Polimorfismos dos genes metilenotetrahidrofolato redutase, fator de crescimento transformador β1 e linfotoxina-α e susceptibilidade à artrite reumatoide.

(1)

ww w . r e u m a t o l o g i a . c o m . b r

REVISTA

BRASILEIRA

DE

REUMATOLOGIA

Artigo

original

Polimorfismos

dos

genes

metilenotetrahidrofolato

redutase,

fator

de

crescimento

transformador

␤

1 e

linfotoxina-

␣

e

susceptibilidade

à

artrite

reumatoide

Olfat

G. Shaker

a

_,

_Amina

_M.

_Alnoury

b,c

,

Gehan

A. Hegazy

b,d

,

Hemmat

E. El

Haddad

e

,

Safaa

Sayed

f

_e

_Ahmed

_Hamdy

e,∗

a_Medical_Biochemistry_and_Molecular_Biology_Department,_Faculty_of_Medicine,_Cairo_University,_Cairo,_Egito

b_Clinical_Biochemistry_Department,_Faculty_of_Medicine,_King_Abdulaziz_University,_Jeddah,_Arábia_Saudita

c_Medical_Biochemistry_Department,_Faculty_of_Medicine,_Ain_Shams_University,_Cairo,_Egito

d_Medical_Biochemistry_Department,_National_Research_Center,_Cairo,_Egito

e_Internal_Medicine_Department,_Faculty_of_Medicine,_Cairo_University,_Cairo,_Egito

f_Rheumatology_&_{Rehabilitation}_Department,_Faculty_of_Medicine,_Cairo_University,_Cairo,_Egito

informações

sobre

o

artigo

Históricodoartigo:

Recebidoem17deoutubrode2015 Aceitoem16demarçode2016

On-lineem18deabrilde2016

Palavras-chave:

Artritereumatoide Polimorfismogenético MTHFRC677TeA1298C TGF-␤1T869C

LT-␣A252G

r

e

s

u

m

o

Antecedentes:Aartritereumatoideéumadoenc¸aautoimuneamplamenteprevalentecom

sugeridapredisposic¸ãogenética.

Objetivos:Detectar opadrão de polimorfismodos genes metilenotetrahidrofolato

redu-tase(MTHFRC677T e A1298C),fator decrescimentotransformador␤1 (TGF-␤1 T869C) elinfotoxina-␣(LT-␣A252G)empacientescomartrite reumatoideecorrelacionaresses padrõescomaatividadedadoenc¸aeosníveisséricosdefator denecrosetumoralalfa (TNF-␣),fatorativadordelinfócitosB(BAFF)eosteopontina.

Métodos:Foramgenotipados194indivíduos–90controlese104comartritereumatoide–à

procuradepolimorfismosdosgenesMTHFRC677TeA1298C,TGF-␤1T869CeLT-␣A252G comumametodologiabaseadanaPCR-RFLP.Mensuraram-setambémosníveisséricosde TNF-␣,osteopontinaeBAFFcomkitsdeElisa.

Resultados:OgenótipoCTeoaleloTdoMTHFRC677TeogenótipoGGealeloGdoLT-␣

A252GestãoassociadosaoriscodeAReaníveismaiselevadosdacitocinapró-inflamatória TNF-␣empacientescomartritereumatoide.

Conclusão:Osachadosdopresenteestudosugeremqueháassociac¸ãoentreos

polimorfis-mosdosgenesMTHFRC677TeLT-␣A252GeumriscoaumentadodeARnessaamostrada populac¸ãoegípcia.

∗ _Autor_para_{correspondência}_.

E-mail:ahramadan777@gmail.com(A.Hamdy). http://dx.doi.org/10.1016/j.rbr.2016.03.005

(2)

Methylene

tetrahydrofolate

reductase,

transforming

growth

factor-

␤

1 and

lymphotoxin-

␣

genes

polymorphisms

and

susceptibility

to

rheumatoid

arthritis

Keywords:

Rheumatoidarthritis Genepolymorphism MTHFRC677TandA1298C TGF-␤1T869C

LT-␣A252G

a

b

s

t

r

a

c

t

Background:Rheumatoidarthritisisawidelyprevalentautoimmunedisorderwithsuggested

geneticpredisposition.

Objectives: Theaimofthisstudyistodetectthepatternofgeneticpolymorphismof

methy-lenetetrahydrofolatereductase(MTHFRC677TandA1298C),transforminggrowthfactor-␤1 (TGF-␤1T869C)andlymphotoxin-␣(LT-␣A252G)inpatientshavingrheumatoidarthritisand correlatethesepatternstodiseaseactivityandserumlevelsoftumornecrosisfactor-alpha (TNF-␣),B-CellActivatingFactor(BAFF),andosteopontin.

Methods:Atotalof194subjects,90controlsand104patientswithrheumatoidarthritiswere

genotypedforMTHFRC677TandA1298C,TGF-␤1T869CandLT-␣A252Gpolymorphisms usingamethodologybasedonPCR-RFLP.AlsoserumlevelsofTNF-␣,osteopontinandBAFF weremeasuredbyELISAkits.

Results: TheCTgenotypeandTalleleofMTHFRC677TandGGgenotypeandGalleleof

LT--␣A252GareassociatedwiththeriskofRAandwithhigherlevelsofthepro-inflammatory cytokine,TNF-␣inpatientswithrheumatoidarthritis.

Conclusion: OurfindingssuggestthatthereisassociationbetweenMTHFRC677TandLT-␣

A252GgenespolymorphismsandincreasedriskofRAinthissampleofEgyptianpopulation. ©2016ElsevierEditoraLtda.ThisisanopenaccessarticleundertheCCBY-NC-ND license(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Introduc¸ão

Aartritereumatoide(AR)éumadoenc¸aautoimunemuito pre-valente, queafeta aproximadamente 1%da populac¸ãonos paísesdesenvolvidos;asmulheressãomaisfrequentemente afetadasdoqueoshomens(aproximadamente3:1).1_Nessa

doença,asarticulaçõessãooprincipalalvodeataque,com grandetendênciaàdestruiçãodasarticulaçõese, consequen-temente,adéficitsemtodososaspectosdaqualidadedevida.2

Ascausasexatasdadoençasãodesconhecidas,masfatores ambientaisepredisposiçãogenéticaestãoenvolvidos.Embora essesfatoresnãosejamsuficientesparaodesenvolvimentoda doença,podemdesempenharumpapelnaheterogeneidade doquadroclínicoenarespostaaotratamentoeseroalvode agentesterapêuticos.Formaspolimórficasdogene metileno-tetrahidrofolatoredutase(MTHFR)ealgunsgenesdecitocinas têmsidoestudadoscomopossíveismarcadoresda suscepti-bilidade,gravidadee/ouproteçãonaAR.3

OC677T(Ala 222Val)eoA1298C(Glu429Ala)sãodois polimorfismos genéticos comuns do gene MTHFR. Ambos estãoassociadosàdiminuic¸ãonaatividadedaenzima5,10 metilenotetrahidrofolatoredutase(MTHFR),commenorgrau paraopolimorfismoA1298Cemcomparac¸ãocomoC677T.4

Essaenzimaéresponsávelpelasíntesede metilenotetrahi-drofolato,necessáriapara asíntesede purinaepirimidina e regenerac¸ão da metionina a partir da homocisteína.5 _A

diminuic¸ãonaatividadedessaenzimaresultaemníveis ele-vadosdehomocisteína,quesãocomumenteencontradosem pacientescomartritereumatoide(AR)esãoparcialmente res-ponsáveispela alta taxa de complicac¸ões cardiovasculares nessesindivíduos.6

Ofatorde crescimentotransformador␤1(TGF-␤1) éum fator de crescimento que regula a proliferac¸ão celular, a

cicatrizac¸ãodeferidaseaangiogênesedeummodo especí-ficoàcélula.7_Está_presente_em_abundância_em_{articulac¸ões}

reumatoides e tem uma func¸ão anti-inflamatória, porque a sobre-expressão desse gene reduziu a artrite em um modeloanimal.8_Indivíduos _com_{polimorfismos}_nas_regiões

decodificação eregulaçãodoTGF-p1têmumamaior pro-pensão a desenvolver transtornos imunes. O polimorfismo TGF-␤1(T869C)afetaosníveisséricosdeTGF-␤1eéusado comomarcadorparaoaumentonoriscodedoençaemvárias enfermidades.9

Ascitocinasdesempenhamumpapelimportantena pato-gênese da AR eseus processos inflamatórios associados e destruiçãoarticular.Issoocorreprincipalmentepormeiodo desviodoequilíbrioparaníveismaiselevadosdecitocinas pró--inflamatóriasàcustadecitocinasanti-inflamatórias.Assim, aconcentraçãodemembrosdasuperfamíliapro-inflamatória TNF-␣ está diretamentecorrelacionada coma patologia da doença.10 _O_TNF-_␣_é_uma_potente_citocina_{pró-inflamatória}

produzidaprincipalmentepormacrófagos.Éconsideradoum dos principais mediadores inflamatórios da inflamac¸ão e destruic¸ãoarticularnaARaoinduziroutrascitocinas infla-matórias eestimular a expressãode moléculas de adesão pelosfibroblastos.11_A_linfotoxina-_␣_(LT-_␣_),_outro_membro_da

superfamíliadoTNFanteriormenteconhecidacomofatorde necrosetumoral-␤(TNF-␤),induzàapoptosecelularea res-postasinflamatóriasapósaligac¸ãoaoreceptordeTNFtipos 1 e2, respectivamente.12 _Detectou-se _um _polimorfismo _de

nucleotídeoúnico(A252G)noprimeirointrondogeneLT-␣e relatou-sequeesseaumentaaexpressãodonívelplasmático deLT-␣.13 _Os_dois_alelos_resultantes_desse_polimorfismo_de

(3)

Outro membro da família TNF é o fator ativador de linfócitos B (BAFF), que pode se ligar a linfócitos B, esti-mularasuaproliferaçãoepromoverasuasobrevivênciae, consequentemente,ajudarnaregulaçãoda respostaimune inataeadaptativa. Observou-seumadesregulaçãodoBAFF em pacientes com doenças autoimunes como a artrite reumatoide.15 _A _osteopontina _(OPN) _também _é _uma

cito-cinapró-inflamatóriaquetemefeitosimunorreguladoresem doenc¸asautoimunesepodeestarenvolvidanapatogêneseda AR.16

Oobjetivodesteestudoédetectaro padrãode polimor-fismodogeneMTHFRdostipos(C677T)e(A1298C),TGF-␤1 (T869C)eLT-␣(A252G)empacientescomartritereumatoide egípcioseseháalgumacorrelac¸ãodaquelespadrõescoma atividadedadoenc¸aeosníveisséricosdeTNF-␣,BAFFe oste-opontina.

Amostra

e

métodos

Selec¸ãodaamostra

Trata-sedeumestudoobservacionaltransversalcomparativo que foi feitona Unidade de ReumatologiaKasr AlAini da FaculdadedeMedicinadaUniversidadedoCairo,demaioa dezembrode2013.Oestudofoifeitodeacordocomos prin-cípiosdaDeclarac¸ãodeHelsinqueefoiaprovadopelocomitê deéticalocaldaFaculdadedeMedicinadaUniversidadedo Cairo.

Foi obtido um consentimento informado por escrito de todososparticipantes,depoisdeseexplicaremafinalidade eanaturezadapesquisa.Foramincluídos104pacientescom artritereumatoide (16 homense 88 mulheres) e90 indiví-duossaudáveisdeidadeesexocorrespondentesqueatuaram comocontrole.Ospacientesestavamemtratamentoregular comfármacosanti-inflamatóriosnãoesteroides(Aine)(n=42), metotrexato(n=88),prednisona(n=24),leflunomida(n=32) ehidroxicloroquina(n=56).Ospacienteseramtratadoscom diferentescombinaçõesdosfármacosanteriores.Fizeram-se umaanamnese completaeexame físico de todos os paci-entesecalcularam-seo escoredeatividade da doença em 28articulações(DAS-28)eapontuaçãototaldoHealth Asses-smentQuestionnaire(HAQ).

Exameslaboratoriais

Mensuraram-seosníveisséricosdeBAFF,OPNeTNF-␣com kitsdeElisaobtidosdaR&DSystems,Minneapolis,MNparaos doisprimeirosedaAviBion,Helsinki,FinlândiaparaoTNF-␣, deacordocomoprotocolodofabricante.

Análisemolecular

Extrac¸ãodeDNA

ODNAgenômicofoiextraídodosangueperiféricocomo mini-kitQIAampDNA(Qiagen,Valencia,CA,EUA),deacordocom oprotocolodofabricante.Agenotipagemfoifeitaporreac¸ão dapolimeraseemcadeia–polimorfismonocomprimentode fragmentosderestric¸ão(PCR-RFLP).

GenotipagemdoMTHFRA1298C17

Usou-seumconjuntodeprimersforward“5’-TGGCTTGGAGCT

GAAGGACTAC-3”ereverse“5’-CACTTTGTGACCATTCCG

GTTTG-3”paraaamplificac¸ãodeumfragmentode241pares de bases;emseguida, ofragmentoamplificadofoi digerido pelaenzimaMboII.OperfildePCRfoi:desnaturac¸ãoiniciala 95◦_C_durante₅_min,_seguido_por₃₅_ciclos_de₃₀_segundos_cada a94◦_C,₅₁◦_C_e₇₂◦_C,_depois_durante₁₀_min_a₇₂◦_C._O_genótipo AAproduzduasbandasde211e30bp,ogenótipoCCproduz umabandaúnicade241bp(nãodividida),eosgenótiposAC produzemtrêsbandasde241,211e30bp.

GenotipagemdoMTHFRC677T18

Usou-seumconjuntodeprimersforward“5’-CATCCCTATTGG CAGGTTAC-3”ereverse“5’-GACGGTGCGGTGAGAGTG-3” paraaamplificac¸ãodeumfragmentode198paresdebases; emseguida,osfragmentosamplificadosforamdigeridospela enzimaHinfI.OperfildePCRfoi:desnaturac¸ãoiniciala94◦_C durante5min,seguidopor35ciclosde 30segundoscadaa 94◦_C,₆₁◦_C_e₇₂◦_C_e_uma_extensão_final_a₇₂◦_C_durante₅_min. O genótipoCC selvagemfoi identificadoporumfragmento únicode198bp,ogenótipo(TT)pelosfragmentosde175/23bp eogenótipoheterozigoto(CT)pelosfragmentosde198,175e 23bp.

GenotipagemdosgenótiposTGF-ˇ1T869C19

Usou-seumconjuntodeprimersforward “5’-TTCCCTCGAGG-CCCTCCTA-3”ereverse“5’-GCCGCAGCTTGGACAGGATC”para aamplificac¸ãodefragmentosde294bpdogeneTGF-␤1.Os produtosdaPCRforamentãodigeridospelaenzimaMspA1I. OperfildePCRfoi:desnaturac¸ãoa96◦_C_durante₁₀_minutos, seguidopor35ciclosde75segundoscadaa96◦_C,₆₂◦_C_e₇₂◦_C, eumaextensãofinala72◦_C_durante₅_min._O_alelo_T_resultou emquatrofragmentosde161,67,40e26bp.OaleloCresultou emfragmentosde149,67,40,26e12bp.

GenotipagemdoLT-˛(A252g)20

Umfragmento de782bpdointron 1(+252A/G)dogene LT--␣ foi amplificado por PCR com um conjunto de primers:

(forward)“5’-AGAGGGGTGGATGCTTGGGTTC-3”e(reverse)

“5’--CCGTGCTTCGTGCTTTGGACTA-3”.OsprodutosdaPCRforam digeridospelaenzimaderestric¸ãoNcoI.OaleloGproduzum fragmentoúnicode782bp(nãodigerido).OaleloGédigerido embandasde586bpe196bp.OperfildePCRfoi:incubac¸ão durante5minutosa95◦_C,_seguido_de₃₅_ciclos_de₁_min_a₉₅◦_C, 1mina52◦_C_e₁_min_a₇₂◦_C,_com_uma_extensão_final_a₇₂◦_C durante7min.

Análiseestatística

(4)

Tabela1–Característicasdospacientes

Parâmetros Min Max Média±DP

Idade(anos) 22,0 70,0 42,7±12,1 Duraçãodadoença(meses) 6 216 66,7±52,5 Rigidezmatinal(min) 3,0 120,0 29,9±38,2 Númerodearticulaçõesinchadas 0,0 18,0 3,3±5,5 Númerodearticulaçõesdolorosas 0,0 20,0 5,0±5,9

VHS 5 125,0 36,4±36,0

DAS-28 1,4 7,7 3,9±1,6

de regressãobivariada para detectar a associação entre as diferentesformasgenéticaspolimórficaseadoença.Aanálise da curva Receiver Operating Characteristics (ROC) foi feita paraexploraracapacidadedediscriminaçãodaosteopontina eTNFempacientescomAR. Valoresdepinferioresa0,05 foramconsideradosestatisticamentesignificativos.

Resultados

Ascaracterísticasdospacientes,incluindoidade,duraçãoda doença,manifestaçõesclínicas,atividadedadoençaeVHSsão mostradasnatabela1.

A comparação entre os níveis séricos de osteopontina, BAFF e TNF-␣ (expressos como a média±DP) em pacien-tese controlesmostrou que osníveisséricos deOPN ede TNF-␣ foram significativamente maiores nos pacientes em comparaçãocomoscontroles(p<0,001).OnívelséricodeBAFF nãoapresentoudiferençaestatisticamentesignificativaentre pacientesecontroles(p=0,6)(tabela2).

AocompararacapacidadedoTNF,daosteopontinaedo BAFFdediscriminar oscontrolesdospacientescom artrite reumatoide,acurvaROCmostrouqueoTNF-␣temumamaior capacidadedediscriminac¸ãodoqueaOPN,comsensibilidade (94,2%)eespecificidade(84,4%)novalordepontodecortede 15,2pg/mL.Poroutrolado,aOPNtemsensibilidade(71,2%)e especificidade(53,3%)novalordepontodecortede5,7ng/mL, talcomocalculadopelacurvaROC(fig.1).

Osresultadosdesteestudomostraramqueasfrequências genotípicasdetodos oscasosestudados estavamem equi-líbriode Hardy-WeinbergparaoMTHFRC677TeA1298C e TGF-␤1T869C.QuantoaoLT-␣A252G,asfrequências genotí-picasestavamemequilíbriodeHardy-Weinbergsomenteno grupocontrole.

Analisou-seaassociac¸ãoentreaartritereumatoidee dife-rentesformaspolimórficasdoMTHFRC677T,MTHFRA1298C, TGF-␤1T869CeLT-␣ A252G(tabela3).Osresultadosdessa análisemostraramumaassociac¸ãoestatisticamente signifi-cativaentreaartritereumatoideeogenótipoCT,aleloTdo MTHRFC677TegenótipoGGealeloGdoLT-␣A252G.Poroutro

1,0

0,8

0,6

Sensibilidade0,4

0,2

0,0

0,0 0,2 0,4

Curva ROC

Osteopontina TNF Linha de referência 0,6

1 - especificidade

0,8 1,0

Figura1–CurvaROCquemostraacapacidadedeTNF, osteopontinaeBAFFdediscriminaroscontrolesdos pacientescomartritereumatoide.

lado,ogenótipoACdoMTHFRA1298Cmostrouumefeito pro-tetorparaadoenc¸a,quandocomparadocomogenótipoAA selvagem.Alémdisso,nãofoidetectadaassociac¸ão estatisti-camentesignificativaentreasdiferentesformaspolimórficas dopolimorfismoT869CdogeneTGF-␤1eaartritereumatoide (tabela3).

OHAQtotalnãoapresentouqualquerassociac¸ãocom dife-rentes formas polimórficasdopolimorfismo MTHFRC677T (␹2=5,5, p=0,06), MTHFR A1298C, (␹2=2,26, p=0,32), TGF--␤1T869C(␹2=1,31,p=0,52)ouLT-␣(␹2=1,1,p=0,57).Além disso,aatividadedadoenc¸a,conformemostradapeloDAS-28, nãoesteveassociadaaformaspolimórficasdequalquerdos genesexaminados–MTHFRC677T(␹2=0,4p=0,81),MTHFR A1298C(␹2=0,69,p=0,7),TGF-␤1T869C(␹2=4,27,p=0,12)e LT-␣(␹2=4,54,p=0,1).

Descobriu-sequeosníveisséricosdeTNF-␣diferem sig-nificativamentenasdiferentesformaspolimórficasdetodos os genes testados, com excec¸ão do MTHFR A1298C, como mostradonatabela4.O testepost hocmostrou queo TNF--␣séricoésignificativamentemaiornogenótipoCTdoque no genótipoCCdoMTHFRC677 (p=0,009),no genótipoCT doquenogenótipoTTdoTGF-␤1T869C(p=0,005),no genó-tipoGGquandocomparadocomogenótipoAA(p=0,008)e genótipoAG(p=0,005)doLT-␣A252G.Nãohádiferenc¸a esta-tisticamentesignificativanosníveisséricosdeOPNeBAFFnos diferentesgenótiposdosgenesexaminados(tabela4).

Tabela2–Comparac¸ãoentreosníveisséricosdeosteopontina,BAFFeTNF-␣(expressoscomoamédia±desviopadrão) empacientesecontroles

Pacientes(n=104) Média±DP

Controles(n=90) Média±DP

p

Osteopontina(ng/mL) 12,9±10,6 5,9±2,5 <0,001

BAFF(pg/mL) 474,5±151,1 489,7±145,6 0,6

(5)

Tabela3–Associac¸ãoentreaartritereumatoideediferentesformaspolimórficasdeMTHFRC677T,MTHFRA1298C, TGF-␤1T869CeLT-␣A252G

Genótipo ealelo

Pacientes Controles p OR(IC95%)

n % n %

MTHRFC677T CC 46 44,2 64 71,1

CT 50 48,1 22 24,4 0,011 3,16(1,30-7,69)

TT 8 7,7 4 4,4 0,260 2,78(0,47-16,5)

C 142 68,3 159 83,3

T 66 31,7 30 16,7 0,028 2,18(1,09-4,38)

MTHFRA1298C AA 46 44,2 20 22,2

AC 34 32,7 56 62,2 0,006 0,26(0,10-0,69)

CC 24 23,1 14 15,6 0,629 0,75(0,23-2,45)

A 126 60,6 96 53,3

C 82 39,4 84 46,7 0,383 0,74(0,42-1,32)

TGF-␤1T869C TT 18 17,3 20 22,2

CT 68 65,4 36 40,0 0,173 2,10(0,72-6,10)

CC 18 17,3 34 37,8 0,390 0,59(0,18-1,97)

C 104 50% 104 58%

T 104 50% 76 42% 0,313 0,73(0,41-1,29)

LT-␣A252G AA 6 5,8 16 28,9

AG 42 40,4 48 17,8 0,252 2,33(0,55-9,95)

GG 56 53,8 26 53,3 0,021 5,74(1,31-25,26)

A 54 26 80 44

G 154 74 100 56 0,007 2,28(1,25-4,18)

Tabela4–Comparac¸ãoentreosníveisséricosdeosteopontina,TNF-␣eFABFnosdiferentesgenótiposemtodosos casosestudados(n=194)

Osteopontinasérica(ng/mL) TNFsérico(pg/mL) BAFFsérico(pg/mL)

Genótipo Média±DP p Média±DP p Média±DP p

MTHFRC677T CC 8,32±7,75 0,248 19,20±15,076 0,031 505,16±149,65 0,162

CT 11,24±9,92 28,93±19,817 444,67±133,17

TT 11,62±7,91 25,62±16,080 486,83±197,19

MTHFRA1298C AA 12,27±11,30 0,076 23,61±16,05 0,233 486,49±136,9793 0,233

AC 7,79±6,00 20,58±18,17 480,98±157,43

CC 9,293±8,00 28,75±17,85 474,47±151,22

TGF-␤1T869C CC 6,79±5,99 0,151 22,17±11,99 0,018 518,42±164,63 0,137

CT 10,54±8,66 27,09±19,39 482,25±139,42

TT 10,91±11,07 14,04±15,32 429,32±139,09

LT-␣A252G AA 14,99±16,98 0,075 14,43±3,62 0,004 525,27±174,13 0,542

AG 9,44±7,86 19,35±15,45 469,87±135,90

GG 8,35±5,53 29,82±19,66 482,71±155,02

Discussão

EmboraaetiologiadaARpermanec¸apoucoclara,fatoresde susceptibilidade–queincluemfatoresambientaisegenéticos –sãoevidentes.Osfatoresgenéticosconstituemcercade50% dessesfatores.3_As_citocinas_{pró-inflamatórias}_amplificam_o

processoinflamatórioeadestruic¸ãodasarticulac¸ões reuma-toides.Ofatordenecrosetumoral,aosteopontinaeoBAFF estãoentreessascitocinas.3

Nesteestudo,osníveisséricosdeTNF-␣foram significati-vamentemaiselevadosempacientesemcomparac¸ãocomos controles.OsresultadosreferentesaoTNF-␣coincidemcom osresultadosdeestudosanteriores,comoosdeGheitaetal.21

eIsmail etal.;22_esses_autores_explicaram _os_resultados_por

seupapelvitalecentralnaetiologiaepatogênesedaAR,daí osinibidoresdoTNFteremsidoosprimeirosfármacos bioló-gicosantirreumáticosmodificadoresdadoenc¸a(DMARD)aser

aprovadosparaotratamentodaAR.Essesmedicamentossão agorapartedotratamentoderotinadospacientescomessa doenc¸a.23_No_entanto,_Ebrahimi_et_al.24_relataram_um_aumento

não significativonos níveisséricosde TNF-␣ empacientes quandocomparadoscomoscontroles.

Alémdisso,nossosresultadosmostraramumaumento sig-nificativonosníveisséricosdeOPNempacientescomARem comparac¸ão com o grupocontrole saudável; issoconcorda com os achados de Ji et al.25 e Chen et al.,26 _que

expli-caram esses resultados pelo papel fundamental da OPN e seusreceptoresnapatogênesedaAR.Assim,váriosestudos experimentaiscomoobjetivodeusaraOPNcomoalvo tera-pêuticoestãosendofeitoseosdesfechosdessesresultados sãopromissores.27

(6)

relataram um aumento significativo nos níveis séricos de BAFF entre pacientes com AR, em especial naque-les com maior atividade da doença e duração da doença maiscurta. Essa discrepância de resultados pode ser atri-buídaà diferente atividade eduração da doença no grupo estudado.

OgenótipoCTeoaleloTdoMTHFRC677Testão associ-adosàAReaumnívelséricosuperiorde TNF-␣, masnão têmefeitosignificativosobreosníveisséricosdeOPNeBAFF. Poroutrolado,asdiferentesformaspolimórficasdoMTHFR A1298CnãoestiveramassociadasàARouaosníveisséricos deTNF-␣,OPN ouBAFF. OgenótipoACdoMTHFRA1298C mostrouefeitoprotetorparaadoença.Issopodeser decor-rentedomaiorefeitodoMTHFRC677TnaenzimaMTHFR,que resultaemhiper-homocisteinemiaesubsequenteativaçãoda cascatadecitocinas.Osresultadosdeestudospréviosforam heterogêneos;algunsnãomostraramassociaçãoentreorisco deAReasdiferentesformaspolimórficasdoMTHFRC677T eA1298C.31,32 _Outros_relataram _{associação}_do_alelo_T, _mas

não de alguma das formas polimórficas doMTHFR C677T comaAR.3_Rubini_et_al.33_relataram_uma_{associac¸ão}_entre_o

genótipoCCdoMTHFRA1298C,masnãodealgumadas for-maspolimórficasdoMTHFRC677Tcomasuscetibilidadeà ARnapopulac¸ãoitaliana.Essaheterogeneidade de resulta-dospodeseratribuídaàsvariac¸õesétnicasnasfrequências alélicasegenotípicas,conformerelatadoporHughesetal.;32

essesautoresencontraramumaumentosignificativonoalelo TdoMTHFRC677T enoalelo C doMTHFRA1298C (inde-pendentemente do status de doenc¸a) em brancos quando comparadoscomnegrosamericanos.Alémdisso,foidescrita umainterac¸ão significativaentre os polimorfismos MTHFR efatoresnutricionais/ambientais (ouseja,níveis defolato, idade,tabagismoeingestãodeálcool).4_O_fator_de_crescimento

transformador␤1(TGF-␤1)éumacitocinaanti-inflamatória associadaàremissãodadoença;alémdisso,temopotencial de ser umacitocina pró-inflamatória.Relatou-se que poli-morfismosdoTGF-␤1estãoassociadosavariaçõesnosníveis séricosdeTGF-␤1eadiversas doenças.34 _Neste _estudo,_os

genótiposdoTGF-␤1(T869C)nãoestiveramassociadosàAR. Noentanto,ogenótipoCTesteveassociadoaumaumento significativonoTNFséricoquandocomparadocomo genó-tipoTT.Issovemassociadoaosresultadosdedoisestudosde metanálisefeitosporZhangetal.35_e_Chang_et_al._,36_que_não

mostraramassociaçãoclaradopolimorfismoT869CealeloT doTGF-␤1comaARemumapopulaçãomundial;contudo,foi sugeridaassociaçãoapenasnaspessoasdeascendência asiá-tica.OsresultadosdeHusseinetal.37_foram_diferentes;_eles

encontraramassociaçãodoaleloTdoTGF-␤1coma suscepti-bilidadeàARempacientesegípcios.Osresultadosdopresente estudotambémmostraramassociaçãodoaleloGedo genó-tipoGGdoLT-␣A252GcomaAReníveisséricosmaiselevados deTNF-␣.Essesresultadosconcordamcomosachadosde Kar-rayetal.38_e_Al-Rayes_et_al._,39_que_relataram_{associação}_entre

osgenótiposGGeAAcomaAR,enquantoogenótipoGAfoi refratário.

Doexposto,pode-seconcluirqueogenótipoCTdoMTHFR C677T,ogenótipoACdoMTHFRA1298CeogenótipoGGdo LT-␣A252GestãoassociadosaumriscoaumentadodeARem pacientesegípcios.

Quesetemconhecimento,esteéoprimeiroestudoa ava-liar, simultaneamente,aassociac¸ãoentreospolimorfismos MTHFRC677TeA1298C,TGF-␤1T869CeLT-␣A252Gcoma ARecomascitocinaspró-inflamatóriasTNF,BAFFeOPNem pacientesegípcios.

Esteestudoapresentaalgumaslimitações,comoainclusão deumgrupomuitoamplodepacientesquantoàduraçãoda doença,atividadedadoençaefármacosusadospelos pacien-tes,alémdenãofazerqualquermençãoàpositividadedofator reumatoideeanti-CCP.Osníveisdecitocinas podemvariar amplamentecomessesfatoresetambémcomoutrosdetalhes metodológicos,comootempoentreaamostrasercoletada eprocessada,apontuaçãonoDAS-28,osfármacosusadose suasdosesquandoasamostrassãocoletadas.

Conflitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconflitosdeinteresse.

r

e

f

e

r

ê

n

c

i

a

s

1.HelmickCG,FelsonDT,LawrenceRC,GabrielS,HirschR, KwohCK,etal.Estimatesoftheprevalenceofarthritisand otherrheumaticconditionsintheUnitedStates.PartI. ArthritisRheum.2008;58(1):15–25.

2.VinayDS,KwonBS.TargetingTNFsuperfamilymembersfor therapeuticinterventioninrheumatoidarthritis.Cytokine. 2012;57(3):305–12.

3.InanirA,YigitS,TekcanA,TuralS,KismaliG.IL-4andMTHFR genepolymorphisminrheumatoidarthritisandtheireffects. ImmunolLett.2013;152(2):104–8.

4.DeMattiaE,ToffoliG.C677TandA1298CMTHFR polymorphisms,achallengeforantifolateand

fluoropyrimidine-basedtherapypersonalisation.EurJCancer. 2009;45(8):1333–51.

5.SpyridopoulouKP,DimouNL,HamodrakasSJ,BagosPG. Methylenetetrahydrofolatereductasegenepolymorphisms andtheirassociationwithmethotrexatetoxicity:a

meta-analysis.PharmacogenetGenomics.2012;22(2):117–33. 6.ErbN,KitasG.Homocysteinemodulationasareasonfor

continuousfolicacidsupplementationin

methotrexate-treatedrheumatoidarthritispatients. Rheumatology.2001;40(6):715–6.

7.EpsteinFH,BlobeGC,SchiemannWP,LodishHF.Roleof transforminggrowthfactor␤inhumandisease.NEnglJMed. 2000;342(18):1350–8.

8.EvansCH,GhivizzaniSC,KangR,MuzzonigroT,WaskoMC, HerndonJH,etal.Genetherapyforrheumaticdiseases. ArthritisRheum.1999;42(1):1–16.

9.AokiCA,BorchersAT,LiM,FlavellRA,BowlusCL,AnsariAA, etal.Transforminggrowthfactorbeta(TGF-beta)and autoimmunity.AutoimmunRev.2005;4(7):450–9. 10.PerriconeC,CeccarelliF,ValesiniG.Anoverviewonthe

geneticofrheumatoidarthritis:anever-endingstory. AutoimmunRev.2011;10(10):599–608.

11.VasanthiP,NaliniG,RajasekharG.Roleoftumornecrosis factor-alphainrheumatoidarthritis:areview.APLARJ Rheumatol.2007;10(4):270–4.

(7)

13.MesserG,SpenglerU,JungMC,HonoldG,BlomerK,PapeGR, etal.Polymorphicstructureofthetumornecrosisfactor (TNF)locus:anNcoIpolymorphisminthefirstintronofthe humanTNF-betagenecorrelateswithavariantaminoacidin position26andareducedlevelofTNF-betaproduction.JExp Med.1991;173(1):209–19.

14.Partida-RodríguezO,TorresJ,Flores-LunaL,CamorlingaM, Nieves-RamírezM,LazcanoE,etal.PolymorphismsinTNF andHSP-70showasignificantassociationwithgastriccancer andduodenalulcer.IntJCancer.2010;126(8):1861–8.

15.SunJ,LinZ,FengJ,LiY,ShenB.BAFF-targetingtherapy,a promisingstrategyfortreatingautoimmunediseases.EurJ Pharmacol.2008;597(1-3):1–5.

16.WangKX,DenhardtDT.Osteopontin:roleinimmune regulationandstressresponses.CytokineGrowthFactorRev. 2008;19(5–6):333–45.

17.VanderPutNM,GabreelsF,StevensEM,SmeitinkJA,Trijbels FJ,EskesTK,etal.Asecondcommonmutationinthe methylenetetrahydrofolatereductasegene:anadditionalrisk factorforneural-tubedefects?AmJHumGenet.

1998;62(5):1044–51.

18.FrosstP,BlomHJ,MilosR,GoyetteP,SheppardCA,Matthews RG,etal.Acandidategeneticriskfactorforvasculardisease: acommonmutationinmethylenetetrahydrofolatereductase. NatGenet.1995:111–3.

19.WoodNA,ThomsonSC,SmithRM,BidwellJL.Identification ofhumanTGF-beta1signal(leader)sequencepolymorphisms byPCR-RFLP.JImmunolMethods.2000;234(1-2):117–22. 20.VasconcelosDF,DaSilvaMA,MarquesMR,DeBritoJuniorRB,

VasconcelosAC,BarrosSP.Lymphotoxin-AlphaGene Polymorphism+252A/G(rs909253,A/G)IsAssociatedwith SusceptibilitytoChronicPeriodontitis:APilotStudy.ISRN Dent.2012;2012:617245.PubMedPMID:23050158.Pubmed CentralPMCID:3463161.

21.GheitaTA,AzkalanyGS,GaberW,MoheyA.Clinical significanceofserumTNF␣and-308G/Apromoter polymorphisminrheumatoidarthritis.EgyptRheumatol. 2015;37(2):49–54.

22.IsmailF,AliH.A-hIbrahimHM.Possibleroleofleptin,and tumornecrosisfactor-alphainhypoandrogenicityinpatients withearlyrheumatoidarthritis.EgyptRheumatol.

2011;4(33):209–15.

23.WillrichMA,MurrayDL,SnyderMR.Tumornecrosisfactor inhibitors:clinicalutilityinautoimmunediseases.TranslRes. 2015;165(2):270–82.

24.EbrahimiAA,NoshadH,SadreddiniS,HejaziMS,

MohammadzadehSadighY,EshraghiY,etal.Serumlevelsof TNF-alpha,TNF-alphaRI,TNF-alphaRIIandIL-12intreated rheumatoidarthritispatients.IranJImmunol.

2009;6(3):147–53.

25.JiH-I,LeeS-H,SongR,YangH-I,LeeY-A,HongS-J,etal. Serumlevelofosteopontinasaninflammatorymarkerdoes notindicatediseaseactivityorresponsivenesstotherapeutic treatmentsinpatientswithrheumatoidarthritis.Clin Rheumatol.2014;33(3):397–402.

26.ChenG,ZhangX,LiR,FangL,NiuX,ZhengY,etal.Roleof osteopontininsynovialTh17differentiationinrheumatoid arthritis.ArthritisRheum.2010;62(10):2900–8.

27.ZhangF,LuoW,LiY,GaoS,LeiG.Roleofosteopontinin rheumatoidarthritis.RheumatolInt.2015;35(4):589–95. 28.EldinAB,SayedS,HegazyG,ShakerO.B-CellActivating

Factor(BAFF)inSystemicLupusErythematosus,Rheumatoid Arthritis,andBehc¸et’sDisease.ArchRheumatol.

2012;27(3):185–94.

29.MahdyAA,RaafatHA,El-FishawyHS,GheitaTA.Therapeutic potentialofhydroxychloroquineonserumB-cellactivating factorbelongingtothetumornecrosisfactorfamily(BAFF)in rheumatoidarthritispatients.BulletinofFacultyof

Pharmacy,CairoUniversity.2014.

30.MouraRA,CascãoR,PerpétuoI,CanhãoH,Vieira-SousaE, MourãoAF,etal.Cytokinepatterninveryearlyrheumatoid arthritisfavoursB-cellactivationandsurvival.Rheumatology. 2010,keq338.

31.Palomino-MoralesR,Gonzalez-JuanateyC,

Vazquez-RodriguezTR,RodriguezL,Miranda-FilloyJA, Fernandez-GutierrezB,etal.ResearcharticleA1298C polymorphismintheMTHFRgenepredisposesto cardiovascularriskinrheumatoidarthritis.HeartFail. 2010;5:2.3.

32.HughesLB,BeasleyTM,PatelH,TiwariHK,MorganSL, BaggottJE,etal.Racialorethnicdifferencesinallele frequenciesofsingle-nucleotidepolymorphismsinthe methylenetetrahydrofolatereductasegeneandtheir influenceonresponsetomethotrexateinrheumatoid arthritis.AnnRheumDis.2006;65(9):1213–8.

33.RubiniM,PadovanM,BaricordiO,FotinidiM,GovoniM, TrottaF.Thec.1298A>Cpolymorphisminthe

methylenetetrahydrofolatereductasegeneisassociatedwith rheumatoidarthritissusceptibilityinItalianpatients.Clin ExpRheumatol.2008;26(1):163.

34.AlayliG,KaraN,TanderB,CanturkF,GunesS,BagciH. Associationoftransforminggrowthfactorbeta1gene polymorphismwithrheumatoidarthritisinaTurkish population.JointBoneSpine.2009;76(1):20–3.

35.ZhangL,YanJ-w,WangY-X,WanY-n,LiJ-p,LiuP,etal. AssociationofTGF-␤1+869C/Tpromoterpolymorphismwith susceptibilitytoautoimmunediseases:ameta-analysis.Mol BiolRep.2013;40(8):4811–7.

36.ChangW-W,SuH,HeL,ZhaoK-F,WuJ-L,XuZ-W. Associationbetweentransforminggrowthfactor-␤1T869C polymorphismandrheumatoidarthritis:ameta-analysis. Rheumatology.2010;49(4):652–6.

37.HusseinYM,MohamedRH,El-ShahawyEE,AlzahraniSS. InteractionbetweenTGF-␤1(869C/T)polymorphismand biochemicalriskfactorforpredictionofdiseaseprogression inrheumatoidarthritis.Gene.2014;536(2):393–7.

38.KarrayEF,BendhifallahI,BenabdelghaniK,HamzaouiK, ZakraouiL.Tumornecrosisfactorgenepolymorphismsand susceptibilitytorheumatoidarthritisinregionalTunisian population.JInfectDisImmun.2011;3(2):30–5.