CryoAFM

Les objets biologiques étudiés en AFM décrits ci-dessus sont des objets mous, qui peuvent être assez facilement déformés par la pointe AFM, même dans des conditions d’imagerie suffisamment douces pour éviter de les endommager. Cette déformabilité contribue à limiter la résolution obtenue. L’imagerie à température cryogénique (typiquement, à moins de 100 K) est une piste explorée depuis environ une dizaine d’années pour atteindre une résolution supérieure, grâce au durcissement des objets à ces températures, et à la diminution considérable de l’agitation thermique. Cette approche a déjà été réalisée sur quelques systèmes (par exemple immunoglobulines, myosine, ADN, virus, globules rouges, revus dans (40)) mais n’est pas simple à mettre en œuvre tant sur le plan technique que sur le plan de la préparation des échantillons, et reste à ce jour très peu utilisée.

Conclusion.

L’AFM est un outil qui présente plusieurs modes de fonctionnement. Ceux-ci permettent d’étudier des objets biologiques comme les macromolécules, les membranes ou les cellules par différentes approches (mesure de forces, imagerie topographique,…). En imagerie, le mode contact intermittent est le plus performant pour limiter les forces exercées par la pointe AFM sur l’objet, et présente donc un intérêt particulier. Le potentiel de l’AFM notamment pour l’observation en milieu liquide a déjà stimulé de nombreux travaux en biologie sur les différents types d’objets. Les principaux progrès techniques nécessaires

a b

concernent le contrôle fin de l’interaction pointe-échantillon et l’augmentation de la fréquence d’acquisition des images. Pour mieux répondre aux problématiques biologiques abordées ce sont aussi des progrès méthodologiques qui doivent être accomplis. L’obtention et la validation d’informations biologiques nouvelles à partir des données AFM requièrent de dépasser les approches encore souvent empiriques par une analyse et une optimisation rigoureuses des paramètres de préparation et d’observation des échantillons.

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