Métodos de análise – técnicas analíticas

III.3.2.1. Espectrofotometria UV-Vis

Os métodos espectrofotométricos estão entre os mais utilizados em laboratórios de análise em todo mundo devido à simplicidade instrumental e operacional44. Entre os procedimentos baseados em medidas espectrofotométricas descritos para análise de sulfonamidas pode ser observado que grande parte destes baseia-se na reação de diazotação122-128 das sulfas. Nesta reação, o grupo amino aromático das sulfonamidas é convertido no respectivo sal de diazônio utilizando ácido nitroso gerado in situ pela adição de nitrito de sódio em meio ácido, cujo excesso é neutralizado pela adição de ácido sulfâmico. Nesta primeira etapa, devido à labilidade do sal de diazônio em temperaturas superiores a 15°C, normalmente se faz necessário manter a reação sob condições de baixa temperatura (<10°C) durante aproximadamente 5 minutos. Na seqüência o sal de diazônio formado, sofre uma reação de acoplamento com fenóis ou aminas aromáticas, produzindo então o produto colorido que é espectrofotometricamente monitorado.

Baseados na reação supracitada, vários autores propuseram o desenvolvimento de métodos espectrofotométricos para a determinação de sulfonamidas em diferentes matrizes. Todos estes métodos apresentam em comum a primeira etapa da reação com variações no reagente de acoplamento empregado, produzindo compostos com sensibilidades analíticas e estabilidade ótica variadas, como mostra a Tabela 2.

Tabela 2. Principais características dos métodos espectrofotométricos baseados na reação de diazotação propostos para determinação de sulfonamidas.

Reagente de

acoplamento Omax (nm) Intervalo linear _{(mg L}-1₎ Amostras Comentários Ref.

Iminodibenzil 570 - 580 0,05 – 6,0 Medicamento Requer 20 minutos p/ o desenvolvimento de cor e utiliza H2SO4 10 M. Produto é estável por 1 dia.

122

3-aminofenol 460 0,05 – 8,0 Medicamento Produto é estável _{por até 6 dias.} 124 8-hidroxiquinolina 500 0,2 – 6,0 Medicamento Produto é estável _{por até 48 horas} 125

N- naftiletilenodiamina 540 - 555 10,0 – 100,0 Medicamento Reação em meio micelar de SDS e tampão acetato (pH 4). 126 N- naftiletilenodiamina 400 - 700 0,41 – 7,34 Urina, Mel e medicamento Requer o uso da espectrofotometria derivativa para uma

análise correta devido interferências

de matriz.

127

Fosfato de

primaquina 468 - 474 0,1 – 12,0 e medicamentoUrina, sangue

Requer 15 minutos para o desenvolvimento de cor. Produto colorido

é estável por várias semanas.

128

Entretanto, apesar dos métodos descritos na Tabela 2 basearem-se na reação de diazotação, amplamente estudada e difundida no mundo todo, algumas desvantagens são observadas. Como exemplo, alguns procedimentos não demonstram alta sensibilidade, sendo adequados somente para amostras que contenham os analitos em concentrações relativamente altas, como é o caso dos medicamentos. Também se observa que os procedimentos envolvem muitas etapas de manipulação das amostras e requerem longos tempos de reação para obtenção do produto colorido a ser monitorado espectrofotometricamente.

Avanços neste sentido foram conseguidos nos métodos baseados em procedimentos de análise por injeção em fluxo com detecção espectrofotométrica129,130. Nestes procedimentos, a reação colorimétrica supracitada é muitas vezes utilizada para a determinação de sulfonamidas em formulações

farmacêuticas e/ou fluídos biológicos, com maior rapidez nas análises e economia de reagentes e amostras.

TENA et al.130 _{propuseram o uso de um sensor para sistema em fluxo}

baseados na integração da reação e retenção do produto colorido em fase sólida para a pré-concentração in situ. A reação de diazotação das SFAs seguida pela reação de acoplamento com N-naftiletilenodiamina (NEED) foi empregada. Após a formação do produto colorido, este é retido em C-18 imobilizada em tubo de vidro inserido na célula de detecção. Adotando esta estratégia um grande aumento na sensibilidade do método foi conseguido, sendo esta a sua principal vantagem. É possível determinar SFAs em intervalos de concentração de 10 – 1200 ppb. Entretanto, a aplicação na análise de amostras complexas não mostrou melhorias, visto que as etapas de ELL com diclorometano e posteriormente em meio aquoso ácido não podem ser dispensadas. As recuperações para amostras de água e leite fortificados mostraram grande variação e em alguns casos valores muito abaixo dos esperados. As taxas de recuperação foram de 26,8 – 86,1% e de 62,7 – 104,2% para amostras de água e leite respectivamente. Os autores também não fazem referência à freqüência analítica alcançada pelo método nem sobre a estabilidade do sensor e não fornecem dados que nos permitam determiná-los.

Além dos métodos baseados na reação de diazotação/acoplamento, várias outras reações são propostas para a determinação espectrofotométrica de SFAs.

NEVADO et al.131 propuseram a determinação simultânea de sulfametazina e sulfatiazol usando o reagente 3-metil-2-benzotiazona hidrazona (MBTH) na presença de íons Fe3+. O recurso matemático de derivação dos espectros é necessário para a correta quantificação dos analitos. Utilizando a derivada 1ª. uma relação linear foi obtida para concentrações de até 40 ppm para ambas as sulfonamidas. O método foi aplicado na determinação de produtos veterinários com recuperações variando de 95,8 a 105,6%.

AMIN et al.132 propuseram a determinação espectrofotométrica de sulfonamidas utilizando a reação de transferência de carga destas substâncias com azul de alizarina, vermelho de alizarina e quinalizarina. Os produtos coloridos são

formados após cinco minutos de reação. Relações lineares foram observadas para os três reagentes no intervalo de concentração de 5 a 130 ppm. Os métodos foram aplicados na determinação de sulfonamidas em medicamentos com bons resultados e ausência de interferências. As porcentagens médias de recuperação foram de 99,3 a 100,8%.

AMIN e ZAREH133 _{propuseram o uso da mistura formaldeído – acetilcetona}

como reagente cromogênico para a determinação de SFAs. O produto de coloração amarela é formado após aquecimento a 40°C durante 25 minutos e monitorado em 400nm. O produto apresentou estabilidade em soluções com pH ajustado para 4,3 a 4,5. A lei de Beer foi obedecida para concentrações entre 4 e 80 ppm. A recuperação das SFAs na análise de amostras de medicamentos foi de 98,3 a 101,0%.

AL-ABACHI et al.134 propuseram o emprego da reação de acoplamento oxidativo utilizando cloridrato de prometazina para a determinação de SFAs em formulações farmacêuticas. A reação ocorre em meio de ácido acético diluído e íons hipoclorito. O produto colorido é formado após 25 minutos de reação a temperatura ambiente e monitorado espectrofotometricamente em 610 nm. A lei de Beer é obedecida para concentrações de 0,4 a 9 ppm. Compostos contendo grupos amino aromáticos primários tais como 1-aminonaftol, ácido amino-salicilico e 4- aminoantipirina interferem seriamente nas medidas.

III.3.2.2. Métodos de separação

Os métodos que empregam as técnicas de separação possuem maior sensibilidade para detectar resíduos de sulfonamidas nas mais variadas amostras (fluídos biológicos, alimentos e águas superficiais). Estes métodos requerem sempre algum tipo de extração e, ou, desproteinização prévia, dependendo da matriz a ser pesquisada, além de instrumentação complexa e operador treinado. No entanto, a capacidade desses métodos em identificar seletivamente e quantificar níveis de resíduos na ordem de ng/mL ou ng/ g tem garantido seu uso, principalmente para a confirmação de amostras positivas em métodos de screening. Portanto, encontram maior aplicação na análise de matrizes complexas tais como, leite, ovos, mel, carne, águas superficiais e fluídos biológicos.