MÉTODO RÁPIDO PARA DETECÇÃO DE FRAÇÃO ANTIGÊNICA DE
VERMES ADULTOS DE
S C H IS T O S O M A M A N S O N I *
M auro Sca pin * * e Miriam Tendler * * *
Fração a n tigênica de S ch isto so m a m a n so n i obtida a p a rtir de verm es a d u l tos, precipitou em 35 m in u to s com soros de doentes com esquistossom ose m a n -ônica e to rn o u -se visível sem\ coloração, u tiliza n d o -se o m étodo de im unoéle-troosm oforese (I.E.O.F.).
INTRODUÇÃO
A e s tr u tu r a a n tig ê n ic a de fo rm a s a d u l ta s de Schistosona m ansoni, h e lm in to re s p o n sáv e l p e la esq uistossom ose m a n sô n ic a , g ra v e p a ra s ito s e que o co rre e n d e m ic a - m e n te em e x te n sa s á re a s de nosso p a ís e e n c o n tra -s e a in d a em ex p a n são , vem s e n do e x a u s tiv a m e n te e s tu d a d a , v isan d o su a c a ra c te riz a ç ã o im u n o ló g ica e b ioquím ica, p u rific a ç ã o e o b ten ç ã o de a n tíg e n o s e sp e cíficos.
K m 1962, B ig u e t e C a p ro n (1) id e n ti fic a ra m , a tra v é s de e stu d o e le tro fo ré tic o e im u n o e le tro fo rétic o , co m p o n en te s a n tig ê - n icos de e x tra to salin o de verm es a d u lto s d e Schistosom a m ansoni.
K e n t (10), em 1963, p esquisou c o m p a ra tiv a m e n te e x tra to s aquosos de fo rm a s a d u lta s e la rv a re s de S. m ansoni, e s tu d a n do ,seus c o n s titu in te s, b em com o seu p o te n c ia l an tig ê n ico , a tra v é s de d u p la im u - n o d ifu sã o em gel de a g a r, c o n tra soros h u
m a n o s e d e a n im a is in fe c ta d o s com S. m an so n i.
S e g u ira m -se a e s ta s in ú m e ra s o u tra s p esq u isa s im u n o so ro ló g icas d a c ita d a h e l- m in tía s e , te n d o com o b ase os m éto d o s de d u p la im u n o d ifu são e im u n o eletro fo rese
(2, 4, 8, 10, 14, 15, 16, 17).
P re se n te m e n te , em nosso lab o ra tó rio , no cu rso de p e sq u isa im u n o ló g ica sobre os c o n s titu in te s a n tig ê n ic o s do S. m ansoni
(e x em p lares m a c h o s e fê m e as de verm es a d u lto s ), tiv em o s a o p o rtu n id a d e d e u tili z a r a té c n ic a de im unoeletro o sm o fo rese
( I . E . O . F . ) , q u e no s p arece , sob v ário s a s pecto s, a exem plo de p ro c ed im en to s sem e lh a n te s em p re g ad o s p a r a estu d o s de am e - b íase (11) e triq u in o se (5 ), g ra n d e m e n te v a n ta jo s a , e a q u a l p a ssa m o s a descrever.
M ATERIAL E M ÉTODOS
C ob aias a d u lta s, em n ú m e ro de 10 (d e z ), fo ra m e x p e rim e n ta lm e n te in fe c ta
-* T r a b a l h o r e a liz a d o n o I n s t i t u t o G o n z a g a d a G a m a F i l h o d a U n iv e r s id a d e G a m a F ilh o (U G F ) e I n s t i t u t o d e E n d e m ia s R u r a i s d a F . I . O . C r u z — M .S .
** P r o f e s s o r A s s is te n te d o D e p a r t a m e n t o d e B io f ís ic a e d o I n s t i t u t o G o n z a g a d a G a m a F ilh o d a U G F . ** * M é d ic a d o I n s t i t u t o d e E n d e m ia s R u r a i s — F . I . O . C r u z — M .S . e b o l s i s t a d o C o n s e lh o N a c io n a l
d e P e s q u is a s .
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d a s com 3 b a n h o s, ricos em c e rc á ria s e li m in a d a s p o r B iom philaria glabrata e, após 45 d ia s de infecção , os v erm es a d u lto s fo ra m recolhidos p o r p e rfu sã o do fíg ad o e siste m a p o rta (13) e co n serv ad o s a — 18°C p o r 24 hs. em 5 m l. de solução de N a C l 0,15M com m e rth io la to 1:10.000.
O e x tra to de verm es ad u lto s, u sad o com o an tíg e n o , foi o b tid o a p a r tir de 275 m g de v erm es secos, em su sp en são de 3,5 m l. de N a C l 0,15M, c o n te n d o 1:10.000 de m e rth io la to , a p a r tir de h o m o g e n e iz a ção a 750 rp m d u ra n te 5 m in . com o h o - m og en eizad o r de vid ro P o tte r-E lv e h je m (15). No se n tid o de e lim in a r re sto s de m e m b ra n a e p a rtíc u la s su b ce lu la res, o e x tra to de v erm es foi su b m e tid o a c e n trifu - gação de 1.500 rp m p o r 5 m in. e 10.000 rp m por 60 m in. F a ra c larific a ç ã o to ta l, o sobre- n a d a n te d e sta ú ltim a e ta p a foi p assa d o a tra v é s de filtro M illipore com p o ro de 0,22 l i
.
Todos estes p ro c ed im e n to s fo ra m le vados a efeito em te m p e r a tu ra em to rn o de 4°C.Soros obtidos de p o rta d o re s de esquis- tcssom ose m an sô n ic a , o riu n d o s de á re a s en d êm icas b ra sile ira s, c u jo d iag n ó stico foi feito p o r ex am e coprológico pelo m étodo de H o ffm an , P o n s & J a n e r (7), fo ra m u s a dos com o fo n te de possíveis a n tic o rp o s.
A té cn ic a p o r nós u tiliz a d a foi u m a m o d ificação do m éto d o de P esen d o rf, K ra s - sn itsk y & W ew alka (19) em p re g a d o p a ra a u m e n ta r a sen sib ilid a d e e velocidade de detecção de com plexos a n tíg e n o -a n tic o rp o , u sa d a em d iag n ó stico de A n tíg en o -A u s- trá lia (6), te n d o sido a te rm in o lo g ia
( I .E .O .F .) u s a d a p o r N ovak, K õszeghy & P en k e (12).
D uas lâ m in a s de vidro de m icro sco p ia de 7,0 x 2,6 cm fc ra m c o b e rta s com 2 m l/ lam ., de a g a r (D ifco) a 0,75% em “sodium b a rb ita l a c e ta te b u ff e r”, pH 8 .4 ; 0,13M (19). A pós a gelificação, fo ra m feito s 4 orifícios em c a d a lâ m in a , d ispostos c o n fo r m e Fig. 1.
As lâ m in a s p ro n ta s , fo ra m colocadas em u m a cu b a p a r a eletro fo rese com c a p a cid ad e p a r a 2 lâ m in a s e a conexão e létric a
e n tre o gel e o b u ffe r de c a d a e x tre m id a de d a cuba, fe ita com p ap e l filtro W h a t- m a n n.° 1.
Os 4 o rifícios d a s 2 lâ m in a s p ró x im as ao cato d o fo ram p re en ch id o s com 2,3 m l de e x tra to e nos o u tro s orifícios fo ra m colo cados a m esm a q u a n tid a d e de 4 d ife re n tes soros de d o en tes esquistossom óticos, que h a v ia m a p re s e n ta d o u m a lin h a de p re c ip ita ç ã o em gel de A garose a 1% em H aO d e stila d a ,q u a n d o su b m etid o à té c n ic a de d u p la im u n o d ifu são , c o n tra o m esm o e x tra to em qu estão , pelo m éto d o de O u c h te rlo n y (3 ). Im e d ia ta m e n te ap ó s a colocação dos soros, o m éto d o de I .E .O .F . foi iniciad o , à te m p e r a tu ra a m b ie n te , con duzin d o c o rre n te c o n tín u a no gel de 11
m A /lâ m in a .
RESU LTADOS
A lin h a de p re c ip ita ç ã o o b tid a p ela I .E .O .F . foi v isu a liz ad a ,e n tre c a d a 2 o ri fícios dispostos lo n g itu d in a lm e n te (Fig. 2.), 35 m in . após a c o n d u ç ão d a c o rre n te elé tric a e sem que fosse n e c e ssá ria a re tira d a
4 «K .K L
kt J 3 w.ih.^1
F ig . 1 — o r ifíc io n o g e l d e a g a r s o b r e l â m i n a . E = e x t r a t o o b tid o d e v e r m e s a d u l t o s d e S c h is to s o m a m a n s o n i, u t i l i z a d o c o m o a n tíg e n o .
S =: so ro d e d o e n t e e s q u is to s s o m ó tic o , u t i liz a d o c o m o f o n t e d e p o s s ív e is a n tic o r p o s .
Jan.-Fev., 1975
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das lâ m in a s de vidro, d a cuba. E n tr e ta n to, p a ra m e lh o ra r a v isualização, u tiliz a - m o-nos de ilu m in a ç ã o oblíqua, co n fo rm e descrito a n te rio rm e n te (19). Todos os 4 soros ex a m in a d o s a p re s e n ta ra m lin h a de p recipitação fa c ilm e n te v isu alizad a , c o n firm an d o a s p ro v a s p o sitiv a s o b tid a s p e la técnica d e O u c h terlo n y .
CONCLUSÕES
Devido à localização do p re c ip ita d o , concluím os que a fra ç ã o a n tig ê n ic a tem m igração s e m e lh a n te à a lb u m in a e o a n ticorpo e s ta ria n a fra ç ã o g a m a do soro.
O c u rto tem p o (35 m in.) em que foi realizad o o m éto d o ( I .E . O .F .) ; a rá p id a e fácil v isu alizaç ão dos re su lta d o s (d isp e n sa c o lo ra ç ã o ); a p o ssib ilid ad e de re d u z ir ain d a m a is o tem p o de ex ecução do m é todo p a r a 10 ou 15 m in u to s (a u m e n ta n d o - -se a in te n s id a d e d a c o rre n te p a r a 20 ou
25 m A ), a u tiliz a ç ão s im u ltâ n e a de d iv e r
sos soros (em p la c a s d e v idro de m aio res d im e n s õ e s ), m o s tra m s e r o m éto d o de v a lia n a d etec ção de fraçõ e s a n tig ê n ic a s so lúveis de fo rm a s a d u lta s de Schistosom a m a n so n i o fe rec en d o v a n ta g e n s sobre ou tro s m é to d o s de im u n o d ifu sã o e im uno- eletro fo rese , h a b itu a lm e n te e m p re g ad o s no seu estudo.
A GRAD ECIM EN TOS
N ossos a g ra d e c im e n to s ao P ro f. G o b e rt d e A ra ú jo C osta, D ire to r do In s titu to G o n za g a d a G a m a F ilh o e ao Dr. C elso A rco- verd e de F re ita s, D ire to r do In s titu to de E n d em ias R u rais.
A gradecem os ao s d e p a rta m e n to s de Zo ologia M édica (H elm in to lo g ia) e P ato lo g ia e D oenças T ro p ica is (F isicp ato lo g ia) do I n s titu to O sw aldo C ruz, p e la colaboração p re s ta d a n o que se re fe re à o b ten ção do m a te ria l (verm e a d u lto de S. m ansoni) u tiliz a d o no p re s e n te tra b a lh o .
S U M M A R Y
A n antigenic fra ctio n of S c h isto so m a m a n so n i, ob tained fro m ad u lt worms, has p recip tta ted w ith in 35 m in u tes w ith h u m a n sera fro m .schistosomotic pa-tie n ts a n d became visible w ith out staining, using th e im m unoeletroctroosm o-phoretic m e th o ã [I.E.O.F.).
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