h a n c e s a v i r u l e n t

T . c r u z i

i n f e c t i o n i n d o g s t h a t d i e d 2 1 d a y s a f t e r t h e i n f e c t i o n , b u t w a s u n a b l e t o p r o m o t e e v i d e n t i n f e c t i o n - d i s e a s e i n a n i m a i s i n j e c t e d w i t h a l i v e a v i - r u l e n t s t r a i n ( P F ) o f t h e s a m e p a r a s i t e a n d k i l l e d n i n e m o n t h s l a t e r .

A n i m a i i n j e c t e d w i t h t h e a v i r u l e n t

P F

s t r a i n a n d s i m u l t a n e o u s l y t r e a t e d w i t h A L S d o e s n o t d e v e l o p i m m u n i t y a g a i n s t a f u r - t h e r v i r u l e n t i n f e c t i o n , d y i n g f r o m a n a c u t e t r y p a n o s o m i a s i s .

I

A c k n o w l e ã g m e n t s

— S e v e r a l p e o p l e h e l p e d m e i n d o i n g t h i s w o r k .

(5)

256

Rev. Soe. Bras. Med. Trop.

Vol. VIII — N* 5

R E S U M O

S o r o a n t i l i n f o c i t á r i o A L S a n t i - c ã o m o s t r o u - s e c a p a z d e a g r a v a r u m a i n ­

fe c ç ã o p r o d u z i d a p e la c e p a v i r u l e n t a Y d o

T r y p a n o s o m a c r u z i

( G r a p h I , T a b l e 4 ) .

C ã e s v a c i n a d o s c o m a c e p a a v i r u l e n t a

P F

n ã o d e m o n s t r a r a m , 9 m e s e s a p ó s

o i n í c i o d a e x p e r i ê n c i a , q u a l q u e r s i n a l d e i n f e c ç ã o - d o e n ç a , a p e s a r d a s a l t a s

d o s e s d e s o r o r e c e b id a s ( G r a p h I , T a b l e s 1 - 3 ) .

O s o r o é u m p o d e r o s o i m u n o s u p r e s s o r c a p a z d e i m p e d i r o d e s e n v o l v i m e n t o

d e d e f e s a s i m u n i t á r i a s e m u m a n i m a l i n j e t a d o c o m a c e p a

P F

e s i m u l t a n e a m e n t e

t r a t a d o c o m o m e s m o ( T a b l e 6 ).

R E F E R E N C E S

1 . A B A Z A , H . M . ; N O L A N , B . ; W A T T , J . G . & W O O D R U F F , M . F . A . — E f f e c t o f a n t i l y m p h o c y t i c s e r u m i n t h e s u r - v i v a l o f r e n a l t r a n s p l a n t - i n d o g s . T r a n s p l a n t i o n

4:

6 1 8 - 6 3 2 , 1 9 6 0 .

2 . A R G Y R I S , B . F . & P L O T K I N , D . H . — E f f e c t s o f a n t i m a c r o p h a g e , a n t i t h y m o - c y t e a n d a n t i s p l e e n s e r u m o n t h e i m m u n e r e s p o n s e i n m i c e . C l i n E x p . i m m u n o l . 7 : 5 5 1 - 5 4 6 , 1 9 7 0 .

3 . B R E N E R , Z . & C H I A R I , E . — T h e e f f e c t s o f s e m e i m m u n o s u p p r e s s i v e a g e n t s i n e x p e r i m e n t a l c h r o n i c C h a ­ g a s ^ d i s e a s e . T r a n s . R o y . S o c . T r o p . M e d . & H y g .

65:

6 2 9 - 6 3 6 , 1 9 7 1 .

4 . B R E N E R , Z . — C o n t r i b u i ç ã o a o e s t u d o d a t e r a p ê u t i c a e x p e r i m e n t a l d a D o e n ­ ç a d e C h a g a s T e s e . B e l o H o r i z o n t e . F a c . F a r m . O d o n t . U n i v . M i n a s G e ­ r a i s , 1 9 5 1 .

5 . B R Y C E S O N , A . D . M . & T U R K , J . L . — T h e e f f e c t o f p r o l o n g e d t r e a t m e n t w i t h a n t i l y m p h o c y t e s e r u m o n t h e c o u r s e o f i n f e c t i o n s w i t h B C G a n d L e i s h m a n i a e n r i e t t i i i n g u i n e a p i g . J . P a t h .

104:

1 5 3 - 1 6 5 , 1 9 7 1 .

6 . C A M A R G O , M . E . ; K L O E T Z E L , J . & B A C H E L L A , T . — A n o t e o n t h e h a v e r - t i n g o f l a r g e n u m b e r s o f

T r y p a n o s o m a

c r u z i

b l o o d f o r m s i n a d u l t d o g s . R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o ,

12 :

2 1 7 - 2 2 0 , 1 9 7 0 .

7 . D E N M A N , A . M . ; D E N M A N , E . J . & E M B L T N G , P . H . — C h a n g e s i n t h e l i f e s p a n o f c i r c u l a t i n g s m a l l l y m p h o c y t e s i n m i c e a f t e r t r e a t m e n t w i t h a n t i - l y m - p h o c y t e g l o b u l i n L a n c e t .

1

: 3 2 1 - 3 2 5 , 1 9 6 8 .

8 . I W A S A K I , Y . ; P O R T E R , K . A . ; A M E N D , J . R . ; M A R C H I O R O , T L . ; Z U L K , V . & S T A R Z I N , T . E . — T h e p r e p a r a t i o n a n d t e s t i n g o f h o r s e a n t i - d o g a n d a n t i - h u m a n a n t i l y m p h o i d p l a s m a o r s e r u m a n d i t s p r o t e i n f r a c

-t i o n s . S u r g . G y n e c . & O b s -t .

1 2 4 :

1 - 2 4 , 1 9 6 7 .

9 . K U M A R , R . ; K L I N E , I . K . & A B E L - M A N N , W . H . — • I m m u n o ^ u p p r e f i o n i n e x p e r i m e n t a l a c u t e a n d s u b - a c u t e c h a - g a s i c m y o c a r d i t i s . A m . J . T r o p . M e d . & H y g .

19:

9 3 2 - 9 3 9 , 1 9 7 0 .

1 0 . L E V E Y , R . H . & M E D A W A R , P . B . — S o m e e x p e r l m e n t s o n t h e a c t i o n o f a n ­ t i l y m p h o i d a n t i s e r a . A n n . N . Y o r k A c a d . S e i .

129:

1 6 4 - 1 7 7 , 1 9 6 6 .

1 1 . L U C K I N S , A . G . — T h e e f f e c t s o f a n ­ t i l y m p h o c y t e s e r u m a n d c y c l o o h o s p h a - m i d e o n t h e c o u r s e o f i n f e c t i o n o f

T .

b r u c e i

a n d

T . c o n g o le n s e

i n r a t s a n d m i c e . T r a n s . R o y . S o c T r o p . M e d . & H y g .

63:

4 2 3 - 4 2 . 4 , 1 9 6 9 .

1 2 . M E D A W A R , P . B . — I m m u n o s u p p r e s - s i v e a g e n t s w i t h s p e c i a l r e f e r e n c e t o a n t i l y m p h o c y t i c s e r u m . P r o c . R o y . S o c . L o n d o n . B .

174:

1 5 5 - 1 7 2 , 1 9 6 9

1 3 . M E N E Z E S , H . — A c t i v e i m m u n i z a t i o n o f d o g s w i t h a n o n v i r u l e n t s t r a i n o f

T r y p a n o s o m a c r u z i.

R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o ,

1 1 :

2 5 8 - 2 6 3 , 1 9 6 9 . 1 4 . I — T h e a v i r u l e n t o f t h e c u l t i

-v a t e d

Y

s t r a i n o f

T r y p a n o s o m a c r u z i.

R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o ,

12:

6 4 - 6 8 , 1 9 7 0 .

1 5 . - - - I I — T h e a v i r u l e n c e o f t h e c u l t i v a t e d

Y

s t r a i n o f

T r y p a n o s o m a

c r u z i.

R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o ,

1 2 :

1 2 9 - 1 3 5 , 1 9 7 0 .

1 6 . - - - . I I I — T h e a v i r u l e n c e o f t h e c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f

T r y p a n o s o m a

c r u z i.

R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o ,

1 3:

1 4 - 1 7 , 1 9 7 1 .

1 7 . - - - T h e a v i r u l e n c e o f t h e c u l t i ­ v a t e d

Y

s t r a i n o f

T r y p a n o s o m a c r u z i.

(6)

Set.-Out., 1974

Rcv. Soc. Bras. Med. Trop.

257

1 8 . M I T C H I S O N , N . A . — M e c h a n i s m o f a c t i o n o f a n t i l y m p h o c y t e s e r u m . F e d . P r o c e e d .

2 9:

2 2 2 - 2 2 3 . 1 9 7 0 .

1 9 . S T R O T J T , R . G . — M e t h o d f o r c o n c e n - t r a t i n g h e m o f l a g e l l a t e s J . P a r a s i t .

48:

1 0 0 , 1 9 6 2 .

2 0 . T H I E R M A N , J . E . & C H R I S T E N , R . A . — I n f l u e n c i a d e i a c e t a t o d e c o r t i s o n a y d e l a a u r e o m i c i n a c o m o a g e n t e a g r a - v a d o r d e l a i n f e c t i o n c h a g a s i c a a t e ­ n u a d a . B o i . i n f o r m . p a r a s i t . C h i l 7 : 5 3 ­ 5 5 , 1 9 5 2 .

2 1 . V I L C H E S , A . M . ; K A T Z I N , A . ; G O L - F E R A , H . & S C H M U N I S , G . A . — T h e e f f e c t o f h e t e r o l o g o u s a n t i - t h y m o c y t e

s e r u m u p o n t h e c o u r s e o f i n f e c t i o n w i t h

T r y p a n o s o m a c r u z i

i n m i c e , T r o - p e n m e d . P a r a s i t .

2 4:

2 7 9 - 2 8 4 , 1 9 7 3 . 2 2 . Í W A L K E R P . J . — T h e v i r u l e n c e o f i n -

f e c t i o n s o f

P . b e r g e i

a n d

T . r h o ã e s i e n

-s e

i n a n i m a i s W h o s e i m m u n e r e s p o n s e h a s b e e n i m p a i r e d b y r a d i a t i o n o r a n ­ t i l y m p h o c y t e s e r u m . J . P r o t o z o o l .

15:

3 3 , 1 9 6 8 . S u p l .

(7)

1 — N o r m a l m y c c a r d i u m . A n i m a l F r 5 9 A - 1 ( V a c c i n e + A L S ) . O r l g . 2 5 X 2 — H e p a t i c m i c r o a b c e s s i n t h e d o g F r 5 9 A - Í ( V a c c i n e - f A L S ) . O r i g . 2 5 X

3 — G r a n u l o m a t o u s l e s i o n i n a p o r t a l t r i a l . A n i m a l F r 5 9 A - 3 ( V a c c i n e - t - A L S ) . O r i g . 2 5 X 4 — ■ I d e m . O r i g . 6 4 X

(8)

7 — L y r a p h n o d e o f a n A L S t r e a t e d d o g ( F r 5 9 A - 4 ) s h o w i n g t h e s c a r c i t y o f l y m p h o c y t e s i n t h e s i n u s e s . O r i g . 2 5 X

8 — ■ L y m p h n o d e s i n u s o f t h e s a m e a n i m a l w i t h l a r g e l y m p h o i d c e l l s . O r i g . 1 6 0 X

9 — V e r y s m a l l i n f l a m a t o r y i n f i l t r a t i o n , w i t h o u t p a r a s i t e s , i n t h e m u s c u l a r l a y e r s o f t h e o e s o p h a g u s o f t h e d o g F r 5 9 A - 2 ( V a c c i n e + A L S ) . O r i g . 2 5 X

1 0 — M i o c a r d i u m o f t h e d o g F r 5 9 A - 4 i n f e c t e d w i t h t h e v i r u l e n t Y s t r a i n a n d t r e a t e d w i t h A L S . A l m o s t a l i t h e m y o f i b e r s h a v e p s e u d o - c y s t f » ( - > * ) . N o i n f l a m a t o r y i n f i l t r a t i o n . O r i g . 2 5 X 1 1 — M y o c a r d i u m ( I V S ) o f t h e a n i m a l F r 5 9 - 2 ( V a c c i n e + A L S + I n f e c t i o n ) S h o w i n g p s e u d o - c y s t s

a n d i n f l a m a t i o n a t t h e l e v e i o f t h e H i s b u n d l e . O r i g . 2 5 X

(9)

T A B L E 1

D o g F R 5 9 A - 1 v a c c i n a t e d a n d t r e a t e d w i t h A L S .

D a y

B o d y w t k g

L y m p h . m m 3

V A C . 1 m l .

A L S .

m l . E C G

* X e n o

* * H e m o c . GA

* * * M

B

* * * * I n o c .

* # * * *

P a r a s i t . O b s .

0 3 ,0 3 . 3 8 2 — __

1 4 , 0 2 . 3 5 4 4 , 0

2 3 ,8 2 . 3 5 4

3 3 , 8 ! 3 ,8

4 4 , 0 1 . 4 4 3 IO 8

5 3 , 8 | 3 ,8

7 3 ,9 3 ,9

8 3 . 5 7 0

9 4 ,7 4 , 7 — —

1 1 4 ,7 3 . 1 3 2 4 ,7 N — ■

--1 3 4 ,7 4 ,7

1 4 9 8 0 4 , 7

1 5 4 ,7 2 , 4

1 7 5 ,3 2 , 4

1 9 5 ,4 2 ,7 — - - - —

2 1 5 ,4 2 ,7 N

2 3 2 ,7 — — —

2 4 2 . 4 0 0 *

2 5 5 ,4 2 ,7 —

2 7 5 , 4 2 ,7 —

2 9 5 ,4 2 , 7 — —

3 0 2 . 8 8 4

3 1 6 ,0 3 ,0

3 3 6 ,0 3 ,0 N — - - - — ■ — — —

3 5 6 ,5 3 . 3 0 0 N — - - - — ■— — —

6 3 9 ,0 N •— - - - — — — —

9 3 1 2 ,0 N — - - - — — — —

1 2 3 1 4 ,0 N — ■ -- — — —

1 5 3 1 7 ,0 N — — — — — —

1 8 3 1 6 ,0 N — - - - — — — — K i l l e d

2 4 3 — —

2 7 3 2 0 , 0

t h

* 5 n y m p h e s R . p r o l i x u s , 5 I n s t a r , e a c h t e s t . * * 3 t u b e s W a r r e n m e d i u m , e a c h t e s t .

* * * G u e r r e i r o «Sc M a c h a d o ( C F T ) — Q u a n t i t a t i v e t e s t ( W a l d s w o r t h , M a l t n e r & M a l t n e r ) . A a n d B d l f . l a b s . — P o s i t i v e > 1 , 9 . * * * * 5 m i c e 1 0 g , e a c h t e s t .

(10)

0 1

2

3 4 5 7

8

9

11

1 3 1 4 1 5 1 7 1 9

21

2 3 2 4 2 5 2 7 2 9 3 0 3 1 3 3 3 5 6 3 9 3 1 2 3 1 5 3 1 8 3 2 4 3 2 7 3

* 5 * 3 ■ * e * 5

T A B L E 2

D o g F R 5 9 A - 2 v a c c i n a t e d a n d t r e a t e d w i t h A L S .

L y m p h . 1 m m 3

3 . 9 9 0

2 . 4 3 6

1 . 4 1 4

1.220

1.110

1 . 1 3 4

1 . 8 4 8

2 . 6 1 8

1 . 5 2 6

V A C . 1 m l .

A L S .

m l . E C G

* X e n o

* * H e m o c .

* * * G & M

A B

* • *

*

I n o c .

3 , 5

N — — —

1 0 8

3 . 3

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3 ,8 N 3 ,b 3 ,8 1 .9 1 .9 2 , 2 2,2, 2 , 2

N —

— —

2 , 2 2 , 2 2 , 2

2 .4 2 .5 N N N N N N N — 1 + + + 1 1 1

> 2 ,0 > 2 ,8 > 2 , 8 > 2 ,8 > 2 ,2 > 3 ,0 > 3 ,0

> 3 ,0 > 3 ,0 > 3 ,0 > 3 .0 > 2 ,7 > 2 ,5 > 3 , 0

i i i i + + i t h

y r o l i x u s , 5 i n s t a r , e a c h t e s t . m e d i u m , e a c h t e s t .

[ a c h a d o ( C F T ) — Q u a n t l t a t l v e t e s t ( W a l d s w o r t h , M a l t n e r & M a l t n e r ) . A — B d i f . l a b s . P o s i t i v e > 1 , 9 . t c h t e s t .

(11)

0 1 3

2

4 5 7

8

9

11

1 3 1 4 1 5 1 7 1 9

21

2 3 2 4 2 5 2 7 2 9

3 0

3 1 3 3 3 5 6 3 9 3 1 2 3 1 5 3 1 8 3 2 4 3 2 7 3

* 5 * * 3 * G ' * 5 '* P>

T A B L E 3

D o g F R 5 9 A - 3 v a c c i n a t e d a n d t r e a t e d w i t h A L S .

A L S .

m l . E C G

* X e n o

* * H e m o c .

♦ * * G & M

A B

* * * * I n o c .

N r _

— —

3 , 7

3 , 7

3 , 9 3 , 7

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4 ,0 N -- —

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2 ,0 2 ,0

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2 , 2 N

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2 ,3 2 ,2 2 ,2

2 ,4 1 ,5 _ _ _

2 ,5 N _ _ — —

N _ _ — > 3 , 0

N _ — > 2 ,5 >

%

3 —

N - - - *r > 3 , 0 > 3 ,0

N -- — — 1 ,9 —

N -- — — —

- - - — 1 ,6 —

1 ,9 > 3 , 0

i t a r . e a c h t e s t . t e s t .

(12)

T A B L E 4

D o g F R 5 9 A - 4 i n f e c t e d w i t h t h e v i r u l e n t Y s t r a i n a n d t r e a t e d w i t h A L S .

D a y

B o d y w t k g

L y m p h o -c y t e s m m 3

I N F E C . P / g b w

A L S .

m l . E C G

* X e n o

* * H e m o c .

* * * G & M

A B

* * * * I n o c .

* * * * *

P a r a s i t . O b s .

0 3 , 7 2 . 4 3 0 N

1 5 ,0 5 ,0

2 1 . 4 8 8

3 4 , 8 4 ,8

4 5 ,0 1 . 0 0 8 4 . 0 0 0

5 5 ,0 5 , 0

7 5 ,1 2 . 7 0 0 5 ,1

9 5 ,5 5 ,5

1 1 5 ,7 5 3 4 5 ,7 N — + — — + _

1 2 7 0 p / 5 m m 3

1 3 5 ,7 5 ,7 1 7 5 p / 5 m m 3

1 4 2 . 4 9 2 1 0 5 p / 5 m m 3

1 5 5 ,7 2 ,9 4 2 0 p / 5 m m 3

1 6 5 ,7 2 4 5 0 p / 5 m m 3

1 7 5 ,7 2 ,9 3 9 5 5 p / 5 m m 3

1 8 6 ,2 4 0 2 5 p / 5 m m 3

1 9 6 ,4 3 ,2 4 3 7 5 p / 5 m m 3

2 0 ; 7 7 0 0 p / 5 m m 3

2 1 6 ,4 3 ,2 N — 2 ,5 3 6 7 5 p / 5 m m 3

2 2 2 8 9 0 p / 5 m m 3

2 3 6 , 4 3 , 2 3 8 7 0 p / 5 m m 3

2 4 5 . 6 0 0 2 9 4 0 p / 5 m m 3

2 5 6 ,5 3 ,3 j 4 0 2 5 p / 5 m m 3

2 6 6 , 4 D I E D

t h

* 5 n y m p h e s R . p r o l i x u s , 5 i n s t a r , e a c h t e s t . ★ * 3 t u b & s W â r r c n m G d i u n i e a c h t e s t

* * * G u e r r e i r o & M a c h a d o ( C F T ) — Q u a n t i t a t i v e t e s t ( W a l d s w o r t h , M a l t n e r & M a l t n e r ) . A a n d B d l í . l a b s . — P o s i t i v e > 1 , 9 . * * * * 5 m i c e 1 0 g , e a c h t e s t .

(13)

T A B L E 5

D o g F R 5 9 A - 5 i n f e c t e d w i t h t h e v i r u l e n t Y s t r a i n

D a y

B o d y w t k g

I n f e c .

p / g B W E C G

*

X e n o

* * H e m o c .

* * * G & M

A B

#* * *

I n o c u l a t i o n

$ * $ sjt sj«

P a r a s i t e m i a O b s .

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1 4 , 0 4 . 0 0 0 3 3 ,9

4 4 , 0 !

7 3 ,9 N + + — — —

8 i 1 0 5 p / 5 m m 3

9 j 1 4 0 p / 5 m m A

-1 0

4 ,0

1 4 0 p / 5 m m 3

1 1 2 8 0 p / 5 m m 3

1 2 1 2 2 5 p / 5 m m 3

1 3

4 ,1

1 1 5 5 p / 5 m m 3

1 4 9 8 0 p / 5 m m 3

1 5 I 1 5 0 5 p / 5 m m 3

1 6 2 5 9 0 p / 5 m m 3

1 7

A b

— 2 ,7 : 9 4 5 p / 5 m m 3

1 8 1 5 2 5 p / 5 m m 3

1 9 j 2 5 4 0 p / 5 m m 3

2 0 1 1 9 0 p / 5 m m 3

2 1 4 ,3 í

í !

D I E D

t h

* 5 n y m p h e s R . p r o l i x u s , 5 i n s t a r , e a c h t e s t . * * 3 t u b e s W a r r e n m é d i u m , e a c h t e s t .

* * * G u e r r e i r o & M a c h a d o ( C F T ) — Q u a n t i t a t i v e t e s t ( W a l d s w o r t h , M a l t n e r & M a l t n e r ) . A — B d i f . l a b s . P o s i t i v e 1 , 9 . * * * * 5 m i c e l O g , e a c h t e s t .

* * * * * P a r a s i t e s c o u n t i n g : P i z z i & B r e n e r T e c h n i q u e ( 4 ) .

(14)

D o g F R 5 9 — 2 v a c c i n a t e d , t r e a t e d w i t h A L S a n d i n f e c t e d w i t h v i r u l e n t Y s t r a i n . T A B L E 6

D a y

B o d y w t k g

L y m p h o -c y t e s m m 3

V A C . I N F .

A L S .

m l . E C G

* X e n o

*

* H e m o c .

* * * G & M

A B

# * * * I n o c .

* * * * *

P a r a s i t . O b s .

0 0 , 8 0 2 . 7 6 7 _

1 0 ,9 5 1 ,0

2 2 . 7 8 4 0 ,5

3 1 ,5 8 1 4 1 ,5

4 2 . 9 9 2 1 ,2

5 1,2.

6 1 . 5 1 2 V A C ( A )

7 1 ,5 2 . 7 1 6 2 ,0

8

1 ,3 3 . 0 6 0 2 , 0

9

1 . 6 9 0 2 , 0

I _

1 0 2 . 0 7 0 2 , 0 i

11 3 . 5 2 0 2 , 0 | _

12, 2 . 5 3 8 2 ,0 _ _

1 3 1 . 7 7 0 2 ,0 _ _

1 4 2 . 2 4 0 2 ,0 _ _ _ _

1 5 2 . 6 6 0 2 ,0

--1 6 2 . 3 7 6 2 , 0

O

rt

--1 7 2 . 3 7 6 z , u9 n

1 8 4 . 8 9 6

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1 ,0

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2 1 1 ,5 1 . 9 0 4 N -- — 1 ,9 --

--2 4 1 ,3

2 5 3 . 3 5 0

3 0 1 , 4

3 5 1 ,5 1 . 7 2 8 ! , 5

4 3 1 ,7 I N F ( B ) 2 8 0 p / 5 m m 3

5 0 1 ,8 A V B 1 ,7 2 ,7 4 2 0 p / 5 m m :^

5 6 D I E D

t h

* 5 n y m p h e s R . p r o l i x u s , 5 i n s t a r , e a c h t e s t . * * 3 t u b e s W a r r e n m e d i u m .

* * * G u e r r e i r o & M a c h a d o ( C F T ) — Q u a n t i t a t i v e ( W a l d s w o r t h , M a l t n e r & M a l t n e r ) . A a n d B d i f . l a b s . P o s i t i v e > 1 , 9 .

* * * * 5 m i c e lO g , e a c h t e s t .

* * * * * B e f o r e i n f . S t r o u f s t e c h n i q u e ( 1 9 ) . A f t e r i n f . P i z z i & B r e n e r t e c h n l q u e ( 4 ) .

6

( A ) 2 , 9 X 1 0 p a r a s i t . P F . ( B ) 3 . 0 0 0 p . Y / g r . b o d y w e i g h t . A B V a u r i c l e — v e n t r i c u l a r b l o c k . T w a v e i n v e r s i o n ( V V V ) .

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