Revista da Sociedade Brasileira de M edicina Tropical 28(4):427- 428, out- dez, 1995.
RESUMO DE TESE
TRA N SFEREN CIA
INVITRO
D E IM UN ID A D E CELULA R PA RA LIN FÓ CITO S H UM A N O S A UM PEPTÍD EO SIN TÉTICO D O V ÍRUS D A A ID S (H IV -1) CO M RN A IM UN EX EN O G ÊN IC O
O presente trabalho foi desenvolvido com um p ep tíd eo sintético de 12 am ino ácid o s (Leu- Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Lle-Cys), denominado p l2. Esse peptídeo corresponde a um ep íto p o im uno d o m inante e altam ente coservado da glicoproteína 41 do HIV-1 (Human Immunodeficiency Virus-1).
O RN A imune (RNAi) anti-p 12 foi obtido de baço e linfonodos de carneiros imunizados com o p l2. O objetivo principal deste estudo foi
v e r if ic a r se o RNAi anti-pl2 é capaz de transferir
in v it ro resposta imune celular para linfócitos
humanos. Portanto, foi testada a possibilidade de ocorrer uma transferência xenogênica (carneiro para o homem) de imunidade celular com RNAi anti-pl2. Além disso, este trabalho foi a primeira tentativa de se transferir imunidade celular com RNAi para um antígeno (p l2) que possui um número de resíduos de aminoácidos considerado no limite da capacidade de reconhecimento do sistema imune. A avaliação da transferência de imunidade celular foi feita através do Teste de Inibição da Aderência de Leucócitos (Teste LAI) e do Ensaio de Transformação Blástica. O uso destes dois ensaios imunológicos permitiu um estudo comparativo entre o Teste LAI e o Ensaio de Transformação Blástica quanto à capacidade de detectar o fenômeno de transferência de imunidade celular com o RNAi, o que constitui outro aspecto original deste trabalho.
Neste estudo, utilizou-se linfócitos de 15 doadores, cujos soros foram negativos para anticorpos anti-HIV-1. Foi possível realizar a transferência de resposta imune celular com RNAi anti-pl2 em 9 (60%) casos, os quais foram denominados de doadores responsivos, sendo que os outros 6 (40%) casos correspondem aos doadores não responsivos. Uma observação importante foi que os doadores responsivos e não responsivos detectados pelo Teste LAI foram rigorosamente os mesmos observados através do Ensaio de Transformação Blástica.
Recebid o para publicação em 17/ 03/ 95.
IN VITRO
TRA N SFEREN CE O F CELLULA R IM M U N ITY T O H UM A NLYM PH O CYTES B Y A SYN TH ETIC
PEPTID E O F TH E A ID S V IRUS O F A XEN O G EN IC IM M UN E RN A
The present work was carried oud with the synthetic peptide o f 12 amino acids(Leu-Gly-Ile- Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys) referred to as p l2. This p ep tid e co rresp o nd s to an immunodominant and well conserved epitope o f th e g ly c o p ro te in 41 o f H IV -1 (H u m an Immunodeficiency Virus-1).
The anti-p l2 immune RNA (iRNA) was obtained from the spleen and lymph nodes of sheep immunized with the p l2. The main purpose o f this study was to verify if the anti-p l2
iRNA is able to transfer in v it ro immune cellular response to human lymphocytes. Therefore, it was tested the possibility to induce a xenogenic transfer (sheep to man) o f cellular immunity with the anti-pl2 iRNA. In adition, this work was the first attempt to transfer cellular immune reactivity to an antigen (p l2) with a number o f amino acid residues near the limit o f recognition o f the im m une sy stem . The tran sfer o f c e llu lar im m unity w as assessed by the leu k o c y te ad herence inhibitio n test (LAI test) and the blastic transformation assay which for the first time allo w ed a co m p ariso n betw een tw o immunological assays in regard to their capacities to detect cellular immunity transfer with iRNA.
This study was performed with lymphocytes from 15 donors w hose sera were negative to antibodies against HIV-1. It was possible to transfer cellular immune response with anti-p l2
iRNA in 9 (60%) subjects referred to as “responsive donors" while other 6 (40%) subjects w ere called “non resp o nsiv e d o no rs”. An important finding was the observation that the responsive and non responsive donors detected by the LAI test were exactly the same as that obtained with the blast transformation assay.
It was also found that the human lymphocytes incubated with the anti-pl2 iRNA were not able to recognize a synthetic peptide of 11 amino acids whose primary structure (Ile-Ser- A rg -Pro -Phe-G ly -Ser-Pro -Pro -Phe-A rg ) is completly different from that o f p l2, indicating that this p heno m eno n is antigen sp ecific.
Resumo de Tese. Saw an FM. Transferência in vitro de imunidade celular para linfócitos humano s a um peptídeo sintético do vírus da AIDS (HIV-1) com RNA imune xenogênico. Revista da Sociedade Brasileira de M edicina Tropical 28:427- 428, out- dez, 1995.
Verifico u-se aind a que linfó cito s hum ano s incubad o s co m RNAi an ti-p l2 não fo ram cap azes d e reco nhecer um p ep tíd eo sintético d e 11 am ino ácid o s, cuja estrutura primária (Ile-Ser-A rg- Pro -Pro -Phe-Gly-Ser-Pro -Phe-A rg) é to talm ente d iferente d o p l2, ind icand o que esse fenô m eno é antíg eno esp ecífico . A lém d isso , d em o nstro u-se que linfó cito s hum ano s tratad o s co m RNAi anti- m e l a n o m a B l6 n ã o r e c o n h e c e m o p l 2 , m o strand o que a info rm ação esp ecífica para esse p ep tíd eo sintético é d ad a so m ente p elo RNAi anti-p l2. O tratam ento d este RNAi co m RNase abo liu to talm ente a sua ativid ad e im uno ló gica, o q u e i n d i c a a i n t e g r i d a d e d a c a d e i a p o linucleo tíd ica d o RNAi anti-p 12 é essencial para q u e o m esm o seja cap az d e sensibilizar o s linfó cito s hum ano s.
A d m ite-se q u e o s lin fó c ito s T c ito tó x ic o s d esem p enham um p ap el im p o rtante na d efesa co ntra as infecçõ es virais, inclusiv e p elo HIV. E fato co n h ecid o que o s p ep tíd eo s sintético s g eralm ente não são cap az es d e ind uzir in vivo esse tip o d e célu la cito tó xica, o que já fo i d em o nstrad o em v ário s sistem as co m o uso sistêm ico d o RNAi. O s d ad o s o btid o s in vitro no p resente trabalho rep resentam um fo rte estím ulo para se abo rd ar esse fenô m eno in vivo, o que p o d erá co ntribuir para o esclarecim ento d e uma no v a alternativ a d e im uno m o d ulação no s caso s d e infecção p elo HIV.
Moreover, it w as d em o nstrated that the hum an lym p ho cytes treated w ith anti-m elano m a B16
iRNA did no t reco g niz e the p l2, sho w ing that the sp ecific info rm atio n fo r the p i2 is o nly o btained by the anti-p l2 iRNA. The treatm ent o f this iRNA w ith RNase to tally abo lished its im m uno lo g ical activ ity, ind icating that the integrity o f the p o ly nucleo ty d e chain o f the anti-p l2 iRNA is essential in o rd er to sensitise the hum an lympho cytes.
It is w ell kno w n that the cy to to xic T ly m p ho cy tes play an im p o rtant ro le in the d efense against viral infectio ns,includ ing the case o f HIV infectio n. It has b een established that synthetic p ep tid es in g eneral are no t able to ind uce this type o f cy to to xic cell in vivo altho ugh this has b een d em o nstrated in sev eral system s by injecting iRNA. The in vitro results o btained in the p resent w o rk rep resent a stro ng stimulus to stud y this p heno m eno n in vivo w hich co uld c o n t r i b u t e to e s t a b l i s h a l t e r n a t i v e s o f im m uno m o d ulatio n in the case o f HIV infectio n.
Fahim M iguel Saw an
Tese ap resentad a à Faculd ad e d e M ed icina d e Ribeirão Preto da Univ ersid ad e d e São Paulo para
o b tenção d o Título d e Mestre.
Ribeirão Preto , SP, Brasil, 1992.
