Protocole de suivi du comportement d’orientation des larves

L’étude du comportement d’orientation des larves de Coquillettidia a été réalisée suivant deux protocoles différents, que nous avons mis au point lors d’essais préliminaires.

B.2.9.1. Tests de choix en groupe, sur une longue durée 34 cm 22

cm Lot de 20 larves à T₀

Supports de fixation (plantules de maïs) Eau du

robinet

Figure 31 : Dispositif de suivi du comportement de fixation des larves (Sérandour et al., 2006)

22 Une première étape a consisté à tester l’attractivité de plantes, d’extraits de plantes ou de molécules de synthèse par rapport à un témoin, pour des lots de 20 larves. Ces essais ont été réalisés dans des dispositifs rectangulaires (34 cm x 22 cm) dont une extrémité est séparée en 4 voies parallèles de taille égale. Aux extrémités de ces voies ont été disposés les items à tester (plantes, arrivée de solutions : extraits de plantes ou molécules de synthèse), et les items témoin (leurre inerte ou arrivée d’eau). Dans le cas de tests de solutions, celles-ci ont été acheminées à débit contrôlé (3,2 mL/minute) dans le dispositif grâce à une pompe péristaltique (Ismatec-Ecoline ; figure 32).

Le protocole mis au point consiste, au temps T0, à déposer les 20 individus testés à l’opposé des items proposés puis à procéder au comptage du nombre de larves présentes dans chaque voie, toutes les 5 minutes pendant une durée totale de 60 minutes. Dans le cas de tests de solutions, T₀ correspond au moment où ces solutions rentraient dans l’arène de test. Durant l’essai, le dispositif a été maintenu à l’obscurité par un couvercle, celui-ci étant délicatement retiré à l’occasion des comptages. Au minimum, 10 réplicats espacés d’une étape de rinçage

Figure 32 : Dispositif de suivi du comportement d’orientation des larves par rapport aux items présentés, sur une longue durée

du dispositif (éthanol puis eau) ont été réalisés pour chaque essai, en permutant à chaque fois la position des items dans les voies de l’arène.

B.2.9.2. Tests de premiers choix

Un deuxième protocole a été établi pour suivre le comportement d’orientation des larves, individu par individu, en continu et sur la base de leur premier choix. Ces essais ont été réalisés dans des dispositifs construits au laboratoire, qui sont des adaptations du modèle utilisé par Saglio et Blanc (1983) pour l’étude comportementale de la carpe.

Chaque dispositif est constitué d’une arène circulaire en plexiglas de 10 cm de diamètre, munie de 4 bras équidistants, de 10 cm de long et de 2,5 cm de diamètre (figure 33).

L’arène possède un fond fixé et un couvercle amovible permettant d’ajuster la hauteur d’eau dans l’arène à 2,5 cm. Ce couvercle possède un orifice en son centre permettant l’insertion de la larve de moustique et la sortie d’eau. A l’extrémité de chaque bras débouche un tuyau relié à une pompe péristaltique, par lequel est acheminée la solution test ou témoin, à débit contrôlé (3,2 mL/minute).

Afin d’éviter les biais comportementaux liés à la lumière blanche, et comme l’observation en continu est impossible en obscurité totale, les tests ont été réalisés sous lumière rouge (650 nm), à laquelle la majorité des Diptères sont insensibles (Wu & Lin, 1990).

Figure 33 : Dispositif de suivi du premier choix des larves

a) Arène circulaire à 4 bras ; b) orifice central du couvercle (insertion larve) ; c) Pompe péristaltique

a)

b)

c)

24 Le protocole retenu consiste à déclencher la pompe péristaltique pour acheminer les solutions test et témoin de façon synchrone au niveau des bras de l’arène, préalablement remplie d’eau du robinet. L’essai débute à l’entrée des solutions dans l’arène, une larve est alors déposée en son centre au temps T0. Le choix réalisé par la larve entre la voie de la solution test ou celle de la solution témoin est noté. La durée maximale de chaque essai a été fixée à 3 minutes après réalisation de tests préliminaires, plus de 90% des individus exprimant un choix dans ce pas de temps.

Les essais ont été réalisés sur 60 individus au moins (de 60 à 90).

Le dispositif a été abondamment rincé à l’éthanol puis à l’eau à l’issue de chaque test, et les voies d’arrivée des solutions ont été permutées à chaque essai.

B.2.10. Analyses statistiques

Les résultats des tests de suivi du comportement de fixation des larves ont été exprimés comme le nombre moyen de larves fixées (± erreur standard) à chaque intervalle de temps. Les cinétiques de fixation obtenues, correspondant au nombre moyen de larves fixées dans chaque condition (test / témoin) en fonction du temps ont été comparées, par une analyse de variance (Anova). L’éventuelle interaction du temps avec la variable environnementale testée a été évaluée, au moyen d’une Anova à mesures répétées, avec le logiciel SPSS 11.0.

Les résultats des tests de suivi du comportement d’orientation de larves dans des dispositifs à 4 couloirs (figure 32) ont été exprimés comme le nombre moyen de larves attirées dans chaque direction (± erreur standard), à chaque intervalle de temps. Les fréquentations moyennes observées dans les couloirs pour les différents items proposés (eau / solutions tests / leurre / plantes) ont été comparées par une Anova (logiciel Statview 4.57.0.0.).

Lors des tests de premier choix, réalisés avec un seul individu en olfactomètre (figure 33), la nature de la première voie choisie par la larve au cours des 3 minutes imparties a été notée. La fréquentation des différentes voies (voies test et témoin) a été comparée avec un test de conformité du χ² à la fréquentation attendue par hasard des voies (25% pour chacun des bras de l’arène, soit 50% pour chacune des solutions testées). Le logiciel utilisé pour les tests du χ² de conformité est Statview 4.57.0.0.