R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 3 1 - 3 6 , J a n - M a r , 1 9 8 4
THE ROLE OF SPLEEN MACROPHAGES IN MALARIA:
AN ULTRASTRUCTURAL STUDY
1
Carlos Eduardo Tosta2, Greta Ruiz and Nina W edderburn
A n e l e c t r o n m i c r o s c o p y s t u d y o f t h e s p l e e n f r o m m i c e i n f e c t e d w i t h P l a s m o d i u m b e r g h e i w a s c a r r i e d o u t t o i n v e s t i g a t e t h e t y p e s o f c e l l s i n v o l v e d i n t h e r e m o v a l o f p a r a s i t e s
f r o m t h e b l o o d , a n d t h e m e c h a n i s m s b y w h i c h t h i s o c c u r s . M a c r o p h a g e s , p a r t i c u l a r l y
f r o m t h e r e d p u l p a n d t h e m a r g i n a l z o n e o f t h e s p l e e n , c o n s t i t u t e d t h e m o s t i m p o r t a n t p o p u l a t i o n o f p h a g o c y t i c c e l l s i n t h e s p l e e n . A t t h e h e i g h t o f p a r a s i t a e m i a , m a c r o p h a g e s i n t h e p e r i p h e r y o f t h e w h i t e p u l p , e s p e c i a l l y i n t h e m a n t l e z o n e o f s e c o n d a r y f o l l i c l e s , w e r e
a l s o f o u n d t o p a r t i c i p a t e i n p h a g o c y t o s i s , a l t h o u g h t o ã l i m i t è d e x t e n í. O l i r jv n d if lg S
s u g g e s t t h a t p h a g o c y t o s i s o f f r e e p a r a s i t e s o r p a r a s i t i z e d e r y t h r o c y t e s i n t h e s p l e e n i s a n i m p o r t a n t m e c h a n i s m o f c l e a r a n c e o f p a r a s i t e s f r o m t h e c i r c u l a t i o n . P a r a s i t e s r e m o v e d
f r o m t h e e r y t h r o c y t e s w h e n t h e s e c e l l s c r o s s t h e i n t e r e n d o t h e l i a l s l i t s a r e f u r t h e r p h a g o c y t o s e d b y n e i g h b o u r i n g m a c r o p h a g e s . E v i d e n c e i s p r e s e n t e d s u g g e s t i n g t h a t
s p l e e n m a c r o p h a g e s m a y a c t a g a i n s t t h e p a r a s i t e t h r o u g h a p r o c e s s o f c y t o t o x i c i t y .
K e y w o r d s : M a l a r i a . P l a s m o d i u m b e r g h e i . B A L B / c m i c e . S p l e e n . M a c r o p h a g e s . P h a g o c y t o s i s . C y t o t o x i c i t y .
T h e p r e d o m i n a n t l y i n t r a e r y t h r o c y t i c h a b i t a t o f m a l a r i a l p a r a s i t e s a n d t h e f a c t t h a t g r o s s c h a n g e s in t h e
s p l e n i c m i c r o a r c h i t e c t u r e o c c u r d u r i n g m a l a r i a 8 , m a k e t h e s p l e e n a n i m p o r t a n t o r g a n in w h i c h t o s t u d y
h o s t - p a r a s i t e i n t e r a c t i o n s . A t t h i s s i t e p a r a s i t e s a r e
r e m o v e d f r o m t h e b l o o d , p h a g o c y t o s e d , a n d b o t h in d u c e a n d a r e s u b j e c t e d t o th e e f f e c ts o f t h e im m u n e
r e s p o n s e . A l t h o u g h m a c r o p h a g e s p l a y a c e n t r a l r o l e in a li t h e s e e v e n ts , o u r u n d e r s t a n d i n g o f t h e i r f u n c ti o n s is s ti ll v e r y f r a g m e n t a r y a n d s e v e r a l i m p o r t a n t q u e s t i o n s
r e m a i n u n a n s w e r e d . T h i s s t u d y w a s t h e r e f o r e u n d e r - t a k e n t o i n v e s t i g a t e t h e n a t u r e o f p h a g o c y t i c c e l l s f r o m d i f f e r e n t a r e a s o f t h e s p l e e n d u r i n g m a l a r i a in f e c t i o n ,
a n d t h e m e c h a n i s m s b y w h i c h t h e y r e m o v e p a r a s i t e s
f r o m t h e b l o o d .
M A T E R I A L S A N D M E T H O D S
F o u r m o n t h o l d f e m a l e B A L B / c m i c e w e r e i n f e c t e d i n t r a v e n o u s l y w i t h 1 0 ^ P . b e r g h e i ( A n k a
1. F r o m t h e D e p a r t m e n t o f P a t h o l o g y , R o y a l C o l l e g e o f S u r g e o n s o f E n g l a n d , L o n d o n , E n g l a n d .
2 . P r e s e n t a d d r e s s a n d a d d r e s s f o r c o r r e s p o n d e n c e : L a b o r a t ó r i o d e I m u n o l o g i a C e l u l a r , D e p a r t a m e n t o d e M e d i c i n a C o m p l e m e n t a r , U n i v e r s i d a d e d e B r a s í l i a , 7 0 9 1 0 B r a s í l i a , D F , B r a z i l .
R e c e b i d o p a r a p u b l i c a ç ã o e m 3 0 / 1 1 / 1 9 8 3 .
s t r a i n ) - i n f e c t e d e r y t h r o c y t e s , a n d e i g h t d a y s l a t e r , a n e s t h e t i z e d b y e t h e r 3 0 m i n u t e s a f t e r a n i n j e c t i o n o f 1 5 0 u n i t s o f h e p a r i n i n t r a v e n o u s l y . A p o l y t h e n e
c a n n u l a ( 0 .6 1 m m e x t e r n a i d i a m e t e r ) w a s i n s e r t e d
c a u d a l l y i n t o t h e t h o r a c i c a o r t a a n d it s t ip s e c u r e d a t
th e le v e i o f e m e r g e n c e o f th e c o e l i a c a r t e r y . A f t e r c l a m p i n g t h e d i s t a i a o r t a a n d s e c t i o n i n g t h e p o r t a l
v e i n , a n i m a i s w e r e p e r f u s e d w i t h p h o s p h a t e b u f f e r e d s a l i n e a t 3 7 ° C a t a p r e s s u r e o f 1 6 3 c m o f w a t e r . A f t e r b l e a c h i n g o f t h e li v e r , p e r f u s i o n w a s s w i t c h e d t o th e
f i x a t i o n s o l u t i o n o f 1 . 5 % g l u t a r a l d e h y d e in 0 . 1 M s o d i u m c a c o d y l a t e b u f f e r p H 7 . 3 . S p l e e n s w e r e r e m o v e d a f t e r 15 m i n p e r f u s i o n w i t h t h e f ix a t i v e , s l i c e d in to
s e c t i o n s o f 1 m m s u b m i t t e d t o a f u r t h e r 2 h o u r f ix a t i o n
w i th 4 % b u f f e r e d g l u t a r a l d e h y d e a n d w a s h e d w it h c a c o d y l a t e b u f f e r c o n t a i n i n g 1 0 % s u c r o s e . T i s s u e s
w e r e p o s t f ix e d in v e r o n a l - a c e t a t e b u f f e r e d 1 % o s m iu m t e t r o x i d e , d e h y d r a t e d in e t h a n o l , e m b e d d e d in A r a l d i -
t e a n d s t a i n e d w ith u r a n y l a c e t a t e a n d l e a d c i t r a t e , a n d e x a m i n e d b y e l e c t r o n m i c r o s c o p y .
A r e a s c o m p r i s i n g e a c h m a j o r c e ll c o m p a r t m e n t o f t h e s p l e e n ( r e d p u lp , m a r g i n a l z o n e , p e r i a r t e r i o l a r
l y m p h o c y t e s h e a t h a n d g e r m i n a l c e n t r e ) w e r e s e le c te d in t o l u i d i n e b l u e - s t a i n e d s e c t i o n s , a n d r e l o c a t e d o n th e
s u r f a c e o f t h e c o r r e s p o n d i n g b lo c k . P h a g o c y t i c c e ll s w e r e c h a r a c t e r i z e d b y t h e p r e s e n c e o f in g e s te d p a r a s ite s
o r m a l a r i a l p ig m e n t . T h e l a t t e r w a s r e c o g n i z e d a s o s m i o p h i l i c t r a p e z o i d a l c r y s t a l s , s o m e t i m e s p a r t i a l l y
d i s s o l v e d b y t h e l e a d c i t r a t e u s e d f o r p r o c e s s i n g th e
T o s t a C E , R u i z G , W e d d e r b u m N . T h e r o l e o f s p l e e n m a c r o p h a g e s i n m a l a r i a : a n u l t r a s t r u c t u r a l s t u d y . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 3 1 - 3 6 , J a n - M a r , 1 9 8 4
R E S U L T S
P h a g o c y t i c c e l l s i n t h e s p l e e n
M a c r o p h a g e s f r o m t h e r e d p u l p , m a r g i n a l z o n e a n d s i n u s , m a n t l e z o n e a n d g e r m i n a l c e n t r e , p a r t i c i p a t -
e d t o d i f f e r e n t d e g r e e s in t h e p r o c e s s o f p h a g o c y t o s i s o f m a l a r i a l p a r a s i t e s . R e d p u l p m a c r o p h a g e s a p p e a r e d t o
b e t h e m o s t a c t i v e p o p u l a t i o n o f p h a g o c y t i c c e l l s i n th e s p l e e n . T h e y p o s s e s s e d a n a b u n d a n t c y t o p l a s m , r i c h in m e m b r a n e - b o u n d v a c u o l e s a n d l y s o s o m e s , a n d fre -
q u e n t ly d i s p l a y i n g a r u ff le d p l a s m a m e m b r a n e ( F ig . 1 ).
R e d p u l p m a c r o p h a g e s w e r e u s u a l l y a c t i v e l y e n g a g e d in p h a g o c y t o s i s a n d c o n t a i n e d d e b r i s o f i n g e s t e d
p a r a s i t e s .
F i g u r e 1 - A r e d p u l p m a c r o p h a g e , w h i c h c o n t a i n s d e b r i s o f i n g e s t e d p a r a s i t e s ( a r r o w s ) , i n p h y s i c a l c o n t a c t w i t h s o m e “ p h a g o c y t o s a b l e ” p a r t i c l e s ; i n c l u d i n g p a r a s i t i z e d a n d n o n - p a r a s i t i z e d e r y t h r o c y t e s , a d a m a g e d c e l l a n d t h e e x t r u d e d n u c l e u s o f a n o r m o b l a s t . X 4 , 7 0 0 .
M a r g i n a l z o n e m a c r o p h a g e s r e p r e s e n t e d a n o t h e r i m p o r t a n t p o p u l a t i o n o f s p l e n i c p h a g o c y t i c c e ll s . T h e y
w e r e l a r g e c e l l s u s u a l l y p o s s e s s i n g a n i r r e g u l a r s h a p e
a n d e x h i b i t i n g a n a r r a y o f i n g e s t e d p a r t i c l e s , i n c l u d i n g p a r a s i t e s ( F i g . 2 ) . T h e y w e r e c h a r a c t e r i s t i c a l l y o b -
s e r v e d i n p h y s i c a l c o n t a c t w i t h l y m p h o c y t e s a n d s o m e o f t h e l a t t e r w e r e s e e n t o b e in t h e p r o c e s s o f c e ll d i v i s i o n ( F i g . 3 ) .
T h e m a r g i n a l s in u s w a s a n o t h e r s i t e w h e r e
m a c r o p h a g e s a c t i v e a g a i n s t m a l a r i a w e r e o b s e r v e d . T h e y w e r e u s u a l l y s e e n f r e e in t h e c i r c u l a t i n g b l o o d ,
a n d t h e y a l s o p r e s e n t e d a n a b u n d a n t c y t o p l a s m r i c h in
l y s o s o m e s a n d i n g e s t e d m a t e r i a l , a n d r u f f l e d p l a s m a
m e m b r a n e . O n a n u m b e r o f o c c a s i o n s , m a r g i n a l s in u s m a c r o p h a g e s w e r e f o u n d f ir m ly a t t a c h e d t o e n d o t h e l i a l
F i g u r e 2 - M a r g i n a l z o n e m a c r o p h a g e s h o w i n g a t t a c h e d a n d i n g e s t e d P . b e r g h e i - p a r a s i t i z e d e r y t h r o c y t e s . I t s p l a s m a m e m b r a n e i s c l o s e l y a s s o c i a t e d w i t h t h a t o f a l y m p h o c y t e ( a r r o w h e a d s ) X 4 , 0 0 0 .
T o s t a C E , R u i z G , W e d d e r b u m N . T h e r o l e o f s p l e e n m a c r o p h a g e s i n m a l a r i a : a n u l t r a s t r u c t u r a l s t u d y . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 3 1 - 3 6 , J a n - M a r , 1 9 8 4
c e ll s I in in g t h e s i n u s e s ( F i g . 4 ) . A l t h o u g h n o d e s m o -
s o m e - l ik e s t r u c t u r e w e r e o b s e r v e d , s u g g e s t i n g t h a t t h i s a s s o c i a t i o n w a s t r a n s i e n t , a n e l e c t r o n - d e n s e m a t e r i a l
w a s i n v a r i a b l y p r e s e n t a t t h e s u r f a c e o f c o n t a c t b e t w e e n t h e c e l l s .
F i g u r e 4 - A m a c r o p h a g e ( M ) i n t h e m a r g i n a l s i n u s c o n t a i n - in g d e b r i s o f i n g e s t e d p a r a s i t e s ( a r r o w s ) , f i r m l y a t t a c h e d t o a n e n d o t h e l i a l c e ll . N o t e t h e p r e s e n c e o f e l e c t r o n - d e n s e m a t e r i a l a t t h e s u r f a c e o f c o n t a c t b e t w e e n t h e c e l l s ( d o u b l e a r r o w s ) . A n e r y t h r o c y t e p r e c u r s o r i s a t t a c h e d t o t h e m a c r o p h a g e , w h i l e a p a r a s i t i z e d e r y t h r o c y t e is s e e n n e a r b y . X 3 , 6 0 0 .
G e r m i n a l c e n t r e ( t i n g i b l e b o d y ) m a c r o p h a g e s d i d n o t s e e m t o p h a g o c y t o s e m a l a r i a p a r a s i t e s , a l t h o u g h
t h e y w e r e f o u n d l o a d e d w i t h i n g e s t e d n u c l e a t e d c e lls . M a c r o p h a g e s c o n t a i n i n g p a r a s i t i c m a t e r i a l w e r e o n l y o c c a s i o n a l l y s e e n i n t h e m a n t l e z o n e o f th e w h i t e p u l p .
A l t h o u g h m a c r o p h a g e s w e r e b y f a r t h e m o s t a c t i v e p o p u l a t i o n o f p h a g o c y t i c c e l l s in t h e s p l e e n , o t h e r c e ll s
a l s o a p p e a r e d t o p l a y a r o l e in t h e c l e a r a n c e o f
p a r a s i t e s , i n c l u d i n g r e t i c u l a r c e l l s , i n t e r d i g i t a t i n g c e l l s , e n d o t h e l i a l c e l l s a n d e o s i n o p h i l s . R e t i c u l a r c e l l s w e r e
f o u n d p a r t i c u l a r l y in t h e p e r i p h e r y o f t h e w h i t e p u lp , e i t h e r a l o n g s i d e t h e s i n u s e s , i n c o n t a c t w i t h th e
b a s e m e n t m e m b r a n e o r a s p a r t o f t h e s t r o m a , a n d w e r e f r e q u e n t l y a s s o c i a t e d w i t h d e p o s i t s o f r e t i c u l i n o r c o l l a g e n . T h e y w e r e i d e n t i f i e d b y t h e i r e l e c t r o n - d e n s e n u c l e o p l a s m a n d c y t o p l a s m m a t r i x . S u c h c e l l s s o m e -
t i m e s c o n t a i n e d d e b r i s o f i n g e s t e d p a r a s i t e s . I n t e r d i g i -
t a t i n g c e l l s w e r e o b s e r v e d i n t h e p e r i a r t e r i o l a r l y m p h o - c y t i c s h e a t h s a n d w e r e c h a r a c t e r i z e d b y t h e i r la r g e
s i z e , s t e l l a t e s h a p e , a n d t h e t y p i c a l l y e l e c t r o n l u c e n t c y t o p l a s m p r e s e n t i n g t u b u l o - v e s i c u l a r s t r u c t u r e s .
T h e s e c e l l s c h a r a c t e r i s t i c a l y p o s s e s s e d c y t o p l a s m i c p r o j e c t i o n s i n t e r d i g i t a t i n g w i t h n e i g h b o u r i n g l y m p h o
-c y t e s , a n d w e r e s o m e t i m e s p i e r -c e d b y f in g e r - li k e
p r o t r u s i o n s o f t h e l a t t e r c e l l s ( F i g . 5 ) . S o m e i n t e r d i g i t a t i n g c e l l s d i s p l a y e d i n g e s t e d p a r a s i t e s in a n a d v a n c e d
s t a g e o f d i g e s t i o n . E o s i n o p h i l s a n d s i n u s o i d a l e n d o t h e li a l c e ll s a l s o v e r y o c c a s i o n a l l y c o n t a i n e d p h a g o c y to s e d
p a r a s i t e s .
F i g u r e 5 - I n t e r d i g i t a t i n g c e l l c o n t a i n i n g c e l l d e b r i s a n d m a l a r i a l p i g m e n t . C y t o p l a s m i c p r o j e c t i o n s i n t e r d i g i t a t e w ith n e i g h b o u r i n g l y m p h o c y t e s a n d a f i n g e r l i k e c e l l p r o t r u s i o n ( a r r o w ) p i e r c e s t h e c y t o p l a s m . X 2 , 7 0 0 .
M a c r o p h a g e s a n d t h e r e m o v a l o f p a r a s i t e s
P h a g o c y t o s i s a p p e a r e d t o b e a n i m p o r t a n t f u n c -
t i o n s o f s p l e e n m a c r o p h a g e s . M a l a r i a p a r a s i t e s w e r e r e m o v e d f r o m t h e c i r c u l a t i o n e i t h e r a s p a r a s i t i z e d
e r y t h r o c y t e s i n t o t o o r a s f r e e p a r a s i t e s . T h i s “ c u l l i n g ” f u n c t i o n is p e r f o r m e d c h i e f l y b y r e d p u l p m a c r o p h a g e s
a n d , t o a l e s s e r d e g r e e b y m a r g i n a l z o n e p h a g o c y t i c c e lls . H o w e v e r , p a r a s i t e s m a y a l s o b e r e m o v e d f r o m
e r y t h r o c y t e s d u r i n g t h e p a s s a g e o f t h e s e c e ll s a c r o s s t h e i n t e r e n d o t h e l i a l s l i t s o f t h e s i n u s o i d a l w a ll a n d a r e
p r o b a b l y s u b s e q u e n t l y p h a g o c y t o s e d b y n e a r b y m a c r o p h a g e s ( F i g . 6 ) . T h i s p r o c e s s a p p e a r e d t o t a k e p l a c e m a i n l y i n t h e m a r g i n a l z o n e , b u t a l s o o c c u r r e d in
t h e r e d p u lp .
D u r i n g t h e i n f e c t i o n , p a r a s i t i z e d a n d n o n - p a r a -
s i t i z e d e r y t h r o c y t e s w e r e f o u n d p a c k e d i n t h e m a r g i n a l z o n e m e s h w o r k . T h e y w e r e a p p a r e n t l y in t h e p r o c e s s o f u n d e r g o i n g l y s i s , e n a b l i n g t h e f r e e d p a r a s i t e s t o b e
T o s t a C E , R u i z G , W e d d e r b u m N . T h e r o l e o f s p l e e n m a c r o p h a g e s i n m a l a r i a : a n u l t r a s t r u c t u r a l s t u d y . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 3 1 - 3 6 , J a n - M a r , 1 9 8 4
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F i g u r e 6 - A r etic u lo c y te Crossing a n a p e r t u r e b e t w e e n t w o e n d o t h e l i a l c e l l s , h a l f w a y t o l h e m arginal s i n u s ( M S ) . T h e t a il o f t h e r e t i c u l o c y t e e x h i b i t s an i n c l u s i o n ( a r r o w ) p o s s i b l y a p a r a s i t e . X 5 , 4 0 0 .
( F i g . 7 ) . I n t r a e r y t h r o c y t i c p a r a s i t e s a l s o s h o w e d s ig n s o f s t r u c t u r a l a l t e r a t i o n , p a r t i c u l a r l y w h e n t h e y w e r e in c l o s e p r o x i m i t y t o m a c r o p h a g e s .
D I S C U S S I O N
T h e c r u c i a l r o l e o f t h e s p l e e n f o r r e s o l u t i o n o f m a l a r i a i n f e c t i o n is w e ll e s t a b l i s h e d a n d h a s b e e n t h e s u b j e c t o f r e c e n t r e v i e w s 1® ^ I n d i f f e r e n t m o d e l s ,
s p l e n e c t o m y m a y r e s u l t in a f u l m i n a n t c o u r s e o f th e in f e c ti o n . O u r d a t a a n d th e r e s u lt s f r o m o t h e r w o r k e r s 17
s u g g e s t t h a t s p l e e n m a c r o p h a g e s p e r f o r m a c r i t i c a i r o le
in s p l e e n - d e p e n d e n t p r o t e c t i o n . T h e y c a n a c t a s
p h a g o c y t i c c e lls , a s c y t o t o x i c c e l l s a n d a s c e l l s in v o lv - e d in t h e p r o c e s s o f i n d u c t i o n a n d r e g u l a t i o n o f th e i m m u n e r e s p o n s e a g a i n s t m a l a r i a p a r a s i t e .
P a r a s i t i z e d e r y t h r o c y t e s e n t e r t h e s p l e e n v i a t h e s m a l l b r a n c h e s o f t h e c e n t r a l a r t e r i o l e , m o s t o f w h i c h
t e r m i n a t e in t h e m a r g i n a l z o n e 1 . F r o m t h e m a r g i n a l z o n e a n d m a r g i n a l s i n u s t h e s e c e l l s c i r c u l a t e th r o u g h
W.' "K i
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T o s t a C E , R u i z G , W e d d e r b u r n N . T h e r o l e o f s p l e e n m a c r o p h a g e s i n m a l a r i a : a n u l t r a s t r u c t u r a l s t u d y . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 3 1 - 3 6 , J a n - M a r , 1 9 8 4
th e r e d p u l p , e n t e r i n g t h e s i n u s e s , a n d f í n a l l y l e a v i n g th e o r g a n b y a v e i n . D u r i n g th i s c o u r s e p a r a s i t i z e d
e r y t h r o c y t e s a r e s u b m i t t e d t o t h e “ c u l l i n g ” f u n c t i o n o f t h e m a c r o p h a g e s o f t h e m a r g i n a l z o n e a n d t h e r e d p u l p
c o r d s . A s a r e s u l t , f r e e a n d i n t r a e r y t h r o c y t i c p a r a s i t e s a r e “ r e c o g n i z e d ” b y m a c r o p h a g e s a n d s u b s e q u e n t l y
p h a g o c y t o s e d . T h e r e is e v i d e n c e t h a t th i s f u n c t i o n is s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d a b o u t t h e ti m e a n t i b o d i e s a g a i n s t t h e p a r a s i t e a r e d e t e c t e d 1 2 . T h e o p s o n i z i n g
a c t iv i ty o f a n t i m a l a r i a l a n t ib o d i e s is w e ll e s ta b l is h e d 5 1 1 , a n d t h i s is a t l e a s t i n p a r t d u e t o t h e p r e s e n c e o f
a n t i b o d i e s c y t o p h i l i c f o r m a c r o p h a g e s 1 4 .
T o e n t e r t h e s i n u s e s i n t h e m a r g i n a l z o n e a n d r e d
p u l p , t h e e r y t h r o c y t e s h a v e t o c r o s s t h e s m a l l a p e r t u r e s b e t w e e n t h e e n d o t h e l i a l c e l l s , w h i c h a r e e s t i m a t e d to
b e a p r o x i m a t e l y 0 . 5 - 2 . 5 / x m w i d e 3 . W h i l e n o r m a l e r y t h r o c y t e s a r e a b l e t o s q u e e z e t h r o u g h t h e s e s l i ts ,
p a r a s i t i z e d e r y t h r o c y t e s n o t o n l y t a k e l o n g e r , b u t a l s o
t h e y m a y b e s e v e r e d , t h e p a r t c o n t a i n i n g t h e p a r a s i t e b e i n g t r a p p e d o n t h e c o r d a l s id e a n d e v e n t u a l l y p h a g o c y t o s e d . T h e p a r t o f t h e e r y t h r o c y t e w h i c h b e a r s
n o p a r a s i t e m a y r e a c h t h e s i n u s o i d a l s id e a n d r e t u m to t h e c i r c u l a t i o n e i t h e r a s a s p h e r o c y t e 9 , o r a s a n a t y p i c a l r e t i c u l o c y t e , s h o w i n g e x t e n s i v e s t r u c t u r a l
a l t e r a t i o n s 1 3 , d e p e n d i n g w h e t h e r t h e “ d e p a r a s i t i z e d ”
c e l l w a s a m a t u r e o r a n i m m a t u r e e r y t h r o c y t e .
D u r i n g t h e C ro s s in g t h r o u g h t h e s p l e e n , e r y t h r o c y t e s a r e s u b m i t t e d t o r h e o l o g i c a l a n d m e t a b o l i c
h a z a r d s . D u r i n g t h e c o u r s e o f i n f e c t i o n t h e s e h a z a r d s a r e c o n s i d e r a b l y a c c e n t u a t e d . A s a r e s u l t o f th e
s p l e n o m e g a l y t h e v a s c u l a r p a t h w a y b e c o m e s e x t e n d e d a n d m o r e t o r t u o u s , w h i c h p l a y a n i m p o r t a n t p a r t in t h e g e n e s i s o f s t a s i s . S t a s i s c a u s e s a r e l a t i v e a n o x i a , w h i c h
l e a d s t o a d e c r e a s e in t h e g l u c o s e c o n t e n t o f e r y t h r o - c y t e ! 6 . I t is p o s s i b l e t o s p e c u l a t e t h a t t h i s m a y c a u s e
s o m e l i m i t a t i o n t o t h e g r o w t h o f t h e h i g h l y g l u c o s e -
c o n s u m i n g p l a s m o d i u m . A n o t h e r c o n s e q u e n c e o f t h e lo w e r i n g o f t h e i n t r a e r y t h r o c y t i c c o n t e n t o f g l u c o s e is t h e n e c e s s i t y f o r a n a e r o b i c u t i l i z a t i o n o f g l u c o s e ,
w h i c h l e a d s t o a f a li i n t h e i n t r a s p l e n i c p H , a n d h e n c e a s h i f t in t h e o x y g e n d i s s o c i a t i o n c u r v e o f h a e m o g l o b i n . T h i s r e s u l t s i n a f u r t h e r d e c r e a s e o f o x y g e n t e n s i o n ,
c a u s i n g m a r k e d r i g i d i t y o f t h e e r y t h r o c y t e s ^ , m a k in g t h e m l e s s d e f o r m a b l e a n d , c o n s e q u e n t l y , l e s s a b l e to
c r o s s t h e f e n e s t r a t i o n s o f t h e s i n u s o i d a l w a ll . A s a
r e s u l t e r y t h r o c y t e s - p a r a s i t i z e d , n o n - p a r a s i t i z e d a n d “ d e p a r a s i t i z e d ” - t a k e l o n g e r f o r t h i s C r o s s in g , w h i c h
f u r t h e r a g g r a v a t e t h e a l r e a d y e x i s t i n g s t a s i s a n d c a u s e s s e q u e s t r a t i o n o f t h e c e lls . T h i s p r o v i d e a p o s s i b l e
e x p l a n a t i o n f o r o u r f in d in g o f e r y t h r o c y t e s , p a c k e d in t h e p e r i p h e r y o f t h e w h i t e p u l p , a n d s h o w i n g s ig n s o f p r e - l y s i s . A t t h i s s i t e i n t r a e r y t h r o c y t i c p a r a s i t e s a l s o
d i s p l a y e d a n a r r a y o f u l t r a s t r u c t u r a l a l t e r a t i o n . T h e c l o s e p r o x i m i t y o f t h e s e a l t e r e d c e l l s to m a c r o p h a g e s
s h o w i n g s ig n s o f a c t i v a t i o n s t r o n g l y s u g g e s t s t h a t t h e s e l a t t e r c e l l s m a y b e r e l e a s i n g s o m e t o x i c p r o d u c t s ,
p e r h a p s o x y g e n r a d i c a i s o r t u m o u r n e c r o s i s f a c t o r 4 . I t is i n t e r e s t i n g t o n o t e t h a t a s i m i l a r p i c t u r e w a s a l s o o b s e r v e d in C a l l i t h r i x i n f e c t e d w i t h P . k n o w l e s i ( C E
T o s t a , G R u i z , N W e d d e r b u r n : u n p u b l i s h e d d a t a ) .
O u r f r e q u e n t f i n d i n g o f c l u s t e r s o f ly m p h o c y t e s ,
s o m e in t h e p r o c e s s o f c e l l d i v i s i o n , a r o u n d m a c r o p h a g e s c o n t a i n i n g i n g e s t e d p a r a s i t e s s u g g e s t s t h a t m a r g i
n a l z o n e m a c r o p h a g e s m a y p l a y a r o l e in t h e i n d u c t i o n o f i m m u n e r e s p o n s e t o m a l a r i a p a r a s i t e s . I n d e e d , a
d e g r e e o f r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t h e e s t i m a t e d n u m b e r o f p h a g o c y t o s i n g m a c r o p h a g e s in t h e m a r g i n a l z o n e
a n d l y m p h o c y t e p r o l i f e r a t i o n w a s f o u n d ( d a t a n o t s h o w n ) . A l t h o u g h t h e m e c h a n i s m s u n d e r l y i n g th e p r e s e n t a t i o n o f a n t i g e n b y m a c r o p h a g e s s ti ll r e m a i n to
b e e s t a b l i s h e d 1®, i t h a s b e e n r e c o g n i s e d t h a t th e o c c u r r e n c e o f l y m p h o c y t e c l u s t e r s a r o u n d a n t ig e n
b e a r i n g m a c r o p h a g e s i n c u l t u r e m a y l e a d t o ly m p h o c y te p r o l i f e r a t i o n ^ a n d a c t i v a t i o n ^ .
A l t h o u g h m a c r o p h a g e s a p p e a r t o b e t h e m o s t i m p o r t a n t p o p u l a t i o n o f c e l l s in t h e s p l e e n f o r th e
r e m o v a l o f p a r a s i t e s f r o m t h e c i r c u l a t i o n , o t h e r c e lls m a y a l s o p l a y a p a r t , p a r t i c u l a r l y r e t i c u l a r a n d i n t e r d i
g i t a t i n g c e ll s . H o w e v e r , t h e p h a g o c y t i c a b i l i t y o f th e s e c e l l s is l i m i t e d a n d o n l y m a n i f e s t e d in t h e p r e s e n c e o f
h i g h p a r a s i t a e m i a . T h e i r r e l a t i v e i m p o r t a n c e in r e s i s - t a n c e t o m a l a r i a r e m a i n s t o b e e s t a b l i s h e d .
R E S U M O
O p r e s e n t e e s t u d o o b j e t i v o u i n v e s t i g a r a t r a v é s
d e m i c r o s c o p i a e l e t r ô n i c a a n a t u r e z a d a s c é l u l a s e s p l ê n i c a s e n v o l v i d a s n o p r o c e s s o d e r e t i r a d a d o
P l a s m o d i u m b e r g h e i d o s a n g u e d e c a m u n d o n g o s
B A L B / c i n f e c t a d o s e o s p o s s í v e i s m e c a n i s m o s u t i l i
z a d o s . O s m a c r ó f a g o s , p a r t i c u l a r m e n t e d a p o l p a v e r m e l h a e d a z o n a m a r g i n a l , c o n s t i t u í r a m a m a i s i m p o r t a n t e p o p u l a ç ã o d e c é l u l a s f a g o c i t á r i a s d o b a ç o . N o p i c o d a p a r a s i t e m i a , m a c r ó f a g o s d a p e r i f e
r i a d a p o l p a b r a n c a , p r i n c i p a l m e n t e d a z o n a d o m a n t o d o s f o l í c u l o s s e c u n d á r i o s t a m b é m p a r t i c i p a
r a m d o p r o c e s s o d e f a g o c i t o s e . C é l u l a s r e t i c u l a r e s e i n t e r d i g i t a i s t a m b é m a p r e s e n t a r a m a t i v i d a d e f a g o -c i t á r i a , e m b o r a e m g r a u l i m i t a d o . N o s s a s o b s e r v a ç õ e s
s u g e r e m q u e a f a g o c i t o s e d e p a r a s i t o s l i v r e s e d e
e r i t r ó c i t o s p a r a s i t a d o s c o n s t i t u i o p r i n c i p a l m e c a n i s m o d e d e s t r u i ç ã o i n t r a - e s p l ê n i c a d o p l a s m ó d i o . O s
T o s t a C E , R u i z G , W e d d e r b u r n N . T h e r o l e o f s p l e e n m a c r o p h a g e s i n m a l a r i a : a n u l t r a s t r u c t u r a l s t u d y . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 : 3 1 - 3 6 , J a n - M a r , 1 9 8 4
d o s s i n u s ó i d e s e s ã o e m s e g u i d a f a g o c i t a d o s p o r
m a c r ó f a g o s . S ã o a p r e s e n t a d a s e v i d ê n c i a s d e q u e m a c r ó f a g o s e s p l ê n i c o s p o d e m d e s t r u i r p a r a s i t o s a t r a
v é s d e m e c a n i s m o s d e c i t o t o x i c i d a d e .
P a l a v r a s - c h a v e s : M a l á r i a . P l a s m o d i u m b e r g h e i .
C a m u n d o n g o s B A L B / c . B a ç o . M a c r ó f a g o s . F a g o c i to s e . C i t o t o x i c i d a d e .
A C K N O W L E D G E M E N T S
T h e a u t h o r s a r e g r a t e f u l t o B i d d y A d k i n , S u e E t t r i d g e a n d P a u l o B e z e r r a f o r e x p e r t t e c h n i c a l a s s i s - ta n c e .
R E F E R E N C E S
1. B a s t e n A , M i t c h e l l J . R o l e o f m a c r o p h a g e s in T - c e l l - B c e l l c o l l a b o r a t i o n in a n t i b o d y p r o d u c t i o n . In : N e l s o n D S ( e d ) I m m u n o b i o l o g y o f t h e m a c r o p h a g e . A c a d e m i c P r e s s , N e w Y o r k , p . 4 5 - 9 0 , 1 9 7 6 .
2 . B r a e n d s t r u p O , A n d e r s e n V , W e r d e l i n O . M a c r o p h a g e - l y m p h o c y t e c l u s t e r s i n t h e i m m u n e r e s p o n s e t o s o l u b l e p r o t e i n a n t i g e n in v i tr o . I I I . D N A s y n t h e s i s o f l y m p h o c y - te s in c l u s t e r s . C e l l u l a r l m m u n o l o g y 2 5 : 2 0 7 - 2 1 6 , 1 9 7 6 .
3 . C h e n L T , W e i s s L . T h e r o l e o f t h e s i n u s w a l l i n t h e p a s s a g e o f e r y t h r o c y t e s t h r o u g h t h e s p l e e n . B l o o d 4 1 : 5 2 9 - 5 3 7 , 1 9 7 3 .
4 . C l a r k I A , V i r e l i z i e r J L , C a r s w e l l E A , W o o d P R . T h e p o s s ib l e i m p o r t a n c e o f m a c r o p h a g e - d e r i v e d m e d i a t o r s in a c u t e m a l a r i a . I n f e c t i o n a n d I m m u n i t y 3 2 : 1 0 5 8 - 1 0 6 5 , 1 9 8 1 .
5 . H u n t e r K W J r , W i n k e l s t e i n J A , S i m p s o n T W . S e r u m o p s o n i c a c t i v i t y i n r o d e n t m a l a r i a : f u n c t i o n a l a n d im - m u n o c h e m i c a l c h a r a c t e r i s t i c s in v i t r o . J o u r n a l o f I m - m u n o l o g y 1 2 3 : 2 5 8 2 - 2 5 8 7 , 1 9 7 9 .
6 . L a C e l l e P L . A l t e r a t i o n o f m e m b r a n e d e f o r m a b i l i t y in h e m o l y t i c a n e m i a s . S e m i n a r s in H e m a t o l o g y 6 : 3 5 5 - 3 7 1 , 1 9 7 0 .
7 . M i t c h e l l J , N o s s a l G J V . L o c a l i z a t i o n a n d f a t e o f f o r e i g n a n ti g e n s ifi t is s u e s . In : S a m t e r M ( e d ) I m m u n o l o g i c a l D i s e a s e s , 3 rd e d n , v o l. I , L i t t l e B r o w n , B o s t o n , p . 2 2 - 3 4 , 1 9 7 8 .
8 . M o r a n C J , d e R i v e r a V S , T u r k J L . T h e i m m u n o l o g i c a l s i g n i f ic a n c e o f h i s t o l o g i c a l c h a n g e s in t h e s p l e e n a n d l iv e r
i n m o u s e m a l a r i a . C l i n i c a i a n d E x p e r i m e n t a l I m m u n o l o - g y 1 3 : 4 6 7 - 4 7 8 , 1 9 7 3 .
9 . S c h n i t z e r B , S o d e m a n T , M e a d M L , C o n t a c o s P G . A n u l t r a s t r u c t u r a l s t u d y o f t h e r e d p u l p o f t h e s p l e e n in m a l a r i a . B l o o d 4 1 : 2 0 7 - 2 1 8 , 1 9 7 3 .
1 0 . S t e i n m a n R M , C h e n L L , W i t m e r M D , K a p l a n G , N u s s e n z w e i g M C , A d a m s J C , C o h n Z A . D e n d r i t i c c e l l s a n d m a c r o p h a g e s - c u r r e n t k n o w l e d g e o f t h e i r d i s t i n c t i - v e p r o p e r t i e s a n d f u n c t i o n s . I n : v a n F u r t h R ( e d ) M o n o - n u c l e a r p h a g o c y t e s . F u n c t i o n a l a s p e c t s . M a r t i n u s N ij- h o f f , T h e H a g u e , p . 1 7 8 1 - 1 7 9 9 , 1 9 8 0 .
1 1 . T o s t a C E , W e d d e r b u r n N . I m m u n e p h a g o c y t o s i s o f P l a s m o d i u m y o e l i i - i n f e c t e d e r y t h r o c y t e s b y m a c r o p h a g e s a n d e o s i n o p h i l s . C l i n i c a i a n d E x p e r i m e n t a l I m - m u n o l o g y 4 2 : 1 1 4 - 1 2 0 , 1 9 8 0 .
1 2 . T o s t a C E . T h e f u n c t i o n s o f m a c r o p h a g e s in r o d e n t m a l a r i a . P h D T h e s i s . U n i v e r s i t y o f L o n d o n , L o n d o n ,
1 9 8 1 .
1 3 . T o s t a C E , H e r m a n s M A A . A t y p i c a l r e t i c u l o c y t e s i n r a t s w i t h m a l a r i a a s a p o s s i b l e c o n s e q u e n c e o f t h e p i t t i n g f u n c t i o n o f t h e s p l e e n . A n n a l s o f T r o p i c a l M e d i c i n e a n d P a r a s i t o l o g y 7 5 : 3 6 3 - 3 6 5 , 1 9 8 1 .
1 4 . T o s t a C E . E f f e c t s o f i m m u n e a n d h y p e r i m m u n e s e r u m o n t h e d y n a m i c s o f p h a g o c y t o s i s o f P l a s m o d i u m b e r g h e i - i n f e c t e d e r y t h r o c y t e s . R e v i s t a d o I n s t i t u t o d e M e d i c i n a T r o p i c a l d e S ã o P a u l o 2 4 : 1 4 0 - 1 4 7 , 1 9 8 2 .
1 5 . T o s t a C E , R u i z G , W e d d e r b u r n N . E f f e c t s o f l e t h a l a n d n o n - l e t h a l m a l a r i a o n t h e m o n o n u c l e a r p h a g o c y t e s y s te m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 6 : 5 8 - 6 7 , 1 9 8 3 .
1 6 . W e i s s L P , T a v a s s o l i M . A n a t o m i c a l h a z a r d s t o th e p a s s a g e o f e r y t h r o c y t e s t h r o u g h t h e s p l e e n . S e m i n a r s in H e m a t o l o g y 7 : 3 7 2 - 3 8 0 , 1 9 7 0 .
1 7 . W y l e r D J . C e l l u l a r a s p e c t s o f i m m u n o r e g u l a t i o n in m a l a r i a . B u l l e t i n o f t h e W o r l d H e a l t h O r g a n i z a t i o n 5 7 ( s u p p l . 1 ): 2 3 9 - 2 4 3 , 1 9 7 9 .
1 8 . W y l e r D J , O s t e r C N , Q u i n n T C . T h e r o l e o f t h e s p l e e n in m a l a r i a i n f e c t i o n s . In : T h e r o l e o f t h e s p l e e n i n t h e i m m u n o l o g y o f p a r a s i t i c d i s e a s e s . W . H . O . T r o p i c a l D i s e a s e s R e s e a r c h S e r i e s n ° 1. S c h w a b e , B a s e l, p . 1 8 3 - 2 0 4 , 1 9 7 9 .
