Rev. Soc. Bras. Med. Trop. vol.6 número4

THE VACCINATION OF HUMAN BEINGS WITH LIVE A VIRULENT

VACCINE OF

T R Y P A N O S O M A C R U Z I . A

TWO-YEAR FOLLOW-UP

OF THE FIRST TWO CASES.

H u m b e r t o M e n e z e s

A t w o y e a r f o l l o w - u p o f t h e f i r s t t w o v o l u n t e e r s v a c c i n a t e d i c i t h t h e l i v e

P F T r y p a n o s o m a c r u z i s t r a i n d e m o n s t r a t e d t h a t t h e p a r a s i t o l o g i c a l a n d c l i n i c a l

t e s t w e r e n e g a t i v e d u r i n g a n d a f t e r t h a t p e r i o d .

O f t h e s e r o l o g i c a l t e s t s e m p l o y e d , t h e C F T p r e s e n t e d , i n o n l y o n e c a s e ,

c o n f l i c t i n g r e s u l t s , p a r t i c u l a r y i n o n e l a b o r a t o r y a n d a m o n g d i f f e r e n t l a b o r a ­

t o r i e s . H o w e v e r n e g a t i v e r e s u l t s w e r e g r e a t e r t h a n a l l d o u b t f u l a n d p o s i t i v e o n e

c o m b i n e d .

T h e I F T w e r e n e g a t i v e i n b o t h p a t i e n t s .

S o m e c o m m e n t s a r e m a d e a b o u t t h e s e n s i b i l i t y a n d s p e c i f i c i t y o f t h e s e t e s t s .

T h e a u t h o r c o n c l u d e d t h a t t h e v a c c i n e , i n s p i t e o f t h e v e r y l a r g e d o s e u s e d

i n t h e s e c a s e s , s e e m s t o b e s a f e t o r h u m a n b e i n g s .

I N T R O D U C T I O N

T h e p r o b a b l e m u t a n t o f t h e T r y p a n o ­

s o m a c r u z i Y s t r a i n t h a t h a s b e e n d e ­ m o n s t r a t e d t o b e a v i r u l e n t f o r l a b o r a t o r y a n i m a l s ( M e n e z e s , 10- n . 12. 14- S a n t o s , 16 a n d H u n g e r e r ß ) s e e m s t o b e a v i r u l e n t f o r h u ­ m a n b e i n g s a s w e l l .

I n a p r e l i m i n a r y r e p o r t ( M e n e z e s 13) t h e

f o l l o w - u p s t u d i e s o n t h e 2 v o l u n t e e r s ,

w i t h i n t h e f i r s t 3 m o n t h s a f t e r v a c c i n a t ­

i o n , a r e r e f e r r e d t o .

I n t h i s p a p e r w e w ill p r e s e n t t h e 2 y e a r p o s t - v a c c i n a t i o n o b s e r v a t i o n s .

M A T E R I A L A N D M E T H O D S

T w o m a l e v o l u n t e e r s , o n e 52 y e a r s o ld

( P a t i e n t 1) a n d t h e o t h e r 32 y e a r s o ld

( P a t i e n t 2) w e r e v a c c i n a t e d w i t h tw o d o ­

s e s o f t h e liv e T . c r u z i v a c c i n e , P F s t r a i n .

T h e t w o d o s e s w e r e s e p a r a t e d b y a f o r t y

d a y i n t e r v a l . T h e f i r s t h a d a l m o s t 5 x l 0 4

p a r a s i t e s a n d t h e s e c o n d 3x107 f l a g e l l a t e s ,

a n d b o t h w e r e i n j e c t e d s u b c u t a n e o u s l y

( M e n e z e s 13) .

B e f o r e v a c c i n a t i o n , a n d 8, 15 a n d 30 d a y s a f t e r e a c h v a c c i n e , a n d a l m o s t o n c e a m o n t h t h e r e a f t e r , f o r tw o y e a r s , E C G , p e r i p h e r a l b l o o d - s e a r c h f o r p a r a s i t e s , b lo o d c u l t u r e f o r t r y p a n o s o m e s , C F T ( G u e r r e i r o & M a c h a d o t e s t ) , I m u n n o f l u o r e s c e n c e T e s t

( I F T ) f o r T . c r u z i , X e n o d i a g n o s i s a n d

b lo o d i n n o c u l a t i o n s i n y o u n g m i c e w e r e c a r r i e d o u t ( T a b l e s 1 & 2) .

O t h e r t e s t s w e r e p e r f o r m e d d u r i n g t h e f i r s t 3 m o n t h s , a s a l r e a d y m e n t i o n e d ( M e ­ n e z e s 13) .

H e m o g r a m a n d b l o o d s e d i m e n t a t i o n

r a t e ( B S R ) t e s t s w e r e d o n e 8, 15 a n d 30

* X JS P . D e p a r t a m e n t o d e G e n é t i c a e M a t e m á t i c a a p l i c a d a à B i o l o g i a . F a c u l d a d e d e M e d i c i n a . R i b e i r ã o P r e t o . S . P a u l o . B r a s i l .

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Kev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. VI — P 4

d a y s a f t e r e a c h v a c c i n a t i o n a n d e v e r y

m o n t h f o r 12 m o n t h s , a n d a f t e r t h e s e c o n d y e a r o f o b s e r v a t i o n .

P a t i e n t 1 h a d x e n o d i a g n c s i s i n t h e 5 '11, 6th a n d 7th m o n t h s b y t h e S c h e n o n e t e c h ­ n i q u e ( S c h e n o n e e t a l.9 ) .

A t t h e s a m e t i m e , a b l o o d c u l t u r e w a s p e r f o r m e d w i t h 14 t e s t t u b e s o f W a r r e n m e d i u m , e a c h d a y , f o r s u c c e s s i v e 3 d a y p e r i o d s , o n c e a m o n t h f o r 3 s u c c e s s i v e m o n t h s , f o l l o w i n g t h e t e c h n i q u e d e s c r i b e d b y A l b u q u e r q u e e t a l . i .

T h e t r i a t o m i n a e b u g s u s e d f o r t h e

S c h e n o n e ’s x e n o d i a g n o s i s w e r e T r i a t o m a

i n t e s t a n s a n d t h o s e e m p l o y e d i n t h e o t h e r

t e s t s w e r e R h o d n i u s p r o l i x u s , s a f e w h e n

s p e c i f i c a l l y r e p o r t e d ( T a b l e l ) .

T h e i n o c u l a t i o n s i n v e r y y o u n g m ic e w e r e o f c e n t r i f u g e d b l o o d s e r u m , f o l l o w i n g t h e S t r o u t t e c h n i q u e ( S t r o u t i s ) .

T h e s e r o l o g i c a l t e s t s , u n t i l t h e f o u r t h m o n t h , w e r e m a d e i n t h r e e d i f f e r e n t l a ­ b o r a t o r i e s a n d i n f o u r l a b o r a t o r i e s t h e r e ­ a f t e r ( T a b l e s 1 & 2) .

S o m e t i m e s tw o o r m o r e C F T w e r e c a r ­ r i e d o u t i n t h e s a m e l a b o r a t o r y w i t h t h e s a m e b l o o d s a m p l e .

R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N

P a t i e n t 1, b e s i d e s a l l n e g a t i v e p a r a s i t o ­ l o g i c a l t e s t s , p r e s e n t e d f e w p o s i t i v e C F T , a t d i f f e r e n t t i m e s , i n t w o o f t h e f o u r l a ­

b o r a t o r i e s w h e r e t h e m a j o r i t y o f t h e s e

t e s t s w e r e p e r f o r m e d .

C o n s i d e r i n g t h e t o t a l n u m b e r o f C F T i n a l l t h e l a b o r a t o r i e s , t h e p e r c e n t a g e o f p o s i t i v e r e s u l t s w a s 4 ,9 % , t h a t o f d o u b t f u l , 18,6% a n d f i n a l l y , 7 6,5% n e g a t i v e r e s u l t s .

I t m u s t b e e m p h a s i z e d t h a t w i t h a l ­ m o s t a l l p o s i t i v e a n d d o u b t f u l r e s u l t s , w h e n t h e t e s t w a s r e p e a t e d , a s a b l i n d t e s t , i n t h e s a m e l a b o r a t o r y , w i t h t h e s a m e b lo o d s a m p l e , t h e r e s u l t s w e r e d i v e r g e n t ( T a b l e

1) .

S p e c i a l m e n t i o n m u s t b e m a d e o f t h e C F T i n t h e 4 th m o n t h o f t h e s e c o n d v a c ­ c i n a t i o n . L a b o r a t o r y 1 p r e s e n t e d , w i t h t h e s a m e b lo o d s a m p l e , t w o p o s i t i v e r e s u l t s , o n e d o u b t f u l a n d t w o n e g a t i v e , w h i l e t h e s a m e b lo o d s e r u m g a v e n e g a t i v e t e s t s i n t h e o t h e r t h r e e l a b o r a t o r i e s , e v e n a f t e r r e ­

p e t i t i o n ( T a b l e 1) .

A n o t h e r s u r p r i s i n g a n d u n e x p e c t e d r e ­

s u l t w a s o b t a i n e d i n l a b o r a t o r y 2 o n t h e 2 3 th m o n t h o f v a c c i n a t i o n , w h e n t w o t e s t s g a v e n e g a t i v e r e s u l t s a n d a t h i r d w i t h t h e s a m e b lo o d , w a s p o s i t i v e s e v e r a l d a y s l a t e r .

I n c o n s e q u e n c e o f t h i s d i s c r e p a n c y , i n t h e t e s t r e a l i z e d a t t h e e n d o f t h e s e c o n d y e a r o f v a c c i n a t i o n , w e u s e d a p o s i t i v e a n d a n e g a t i v e c o n t r o l s e r u m .

T h e f i r s t o n e w a s a p o o l o f s e r a o f p a ­ t i e n t s w i t h s e v e r a l p o s i t i v e C F T , a n d t h e

s e c o n d t h e b lo o d s e r u m o f a y o u n g m a n w h o a l w a y s l i v e d i n t h e c i t y , n e v e r h a d

c o n t a c t w i t h t r i a t o m i n a e b u g s , a n d h a d t w o p r e v i o u s n e g a t i v e C F T .

A s c a n b e s e e n i n T a b l e 1, t h e r e s u l t s o f t h e s e c o n t r o l s w e r e c o n c o r d a n t i n 3 d i f ­ f e r e n t l a b o r a t o r i e s b u t g a v e b o t h p o s i t i v e r e s u l t s i n l a b o r a t o r y 2.

O v e r 19 o c c a s i o n s t h a t t h e C F T w a s p e r f o r m e d o n P a t i e n t 1, o n l y i n 9 ( 4 7 % ) w h e r e t h e r e 100%; a g r e e m e n t ( d o u b t f u l a n d n e g a t i v e r e s u l t s ) a m o n g t h e d i f f e r e n t l a ­ b o r a t o r i e s .

T h e I F T , e x c e p t f o r t w o p o s i t i v e r e s u l t s ( a t v e r y lo w t i t e r s ) , e a c h o n e i n a d i f ­

f e r e n t p e r i o d s , w e r e n e g a t i v e i n 94,3% o f t h e t i m e .

P a t i e n t 2 h a d o n l y 2 d o u b t f u l C F T i n o n e l a b o r a t o r y , r e p r e s e n t i n g 2 ,6 % o f t h e t o t a l t e s t s r e a l i z e d , o r 97,4%. n e g a t i v e r e ­

s u l t s . T h e I F T i n t h e b l o o d o f t h e s a m e

p a t i e n t g a v e 100% n e g a t i v e r e s u l t s ( T a ­

b l e 2 ) .

A ll t h e E C G w e r e w i t h i n t h e n o r m a l l i m i t s i n b o t h c a s e s .

T h e H e m o g r a m a n d B S R p r e s e n t e d n o a b n o r m a l i t i e s .

F i n a l l y , n o c l i n i c a l o r l a b o r a t o r y d a t a d e m o n s t r a t e d a n y s i g n o f d i s e a s e d u r i n g t h e w h o l e t w o - y e a r p e r i o d . B o t h v o l u n ­ t e e r s a r e l i v i n g a n o r m a l l i f e i n a p p a r e n t g o o d h e a l t h

T h e s e r o l o g i c a l t e s t s o f P a t i e n t 1 r a i s e s e m e d i s c u s s i o n a b o u t t h e s p e c i f i c i t y a n d

s e n s i b i l i t y o f t h e C F T a n d I F T i n t h e d i a g ­ n o s i s o f C h a g a s ’ d i s e a s e .

I t is n o t o u r i n t e n t i o n t o g o i n t o t h i s

c o n t r o v e r s i a l f i e l d . L e t u s o n l y q u o t e t h e

o p i n i o n s o f s o m e e x p e r t s o n t h e s u b j e c t .

T h e I F T is c o n s i d e r e d a s t h e m o s t s e n ­ s i t i v e o f t h e s t a n d a r d t e s t f o r s e r o l o g i c a l d i a g n o s i s o f p a r a s i t i c d i s e a s e s ( F i f e J r . 5 ) , p a r t i c u l a r l y i n C h a g a s ’ d i s e a s e w h e r e i t g iv e s e a r l i e r p o s i t i v e r e s u l t s a n d s h o w s

t h e g r e a t e s t s e n s i b i l i t y (1 0 0 % ) a f t e r t h e

Julho-Agosto, 1972

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

179

I n P a t i e n t 1, d u r i n g t h e w h o l e 2 y e a r s , o n l y 2 o u t o f 35 I F T g a v e p o s i t i v e r e s u l t s , b u t I n b o t h , t h e s e r u m d i l u t i o n w a s t o o lo w t o b e c o n s i d e r e d o f c l i n i c a l v a l u e .

L a b o r a t o r y 3 u s e d t h e m e t h a n o l i c a n t i ­ g e n i n t h e C F T ; f o l l o w i n g A l m e i d a e t a l . 2 i t is w i t h t h i s a n t i g e n t h a t t h e h i g h e r t i ­ t e r s a r e o b s e r v e d i n t h e p o s i t i v e c a s e s .

T h e C F T o f P a t i e n t 1 g a v e o n l y 3 d o u ­ b t f u l r e s u l t s i n t h a t l a b o r a t o r y a f t e r t h e 18th m o n t h o f t h e s e c o n d v a c c i n a t i o n , a n d a l l t h e I F T w e r e n e g a t i v e .

I n c h r o n i c C h a g a s d i s e a s e , w h e n s e ­

v e r a l C F T a r e r e a l i z e d , t h e t e s t s s h o w

c o n s i s t e n t p o s i t i v e r e s u l t s w i t h o n l y f o r ­ t u i t o u s a c c e n t u a t e d t i t e r v a r i a t i o n s a n d t r a n s i t o r y n e g a t i v e r e s u l t s ( R a s s i e t a l . 15) .

I n P a t i e n t 1, t h e t e s t s s h o w c o n s i s t e n t n e g a t i v e r e s u l t s w i t h o n l y f o u r p o s i t i v e c a s e s , w i t h t h e d i s c r e p a n c i e s a l r e a d y m e n t ­

io n e d .

T h e p a r a s i t o l o g i c a l t e s t s , e v e n s o p h i s ­ t i c a t e d o n e s a s s u c h a s S c h e n o n e ’s x e n o - d i a g n o s i s , 1? b lo o d c u l t u r e b y t h e A l b u q u e r ­ q u e e t a l . 1 t e c h n i q u e a n d s e r u m i n o c u l a t ­ i o n i n y o u n g m i c e ( S t r o u t ’s t e c h n i q u e i s ;

w e r e a l w a y s n e g a t i v e i n b o t h p a t i e n t s d u r ­ i n g t h e t w o - y e a r p e r i o d o f o b s e r v a t i o n .

I t s e e m s t o u s t h a t t h e P F s t r a i n is a v i -

r u l e n t f o r m a n a s w e ll a s f o r l a b o r a t o r y a n i m a l s .

A C K N O W L E D G M E N T S

T o D r s . F a b i o V ic c h i, O t a v i o B a r a c h i n i ,

R o s a R i b e i r o , S i d n e y M o r a i s R e g o , R e n a t o R i b e i r o d o s S a n t o s a n d t o t h e L a b s . C l i n i c s

H o s p i t a l , P a r a s i t o l o g y a n d I m m u n o l o g y o f t h e F a c u l d a d e d e M e d i c i n a d e R i b e i r ã o

P r e t o . T h e A u t h o r w i s h e s t o e x p r e s s h i s

d e e p s e n t i m e n t o f g r a t i t u d e t o t h e t e c h ­ n i c i a n M r . H e l i o R . R o c h a b y h i s d i r e c t

p a r t i c i p a t i o n i n t h i s e x p e r i m e n t .

R E S U M O

O a u t o r a p r e s e n t a o s e g u i m e n t o d e d o i s c a s o s h u m a n o s v a c i n a d o s c o m v a ­

c i n a v i v a a v i r u l e n t a d e T r y p a n o s o m a c r u z i .

O s r e s u l t a d o s d o s e x a m e s d i t o s e s p e c í f i c o s e t a m b é m a l g u n s i n e s p e c í f i c o s

d e m o n s t r a r a m q u e n ã o h o u v e , n o p e r í o d o d e d o i s a n o s, q u a l q u e r s i n a l d e i n f e c

-ç ã o - d o e n -ç a ■

E m u m d o s v o l u n t á r i o s h o u v e a c e n t u a d a d i s c r e p â n c i a n o s r e s u l t a d o s d a

r e a ç ã o d e G u e r r e i r o & M a c h a d o , n ã c s ó e m u m m e s m o l a b o r a t ó r i o , c o m a m e s ­

m a a m o s t r a d e s o r o , m a s t a m b é m e n t r e d i f e r e n t e s l a b o r a t ó r i o s , n a m e s m a e e m .

d i f e r e n t e s o p o r t u n i d a d e s .

A p e s a r d e t o d a e s s a c o n f u s ã o , o s r e s u l t a d o s P O S I T I V O S n ã o f o r a m a l é m

d e 4 , 9 % ( e m d o i s l a b o r a t ó r i o s a p e n a s ) , o s D U V I D O S O S n ã o u l t r a p a s s a r a m 1 8 , 6 %

e f i n a l m e n t e o s c a s o s N E G A T I V O S a t i n g i r a m 7 6 % d e t o d a s e s s a s r e a ç õ e s .

O s t e s t e s d e i m u n o f l u o r e s c ê n c i a p a r a T . c r u z i d e r a m 9 4 , 3 % d e r e s u l t a d o s

N E G A T I V O S n o P a c i e n t e 1 e 1 0 0 % n o P a c i e n t e 2 .

H e m o c u l t u r a s , x e n o d i a g n ó s t i c o s e s u b - i n o c u l a ç ã o e m c a m u n d o n g o s j o v e n s

f o r a m s e m p r e n e g a t i v o s e m a m b o s o s p a c i e n t e s .

C o n c l u e o a u t o r q u e a c e p a P F p a r e c e s e r a v i r u l e n t a p a r a o h o m e m t a l

c o m o e l e e o u t r o s ( S a n t o s 16 e H u n g e r e r ^ j j á d e m o n s t r a r a m s e r p a r a a n i m a i s

d e l a b o r a t ó r i o .

R E F E R E N C E S

1 . A L B U Q U E R Q U E , R . D . R . , F E R N A N ­

D E S , L . A . R . ; F U N A Y A M A , G . K „ F E R R I O L I , F ° F . & S I Q U E I R A , A . F . — H e m o c u l t u r a s s e r i a d a s c o m o

180

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. VI — N? 4

2 . A L M E ID A , J . O . ; P R A T A , A . ; A R -

J O N A , A . C , & A R A N T E S , J B . —

P r e s e n ç a d e i n i b i d o r e s p e c í f i c o d a f i ­ x a ç ã o d o c o m p l e m e n t o e m a n t í g e n o s

p r e p a r a d o s d e T r y p c m o s o m a c r u z i .

B o i, O f. S a n i t . P a n a m . 6 6 : 3 0 4 -3 1 6 ,

1969

3 . A R A Ú J O , F . G . & B A T I S T A , S . M . — O b s e r v a ç õ e s s o b r e o s t e s t e s d e f i x a ­ ç ã o d e c o m p l e m e n t o e i m u n o f l u o r e s - e é n e i a i n d i r e t a e m D o e n ç a d e C h a g a s .

R e v . I n s t . M e d . T r o p . S . P a u l o , 1 1 :

1C 4-110, 1969.

4 . C E R I S O L A , J . A . — I m m u n o d i a g n o s i s

o f C h a g a s ’ d i s e a s e : H a e m a g g l u t i n a t -

i o n a n d i m m u n o f l u o r e s c e n c e t e s t s .

J . P a r a s i t . 5 6 : 4 0 9 -4 1 0 , 1970, S e c . I I .

P a r t . 2.

5 . F I F E , J r . , E . — A d v e n c e s i n m e t h o ­ d o lo g y f o r i m m u n o d i a g n o s i s o f P a r a ­

s i t i c D i s e a s e s . E x p . P a r a s i t . 3 0 : 13 2

-163, 1971.

6 . H U N G E R E R , D . — I m m u n o l o g y o f

e x p e r i m e n t a l C h a g a s d i s e a s e . C o n f e ­ r e n c e a t t h e D e p a r t a m e n t o d e M e d i ­ c i n a P r e v e n t i v a . F a c . M e d . U n i v . S . P a u lo , 11 F e b r u a r y , 1972.

7 . M E N E Z E S , H . — P r o t e c t i v e e f f e c t o f

a n a v i r u l e n t ( c u l t i v a t e d ) s t r a i n o f

T r y p a n o s o m a c r u z i a g a i n s t e x p e r i ­ m e n t a l i n f e c t i o n i n m i c e . R e v . I n s t .

M e d . t r o p . S . P a u l o , 1 0 : 1 -4 , 1968.

8 . ---A c tiv e i m m u n i z a t i o n o f d o g s

w i t h a n o n - v i r u l e n t s t r a i n o f T r y p a ­

n o s o m a c r u z i . R e v . I n s t . M e d . t r o p .

S , P a u l o , 1 1 : 2 5 8 -2 6 3 , 1969.

9 . --- — I m u n i z a ç ã o a t i v a d e m a c a c o s

c e b u s c o m v a c i n a v i v a a v i r u l e n t a d e T . c r u z i . A p r e s e n t a d o , e m p a r t e , p e ­ r a n t e a X V I I A s s e m b l é i a M é d i c a d o H . S . E . — R io — G B . 23 d e O u t u b r o , 1969.

1 0 . I — T h e a v i r u l e n c e o f t h e

c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f T . c r u z i . R e v .

I n s t . M e d . t r o p . S . P a u l o . 1 2 : 6 4 -6 8 ,

1970.

1 1 . I I — T h e a v i r u l e n c e o f t h e

c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f T . c r u z i . R e v .

I n s t . M e d . t r o p . S . P a u l o . 1 2 : 1 2 9 -1 3 5 ,

1970.

1 2 . I I I — T h e a v i r u l e n c e o f t h e

c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f T . c r u z i . R e v .

I n s t . M e d . t r o p . S . P a u l o . 1 3 : 1 4-17,

1971.

1 3 . — A p l i c a ç ã o d a v a c i n a v i v a a v i ­

r u l e n t a d e T . c r u z i e m s e r e s h u m a n o s

( N o t a p r é v i a ) . R e v . I n s t . M e d . t r o p .

S. P a u l o . 1 3 : 1 4 4 -1 6 4 , 1971.

1 4 . --- T h e a v i r u l e n c e o f t h e c u l t i ­

v a t e d Y s t r a i n o f T . c r u z i . I V — T h e

e f f e c t o f i m m u n o s u p r e s s i v e a g e n t s in

m i c e . R e v . S o c . B r a s . M e d . t r o p . 5 :

2 1 3 -2 3 3 , 1971.

15. R A S S I , A . ; A M A T O N E T O V . & S I ­

Q U E I R A , A . F . — C o m p o r t a m e n t o

e v o l u t i v o d a r e a ç ã o d e f i x a ç ã o d o

c o m p l e m e n t o n a f a s e c r ô n i c a d a M o ­ l é s t i a d e C h a g a s . R e v . I n s t . M e d . t r o p .

S . P a u l o . 1 1 : 4 3 0 - 4 3 5 , 1969.

16. S A N T O S , R . R . — P e r s o n a l c o m m u ­

n i c a t i o n ,

17. S C H E N O N E . H .; A L F A R O , E .; R E Y S .

H . & T A N C H E R , E . — V a l o r d e l x e - n o d i a g n o s t i c o e n l a i n f e c i o n c h a g a s i c a

c r o n i c a . B u l. C h il. P a r a s i t o l o g i a . 2 3 :

1 4 9 -15 3 , 196 8 .

18. S T R O U T , R . G . — A m e t h o d f o r

c o n c e n t r a t i n g h e m o f l a g e l l a t e s . J . P a ­

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