Parte Experimental

VII.1.1. Materiais e equipamentos

As medidas de volume foram efetuadas com buretas classe A e micropipetas “Brand” (100-1000PL) e “Eppendorf” (10-100PL). A vidraria utilizada no preparo das soluções foi de grau A e as pesagens foram realizadas em balança analítica AG204, Mettler Toledo. Para solubilização dos reagentes foi utilizado um banho de ultrasson, marca Thornton e agitadores magnéticos.

As medidas de reflectância foram efetuadas utilizando uma esfera integradora portátil (ISP-REF, Ocean Optics, Dunedin, USA) conectada a um espectrofotômetro de fibra ótica (USB2000,Ocean Optics).

VII.1.2. Reagentes e soluções

Para os experimentos foi utilizado papel de filtro qualitativo Whatman 1 como suporte sólido. Água deionizada (18,2 M:.cm) obtida pelo sistema Milli-Q plus (Millipore Corp., Bedford, MA, Estados Unidos) foi utilizada no preparo das soluções de dipirona sódica. Os reagentes utilizados foram todos de grau p.a.:

¾ Metanol (grau cromatográfico) (Mallinckrodt, Xalostoc, México);

¾ p-Dimetilaminocinamaldeído 94,0% (p.a., Riedel-de haën, Alemanha); ¾ Ácido acético glacial 99 % (Merck, Alemanha);

¾ Dipirona sódica 99,99%, (Daichi Seiyaku Co. Ltd, Tóquio, Japão).

As soluções utilizadas neste trabalho foram:

a) Solução estoque de dipirona sódica: Foi preparada diariamente uma

solução estoque 5,70 x 10-3 mol L-1, pela dissolução de 100 mg de dipirona sódica em 10 mL de água deionizada e transferida quantitativamente para balão volumétrico de 50 mL e o volume completado até a marca com água deionizada. Esta solução foi padronizada como descrito na literatura239.

Soluções padrão foram preparadas a partir de diluições adequadas da solução estoque de dipirona sódica com água deionizada e utilizadas na construção da curva analítica (1,42 x 10-4 a 2,85 x 10-3mol L-1 equivalente a 50 a 1000 Pg mL-1_).

b) Solução de p-dimetilaminocinamaldeído (p-DAC) 0,8 % (m/v): foi

preparada pela dissolução de 80,0 mg do sólido em 5 mL de metanol com agitação em banho de ultrasson durante 5 minutos. Esta solução foi quantitativamente transferida para balão volumétrico de 10 mL e o volume completado com metanol. A solução foi mantida refrigerada por, no máximo, uma semana220_.

VII.1.3. Amostras

As amostras comerciais de medicamentos contendo dipirona sódica foram adquiridas em farmácias locais e analisadas pelo método proposto, dentro dos seus prazos de validade.

Na Tabela 13 estão relacionadas as formulações farmacêuticas (comprimidos e solução oral) analisadas neste trabalho.

Tabela 13. Amostras comerciais de medicamentos analisados contendo dipirona sódica.

Amostras comerciais Conteúdo nominal de dipirona sódicac

Novalgina® a _{500 mg}

Anador® a _{500 mg}

Lisador® a _{500 mg}

Conmel® a _{320 mg}

Dipirona Sódica – Genérico a _{500 mg}

Buscopan® _{Composto 250 mg}

Anador® b _{500 mg}

Lisador® b _{333 mg}

a _{mg/comprimido;} b _{mg / mL de solução;}

VII.2.Procedimento experimental

VII.2.1. Procedimento para o spot test quantitativo empregando

espectroscopia de reflectância difusa

Para a reação de spot test, as soluções foram adicionadas no centro do papel de filtro (com 2,25 cm2 _{de área) utilizando uma micropipeta que é encaixada em um}

suporte representado na Figura 16, de acordo com o procedimento descrito por TUBINO e colaboradores219_.

Figura 16. Suporte utilizado na realização dos spot tests (Baseado em: TUBINO et al.219).

Inicialmente, 20 Pl da solução do reagente cromogênico p-DAC foi adicionada. Subseqüentemente, fez-se a adição de 20 Pl de ácido acético glacial e por fim 10 Pl da solução do analito (dipirona sódica). Em seguida, o papel de filtro foi secado ao ar durante 15 minutos e as medidas de reflectância efetuadas em 510 nm. Uma solução de referência contendo 20 Pl da solução do reagente cromogênico (p-DAC), 20 Pl do ácido e 10 Pl de água deionizada foi analisada utilizando o mesmo procedimento.

VII.2.1.1. Construção da curva analítica

A curva analítica foi construída seguindo o procedimento descrito no item acima de spot test utilizando soluções padrão de dipirona sódica na faixa de concentração de 1,42 x 10-4 _{a 2,85 x 10}-3 _{mol L}-1 _{para os experimentos. Um branco}

contendo 20 Pl da solução do reagente cromogênico p-DAC, 20 Pl do ácido e 10 Pl de água deionizada foi preparado utilizando o mesmo procedimento.

VII.2.2. Estudo da estabilidade óptica

Com o objetivo de avaliar a estabilidade óptica do composto colorido obtido, sobre a superfície do papel de filtro, após reação de spot test proposta neste trabalho, foi efetuado o acompanhamento do valor da reflectância em 510 nm durante 60 minutos, com medidas em intervalos de 5 minutos. Transcorrido este período, efetuou-se a medida de reflectância após 20 horas.

VII.2.3. Preparo das amostras

VII.2.3.1. Comprimidos

Vinte comprimidos de um mesmo lote de cada amostra comercial analisada foram pesados em balança analítica. Determinou-se o valor da massa média dos comprimidos com variação menor que 5%239. Os comprimidos foram subsequentemente pulverizados em gral de ágata até obtenção de um pó fino.

Uma porção de amostra pulverizada equivalente a 7,4 mg de dipirona foi exatamente pesada e submetida à agitação com 7 mL de água deionizada com agitador magnético por 5 minutos. Esta solução foi filtrada em papel de filtro quantitativo Whatman 41 e o filtrado transferido para balão volumétrico de 25 mL e o volume completado com água deionizada até o menisco.

VII.2.3.2. Solução oral

Alíquotas de 500 PL ou 750 PL das amostras líquidas foram transferidas para balões volumétricos de 100 mL com auxílio de uma micropipeta e diluídas com água deionizada. Diluições posteriores foram efetuadas de modo a obter soluções com uma concentração final aproximada de 7,11 u 10-4 _{mol L}-1_.

VII.2.4. Estudo de interferentes

Os excipientes comumente encontrados nas formulações farmacêuticas de dipirona sódica foram cuidadosamente estudados visando avaliar possíveis interferências que os mesmos poderiam causar sobre o valor de reflectância medido.

Os excipientes analisados foram: lactose, sacarose, ácido cítrico, amido, sacarina sódica, sulfito de sódio, benzoato de sódio, talco, estearato de magnésio, polivinilpirrolidona, sorbitol, metilcelulose, cafeína, aspirina, acetominofem, ácido ascórbico, fenacetina, oxifenbutazona, cloridrato de prometazina, cloridrato de adifenina, brometo de butilescolpolamina, salicilamida e fenobarbital.

Neste estudo, soluções individuais contendo dipirona sódica (250 Pg mL-1

correspondente a 7,11 u10-4 _{mol L}-1_{) juntamente com cada excipiente presente em}

concentração igual e dez vezes maior à concentração de dipirona sódica (em massa) foram submetidas à agitação magnética por 5 minutos em aproximadamente 15 mL de água deionizada, quantitativamente transferidas para balões volumétricos de 25 mL e diluídas até a marca com água deionizada. Estas soluções foram então filtradas em papel de filtro quantitativo Whatman no. 41 se necessária e posteriormente, analisadas sob as mesmas condições descritas para a construção da curva analítica.

VII.2.5. Análise das amostras pelo método oficial

A Farmacopéia Brasileira preconiza a titulação iodométrica239 para a determinação quantitativa da dipirona sódica. O método consiste em solubilizar a amostra com água deionizada, acidificá-la com HCl 0,5 mol. L-1 _{e titular com uma}

solução de iodo 0,05 mol.L-1 _{utilizando como indicador uma solução de amido 1%}

(m/v).

VII.2.6. Estudos de adição e recuperação

Estudo de adição e recuperação do princípio ativo puro foi realizado com o objetivo de avaliar efeitos de matriz (formulação farmacêutica) nas análises. Para tanto, quantidades conhecidas (3,98 x 10-4; 7,97 x 10-4 e 1,20 x 10-3 mol L-1) de dipirona sódica foram adicionadas em quatro amostras previamente analisadas contendo o equivalente a 7,97 x 10-4 mol L-1 de dipirona sódica. As quantidades do fármaco padrão adicionadas corresponderam a 50, 100 e 150% da quantidade presente na amostra. A análise foi realizada como descrito no procedimento para construção da curva analítica.